Nghiên cứu cây chè dây làm thuốc điều trị bệnh loét dạ dày hành tá tràng

Trang 1

4 3p /-& BỘ Y TẾ 4d, lên TRUONG PAT TOC DUOC HA NOL ca#©o ĐỀ TÀI CẤP BỘ

NGHIÊN CỨU CÂY CHE DAY LAM THUOC DIEU TRI BENH

LOET DA DAY - HANH TA TRANG

Chi nhiém dé tai: PGS PTS Pham Thanh Ky

Hà Nội - 1995

Trang 3

NGHIEN CUU CHE DAY LAM THUOC

ĐIỀU TRỊ BỆNH LOÉT DA DAY - HANH TA TRANG

1 ĐẶT VẤN ĐỀ:

Bệnh loét da dày - hành tá tràng là một bệnh có nhiều người

mắc ở trên thế giới cũng như trong nước ta Bên cạnh dùng

những thuốc có nguồn gốc hoá dược việc nghiên cứu những bài thuốc, cây thuốc có ở trong nước để điều trị bệnh loét da day - hành tá trằng đang được quan tâm

Chê dây là một dược liệu chưa được ghi vào danh mục

"Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam" của Giáo sư Đỗ Tất Lợi và những sách dược liệu khác Nhân dân địa phương thường dùng lá nấu nước uống như nước chè Bệnh viện Y học dân tộc

tỉnh Cao bằng và bệnh viện Y học đân tộc quân đội dùng chè dây để sắc hay hãm uống chữa đau đạ dày Cho tới nay chúng tôi

chưa thấy tài liệu nào trong nước ta công bố nghiên cứu về thực vật, thành phần hoá học, độc tính cũng như tác dụng được lý của chẻ dây Do đó chúng tôi đã đăng ký để tài này ở cấp Bộ nghiên cứu về cây chè đây làm thuốc điều trị loét đạ đây - hanh ta trang

với nội dung sau : 1- Nghiên cứu đặc điểm thực vật, định tên khoa học của chè day 3- Nghiên cứu về thành phần hoá học : - Xác định các nhóm chất chính có trong chè dây - Chiết xuất và phân lập thành phần chính - Nhận dạng các chất phân lập dược 3- Nghiên cứu độc tính của chê dây và thử một số tác đụng sinh học

Trang 4

IL NGUYEN LIEU VA PHUONG PHAP NGUTEN CCU: 1- Nguyên liên : thực - Đã lấy mẫu cây có hoa, quả, nghiên cứu đặc đ vật và định tên khoa học - Dược liệu dùng nghiên cứu thành phần hoá học và tác {a điểm dụng sinh học trên cùng cây và cùng mội 2.1- Vé thực vị - Quan sá

- Vi phdu dược cắt, nhuộm kop theo phương pháp trong tài

liệu "Thực hành được liệu" và chụp ảnh qua kinh hiến vì

MEN - 15

2.2 Về hoa hoe:

- Dinh tinh cac nbh6m chất trong dược Tiện theo phương

pháp trong tài Hiệu " Thực hành được liệu" và "Phân tích hoá

thực vật"

» Dé chay đo trên máy OSI (Pháp) tại phòng nghiên cứu tổng hợp hữu cơ của trường ĐH Dược

- Cáo nguyên tố vi lương do lrên may quang phổ phát xạ UCn- 30 (Nga) tai phòng quang phổ của cục dịa chất Việt

Nam

- Phổ UV đo trên máy 5pcctropbotometer UV-160A Shimađzu - (Japan) tại viện hố học cơng ngh

- Phổ IR do trén may PYE UNICAM SP200 dang vién nén

tam cua Trudng

een rac TT

+ (Thuy Điển)

aiéu xa tia X (X-ray) do tai viện linh thể học Trường

Tổng hep Ty do Berlin ite)

ng sink hoc;

ộc tỉnh cấp và bán cấp theo phương pháp của viện ghiệm thuốc Bucaret (Ituman)) tại việp Y học cổ

Trung vương

ic dụng giảm đau trên máy Ánalgesymetber, thực

Trang 5

~ Thử tác dụng kháng khuẩn bằng kỹ thuật khuếch tán

trên môi trường đặc, đo đường kính văng vô khuẩn dánh

giá tác dụng ức chế vi khuẩn đối chiếu với một số kháng

sinh

- Xác định hoạt tính chống oxy hoá trên ty thể tế bào gan

chuột Thực hiện phản ứng peroxy hoá lipit màng ty thể

và dịnh lượng Malodialdehyd (MDA) tao thành bằng phần

ứng với thiobacbituric Sản phẩm màu được đo bằng quang

phổ kế ở bước sông 535ðnm Hoạt tỉnh chống oxy hoá (AOA) của mẫu thử được tỉnh bằng % lượng MDA giảm di so với lô chứng (ứng với lô chitng co AOA bing 0)

II KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

1- Về mặt Lhực vật

1.1- Xáo định tên khoa hoo:

