BO KHOA HOC VA CONG NGHE VIỆN DƯỢC LIỆU
BAO CAO TONG KET DU AN SAN XUAT THU NGHIEM GẤP NHÀ NƯỚC Z NHÀ
HOÀN THIỆN QUI TRÌNH SẢN XUẤT THUỐC NHỎ MŨI TỪ CÂY NGŨ SẮC
MÃ SỐ KCI0.DA07
CHỦ NHIỆM DỰÁN: PGS TS NGUYÊN THƯỢNG DONG
CƠ QUAN CHỦ TRÌ: VIEN DUGC LIEU
5917 28/6/2006
Trang 2BO KHOA HOC VA CONG NGHE VIỆN DƯỢC LIỆU
BAO CAO TONG KET
DU AN SAN XUAT THU NGHIEM
CẤP NHÀ NƯỚC
"HOÀN THIÊN QUI TRÌNH SÂN XUẤT THUỐC NHỎ MŨI TỪ CÂY NGŨ SẮC"
MA SO KC10.DA07
CHUNHIEM DUAN: PGS TS NGUYEN THUQNG DONG
CO QUAN CHU TRI: VIỆN DƯỢC LIỆU
CO QUAN CHU QUAN: BO KHOA HQC VA CONG NGHE
THGI GIAN THUC HIEN: 1⁄2003- 1/2006
TONG KINH PHIDUAN: 2.900 TRIEU DONG
RINH PHÍ TỪ NGÂN SÁCH: 1.009 TRIỆU ĐỒNG
KINH PHi THU HOI: 595 TRIỆU ĐỒNG
Trang 3DANH SÁCH NHỮNG NGƯỜI THỰC HIỆN CHÍNH 10 31 12 18 14 15 16 LT 18 PGS.TS DS DS CN TS TS DS PGS.TS DSGKI DSGKI DS GS.TSKH TS ON Ths CN Ths Nguyễn Thượng Dong Nguyễn im Phượng Hé Thi Xuyén Chu Thi Ngo Lê Kim Loan Phạm Thanh Trúc La Kim Oanh Trương Vĩnh Phúc Nguyễn Kim Cẩn Dinh Thị Thuyết, Nguyén Kim Bắch Nguyén Thi Dung ỔTran Van Sung Trần Văn Lộc Nguyễn Thế Anh Vũ Đức Chắnh Dao Đứo Thiện Lê Thị Giảng
Viện Dưgo liệu Viện Dưge liệu Viện Dưgo liệu Viện Dưgo liệu Vign Duge ligu Vign Duge ligu Vign Duge ligu Vign Duge ligu Vign Duge ligu Vign Duge ligu Vign Duge ligu Vign Duge ligu Viện KH & ƠN Việt Nam Viện KH & ƠN Việt Nam Viện KH & ƠN Việt Nam Viện KH & ƠN Việt Nam Viện KH & ƠN Việt Nam
Viện Riểm Nghiệm
Trang 411 TT 1.12 1.18 114 1.15 1.3 I 21 22 2.2.1 2.2.2 2.2.38 2.2.4 2.2.5 Tl 3.1 811 B12 3.2 821 8.2.2 8.2.38 MUC LUC ĐẶT VẤN ĐỀ TỔNG QUAN
Công dụng và những nghiên cứu ở nước ngoài Gong dung theo Y hoe dan gian va YHƠT
Những nghiên eúu về táo đụng của cây ngũ sắc ổ nước ngoài Những nghiên súu về thành phần hoá học
Nghiên cứu nông nghiệp Nghiên oứu về thực vật
Tình hình nghiên eứu trong nước
NGUYEN LIỆU VẢ PHƯƠNG PHẬP NGHIÊN CỨU
Nguyên liệu
Phương pháp nghiên cứu Nghiên oứu chiết xuất
Xây dung tiêu chuẩn chất lượng
Phương pháp theo đôi độ ổn định ca thuốc
Phương pháp nghiên cứu về táo đụng được lý Nghiên oứu lâm sàng
KẾT QUÁ NGHIÊN COU
Hoàn thiện qui trình công nghệ chiết xuất SP8 từ cây ngũ sắc
Nghiên eứu chiét xudt SP3 tit cay ngũ sắc Quy trình sản xuất bột SPả từ cây ngũ sắc
Hoàn thiện qui trình sản xuất thuốc xịt mũi ngũ sắc
Công thức pha chế 1 đơn vị thành phẩm
Gong thite cho 1 mể sản xuất 30.0000 15m]
Trang 58.2.4 8.2.5 8.26 3.2.7 8.2.8 8.29 8.210 8.211 3.3 8.3.1 8.8.2 8.3.8 8.8.4 3.4 35 3.6 8.61 8.6.2 8.6.3 8.6.3.1 8.6.3.2 8.6.3.3 8.6.3.4 8.6.3.5 9.7 IV 41 411 4.12
Sơ đổ các giai đoạn pha chế thuốc xịt mũi Agerhinin ỘThiết bị đàng trong pha chế thuốc xịt mũi Agerhinin Mô tả qui trình sắn xuất
Vệ ginh vô trùng và an tồn lao động
Kiém sốt, kiểm nghiệm
Nội đụng, kiểm tra trong quá trình sản xuất, Tư phẩm, phế phẩm
Hồ sơ làm việo sẵn thiết,
Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng Xây đựng tiêu chuẩn nguyên liệu
ỘTiêu chuẩn sở sổ bột SP8
ỘTiêu chuẩn sơ sổ thuốc xịt mũi Agerhinin
ỘTiêu chuẩn ằằ sổ bao bì
Két qua theo déi độ ổn định của thuốc
Hàm lượng kim loại nặng trong bột SP8 và thuốc xịt mũi Agerhinin
Tác dụng được lý và độc tỉnh bản trường điển của bột SP8
chiết từ ngũ sắc
Nguyên vật liệu và phương pháp thử Mô tả phương pháp thắ nghiệm
Xết quả nghiên cứu táo đụng được lý ỘTáo dụng kháng histamin
Ảnh hưởng trên niêm mạc mũi
ỘTáo dung chống tiết địch rỳ màng phổi
Độc tắnh bán trường điễn Xết luận
Xết quả thử nghiệm và ứng dụng lâm sang
KET LUAN VA BAN LUẬN
Bản luận
Về kết quả nghiên cứu
Trang 64.138 42 Oot Ae ewe Y hiệu quả kinh tế xã hội Kết luận TAI LIEU THAM KHAO PHU Luc
Hợp đồng nghiên oứu và phát triển sông nghệ
ỘTiêu chuẩn sở sổ được liệu ngũ sắc ỘTiêu chuẩn sở sổ bot SPB
ỘTiêu chuẩn sở sổ thuốc xịt mũi Agerhinin
ỘTiêu chuẩn bao bì
Phiếu kiểm nghiệm sủa Viện kiểm nghiệm Phiếu kết quả tra cứu nhãn hiệu hàng hoá Xết quả phân tắch mô bệnh học
Xết quả thử nghiệm và ứng đụng lâm sàng
Tigp đồng độc quyển phân phối với sông ty TNHH AN PƠ
Trang 7BẰNG CHỨ GIẢI NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT DĐVN II TCCS LDạp
Dượo điển Việt Nam IIT
ỘTiêu chuẩn eơ sổ
Liểu gây chết đ0% súc vật thắ nghiệm
ao khơ tồn phần chiết từ sầy ngũ sắc
Sắc ký lớp mồng Phân triệu
DO PH cia dung dich
Trang 8ĐẶT VẤN ĐỀ
Bệnh viêm mũi, viêm xoang mạn và đị ứng là bệnh phổ biến trong cộng đồng, nhiều nước tỷ lệ mắo bệnh khoảng 20% đân số Ở Việt Nam, thông thường hay sử
dụng thuốc điểu trị tại chỗ và toàn thần, Điều trị tại chỗ nhằm làm giảm phù nể niêm mạo, xung huyết, xuất tiết, nhiễm trùng, bằng cách nhỏ hay xịt dung dich
thuốc có tác dụng eo mạch, kháng khuẩn Điều trị toàn thân bằng cách cho người bệnh uống các thuốc kháng histamin, kết hợp với kháng sinh và eoztison nếu só bội nhiễm Bệnh viêm mũi, viêm xoang thường phải điều trị đài ngày, nên tác đụng phụ sửa thuốc như làm teo vách ngắn mũi, bổng rát, làm nặng thêm các bệnh hen phế
quản, suy giảm chức năng thượng thận
Cây ngũ sắc đã được bệnh viện Phú Thọ sử dụng chữa viêm xoang, viêm mũi só kết quả tốt, Từ những năm 70, Viện Dượe liệu đã kết hợp với khoa Tai-Mũi-Họng bệnh viện Việt Nam - Cu ba và bệnh viện Hai Bà Trưng nghiên cứu về thành phần hoá họe, tác đụng đượe lý và táo đụng trên lâm sàng của chế phẩm thuốc nhỗ mũi từ dây ngũ sắc và đã được Bộ Y tế cấp các số đăng ký NOE1-H11:00, NG44-H02-02, NƠT4-H02:03 và NG6-H0đ-04 Trong quá trình sản xuất, việc chiết xuất còn gặp khó khăn khi loại tạp Ý kiến phản hỏi từ bệnh nhân cho thấy độ xót của thuốc cao,