Chúng tôi đã lấy được mẫu cây có hoa, quả đem về phân tích và GS Và Văn Chuyên đã định tên khoa học của cây

ché day lA :Ampelopsis cantoniensis Planch Ho Nho (Vi, baceae)

điểm thực vật của

Cây chè đây còn có tên gọi là Thau ra (Tay), Khau rả

(Nùng) mọc ở vùng núi tỉnh Cao bằng Quan sát thấy các

đặc điểm s

dạng đây leo dài tới trên 10m, thân non có màu xanh, thân già màu nâu, thường leo lên các bụi rậm, cây to khác, hoặc mọc bò lan trên mặt đất Cây sống nhiều năm

- Lá mọc so le, mỗi lá có 7 11 lá chét, lá chét lẻ (cuối cùng) thường to hơn các la chét khác La chét đầu đôi kbi phan nhánh tạo thành 1á kép 2 lần lông chim Tua cuốn mọc đối

diện với lá

- Hoa : mọc thành cụm xim hai ngả đối diện với lá và ở đầu cành, cuống cụm hoa thường đài 4 - ð em mới phân

nhánh Hoa nhỏ,cuống mỗi hoa Ð - 2 mm phủ nhiều lông

Đài : 5 liền nhau thành hình chén cao Lnm phủ nhiều

lông nhỏ

Tràng : 5 cánh rời nhau, rộng 1 man, dài 1,8 - 1,5mm hai mép uốn cong thành hình mỗi giầy

Bộ nhị : chỉ nhị dài 0,ðqam đính lưng, bao phan 0,5mm

hướng trong Bao phấn 2 ô, khi chín nứt dọc thành 3 rãnh

Trang 6

Bộ nhuy : bình trụ, bầu trên có 8 - 3 lá noãn hàn liền, 1 vôi, L núm

- Quả : loại mọng, lắc non có màu xanh, khi chin mau dé, trên đỉnh quả côn vết tích của vòi nhuy như một cái gai nhỏ

- Hạt : Quả chứa 9 - 3 hạt nhỏ mặt ngoài màu nâu den, 2

mớp trắng trong, vó cứng như hại chè

1.3- Dac điểm “Tiêu bản cắt ngang lá, nhuộm kóp, soi dưới kính hiển vị, vì phẩu lá : quan sát thấy các đặc điểm sau :

- Hình dạng tiêu bản có đặc điểm : Gân chính của lá lồi nhọn hình tháp về phía mặt trên phiến lá

- Về cấu tạo : Từ ngoài vào trong có : 1: Biểu bì 3: Mõ dày 3: Lông che chở đơn bào 4: Bỏ sợi 5: Bó li be - gỗ gân chính 6: Mô dậu 7: Bỏ libe - gố gân phụ

8: Tế bào mô mềm chứa Ca oxalat hình kim

9: Lỗ khi ở biểu bì dưới

1.4- Đặc điểm vi phẩu Lhân : : Biéu bì : Mô mềm vỏ Mô dây : Bó sợi : Bó libe - gỗ : Tia ruột : Mô mềm ruột 1.5- Dac điểm bột lá : Dược liệu sấy khô, tán nhỏ Soi dưới kinh hiển vì thấy các đặc điểm sau :

1: Lông che chở đơn bao

Trang 9

2- Vé thanh phan hod hoc :

.1- Xác định các nhóm chất có trong dược liệu

Kết quả định tính các nhóm chất có trong dược liệu được ghi ở bảng 1 Bảng 1 : Kết quê định tính các nhôm chất trong dược liệu Các nhóm chất Phản ứng Kết quả | Kết luận + Pit Shinoda + 1

FLAVONOID + Vai NaOH 10% + | Co Flavonoid + Vai hai NI; +

= Vdi dd AICh 2%

SAPONIN - Tạo bọt Ï Không có Saponin

ANTRAGLYCOSID_ |- Với NaOH = Khong 06 Antraglycosid ‘TANIN + Voi dd FeCl, 8% „ Với dd gelatin 2| + + C6 Tanin

ALCALOID ~ Với T.T, Mayer - Véi T-T Bouchardat = - Khong cé Alealoid ~Véi.T Dragendorff | -

ACID HỮU Cơ + Bột Na;COx ‡ + Có acid hữu cơ

ĐƯỜNG KHỨ + Fehling A+FehlingB | + Cá dường khử

Hariosenon ~ Pu Licbermann + Có phytosterol CHẤT BÉO - Nhỏ 1-8 giọt đ/chiếc ——— } Không có chất béo

lên giấy lọc hơ nóng i

2.2 Xac dinh cáo nguyên tố vi lượng trong lá chè dây

ết quả phân tích trên máy quang phổ phát xạ UCII - 30

(Nga) tại phòng phân tích quang phổ của cục Địa chất Việt

Nam cho biết:

Mn : 0,7%, Mg : 0,5%, Ca :0,5%, Si : 0,09%, AI : 0,007,

Cu :0,005%, Cr : 0,002%, Fe : 0,001%, Ag : 0,001% va Ti : 0,001%

2.3- Dinh tinh Flavonoid trong dude liêu bằng SKLM,

- Dùng chất hấp phu : Silicagen G MERCK da trang + Dich chấm sắc ký : địch chiết dược liệu bằng cồn - Hệ dung môi khai triển