khi nhỗ vào hai hốo mũi còn để lại vết xanh đen, tạo cảm giáo khó chịu Để hoàn
thiện qui trình sản xuất thuốc xịt mũi ngũ sắc, đặo biệt là việo nâng cấp tiêu chuẩn
kiểm nghiệm nguyễn liệu, bán thành phẩm và thành phẩm, chúng tôi đã đẳng ký
dự án sẵn xuất thử nghiệm Bộ KH&ƠN đã ký duyệt tháng 10/8007, cho phép triển khai dự án với mã số KƠ10.DA0T với 6 nội dung chắnh:
1 Hoàn thiện qui trình chiết xuất bán thành phẩm 2 Hoàn thiện qui trình pha chế thuốc nhỏ mũi
3 Nâng cấp tiêu chuẩn chất lượng cải thiện độ trong, nghiên cứu độ PH thắnh
hợp, xây đựng tiêu chuẩn chất lượng nguyên liệu, bán thành phẩm và thành phẩm
4 Kiểm chứng táo dụng đượe lý và lâm sàng
Sản xuất 600.000 lọ thuốc xịt mũi
Trang 91 TONG QUAN
1.1 CÔNG DỤNG VÀ NHỮNG NGHIÊN CỨU Ở NƯỚC NGỒI
1.1.1 Cơng đụng theo y học đân gian và y học cổ truyền
Theo tài liệu nước ngoài: Ấn Độ, Nepal, Senegal, Nigieria, Kenya, Nam phi, Cameroon, Congo, Braxin, Malaysia, Trinidad, Venezuala, Ghana Cây ngũ sắc đã được đân địa phương sử dụng chữa vết thương, vết bổng, viêm phổi, bệnh ngoài đa, chữa ly, hạ sốt, thấp khóp, đau đầu, đau sổi, đau bụng, nhỗ mắt, khó tiêu, gây nôn,
tan mộng mất, đau nhứo, giang mai, thuốc bổ, chữa sốt rét, lợi tiểu, làm ngon
miệng, viêm đường tiết niệu, giun chỉ châu Phi, ngửa thai, long đờm, cầm máu,
thoát mề hôi, mụn nhọt, làm sẩy thai, ho, tiểu đường, sắm, tiêu độo, u bướu, chữa hen, tầm thần, chống so thất, bệnh phụ nữ (7,28,85,40)
1.1.8 Những nghiên cứu về tác đụng của cây ngũ sắc ở nước ngoài
1.1.8.1 Thử tác đụng chống viêm : Gs Marques Neto và cộng sự tại trường tổng hợp Campinas và tổng hợp bang Paraiba, Braxin đã nghiên cứu địch chiết nước sây ngũ sắc trên bệnh nhân cho thấy 66% bệnh nhân giảm đau, 24% bệnh nhân nhanh chóng khôi phụo tình trạng khóp (8)
Gs Yamamoto, Gs Moura A.C, Jose Franco, G.Magalhaes, Maria Teane Margort và cộng sự (34,đ1) đã nghiên cứu tác dụng ca eao chiết nước cây ngũ sắc trên cáo mô hình gây viêm bằng earagenin, gây phản ứng đau đuôi
chuột nhất trắng bổi dung dich acid axetic vA nghiên sứu táo dụng an thần
trên mô hình theo đôi thời gian ngũ của chuột gây bồi natri pentobaobital và táo đụng kháng hietamin trên hồi tràng chuột lang sô lập
L122, Gs Garcia E.A (19) va cong st khi nghién edu trén tim chudt lang cô lập đã nhận thấy, trên điện tim đổ khoảng PR tăng từ 80 + 1.4ms lên 105 Ậ 14ms, khoảng QT giảm từ 170 + 2ms xuống 154 + Tms, nhịp tỉm giảm từ 170 +
1Tbpm xuống 158 + #1 bpm, vận tốc lựe đẩy hang giảm từ đ1 + 2em/s xuống 4đ + 8emfs
Aehola KJ và sộng sự đã nghiên cứu tác đụng phong bế thần kinh lên
màng ngắn thần kinh eở hoành chuột cống trắng sô lập, cao chiết ngũ sắc
Trang 101.1.8 Jagetia G.Ơ và cộng sự (26) đã xác định liều 7đmg/kg cao chiết cin ngũ sắc só tác đụng giảm tỉ lệ tử vong 70,88% số chuột nhất trắng khi chiếu xạ ở liều từ 6 đến 11 GỲ tia phong xa gama
1.13.4 Shirwaikar và cộng sự (47) đã nghiên cứu tác đụng bảo vệ đạ đày chuột sống trắng của cao chiết sổn thông qua mô hình gây loét bằng ibuprofen, ethanol va stress lạnh Ở liều đ00mg/kg đã giảm số vết loét 89,83%, 99,24% và 98,71% ở các mô hình tương ứng
1.125, Duradola, Almagboul, Biola, Hoffman, Moody, PattnaiK vA céng su
(18,11,83,36) đã xáo định tỉnh đầu và địch chiết của cây ngũ sắc 06 tac dung
ức chế staplyllococous aureus, bacillus subtilis, E.coli, pseudomonas aeruginosa, candida albicans
1.1.26 Pereira Vyas, Mulchandani, Ekundayo, Ra, Kamal, R Saxema A (44) Iqbal.M (25) Mendonea.F.A (17) d& nghién ctu vA xée dinh tinh dau ngũ sắc só tác dụng ức chế để trứng và phát triển của sâu bọ với liều 2,5 dén 10 yl Precocen só tác dụng mạnh gấp 4 lần tỉnh đầu, Cáo thắ nghiệm ổ Ấn độ cho thấy, tắnh đầu só khả năng điệt 91% nhộng cửa loài sâu shistocerca gregaria, Calle và cộng sự cho biết địch chiết n hexan có hoạt tắnh chống
được ấu trùng ruổi musca domestica, Dich chiét methanol 14 tuoi vdi liéu
250 va 500 ppm gay ra thiéu hoat hormon t&ng trudng ea sau hai Ia chilo partellus precocen I, II c6 hoat tinh tte ché hormon tang trudng sitophylus orysae (15), thlaspida japonica, leptocarsia chinensis vA dysdereus flavidus
Cao chiết hoa ngũ sắo oó táo dụng điệt muỗi anopheles stephensi d liéu 188
ppm Các chromen phân lập từ rễ cây ngũ sắc só táo dụng chống cáo loại nếm thực vật như rhizoctonia solani, selerotium rolfsii, botryodiplodia theobromae, phomosis theae
1.1.8.7 Các chromen, ehroman, đảo biệt là các đẫn xuất 6-amino và 6-aoetami do só táo dụng an thần Hai poly-methoxy-flavon oó hoạt tắnh chống ung thư Cáo flavonoid khác eó tác đụng ứo chế các nấm gây bệnh hại như elsimoe faweetti, collectrichum gloeosporindes, ụiđium tingitaminum, capondium citri và diét cdc loai rép nhu ambalyseius newsami, panonychus citri
1.1.2.8, Do tae đụng kháng khuẩn, kháng nấm, điệt sâu bọ của cây ngũ sắc nên một, số nước đã đùng bột toàn cây trộn với bột đậu đen để chống sâu mọt trong
cáo kho ngũ sốc , trồng cây ngũ sắc trong sáo vườn chanh, vudn cam dé han
Trang 111.129 Nhờ sáo táo dụng đa đạng của oây ngũ sắo và mứo độ sử đụng rất lồn trên thế giới, đảo biệt ổ các nước châu Mỹ, nên tập đoàn Raintree Nuirion đã
đăng ký bản quyển tại bang Texas Hoa Kỳ về thuốc chữa động kinh, chữa yết thương, chữa suy nhượ: trắ lực và thuốc xua đuổi côn trùng điều chế từ
cây ngũ sắc (40),
1.1.8 Những nghiên cứu về thành phần hoá học
Bang 1: Thành phần hoá học của Ageratum conyzoides LẤ
sé] Tên Tén phan Số | Ham | Tal
Trang 1410 11 12 ỔTriterpen va Sterol Acid hữu od Acid béo Acid amin Vitamin Tanin Các chất khác Chromin ỔTriterpen Sterol - dihy drochroman 6 (1.hydroxylethy) - 8, 2 Ề dimethy 13, 4 Ềdihy đrochromin 1 - hydroxyl - 2,2 - dimethylchromin friedelin friedelan 38 - ol 8 - Sitosteral Stigmasterol brassicasterol Dihydrobrassicasteral spinasterol Dihydrospinasterol spinasteral Dihydrospinasterol Pumaric caffeic 6 - methyl heptadecenoic gallic protocathechuic P hydroxybenzcic Hexadecenioc Linoleic, vanillic amino -n - butiric aspartic proline Arginin eystein glutamic acid glycine Isoleucine Leucine methionin ornithine tryptophan ỔTyrosine Vitamin A, B (#).Sesamin, auraniiamid acetat phytol, các hydrocacrbon từ QuHu - CuHim conyzorigin, dolriaconten, sendoborneol Ấ endo bornylacetat, ethyl -
Trang 15TAI LIEU GOC KHONG CO TRANG 13
Trang 161.1.4 Các nghiên cứu nông nghiệp
Maglhaes và cộng sự (35) đã nghiên oứu về phân bón và mật độ trồng lên sinh khối của cây ngũ sốc - sắn lượng đạt 1,8tấn khô/ha (5,3 tấn tưi/ha), hàm lượng tỉnh đầu 0,16% trong được liệu khô Saunders K và cộng sự (43) đã xác định nguyên nhân gây bệnh vàng lá sủa cây ngũ sốc là do sự đổng nhiễm bởi AYVV DNA và ADN đạng vòng só kắnh thước 1,347nt của virus vàng gân lá Ageratum (Ageratum yellow vein virus (A.YWW), Một số công ty được ở Braxin sử đụng cây ngũ sắc làm nguyên liệu sản xuất thuốc chữa bệnh và thuốc bảo vệ thự vật, do vậy, nhu cầu được liệu này ngày càng oao, Trên thị trường thế giới, đặo biệt là nam Mỹ, cây ngũ sắc và nhiều sản phẩm của nó đã trổ thành hàng hoá quen thuộc
1.1.5 Nghiên cứu về thực
Ageraium có nguồn gốc từ Hylạp, ỘAgerasỢ có nghĩa là không già Từ
ỘconyzoidesỢ oó nguồn gốc từ: Konyz tên Hylap của Inula helenium
Johnson (1971) phân thành đưới loài là laifolium và sonyzoides Loài latifolium được tìm thấy ở cáo nước châu Mỹ, Loài sonyzoides phân bố ổ cáo vùng nhiệt đới ụó số nhiễm sắc thể 2n=80 Hai dưới loài onyzoides và latifolium là lưỡng bội cồn Ageratum conyzoides L là tứ bội
1,9, TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC
Ghi ngũ sắc (cồn gọi là chỉ sút lợn) bao gồm 4đ loài, nước ta só # loài: ngũ sắc (Ageratum conyzoides L) và tam đuyên (A.houstoriamum miller) Trữ lượng cây ngũ sắc ở Việt Nam vô càng lớn, ước tắnh eó thể khai thác hàng ngàn tấn một năm, nhất là ở trung đu và miền núi
ỘTheo kinh nghiệm đân gian, nhân đân thường dàng cây ngũ sắc làm thuốc chữa bệnh phụ nữ bị rong huyết sau khi sinh nổ Hái chừng 80-50g cây tươi, đem về rita sạch, giã nát, vất lấy nướe và uống trong ngày Phối hợp với bổ kết nấu nước
đầu, vừa thơm vừa sạch gầu, trơn tóc Lá làm thuốc đấp, chữa vết thương phần
mềm
Bệnh viện Phú Thọ (1878) đã sử dụng cây ngũ sắo chữa viêm xoang đị ứng só hiệu quả tốt,
Khoa tai mũi họng Bệnh viện Hai Bà Trưng (Hà Nội và Bệnh viện Việt Nam -
Cu ba di áp đụng chế phẩm của Viện Dượo liệu để điểu trị sáo chứng bệnh viêm
mũi xoang và só nhận xét như sau: Ộ?ức đụng tốt trong điều trị niêm mỗi xoang mgn oà niêm mũi xoang dị ứng Tác dụng kéo đài, làm giầm ngạt mỗi, giằm niêm,
Trang 17ting, ede ché phdm nay có khả năng thay thế cortison, ngũ sắc không có tác dụng
phụỢ Kết luận trên là đựa vào kết quả nghiên cứu trên T9 bệnh nhân
Về thành phần hoá học, đã xác định trong cây ngũ sắc chứa tỉnh dau, carotenoid, phytosterol, tanin, đường khổ, saponin và hợp chất uronie Đã phân lập một chất kết tỉnh và xác định là ageratoehromen, só mùi thơm đễ chịu, một chất lổng mẫu vàng eó mùi thơm của hoa và xác định là demethoxy-agertochromen Cée tác giả Đoàn Thị Nhu, Lê Hà Lệ Xuân và Quách Mai Loan (Viện Dược liệu) đã thử nghiệm trên các mô hình chống xuất tiết địch màng phổi, tác dụng ứe chế tuyến ức,
ết quả như sau:
Bang 2: Tac dụng chống viêm và chống xuất tiết địch màng phổi Phương pháp Ngũ sắc Hydrocortison thử Liểu [Tỷ lệức Liga [Týlệứe (kg) | chế (%) | P (mg/kg) | chế(% | P ; 6 | 238 | <oo1 50 22,8 | <0,01 ay phù thực| 9 36,7 |<0,01 100 39,4 | <0,002 ene 15 | 61⁄5 |<001 150 57,4} <0,002 9 | 352 | <0,02 aay tit dich] a5 | ais | coos a , , PERED a._| 619 | <0,001 87 <0,02 | 18x5ngày | 408 | <0,21 Gây u hại thực 43,6 |<0,001 | 20x5ngày | 53,3 | <o021 nghiệm , 10 | 619 Bảng 8: Tác dụng ức chế trên tuyến ứe |<00L 30 xđngày | 62,4 |<0,002 mi l Phương Ngũ sắc Hydrocortison pháp thử Tỷ lệ Tỷ lệ Liểu (g/kg)| giảm P Liêu giảm P (2) (mg/kg) (2)
chế 5x 2ngay 148 | Vonghia | 10x2ngay | 40,8 | <0,05 tuyén tie | 10x2ngay | 45,9 <0,01 | 15x2ngay | 54,9 |<0,05
chute sống | 15 x 2ngày 49 <0,01 | 20x2ngay | 60,1 | <0,02
Táo dụng chống choáng phản vệ trên chuột lang với liểu 15g/kg Ngũ sốo có táo dụng bảo vệ 48% chuột lang đối với choáng phản vệ ở liêu 20g/kg só táo dụng bảo vệ 66% súo vật, Táo dụng của ngũ sắc đối kháng lại táo dụng gây so bóp ruột của hietamin theo mô hình Magus, đã chứng mỉnh táo dụng kháng histamin của ngũ
Trang 18sấo, ở nỗng độ thấp ngũ sắc gây giãn mạch trên hệ mạch ếch và hệ mach tai thé
Nhung ô nồng độ cao hơn lại só tác đụng eo mạch
Độc tắnh cấp và LDđ0 của ngũ sắc được xác định theo phương pháp Perehin là 82g/Kg Doc tắnh bán trường điễn nghiên cứu trên chuột trong 80 ngày liên tục Kết quả xét nghiệm huyết học cho thấy ngũ sắc không ảnh hưởng đến chức năng gan, thận và tạo máu