Toluen : Ethylacetat : Acid formic |5:6:1)

Sau khi khai triển tấm sắc ky cho bay bết hơi dung môi rồi quan sát dưới ánh sáng thường, đưới đèn tử ngoại, hơ trên

hơi amoniac, phun thuốc thử là hỗn hợp acid oxalic - boric

10% [5:15 ] Kết qua được ghi ở bảng 2

Trang 10

Bang 2: Vi tri va màu sắc các uết trên sắc hý lớp móng

RE DG dim | 4 sang UV NHạ + Dạd Borie: oxalic

2.4 Định lượng Flavonoid toàn phần

, Qua định tỉnh chúng tôi thấy trong bột lá chè dây, ngoài flavonoid cén cé ta-nin va clorophyl do dé trong qua trinh định lượng đã tién hanh loai clorophyl bang ete dau hoa va loại tanin bằng da hoac dung dich gelatin 3%

Quả trình dịnh lượng dược thực hiện Lheo nguyên tắc sau:

Cân chính xác khoảng 2g bột được liệu chiết trong bình Soxhlet bang ete dau hoa dé loại clorophyl Sau đó lấy túi

dược liệu ra để ở nhiệt độ phòng cho bay bết hơi dụng môi

rồi chiết kiệt flavonoid bằng cồn 70°, cất thu hồi cồn, còn

dich chiết nước, để nguội rồi loại tanin bằng bột da hoặc

bang dung dich gelatin 3% đến khi không còn tửa xuất hiện

Chiết lấy kiệt flavonoid bằng ethylacetat, bốc hơi dung môi rồi sấy cắn đến khối lượng không đổi, đem cân Hàm lượng

flavonoid toàn phần chứa trong mẩu thử dược tính theo

công thức :

Trang 11

Bảng 3: Hàm lugng Flavonoid toan phần trong lá chè dây

b: khối lượng cắn khô

a: khối lượng dược liệu khô tuyệt đối Kết quả định lượng được ghi 6 bang 3

Mẫu Hàm lượng flavonoid (6)

Loại tạp bằng bột đa Loại tạp bằng dd gelatin 3% 1 19,18 18/03 z 17,96 17,08 1 3 18,01 17,88 4 18,08 17,81 5 18,61 18,15 8 17,80 18,29 TB 18,27 = 0,5! 18,03 + 0,17 Nhan xét :- Ham ligng ‘flavonoid toàn phần trong lá chè dây kha cao (> 18%)

- Kết quả định lượng ở phương pháp loại tạp bằng

bột da và phương pháp loại tạp bằng dung dịch gelatin 3%

gần như nhau (sự sai khác không có ý nghĩa) 9.5- Định lượng tanjn

Chúng tôi đã định lượng tanin theo phương pháp oxy hoá

(dung KMn0, 0 0,1N, chi thị mãu là Sulfoindigo) trong DDVN

Iva phuong phap tia voi b6t da theo DDVNII tap 3 Kết quả định lượng dược ghi đbảng 4 | Bảng +:

I Ham higng Tanin (%)

Phương pháp oxy hoa Phương pháp tủa với bột da 1 11,85 l 10,44 2 10,59 11,59 3 13,68 13,45 4 12,89 11,49 5 12,25 12,11 6 11,88 12,04 TB 12148 2} 111 11,85 : 1,03 | Nhận xét: - Hầm lượng Tanin trong lã ché đây kha cao (114)

„ Kết quả định lượng bằng phương pháp oxy hoá cao hon phương pháp định lượng bằng bột da,nhưng sự sai khác không có ý nghĩa

Trang 12

2.6- Chiết xuất và phan lap Flavonoid

2.6.1- Chiết xuất :

Qua khảo sát với một số dung môi va điều kiện chiết xuất, chúng tôi đã lựa chọn phương pháp chiết nóng với cồn70° Quá trình chiết xuất và tỉnh chế được tom tắt ở sơ đồ sau : Bột dược liệu + cồn 0° Dịch chiết cồn; n thụ đượe| Dịch chiết nước + gelatin + than hoạt - |_————— | Tạp chất | Tia Flavonoid ad" Két tinh lai Hỗn hợp Flavonvid| tinh khiết

2.6.2- Phân lập Flavonoid F, va Fa,

Dùng phương pháp sắc ký cột cải tiến, dung môi phan hấp

phụ là: Toluen : etylacetaL: acid formie [ã:6: 1] Kiểm tra các phân đoạn bang SKLM, gộp các phân đoạn cô 1 vết, cho hốc hơi dung môi, kết tình lại nhiều lẩ,sẽ thu được 2 chất tình khiết ký hiệu là Fy va Fp 2,6.8- Kiểm tra độ tình khiết của chất P, và F; trên SELM và sắc ký giấy