II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1 NGUYÊN LIỆU
Cay ngfi s&c (Ageratum conyzoides L.) thudc ho ctic (Asteraceae) thu mua tai
Bắc giang và Hưng yên vào mùa hè các nắm 2002, 2008, 2004 3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1 Nghiên eứu chiết xuất: Bột SP toàn phần được chiết xuất bằng nước, loại
tạp bằng cáoh tủa với sổn 96", cd giảm thể tắch, chiết lấy phần hoà tan trong methanol và loại tạp lần 2 bằng sách tủa với axeton, theo phương pháp chiết xuất,
thông thường
8.3.3 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng
3.8.5.1 Vi phẫu được cất và nhuộm kép, rồi quan sát đưới kinh hiển vi theo phương pháp ghi trong tài liệu ỘThực tập được liệuỢ
3.8.5.8 Xác định đạo điểm bột đượe liệu: Dượe liệu được tán thành bột mịn, làm tiêu
bản rồi quan sát đưới kắnh hiển vi
2.2.2.8, Xe dinh d mất khối lượng đo làm khô: Theo phương pháp của Dược điển Việt Nam III, phulue 5.16, dang khoảng 1g chế phẩm, sấy ở áp suất
thường
3.8.5.4 Xác định tro toàn phần: Theo phương pháp của Duge dién Viet Nam IIL, phu 1ue 7.6, lượng mẫu thử là 1g
3.825 Xéo định tạp chất: Theo phương pháp của Dược điển Việt Nam III phu lue 9.4, lượng mẫu thử là 20g
3.8.5.6 Xác định cắn không tan trong nước: Cân chắnh xác 1g chế phẩm, nghiền kỹ trong cối sứ với 80ml nước trong 10phút, lọ qua giấy lọc đã sấy khô ở 10đồG đến khối lượng không đổi Tráng chày, sối và giấy lọc với 10ml nướe 8iần Sấy cắn và giấy lọc ô 108ồƠ đến khối lượng không đổi, cân, tắnh kết
quả
2.2.2.7, Xae dinh độ nhiễm khuẩn: Theo Dượo điển Việt Nam III, phụ lục 10.7
Trang 192.2.3.9, Xáo định kim loại nặng: Theo phương pháp sủa Trung tâm kỹ thuật tổng 3.2210 3.2211 3.2212 3.2218 3.2214
oụo đo lường chất lượng
Xáo định chất tan trong methanol : nước (4 : 1): Lấy chắnh xác đml thuếc
thành phẩm cho vào bình định mức 25ml, thêm methanol vừa đổ đến
vạch, lắo đều, lọc lấy địch, cho vào một cốc cân đã sấy khô đến khối lượng không đổi ở 108ồC, tráng phẫu và giấy lọc bằng 5ml methanol 80%, bốc hơi trên bếp cách thuỷ đến khô Sấy cốc và cấn 6 nhiét dd 105ồC trong 1 gid, dé nguội trong bình hút ẩm 30 phút, cân và tắnh kết quả theo sông thức:
a, 100 b
X% =
Trong đó: -a là cắn sau khi sấy khô
b là số lượng thuốo lấy đem thử (ml)
ỘThử độ trong: Tháo đầu xịt, gạn bổ nhẹ nhàng dung địch ở phắa trên, lấy khoảng #ml còn lại, lắc đều rồi chuyển sang ống thuỷ tỉnh không màu, pha
loãng bằng nước cất gấp 3 lần thể tắch Dùng tay bit chặt miệng ống, lắc nhẹ nhàng theo chiểu thẳng đứng, tránh tạo bọt Để yên trong 1 phút rồi
đem soi đưới ánh sáng đèn
Định tắnh chat tan trong methanol bằng sắs ký lớp mổng:
Lấy 0,0đg bột SP3 hoà tan trong 1ml methanol 80% làm dung địch chấm sắc ký Dung địch mẫu đối chiếu: Lấy đg bột cây ngũ sắc, thêm 100ml methanol 80%, đun hồi lưu 60 phút, chuyển vào bình gạn, loại tap lần lượt với efher dâu hoả, ehloroform mỗi lần 80ml Chiết với 80ml n- butanol bão hoà nước ô địch chiết butanol đến sạn, hoà cấn với 1ml
methanol 80% để chấm sắc ký
Dang ban méng Silicagel GE2đ4 (MereK) đã trắng sẵn, hoại hoá ban méng 4 105ồC trong 80 phi
Hé dung méi khai triển = Chloroform - methanol - nude (60:40=5) Thuée thit phun hién mau = Vanilin - acid phosphoric
Dinh tinh oligosacharid bang s&c ky 1ép méng: Cân khoảng 0,1ụ chế phẩm hoà tan trong 10ml hỗn hợp methanol/nước (1=1) Chấm 10ul, ding ban
mồng Silicagel GF254 MereK trang e&n
Hé dung méi khai trién = n-butanol = ethanol = nude (50=:
Thuốc thử = ềcnapthel
=20)
Xáo định chỉ số tạo bọt: Cân 1g bột nguyên ligu d& ray qua ray sf 82, cho vào bình nón só dung tắch 500ml đã chứa sẵn 100ml nước sôi, giữ cho sôi nhẹ trong 80 phút , lọo để nguội và thêm nước cho đổ 100ml Lấy 10 ống nghiệm oó chiểu oao 16m và đường kắnh 16mm Cho vào sáo ống nghiệm
Trang 20lân lượt 1, 2, 8 dén 10ml đung địch Bị: miệng ống nghiệm, lắc theo chiều dọc của ống trong 1đ giây, mỗi giây 3 lần lắo, để yên 15 phút Đo chiều cao sáo cột bọt, Chỉ số tạo bọt được tắnh theo công thức:
10 xĩ A
Trong đó: A là số gam bột nguyên liệu eó trong cột bọt eao Lem
3.32.15 Xác định chỉ số phá huyết: Lấy đg gelatin ngâm trong 100ml dung địch NaCl 0,9% hâm nóng trên bình cách thuỷ cho tan Sau khi để nguội ở khoảng 40ồC, thêm 8ml máu bồ đã loại ựbrin, trộn đều rồi đổ vào đĩa petri, để nguội, thạch sẽ đông lại, máu bò được phân tán đều trên địa thạch Đục lỗ thạch bằng miệng ống nghiệm để tạo ra các giếng có đường kắnh lem,
ho dung địch thổ vào đẩy giếng, để yên, quan sát hiện tượng phá huyết sau 24 giờ
3.3.5.16 Định lượng chất tan trong hỗn hợp methanol : nước (4 : 1) của bán thành phẩm: Cân chắnh xác 0,đg bột SP8, hoà tan trong 25ml hỗn hợp methanol : nước (4: 1) khuấy đều để hoà tan, lọe qua giấy lọc lấy phần địch và cho vào sốc sân đã được sấy khô đến khối lượng không đổi ở 108ồC, tráng phẫu và giấy lọc với đml methanol 80% làm bay hơi địch chiết, thu đượo cắn Sấy
cắn và oốo ở 10đồC trong 1 giờ để nguội trong bình hút ẩm 1đ phút, sân và
tắnh kết quả theo công thúc:
P 10.000 X =_ m[100-R)
Trong đó: X là hàm lượng chất tan trong butanol (%)
P là lượng cắn thu đượe (g)
m là lượng thuốc lấy thổ (ml)
5 là độ ẩm của bột SP;
3.3.8 Phương pháp theo đõi độ ổn định của thuốc
ỘTheo đôi độ ổn định của thuếo với sáo chỉ tiêu: Hình thức, độ trong, sai số thể
tắch, tỷ trọng, độ PH, cắn sau khi bay hơi, định tắnh, định lượng, độ nhiễm khuẩn
ỘTheo đối 3 tháng 1 lần trong nắm đầu tiên và 6 tháng 1 lần trong năm thứ 2
sửa 8 lô sản xuất, được bảo quản ô nhiệt do 30ồC + 2ồC, d dm tuong doi 70% + 5% 3.3.4 Phương pháp nghiên cứu tác dụng được lý:
3.8.4.1 Táo dụng kháng hietamin: Theo phương pháp của Ađảy và cộng sự: Dùng sáo đoạn hồi tràng chuột lang cô lập Ghi eo bóp bình thường, ghi eo thất khi s6 histamin, ghỉ eo thất đo hietamin sau khi cho nhổ SP3, bằng máy ghi
Gimini 8 cần
3.8.4.8 Nghiên cứu ảnh hưởng của bột SP8 trên niêm mạc mũi: Nhỗ trực tiếp đung địch P8 e6 nỗng độ đ và 10% vào một bên mũi thổ, mỗi ngày 8 lần và 1 bên không nhỗ thuốc Sau 8 ngày xáo định tình trạng niêm mạc mũi thổ
Trang 212.2.4.8, Tée dụng chống viêm đánh giá trên sự tiết địch rỉ màng phổi: Cho chuột sống trắng uống thuốc vào 8 thời điểm: 3giồ và 1 giờ trước khi gây viêm và 1 giờ sau khi gây viêm Đối với lô chứng cho uống nước với cùng thể tắch thuốc sửa lô thuốc Chuột của cả 2 lô thắ nghiệm được gây viêm bằng cách tiêm 0,Zml tỉnh đầu terebentin/1ụon vào giữa # lớp niêm mạc lá thành và lá tạng (khoảng giữa 2 sườn) chuột sống trắng trưởng thành só trọng lượng 800-240g Sau 8 giờ 80 phút gây viêm, giết chuột bằng chloroform, đùng bơm tiêm hút
hết dich ri 6 c 2 bén buồng phổi Đo thể tắch địch rỉ của từng con So sánh thể
tắch địch rỉ trung bình cựa lô thử thuốc so với lô chứng
8.5.4.4 Xác định độc tắnh bán trường diễn: Thổ đượe nuôi ắt nhất 1 tuần trước khi
thắ nghiệm chia thổ ngấu nhiên thành 8 lô: 1 lô chúng và 8 lô thử thuốc ô 2 liêu kháo nhau Lấy máu thổ lần 1 để định lượng cáe chỉ số sinh hoá và huyết, học bình thường của thổ trước khi thắ nghiệm Sau khi lấy máu lần 1, lô thổ thử thuốc eho uống thuốc với liều tương ứng, thổ lô chứng eho uống nước Cả 8 16 eho uống trong 1đ ngày liên tục Sau đó lấy máu thổ lần 3 để định lượng cáo chỉ số sinh hoá và huyết họ Cho cả 8 lô uống tiếp 15 ngày Sau 30 ngày uống thuốc, lấy máu thổ lần 8 Nếu cáo chỉ số trên bình thường, không eó sự khá biệt với trước khi thắ nghiệm, thì tiến hành mổ thổ, làm xét nghiệm mô học
gan, thận và thượng thận
2.2.5 Nghiên cứu lâm sang thuốc xịt mũi Agerhinin (Ngũ sắe) trên bệnh lý yiêm mũi xoang
Đối tượng là sáo bệnh nhân viêm mũi cếp, viêm mũi xoang cấp, viêm mũi dị ứng-yận mạch, viêm mũi mạn tắnh, viêm xoang mạn tắnh Sử dụng phương pháp mô tả sất ngang: bệnh nhân được khám kỹ về tai mũi họng và cáo bệnh lý kháe ụó liên quan Loại trừ các bệnh nhân có bệnh lý nội khoa nặng và các bệnh nhân suy giảm mién dich (HIWAIDS)
ận lâm sàng = chup phim Blondeau va Hirta truée khi ding thude Déi véi nhóm viêm mũi vân mạch - đị ứng thì xét: nghiệm bạch cầu ái toan ở mũi và địch
mũi trước điều trị
Điều trị = Dùng thuốc nhỏ hoặc xịt cho bệnh nhân 5lần/ngày Khám lại sau 1,
5 tuần và 1 tháng, để đánh giá cáo triệu chứng thựo thể và cận lam sàng theo bệnh
án mẫu
Hiệu quả điểu trị được tắnh theo mức độ thay đổi triệu chứng eở năng, thực thể và các xét nghiệm cận lâm sàng như chụp phim X-quang, Elondeau, Hirtz và sáo xét nghiệm bạch cầu ưa aụid trong địch mũi và trong máu
IIL KẾT QUÁ NGHIÊN CỨU
3.1 HOÀN THIỆN QUI TRÌNH CƠNG NGHỆ CHIẾT XUẤT BỘT SP3 TỪ CÂY NGŨ SẮC
8.1.1 Nghiên cứu chiết xuất SP8 từ cây ngũ sắc
8.1.1.1 Nghiên cứu các phân đoạn tan trong cáo dung môi kháo nhau
Trang 22TAI LIEU GOC KHONG CO TRANG 20
Trang 24Bảng 4: Kết quả chiết các phan doan véi 2 loai duge ligu
có nguồn gốc khác nhau
đủ sói ối Can tan Cắntan | Cantan | Cắn tan
Nguồn gốc | Khéi | tong ne trong trongm | trong
đượcliệu | lượng| hexan | ethylaxetat| butanol | methanol
B&e giang 1kg 0,1448g 0,828g 3,09g 45
Hưngyên | ikg | 0,3760g 1,158 3,118 49,5g
3.1.1.8 Nhận xét
+ Dượo liệu oó nguồn gốc từ Hưng yên 06 hàm lượng cáo nhóm chất đều cao hen
3.1.3 Quy trình sẵn xuất bột SP3 từ cây ngũ sắc so với được liệu só nguồn gốc từ BẮo giang
+ Lượng chất tan trong phân đoạn n-hexan sủa được
yên cao hón gấp 3 lần dượo liệu ụó nguồn gốc Bắo giang u số nguồn gốc từ Hưng + Oả ỏ phân đoạn chất chiết được bằng n-hexan, ethy]axetat và n-butanol rất thấp so với phân doan methanol, Do dé trong qui trình chiết xuất sông nghiệp chúng tôi lấy luôn phân đoạn tan trong mebhanol Sau này được ký hiệu là bột khô SP8 8.1.3.1, Máy móc thiết bị (Bang 5)
TT Tên máy Ký hiệu | Số lượng| Đặc điểm | Công suất
1 | May xay VN 1 Inox 5 KW
2 | May chiết đa năng Tour 1 Inox 2000 Itt
3 | May cd mang ming Tour 1 Inox 500 Itt
4 | Noi phan ứng ỔTour 1 Inox 50 Itt
đ_ | Tủ sấy chân không ỔTour 1 Inox 3000 Itt
6 | Thing inox VN 5 Inox 300 Tắt
T- | Thùng nhựa Tq 5 200 Itt
8 | May nguấy Tour 1 Inox 1 KW
9 | Can 30, 50, 100 kg VN 3
10 | May ly tâm Dite 1 Inox 1 KW
11 | Pheu loc VN 1 Inox
12 | Néi hoi HQ 1 Chay đầu DO 300 kg
Trang 25
8.1.8.3 Sơ đổ các giai đoạn sản xuất bột SP8 (sơ dé 2)
Nguyên phụ liệu Cae giai đoạn Nội dung kiểm tra
Bột dược liệu, Chiết 2 lần với nước ở Kiểm tra
nước trao đổi nhiệt độ sôi nguyên liệu
lon +
Cất thu hỏi áp suất |g Kiểm tra an
giảm toàn chầy nổ + 'Tủa loại rạp bằng cồn + Lọc lấy dịch chiét con
Có thu bồi côn Ổ Kiém tra ao, ấp suất giảm toàn chay nd + Tỉnh chế bằng methanol + Lọc lấy dịch chiết methanol Ỷ Cô dưới áp suất giảm |&ỞỞ| + axeton EỞệ| Ta bằngaxecton + Gan, lọc lấy tủa + sayseoc || Kiêmtm an tồn Bột khơ SP3 cm + Đóng gói, nhập kho côn 96ồ FỞ* methanol FỞ*Ẩ
Trang 263.1.2.3, Mé td qué trinh sin xudt
- Chuẩn bị nguyên liệu: Cây ngũ sắo đạt tiêu chudn cd sd (TCCS.VDL08