- Hoà tan tinh thé I’, và F; thu được trong côn để chấm

sic ky Chấm 2 dung dich F, va E¿ lên ö tấn

hấp phụ là Silicagen G (MERGK)đã tráng sẵn, sau đỏ khai %riển trên 3 hệ dung môi khác nhau :

Toluen : Bthylacetat : acid formic [5:6:1] 5 I: CH,OOH : HCI: H,O [30:53:10]

HH: n‹ BuOH : Rh Hgi HO [451251

Trang 13

Chiều 2 : CHạCOOH : HạO [ lỗ : 8õ |

Kết quả : Chất F¡ cũng như F; chỉ xuất hiện trên các tấm sắc kỹ lớp mỏng và sắc kỷ giấy 1 vết màu vàng khi hơ trên hơi amoniae và phun dung dịch acid boric - oxalic 10% Diéu đó chứng tỏ F; và F; la những đơn chất tỉnh khiết,

9.7- Nhận dạng chất F,

+ Chất F, thu được ở dạng Linh thể hình kim màu vàng,

không mùi, không vị, Rất it tan trong nước, tan it trong

nước nóng Tan trong cồn, trong ethylacetat Ít tan trong ete

và hầu như không tan trong benzen, clorofoxm Tan được

trong các dung địch kiểm và aoid

- Nhiệt độ nóng chảy : 12 - 315°C

- Phổ tử ngoại đo trong etanol (PA) cho Amax : 375,5nm và 983,5nm, đặc trung cho cấu trúc Flavonol

- Phổ IR :đo dưới dạng viên nén KDr, cho cáe băng hấp thu mạnh ở 3200, 1650, 1610, 1500, 1320 °°”, dặc trưng

cho cấu trúc phân tử có nhóm OH - pheno], ©= G nhân thơm va C=0

- Phổ khối (MS)

Cho pic] M+1]" : 819, phân tử lượng M = 318, tương

ứng với công thức Ở¡¿H;sO; và eö cáo píc phân mảnh : 308, 274, 257,232, 217, 181, 165, 149, 126, 109 3.7.6- Phổ TH - NMR và “C-NMR

Phổ 'H-NMR đã chững minh sự có mặt của 10H, trong,

dé có 6 -OH Phổ 'C-NMR cho kết quả trong phân tử E; có 15C Giá trị do của các H và Ở được ghi ở bảng ð Qua đó cho thay vj (ri cde proton và © phù hợp với cơng thức đã dự

đốn

Trang 14

Béng 5: S6ligu phO1H-NMR va °C-NMR cia F, Proton éppm ebon 5ppm _ HE 6,295 02 146,328 HS 6,120 G3 186/746 1 H-#và H-8“ 7,245 | G4 175,481 OH-3 7,923 † C5 l 156,049 OHS “12,2 + 12/4 G-6 98,011 OH-7 G7 160,662 OH-3! C8 93,033 on] ~84> 94 C8 135,383 OHS: C10 ¡ 108,898 e1 I 121,037 cetvace | 107,129 | a va Cố" 163,691 - ce 145,340

2.7.7- Pho nhiéu xa tia x (x - ray)

Phổ nhiễu xa tia x cho biét cấu hình không gian của chất

F, (inh 1)

Kết luận : Chất F, duge xac dinh 1a 3, 5, 7, 3', 4’, 5' hexahydroxyflavon hay myricetin

2.8, Nhan dang chat Fy,

- Chất F; ở dạng tỉnh thế hình kim màu vàng nhạt, không

mùi vị; Rất ít tan trong nước lạnh, tan tốt trong nước sôi

'Tan được trong cồn và ethylacetat Ít tan trong ether vA

hầu như không tan trong benzen và cloroform - Nhiệt độ nóng chảy ¡ 225 - 227°C

Trang 15

- Phổ hồng ngoại cho các băng hấp thu mạnh ở 3230,

1600, 1550, 1470, 1320 °®'1, đặc trưng cho cấu trúc phân tử có nhóm OH - phenol, C = C phan thom, € = 0

- Phổ khối cho pìc |M+1]+ 321.; phân tử lượng M = 320, tương ứng với công thức phân tử C¡;H;zO; và các píc phân mảnh của Fy

- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 'H-KMR và '”C-NMR và các phổ tương quan 2 chiều !H- 'H-COSY; 'H -ÝC -COSY

Trang 16

MINA 2

- Kết luận : Các kết quả phân tích phổ cho thấy chất Ƒ; được xác định là 8, 5, 7, 3), 4', õ' hexahydroxyflavanon hay

nh cất

: chuột nhắt trắng mua tại Viện vệ sinh dịch

im bdo tiêu chuẩn thí nghiệm, không phân biệt trong lyong [9g + 1g im thit: Flavonoid Fy, E; và chế phẩm YP nh : Chia chuột vào ð lô, mỗi lô 6 con, cho mỗi

nợ 0,Aml hỗn dịch E; hoặc Ƒ¿ hoặc chế p Ẩm

YP trong nước bằng bơm tiêm có kim đầu tù ở các khác nhau Quan sát các biểu hiện của chuột