TƠL1) loại bổ tạp chất, xay thành bột thô hoặo chặt nhỗ hơn 0,đ em - Nguyên liệu eho 1 mẻ chiết:
Bột thô cây ngũ sắo: 200 kg Nước trao đổi ion: 8600 lắt
Gén 96ồC 260 lắt
Methanol 380 lắt
Axeton 100 lắt
- Tiển hành:
+ Công đoạn chiết nước: Cho 200 kg được liệu ngũ sắc vào 8 nổi chiết có đung tắch 2000 lắt Ghiết 2 lần với nước trao đổi ion Lần thứ nhất với 2200 1ắ: nước (tỷ lệ
1:11, lần thứ hai với 1400 lắt: nước (tỷ lệ 1:7) Thời gian shiết lần thứ nhất là 5 giờ
tắnh từ khi khối được liệu chiết đạt nhiệt độ sôi, lần thứ # là 1/8 giờ Trong thời gian
chiết chi can giữ nhiệt mà không cần sấp thêm nhiệt Dịch chiết sủa 5 lần chiết
được gộp lại, cô bằng máy cô màng mỗng đến khối lượng 300 lắt (tỷ lệ 1:1,đ)
+ Công đoạn loại nhựa, tạp bằng cân : Oao nước được hoà tan trong sốn 96* theo
tỷ lệ khối lượng (được liệu : ụao nước: sổn = 1: 1,đ : 1,8), tương đương với cén 40ồ
Xhuấy liên tục thấy xuất hiện nhiều tảa Để lắng, gạn, lọc lấy địch nướe/cổn trong
ỘThu hổi đưới áp suất giảm đến khi thu hổi được lượng cồn só tỷ lệ khối lượng (dude liệu : ổn = 1: 1,đ) tương đương với sẩn 70ồ, tiếp tụo sô loại dung môi đưới áp suất
giảm tới khi thu được cao đảo, màu sấm có tý lệ đượe ligu : cao chiét cn = 1: 0,35 + Công đoạn tỉnh chế bằng methanol: Cao đặc ethanol được hoà tan trong methanol với tỷ lệ khối lượng (đượe liệu : cao chiét cdn : methanol = 1: 0,85: 1,6)
thấy xuất hiện tủa mầu vàng nhạt, phần tạp bị tủa tiếp Hỗn hợp dude khuấy liên tụo trong 1 giờ Để lắng, gạn, lọc lấy phần địch chiết methanol s6 mầu vàng đậm
Dich loe methanol duge thu héi bằng máy Tournaire đến khi thu được địch đặc, có tý lệ khối lượng (đượe liệu : dich d&e = 1: 0,2)
+ Công đoạn loại tạp bằng axefon: Cao đặc methanol duge dua din vào khối axeton với tỷ lệ khối lượng (đượe liệu : cao methanol : axeton = 1: 0,8 : 0,đ) Nguấy cho đến lúc xuất hiện tủa mẫu nâu nhạt Để lắng 80 phút, gạn lấy phần tủa, rửa
tủa vài lần với lượng nhỗ axeton
+ Công đoạn sấy khô bán thành phẩm: Bột bán thành phẩm SP3 được
sấy bằng máy sấy chân không ở nhiệt độ 60ồC cho tới khổ, xay thành bột
Trang 27+ Đồng gói, ghỉ nhấn nè nhập kho: Chế phẩm được đồng trong 3 lần tái PE, mỗi túi 10kg, ghắ nhãn và nhập kho
- Nhận xét: Với quy trình chiết như trên từ 200kg dược liệu thu được trung bình 8kg bột khô SP3 màu vàng nhạt Hiệu suất 4%
3.1.8.4 Vệ sinh an toàn lao động:
+ Phòng sản xuất có nội quy an toàn lao động va dung cụ phòng chống
cháy nổ
+ Ơ6 nội quy chống cháy nổ tại nơi cat thu héi cén, methanol va axeton + Đảm bảo điểu kiện vệ sinh nơi sản xuất, dụng cụ sản xuất, người sản
xuất, chống nhiễm khuẩn và nấm mốc
3.1.2.5 Phương pháp kiểm tra, kiểm nghiệm (Bảng 6)
Giai đoạn Nội dung Số lần Yêu cầu er
sẵn xuất kiểmtra | Kiểmtra | Kiểmta | Ngườikiểm ra
ẩ ỘTheo tiêu [Đúng quy cáoh |Ds, tổ trưởng sản xuất,
lo shuẩn nguyên |Từng lô, mể | không có tạp | sán bộ đảm bảo chất
? Tiệu, xuất xứ chất Tượng
: 3 Đúng sông Người cân, Ds, tổ
can ey Timgmé | thứcđúng | trưởng sản xuất, cấn
ene Khối lượng bộ ĐBƠL
ecg: | An toàn chấy | Thường ềa | Cong nhan san xugt Chiết xuất nề xuyen _ | Chống chấy Gen ni BRGL
3 + | Án toàn chấy ềa | Congnhén sin xugt
Cat thu BOT n8 thd tic t erence |Ở Can bp BECL
8 dich chiét 8 Ds, tổ trưởng sản xuất,
mm Công nhân sản xuất Tinh chế nhiệt độ Ba, | mừnglô [Đúng quy định | Can bo DBCL Rete a,
wey Ds, tổ trưởng san xuất
Nhiệt độ, độ Losing quy định, | Công nhân sản xuất
Sấy ẩm, an tồn | Từnglơ đống máy |Ở Cán bộ ĐBƠL
chấy nể 8 GRẦY ÍDz tý trưởng sản xuất
Độ ẩm, kiểm Độ ẩm <9%
ĐSNEEBE | a chal lung + theo TCƠS Ds Kiểm nghiệm
Trang 28
8.3, HOÀN THIỆN QUY TRÌNH SẢN XUẤT THUỐC XỊT MŨI AGERHININ
3.3.1 Công thức pha chế 1 đơn vị thành phẩm Bot SP3 750mg Natriborat 90mg Nipagin 11,25mg Nipazol 3,75mg Nước cất vừa đổ 15ml 3.3.3 Công thức pha chế cho 1 mẻ sản xuất 80.000 lọ 15ml Bot SP3 28,5kg Natriborat 2,7kg Nipagin 0,88T5kg Nipazol 0,1185kg Nước cất vừa đổ Ở 4đ0lắt 8.3.8 Đặc điểm nguyên, phụ liệu Bột SP8 Đạt tiêu chuẩn co sổ Natriborat Đạt tiêu chuẩn BP 8001
Nipagin Đạt tiêu chuẩn BP 8001 Nipazol Đạt tiêu chuẩn BP 8001
Nước sất vừa đủ Ở Đại tiêu chuẩn DĐVNII
Trang 303.2.5 Thiét bj ding trong pha ché thuéc xjt mii Agerhinin (Bang 7)
TT Tên máy Kýhiệu | Số lượng | Đặc điểm | Công suất
1 Máy xay VN 1 Inox SRW
2 | Mấy chiết chai KBF2 1 Inox 251⁄h
3 May loc dich Satorius - 1 Loe mang đ01⁄h
4 Máy đo PH Metler | 1 Để bàn
5 Nỗi nấu 2 về ix 1 Inox đ001ft:
6 Máy nguấy Tour 1 Inox 1KW
T ỘThùng Inox vN 1 Inox 250lft
8 ỘTỷ trọng kế Tour 1
9 | May dan mang co VN 1 Dang nhigt | 1000 lofh
10 Gân điện tổ Japan 1
1L Can déng hd TQ 1
18 C&n dia 200g Tq 1
18 Cân 80kg VN 1
8.3.6 Mô tả quy trình sản xuất 3.2.6.1 Chuẩn bị nguyên liệu
- Tắnh nguyên liệu theo định mức kỹ thuật, khi nh nguyên liệu phải só 2 người : 1 người là cán bộ kỹ thuật, kiểm tra chất lượng và số lượng nguyên liệu Đối
chiếu với phiếu xuất kho, phiếu kiểm nghiệm nguyên liệu
- Trước khi đưa nguyên liệu vào sắn xuất phải kiểm tra lại chất lượng và số lượng nguyên liệu
3.2.6.2, Tiến hành:
- Toàn bộ quá trình pha chế đượs tiến hành trong phòng vô trùng
- Oho bột SP vào nướo oất 3 lần, đun sôi, khuấy đều cho đến khi hoà tan hết,
ề Để lắng 16 giò, sau đó lọc bằng máy lọo Satorius
- Đun sôi dich log, tiệt trùng 80 phút, hoà tan nipagin và nipazol vao dung dich ỏ nhiệt độ khoảng 80.100*Ơ, khuấy đều
Trang 31- Để nguội dung dich dén 60ồC, sau đó hoà tan natribonat, khudy déu
- Để lắng T8 giồ, lọe, diéu chinh da lugng nude 450 Itt
- Kiểm tra dung địch thành phẩm theo tiêu chuẩn, chuyển sang phòng đóng gói Trong quá trình đóng gói, sứ 30 phút kiểm tra thể tắch trong lọ 1 lần để kịp thời
điểu chỉnh
- Mỗi lọ 1đ mì đóng vào 1 hộp nhỗ só tờ hướng dẫn sử đụng, 10 lọ đóng trong một màng ụo, 100 lọ đóng vào một hộp earton
+ Bảo quản: Để ở nơi khô, mát, tránh ánh sáng - Kiểm nghiệm thành phẩm
- Nhập kho
3.3.7 Vệ sinh vơ trùng, an tồn lao động 3.2.7.1 Vé sinh vo trùng
+ Vé sink od nhdn: Ngudi lam viée 6 khau hd phai deo khdu trang Tay tiép xtc
true tiép véi thude phai tiét trang bang cdn 70ồ
- VỆ sinh cở sẽ sẵn xuất: Dụng eu phải được tiệt tràng, khô sạch, không eó vi sinh vật,
3.2.7.2 An toàn lao động
- Khi làm việc phải mặo áo blou, mũ, khẩu trang
- Người làm việc ô khâu bụi, phải đeo khẩu trang ưới - G6 quy trình sử dụng cáo thiết bị điện, máy móe
+ Người vận hành máy phải là người được hướng dẫn sử dung và được phép sử
dung
- Khi só sự of phải ngừng sản xuất và lập biên bản báo cáo ngay cho quản đốc phân xưởng và cán bộ đảm bảo chất lượng, sán bộ phụ trách an toàn lao động Dé nghị sửa chữa
8.3.8 Kiểm soát, kiếm nghiệm:
3.2.8.1 Phương pháp kiểm soát: Thực hiện 3 kiểm tra, 3 đối chiếu
- Ba kiém tra: + Đơn phiếu s6 hợp lệ không
+ Nhãn, hàm lượng, hình thức, thời gian đùng
+ Chất lượng bằng cảm quan
- Ba đối chiếu: + Tên thuốc trên nhãn và phiếu nhập kho +Nông độ, hàm lượng phiếu xuất, nhập + 8ố lượng, số khoản phiếu xuất, nhập
Trang 323.2.8.2 Phương pháp kiểm nghiệm:
+ Hình thứo: bằng cảm quan
+ Kiểm nghiệm theo tiêu chuẩn eở sổ
8.3.9 Nội dung kiểm tra trong quá trình sản xuất (Bang8) TT Nội dung kiểm tra Thời gian kiểm tra Người kiểm tra PHA Vệ sinh phòng sản xuất và đụng oụ máy móc
8 | Nhiệt độ, độ ẩm khu vựo sản xuất
ỔTheo dai, pha chế theo hỗ ụơ 16 sản xuất, Về sinh phòng sản xuất và dụng eu mấy móc 8ụ | Nhiệt độ, độ ẩm khu vựo sản xuất CHẾ Bất đầu Bắt đầu và trong quá trình pha chế ỘTrong suốt quá trình ĐỒNG LỌ Bắt đầu Bắt đầu và trong quá trình Bắt đầu và trong
8 Kiém tra dung địch đóng lọ gue tink
Ổi Bat dau va méi
4 Kiém tra khối lượng trung bình Min
êu khối Bất đầu và mỗi
5 Độ đồng đều khối lượng PR ae
DONG GOI
1 | Tinh trạng lọ thuốc số đạt tiêu chuẩn không nhàn
2 Quy edch dong g6i Bat dau va trong
Trang 33- Dư phẩm: Dung địch thuốc đóng thử, phần còn dư lại được thu hổi đóng lọ tiếp - Phế phẩm: Dung địch thuốc bị vấy bẩn phải loại bổ 8.2.11 Hé so làm việc cần thiết + Dược điển Việt Nam IIT qui và ch
võ trùng vệ cinh công nghiệp - Nội qui sử đụng máy mó, thiết bị
+ 8ổ pha chế, phiếu luân chuyển sản phẩm, quy trình kỹ thuật, tiêu chuẩn kỹ
thuật
+ Tiêu ehuẩn cơ sở
+ Tiêu chuẩn sở sổ bao bì đóng gói
8.8 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG
3.8.1 Xây đựng tiêu chuẩn nguyên liệu
3.3.1.1.Xáo định đặc điểm vi học
*) Vi phẩu lá: Oất nhuậm kép, quan sát đưới kắnh hiển vi thấy cáo đảo điểm
sau!
+ Phân gân lá: Gân lá lỗi sả đ trên và đưới, biểu bì trên và biểu bì đưới cấu tạo
từ những tế bào tròn, nhổ, xếp thành hàng mang nhiều lông che ehổ, đa bào to, nhổ không đều Sát biểu bì là mô đẩy gồm 8-8 lớp tế bào Mô mềm là những tế bào hình trứng, thành mồng xếp lộn xộn Bó libe gỗ gân chắnh gồm eung libe bao phắa ngoài,
gỗ phắa trong
+ Phiến lá: Biểu bì trên và biểu bì đưới cấu tạo từ những tế bào hình chữ nhật
không đều, tạo thành một lớp màng lông che chổ đa bào Sát biểu bì trên là mô dầu, gồm 1-8 lớp tế bào mô đầu tương đối lớn, cáo tế bào ở phiến lá só chứa các giọt đầu
*) Vi phẫu thân: CẤt ngang một đoạn thân già, nhuộm kép quan sát đưới
kắnh hiển vi thấy cáo đáo điểm sau: Mặt cất ngang thần hình gân tròn, từ ngoài vào
trong 66: Biểu bì sấu tạo từ những tế bào hình chữ nhật, nhỏ, xếp thành hàng mang nhiều lông che chổ, đa bào to, nhổ không đều Lông che chổ gồm sáo tế bào xếp thành một đấy, cáo tế bào phắa chân lông ngắn, phắa ngọn lông đài hơn Lông thường ụ6 1 tế bào hẹp, tạo nên chỗ thất Mô dày gồm khoảng 3 lớp tế bào thành mồng ở góo tạo thành vòng sát phắa trong biểu bì Mỏ mềm vỗ sấu tạo từ 4-đ lớp tế bào hình đa giáo, thành mỗng xếp lộn xộn Ơáo bó libe gỗ xếp gần liên tục thành vòng, 06 khoảng 1đ - 20 bó, mỗi bó oó libe phắa ngoài, gỗ phắa trong ở phần thân già ngay sát phắa ngoài libe , mỗi bó gồm só 1 đám mỏ cứng, sấu tạo từ những tế bào,
Trang 34thành day hơn hóa gỗ Tầng phát sinh libe gỗ gồm 1-3 lớp tế bào thành vòng liên tục Mô mềm gồm cáo tế bào lớn, hình đa giáo, thành mỗng, xếp lộn xộn, rải ráo só các tế bào chứa cáo giọt đầu
*) Bật dược liệ
nhiều lông che chổ đa bào (đ-10 tế bào) nguyên hoặc gẫy thành từng mảnh Cáo tế bào phắa chân lông ngắn, phân đầu lông đài hơn, phắa đầu lông thường có chỗ thất Hạt phấn hình cầu ụ6 nhiều gai Mảng biểu bì mang lỗ khắ mảnh, mạch xoắn Cáo
Bội màu xám nâu, mùi thơm không vi Soi kắnh hiển vi thấy :
phiến lá mang lông che chổ lỗ khắ, mạch đấn 3.3.1.5 Xáo định độ ẩm
Cân chắnh xáo 10g bột được liệu, tiến hành theo DĐVN III, phụ lục 8.6 Dựa vào kết quả thực nghiệm, để nghị quy định được liệu só độ ẩm không vượt quá 18%,
3.8.1.8, Xáo định tro toàn phần
Cân chắnh xáo khoảng 1g bật được liệu, tiến hành theo DĐYN II, phụ luc 7.6 Dựa vào kết quả thực ngiệm để xuất tro toàn phần trong dượ: liệu không quá 11%
3.8.1.4 Tạp chất