Trang 17

Nhận xét : + Liều 7.500mg/kg thé trọng chuột là liều tối da

cua chat F, va Fa, voi liều 6500mg/kg thể trọng chuột là lề

tối da của chế phẩm AMPELOP có thế cho chuột uống được

+ Quan sát các biểu hiện của chuột trong 48 giờ

và sau 72 giờ, chuột vấn hoạt động bình thường, không có chuột nào chết trong các lỗ thí nghiệm

3.2- Thử dộc tỉnh bán cấp của chế phẩm Ampelop

3.2.1- Sac vật : Chon thé khoẻ mạnh, cả đực lấn cái, có trọng

lượng 9,5 kg - 3,0 kg, nuôi trong điều kiện của tổ chăn nuôi viên Ÿ học cổ truyền Hà nội

3.2.2: Chỉ tiêu quan sát:

- Sinh hoá : điện di proteìn huyết thanh, uyê máu

- Huyết học : Hồng cầu, bạch cầu, công thức bạch cầu, tốc dg mau lang (VSS)

3.2.3- Liéu lugng thudc thi : 375mg/kg thé trong/ngay

3.2.4 Cach tidn hanh :

Lấy máu thỏ bình thường 3 lần sau đó lấy trị số trung bình để có trị số bình thường chỉ tiêu quan sát như trên Sau khi lấy máu bình thường cho thỏ uống thuốc với liều

Trang 18

BANG 8 Tốc

ế Trung bình Hồng | Bạch | độ Công thức bạch cẩu Điện dì protein Uyê

Trang 19

Ghi chú: L:limpho M: mono (đơn nhân) AL:albumin

Nhận xét : So sánh trước và san khi dùng thuốc thấy các biến đổi của huyết học và sinh bố là khơng dang kế, có

nghĩa là thuốc không độc hại đối với súc vật thí nghiệm sau

thời gian dùng dài ngày (một tháng rười),

8.3- Thăm dò ảnh hưởng của Flavonoid F, trên di truyền

3.3.1- Ảnh hưởng trên nhiễm sắc th

Thi nghiệm được thực hiện trên 60 chuột đực, trong đó 10

chuột được dùng làm lô chứng; 50 chuột được uống thuốc

liền trong 7 ngày

Két qua đánh giá qua tần số rối loạn nhiễm sắc thể của tế

bào tuỷ xương và tình hoàn được ghỉ ở bảng 9 va 10

Bảng 9: Tân số các rối loạn nhiễm sắc thể ở tế bào tuỷ xương

Số | Số tế bào Các kiểu rối loạn 'Tế bào

Số _ | Số tế bào Các kiểu rối loạn

Nhóm | chuột | đánh giá Ủnivalent <20 Babei| Ca

xX-¥ NST thường bivalent trí

Ghất F1 | 50 2400 5,0611,65 | 0,9810,32 |0.672022 |0/2440/08 | 0,02 Chứng |10 468 4,6811,07 | 1,2440,29 |0/892014 [0,271,038 | —

tp 30,05 20,05 > 0,05 > 0,05

Nhận xét : Qua cac bang trên cho thấy tần số các dạng rối

loạn nhiễm sắc thể ở tế bào tuỷ xương và ở tế bào tỉnh hồn

khơng có sự sai khác đáng kể giữa nhóm chứng và nhóm tha (p> 0,05) và không gặp những tế bào mang nhiều rối

Trang 20

Bors

3.8.2- Đánh giá trên sự sinh sản

Dùng thử nghiệm gây chết trội Tiến hành ghép chuột đực va ci sinh sân Quan sát và nhận xét quá trình sinh sản qua mỗi „thời kỳ Kết qủa quan sát được ghi ở bang 11, 12, 13 Bảng 11: Tỷ lệ chuột giao phối uà chuột thự thai,

Nhôm Số chuột Sổ chuột cái giao phối] _ Số chuột cái thụ thai cái thị nghiệm _| Số lượng % Số lượng % uống chất F1 | 90 a 93,33 84 93,33 PzP P > 0,05 P> 0,05 ‘Dai 1x doi | 60 57 P> 0,05 95,0 56 P>0,05 93,33 Chứng 20 950 19 95,0

Nhận xét Két qua thi nghiệm cho thấy không có sự khác

biệt về hiện tượng giao phối và hiện tượng thụ thai giữa

nhóm chứng và nhôm dùng thuốc F (P > 0,05) Tỷ lệ giao

phối và tỉ lệ thụ thai ở đời 1 không giảm so với thế hệ P Bằng 13 : Tình trạng phát triển phôi thai của chuột, Số Số Số phối thai, Chỉ số | Chỉ số Nhóm | chuột | hoàng |Sống | Chết | Chết trứng | mất thể sớm muộn | chết | lãm tổ | trứng Uống 279 al 14 4ã 344 8 FI 42 332 | 84,08% 1 9,24% | 4,21% | 13,98% | 97,60% | 2,40% [pxp p>0,05 _| p20,05_| p>0,05 | p>0.05 | p>0,05 Đời 1 178 16 14 30 209 10 x 26 219 | 83,73% | 7,20% | 6,39% | 14,35% | 95,43% | 4,56% DAL p>0,05 | p>0,05_ | p>0,05 | po0,05 | pa0,05 Chứng| 9 92 Tí 6 6 18 89 8 837 | 652% |6,02% |18,48% | 96/739 | 3,26% Bang 13: Tinh trạng chuột con dược sinh ra

Nhâm Số chuột Séchugtcon | Thờigiandể | Số chuột com cái để một lừa để | đạt20gtngày) bị dị tật

Uống chất FL 42 8,2 + 1,B 40,8 + 2,6 Khong gap

PxP 81 + 348 p> 0,05 401 + 1,6 P2005 Côi trường Đổi 1 x đời 1 28 p>005 p> 0,05 hợp hở hàm bẩm sinh

Chứng 10 T8 + 24 39,5 = 25 ‘Khong gap

Trang 21

Tình trạng chuột con được sinh ra va phat triển bình

thường

3.4- Thử tác dung làm giảm độ acid

Dùng dịch chiết 50g lá chè dây (hoặc lãg cao tương ứng

với 50g 1#) Thêm dần các lượng acid có pH: 1,00 ; 1,25 ; 1,50

đến khi hỗn hợp có pH = 8 tương đương với pH của dịch vị Két qua thi nghiệm được ghỉ ở bảng 14

Bảng 14: Rhả năng làm giảm độ acid của dịch chiết lá chè dây

Số | pH dịch chiết Tượng HƠI tiêu thụ dé hỗnhợn có pH = 30ml) eT lúc đầu, HƠI cápH =1 | HCled pH = 1,25 HO) cé pH = 1,5 1 4,82 47,5 34,5 158,7 2 4,48 41/7 85,0 : 1ã1,ỗ 3 4,73 50,0 85,0 147,0 4 4,61 416 81,0 182/7 5 4,73 55,0 82,5 168,0 6 4,44 41,5 86,0 ‘ 155,3 7 4,50 47,0 80,0 1700 8 453 52,6 83,1 160/3 TB AST 49,35, 8338 158,17 j

Nhận xét : Kết quả thí nghiệm cho thấy mặc dù dịch chiết lá

chè đây có pH hơi acid nhưng vẫn có khá năng làm giảm độ

acid của HƠI trong ống nghiệm

3.5- Thử tác dụng giảm đau của chất F¡

Thi nghiệm tiến hành trên 60 chuột nhắt trắng khoẻ mạnh

có trọng lượng 18 - 30g đạt tiêu chuẩn thí nghiệm Ngưỡng

dau do bằng đơn vị garm/giây theo nguyên lý Green - Young Tính theo công thức Ww] + wo + wg twa wot 4 1= hệ số giảm đau WJ; W3; W3, wạ : ngưỡng đau đo lại các thời điểm 201, 40,

60', 90' sau khi cho chuột uống thuốc w„ : Ngưỡng đau trước khi cho chuột uống thuốc

Súc vật thí nghiệm được chia lam 5 16 :

Lô 1: Kiểm tra dãy đáp ứng đau trên đuôi chuột nhắt trắng

trong thời gian thí nghiệm 90'

Lô 3: Lô chứng - cho chuột uống 0,õml nước cất

Lô 3 : Cho chuột uống chất F1 với liều 250mg/kg

Trang 22

Tô 5: Cho chuột uống liều 1250mg/kg

Kết quả cho thấy

- ở liều 2ö0 mg/kg, ¡ = 0,87 không có tác dụng giảm đau ở liều 625 mg/kg, i = 3,78 có xu hướng tăng ngưỡng dau lên cao hơn cả

- ở liều 1250 mg/kg, ¡ = 3,19 ngưỡng đau có tăng song kém

hơn so với liều 625 mg/kg

3.6- Thử tác dụng kháng khuẩn :

Thử tác dụng của chất Fy, Fx, chế phẩm Ampolop trên 19 chủng vi khuẩn so sánh với một số kháng sinh trong cùng

điều kiện Kết quả được ghi ở bảng 15 Bang 15: Tée dung te ché vi khuẩn,

Sẽ Chung [Dungdich tht l% | Mau déi chidu

TT vi khuẩn Fy| Fa] Ampelop 7T By 1 S.aurens ATCC 12228 11,0) 18,0 15,6 19,0 2 S.aureus 10835 12,0 12,5 16,0 18,0 | 3 S.aureus 108109 tL 13,0 15,8 19,5 4 S.aureus 10838 10,0 18,0 35,5 | 18,5 5 E.coli 0126-B16 0 12,0 14,0 0 6 |Ecoli108-47 9 05 9 9 7 Klepsiclla 128 18,2 12,0 20,4 8 | Proteus mirabilis 0 9 0 9 | Proteus 10864 | 0 0 0 10 Samonella typhy 1 9 10,01 10 11 Samonella typhy 10812 9 ito 10 12 | Shigella 0 9 0 13 | Pseudomonas aeroginose! 0 0 0 4 14 B.cereus ALCC 9846 13,0 14,0 18,0 22,0 80 15 B.cereus ATCC 21178 13,2 13,8 17,0 20,0 18,2 16 B.Subtilis ATCC 6633 13,8 13,2 18,5 18,2 17 | Bosubtilis 720 190| 13,0! 16,0 1 19,0} 18 B.pumilus ATCC 8241 12,0 14,2) 170 | 15,0 18 | Candida albiears ATCC a0, 110 THÔ 10231 1 - Mẫu thử : Pha nồng độ 1% - Mẫu đối chiếu : Khang sinh: ‘Lx: Tetraxiclin Er : Erythromyxin Pha ở nỗng dộ 2 Ul/ml