ân chắnh xác khoảng 20g được liệu, tiến hành theo DĐVN II, phụ lục 8.4 Tựa vào kết quả thực nghiệm để xuất tạp chất trong đượe liệu không quá 1%
3.8.1.5 Kim loại nặng
ân chắnh xác khoảng 1g %P8, theo phương pháp của Tổng eụe đo lường chất lượng (Trung tâm kỹ thuật) Dựa vào kết quả thực nghiệm để nghị kim loại nặng không quá 20mg/kg (20ppm)
3.816 Định tắnh
Xác định chỉ số tạo bọi: Cân 1g bột nguyên liệu, tiến hành theo phương pháp đã ghỉ tại trang 16 Mẫu thử là 8 lô SP8 sản xuất vào tháng 8, 9 và 11/2004 và được
liệu ngũ sắc Kết quả cho thấy tất sả sáo sột bọt trong cáo ống sủa cáo mẫu thử đều
thấp đưới 1em Như vậy chỉ số tạo bọt của SP8 và đượe liệu ngũ sắc là đưới 100
Xác định tắnh chất phá huyết: Mẫu thử là đượs liệu ngũ sắc và bột SP8 được pha trong đung địch nước muối 0,8% ở sáo nổng độ khác nhau: 1g chế phẩm trong 10 và đml đung địch Dược liệu ngũ sắc : mẫu thử là địch chiết của 1đg được liệu trong đml nước muối 0,9% Mẫu đối chiếu là địch chiết ngưu tất
Định tinh bằng SKLM: Tiến hành theo phương pháp đã mô tả tại trang 16 Xết quả và để nghị đưa vào tiêu chuẩn chết lượng: Sắc kắ đổ câa đung địch thử phải s6 cáo yết só cùng mầu và cùng Rf với sáo vết sủa dung địch đối chiéu
Trang 35
DL SP3
Hinh 1: Sac ky dé dinh tinh terpenoid
DL: Dược liệu cây hoa ngũ sắc
SP3 : Sản phẩm SP3
Hệ dung môi :
Hình 1: n-butanol : ethanol : amoniac 25% : nước (7 : 2 : 2 : 2) Thuốc thử : Vanillin- acid phosphorie
Trang 36Hình 2 - Cây ngũ sắc
Ngon cay mang hoa; 2 Cụm hoa; 3 Hoa)
Trang 37
DL SP3 TP Sac Hình 3 : Sắc ký đồ định tắnh đường DL: dược liệu cây hoa ngũ sắc SP3 : sản phẩm SP3 TP : thành phẩm thuốc xịt Agerhinin
Hệ dung môi : n-Butanol : ethylaeetat : aeid aeetie : nước 4: 3: 1:2)
Trang 38Tiêu chuẩn eơ sở cây ngũ sắc Bộ Ỳ tế GÂY NGŨ SÁC 08-TCI,.04/99 Ageratum conyzoides L Viện Dược liệu Gó hiệu lực từ: 01/10/3004
Dư: liệu là phần trên mặt đất đã chế biến và phơi hay sấy khô của cây ngũ sắc (Ageratum conyzoides L) ho otic (Asteraceae)
Mô tả:
Thân mang ngọn đài không quá 40 em, mu nâu sấm đến nâu nhạt, oó nhiều lông ngắn xắt nhau, lá mọc đối ụó cuống, hình trứng hay ỏ cạnh, mép só rằng cưa
tròn, 2 mặt đều só lông tơ, mặt đưới s6 mẫu nhạt hơn Hoa nhổ, mọc thành đầu ngũ ở đầu cành
Vi phẫu:
+ Phần thân: Mặt cất ngang thân hình gần tròn, biểu bì cấu tạo từ những tế
bào chữ nhật Lông che chỗ gồm cáo tế bào xếp thành một dãy, eáe tế bào phắa ngọn lông đài hơn phắa chân lông Mô dày gồm khoảng 3 lớp tế bào mô mềm, vỗ cấu tạo từ 4-đ lớp tế bào hình đa giáo Các lớp libe gỗ xếp liên tục thành vồng, mỗi bó gỗ só 1 đém mô cứng Tầng phát sinh libe gỗ gồm 1-8 lớp tế bào thành vòng liên tục
+ Phần gân lá: Gân lá lỗi sả ở trên và đưới, biểu bì trên và biểu bì đưới sấu tạo
như những tế bào trồn nhỗ xếp hàng, mang nhiều lông che chổ, đa bào to, nhỏ không đều, sát biểu bì là mô đày gồm 8-8 lớp tế bào Mô mềm là những tế bào hình trứng, thành mỗng, xếp lộn xộn Bó libe gỗ gân chắnh gồm só cung libe bao phắa
ngoài cung gỗ
+ Phần phiến lá: Biểu bì trên và biểu bì đưới cấu tạo từ những tế bào hình ehữ
nhật, không đều tạo thành một lớp màng lông che chỗ đa bào Sát biểu bì trên là mô đầu gồm 1-8 lớp tế bào, áo tế bào ô phần phiến lá eó chứa các giọt đầu
Soi bột:
Soi bột đượo liệu đưới kắnh hiển vi sẽ thấy nhiều lông che chổ đa bào (B-10 tế bào) nguyên hoặc gãy thành từng mảnh Các tế bào phắa chân lông ngắn hơn phần đầu lông, phắa đầu thường e6 chỗ thất Hạt phấn hình cầu só nhiều gai Mảnh biểu bì mang lỗ khắ, mảnh vạch xoắn Các mảnh phiến lá mang lông che chổ lỗ khắ, mạch
din
Độ ẩm: Không quá 18% theo phương pháp của DĐVN II phụ lụe 5.16 hoặc phụ lụe 96
Trang 40Tro tồn phẩn: Khơng quá 11% theo phương pháp cia DDVN III phu luc 7.6 phướng pháp 3, sân chắnh xác khoảng 1g bột được liệu
Tạp chết: Không quá 1% theo phướng pháp của DĐYN III phụ luc 9.4
Kim loại nặng: Không quá 20ppm, thổ theo DDVN III phu luc 7.4.7, ding 1g mau thủ Tỷ lệ vụn nât: Không quá đ% Tỷ lệ lá: Không ft hón 40% Định tỉnh: Định tắnh bằng phản ứng tạo bọt:
Lấy 1g bột đượe liệu, cho vào bình nón, thêm 10 ml nước sôi, giữ cho sôi nhẹ trong 30 phút Lọo qua giấy lọc vào 2 ống nghiệm mối ống đml ống L cho thêm 1ml dung địch HƠI 0,đN, ống 2 cho thêm 1ml dung địch NaOH 0,đN Lắc mạnh sả 8 ống trong 30 giây, sả 2 ống đều tạo bọt, ống L phải só cột bọt bển vững hơn
Phương pháp SKLM Chuẩn bị mẫu:
- Lấy 1g đượe liệu đã được tán nhổ, tiến hành chiết bằng sách đun hổi lưu trên sách thuỷ với 20ml hỗn hợp methanol và nước tỷ lệ 4 : 1, gan lọo lấy phần địch chiết và sô trên cách thuỷ đến oạn Hoà cắn trong đml hỗn hợp methanol và nước như
trên, thu được đung địch chấm sắc ký
- Dung địch đường ụaocharosa 1% trong methanol Ở nướs tỷ lệ 4 : L
Tiến hành sắc ky:
ỔTrén ban méng silicagel G Merck chém 10ul dich chiét duge ligu va 10 ul dung địch saoeharosa, tiến hành sắc ký theo DĐVNIII phụ lục 4.4 với hệ dung môi n.propanol : ebhylaoetat : nước : agid axetio (4: 8 : 3: 1) Sau khi triển khai sắc ký sao khoảng 8om, lấy kắnh ra, để bay hơi hết dung môi rỗi phun thuếo thử 0,29 Ủ naphthol trong đung địch aoid sulfurie 10% trong oổn, sấy kắnh ở nhiệt độ 1000 đến khi xuất hiện vết Sắc ký đổ của mẫu thử phải só 1 vết ohắnh màu xanh tắm ổ vị
chắ Rf 0,4 ~ 0,8, só cùng màu sắc với đường saocharosa và dó giá trị Rx 1,1 ~ 1,2 go với yết của saooharosa đối chiếu
Chế biến, bảo quản:
Thu hái được liệu, loại bổ lá sâu, già úa, phơi khô Bảo quản nơi khơ ráo, thống mát