3.7- Thứ tác dụng chống loét trên da đây chuột

Tiến bành theo phương pháp thắt môn vị của chuột nhắt trắng, mổ dạ dày và quan sát các điểm xung huyết, so sánh

Trang 23

rer giữa nhóm chứng và nhóm thử Các nhóm thử được dùng thuốc liền trong 3 ngày trước khi thí nghiệm Kết quả được ghi ở bang 16 gì EL tt Bảng 16 : Ảnh hưởng của chè dây lên chỉ số loét Nhóm Chỉ số loét Tỉ lệ % P + Ching 7,60 + 2,17 100 + 27,73 - Chè dây 58/kE 5354142 | 70/39+18/72 < 0,01 + Chất E1 (1g/kg) 5,50 + 1,50 72,56 + 19,73 <0,01 - Chất F3 (1g/kp) 6,80 + 2,36 89,47 + 31,05 > 0,05

Nhận xét: Dịch chiết lá chè đây và chất F¡ có khả năng

chống loét rõ rằng, còn chat F, chưa thể hiện rõ tác dung

(p > 0,05)

3.8- Thử tác dụng chống oxy hoa

Đánh giá hoạt tính oxy hoá trên quá trình peroxy hoá lipit

của tế bào gan chuột Ủ thuốc với tỉ thể tế bào gan Đo lượng

malodialdehyd tạo thành rồi tính ra boạt tính chống oxy hoá

MDA (Malodialdehyd - tính bằng nanomol) xác định bằng

phương pháp đo quang sau khi thực hiện phân ứng tạo màu

với thiobacbiturie

AOA (Antioxydant aotivity) : boạt tính chống oxy hoá của xấu thử được tính bằng % lượng MDA giảm ải so với lô chứng (lô chứng cô AOA bằng ©)

Trang 26

Bảng 17 : Hoạt tính chống oxy hoá của Flavonoid Fy Fy tà chế phẩm AMPELOP 10" 20' 30' Mau | Nẵng độ Pp thử | ug/mg L

MDA |AOA [MDA] AOA [MDA] AOA

nmol | % nmol | % nmol | % | Fr 0 2,48 10 [2,32 |0 3,79 |0 26 186 |24,9 |2,50 [22,6 |2,06 |19/3 |<0,05 50 1,50 |39,6 | 2,08 |35,6 ¡2,35 | 38,0 T5 0,63 |746 |1,08 |66,6 |1,88 |504 |<0,01 100 0,42 |837 |0,86 |734 |142 ;626 f2 |0 ¡#58 |0 356 |0 431 |0 | 25 1,82 [28,7 [2,57 |27,8 | 3,19 |26,0 |< 0,05 50 1,53 40,0 [2,18 |38,8 | 254 | 41,1 15 0,96 1624 |1,56 | 562 )2,29 !470 |<0,01 100 0,65 ¡754 |1,10 | 69,1 |1,61_ 61,3 9 654 |0 8,85 |0 10190 | 200 2/35 |641 '3,8L /62,6 | 4,00 |60,8 ` 500 144 |780 ¡1,73 |80,5 |1,20 |87/7 |<0,01 lmpEri| 700 115 |85,4 |0,67 |93,6 |0,1 |93,1 " 100 — |038 |942 |o19 |97,9 [019 |98,2

Nhận xét : Bang 17 cho thấy cả 8 mẫu thử flavopoid F, Fg va chế phẩm Ampelop đều cô hoạt tỉnh chống oxy hoá

rất cao so với nhóm chứng

3.9- Thy kha nang giải độc

- tác nhân gay d :cacbon teiraclorid

- Đánh giá qua việc Lheo dôi giấc ngủ tạo bởi hexobarbital - Sức vật: Dùng chuột đực khoẻ mạnh chia thành 4

mỗi nhôm 8 chuột

- Các nhóm thử cho uống thuốc từ chiều hôm trước (16 giờ)

Sau một tiếng cho uống cacbon tetraclorid cùng nhôm đối

chiếu

+ Nhóm đổi chiết

nhóm,

*'Phí nghiệm gây ngủ được tiến bành cùng nhóm

Trang 27

+ Nhóm thử chế phẩm Ampelop (3g/kg chuột) :

212 +81 phat (p < 0,05

Xết quả trên cho thấy chè dây có khả năng hạn chế tác

dụng độc của cacbon tetraclorid Tác dụng của flavonoid Fy

thể hiện rất rõ, chế phẩm Ampelop thể hiện yếu hơn

4 Bào chế một dạng thuốc đưa thử tâc dụng trên lâm sàng

Chúng tôi đã bào chế 1 dạng thuốc dùng uống đưa ra thử trên lâm sàng gọi tên là AMPELOP

Kết quả điều trị loét đạ dày - hành tá tràng (đã điều trị 73 bệnh nhân chia làm 3 nhóm

nhóm 1 : điều trị chế phẩm Ampclop : 38 bệnh nhân

nhóm 2: điều trị Alusi : 34 bệnh nhân )

(Do Bs Vũ Nam thực hiện đưới sự hướng dẫn của

GS Hoang Bao Chau va GS Nguyén Khanh Trach)

1- Chế phẩm Ampelop có dụng cắt cơn dau do loét đạ

day - ta trang, Sau khi đừng thuốc 1 tuần cỏ trên 50% bênh nhân

hết đau và đa số hết đau san 2 tuần (89,485) Thời gian hết đau

trung bình là 8,#8 ngây (nhóm bệnh nhân đùng Alusi có 4 bệnh

nhân không hết dau sau 6 tuần diểu trị và thời gian hết dau

trung bình là 17,66 ngày) Sự khác biệt này có ý nghĩa thống kê với P < 0,02

2> Ampelop có tác dựng làm lành ổ loét dạ dày - tá tràng (78,84%) cao hơn Alusi (47,07%) với mức ý nghĩa P < 0,01

3- Ampelop cõ tác dụng làm sạch Helicobater Pylori với tỷ lệ 45,71% còn Alusi là 20% Sự khác biệt này có ý nghĩa thống kế

P<0j01

4- Ampelop cải thiện mức độ hoạt động của viêm dạ dày tốt hơn Alusi với mức P < 0,01

Trang 28

KET LUAN 1- Về mặt thực vật :

- Đã phân tích các đặc điểm hình thái của cây chè dây, xác định tên khoa học là : Ampelopsis cantoniensis Planch - Họ Nho

(Vitaceae)

- Đã nghiên cứu đặc điểm vi phẩu lá, vi phẩu thân, đặc điểm bột góp phần tiêu chuẩn hoá được liệu

2- Về thành phần hoá học :

- Định tỉnh các nhóm chất trong Dược liệu cho thấy : Trong 1a cd Flavonoid, Tanin, Acid hitu co, đường, hợp chất phytLostorol Trong đó flavonoid và tanin có hàm lượng cao

- Kết quả phân tích quang phổ phát xa cho thấy trong lá chè dây có các nguyên tố vị lượng : Mn (0,7%), Mự (0,6%), Ca (0,9), Sĩ (002%), AI (0,007%), Cu (0,005%), Cr (0,002%), Fe (0,001%), Ag (0,001%) va Ti (0,001%) - Đã định lượng Flavonoid toàn phần và định lượng tanin trong lá : + Ham luong flavonoid : 18,15% + 0,36% + Hàm lượng Tanin : 10,82 - 13,30% - Đã chiết xuất flavonoid toàn phần và phân lập dược 2 flavonoid tình khiết F1 và F8

- Dựa trên cơ sở phân tích các phổ UV, IR, MS, *H-NMR và

1C NMR và phổ nhiều xạ tia X đã xác định cấu trúc hoá học của

chất F; là myricetin (8, 5, 7, 8, 4, 6" hexahydroxyflavon) và chất F, là dihydromyricetin (3, 5, 7, 3', 4', 5' hexahydroxyflavanon)

Day la 2 flavonoid lần đầu tiên được công bố ở Việt nam có trong

cây chè đây Ampelopsis cantoniensis Planch - Vitaceae

3- Về tac dung sinh hoc:

- Da nghién citu doc tinh cap eda Flavonoid Fy, Fy và ché

phém AMPELOP, thi déc tinh bán cấp của chế phẩm AMPELOP, Kết qua cho thấy flavonoid Tụ, E¿ và chế phẩm Ampolop đều không độc, có thể dùng nhiều ngày không ảnh hưởng tới các chỉ tiêu sinh hoá và huyết học Ngoài ra cũng đã chứng mình

Flavonoid F¿ không gây ảnh hưởng tới sự sinh sản và di tru

- Chè đây có tác dụng làm giảm độ acid của dịch vị, có tac

dụng giảm đau, có tác dụng ức chế sự phát triển của một số

chủng vì khuẩn, có tác dụng ức chế các ổ loết,

Két qué nay góp phần giải thích việc sử dụng chè dây làm

Trang 29

- Chè đây và các Flavonoid E, F¿ có hoạt tính chống oxy hoá

cao, có khả năng thải độc theo cơ chế gốc tự do trên chuột thí

nghiệm

4- Ứng dụng trên lam sang:

Chế phẩm Ampelop sử dụng trong điều trị loét dạ đây -

Định dạng
Số trang	47
Dung lượng	5,87 MB