Xây dựng quy trình sản xuất cây giống gấc nếp bằng phương pháp nuôi cấy mô

THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Xây dựng quy trình sản xuất giống Gấc nếp phương pháp nuôi cấy mô Chủ nhiệm Họ tên: Phan Thị Hồng Thủy Năm sinh: 05/02/1987 Nam/Nữ: Nữ Học vị: Thạc sỹ Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Năm đạt học vị: 2014 Chức vụ (nếu có): Tên quan công tác: Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp NNCNC Địa quan: Ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, TP HCM Điện thoại quan: 08 62646103; Fax: 08 62646104 Địa nhà riêng: 201 Nguyễn Văn Khạ - Phú Hịa Đơng- Củ Chi - HCM Điện thoại nhà riêng: ĐTDĐ: 0901305287 E-mail: hongthuyitb@gmail.com Chủ nhiệm Họ tên: Nguyễn Ngọc Ánh Năm sinh: 01/11/1986 Nam/Nữ: Nữ Học vị: Thạc sỹ Chuyên ngành: Sinh thái học Năm đạt học vị: 2015 Tên quan công tác: Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp NNCNC Địa quan: Ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, TP HCM Điện thoại quan: 08 62646103; Fax: 08 62646104 Địa nhà riêng: D47- Chung cư Khánh Hội 2-360ª Bến Vân Đồn, P1, Q4 Điện thoại nhà riêng: ĐTDĐ: 0938 522 236 E-mail: anhnn1986@gmail.com Cơ quan chủ trì: Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nơng nghiệp Công nghệ cao Điện thoại: 08.62646103 Fax: 08.62646104 E-mail: info@abi.com.vn Website: www.abi.com.vn Địa chỉ: ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, Tp HCM Văn phòng giao dịch: 499, Cách mạng Tháng 8, phường 13, quận 10, Tp HCM Thời gian thực hiện: 24 tháng (1/2017 – 12/2018) Kinh phí duyệt: 124.484.331 Nội dung Giai đoạn Khảo sát môi trường tái sinh chồi Gấc Khảo sát môi trường nhân nhanh cụm chồi Gấc Khảo sát môi trường rễ Gấc Khảo sát môi trường dinh dưỡng thích hợp cho phát triển Gấc Giai đoạn Nghiên cứu số loại giá thể ảnh hưởng đến phát triển Gấc giống in vitro đưa vườn ươm Khảo sát phân tính giống Gấc in vitro Sản phẩm Giai đoạn Báo cáo tổng hợp, phân tích Qui trình nhân giống in vitro Gấc nếp Cây giống in vitro: cao 3-4 cm, có từ trở lên, dài từ 3-5 cm, rễ có từ 35 rễ (100 cây) Giai đoạn Báo cáo tổng hợp, phân tích Tiến độ thực STT Nội dung Khảo sát môi trường tái sinh chồi Gấc Khảo sát môi trường nhân nhanh chồi Gấc Khảo sát môi trường rễ Gấc Khảo sát mơi trường dinh dưỡng thích hợp Tổng hợp tài liệu viết báo cáo nghiệm thu (giai đoạn 1) Kết Người thực Giai đoạn (2017) Hoàn Phan Thị Hồng Thủy thành Nguyễn Ngọc Ánh 100% Hoàn Phan Thị Hồng Thủy thành Nguyễn Ngọc Ánh 100% Hoàn Phan Thị Hồng Thủy thành Nguyễn Thị Minh 100% Trâm Hoàn Phan Thị Hồng Thủy thành Nguyễn Thị Minh 80% Trâm Hoàn Phan Thị Hồng Thủy thành Nguyễn Ngọc Ánh 100% Giai đoạn (2018) Khảo sát môi trường rễ Gấc Khảo sát môi trường dinh dưỡng thích hợp cho phát triển Gấc Tổng hợp tài liệu viết báo cáo nghiệm thu (giai đoạn 2) Chưa thực Chưa thực Chưa thực Thời gian thực 01/2017 đến 04/2017 04/2017 đến 07/2017 07/2017 đến 10/2017 10/2017 đến 12/2017 11/2017 đến 12/2017 PHẦN MỞ ĐẦU Tính cấp thiết Trái Gấc Momordica cochinchinensis có nhiều cơng dụng sử dụng làm nguồn thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao, nguồn dược liệu quý trái chứa nhiều β-carotene, lycopene, zeaxanthin, β-cryptoxanthin Trong giống Gấc nay, xét mặt dược tính Gấc nếp giống cho dược tính cao nhất, với nhiều chất quan trọng dùng sản phẩm dược liệu Gấc trở thành nguồn nguyên liệu cho nhiều tá dược, chế phẩm bảo vệ sức khỏe mỹ phẩm, nhu cầu thị trường cao, tiêu thụ nước xuất sang số thị trường khó tính Châu Âu, Mỹ Để đáp ứng nhu cầu này, việc cung cấp vùng chun canh ngun liệu Gấc có quy trình khép kín từ khâu sản xuất giống cây, kỹ thuật trồng trọt chăm sóc, thu hoạch kiểm tra chất lượng đóng vai trị quan trọng Trong đó, sản xuất giống đáp ứng tiêu chí bệnh, đồng đều, dự đoán tỉ lệ phân tính u cầu tiên Ngồi số hạn chế thường gặp sử dụng biện pháp nhân giống truyền thống (gieo hạt, giâm hom) chất lượng giống khó đảm bảo, nhiều thời gian cơng sức cho hệ số nhân giống thấp, mặt khác đặc tính Gấc phân tính đực cái, nên giâm hom gieo hạt, giống bị phụ thuộc nhiều vào tỉ lệ hình thành đực từ hom giống hay hạt giống Tỉ lệ cao thường lên tới 50 - 70%, ảnh hưởng lớn đến hiệu kinh tế người trồng Gấc Phương pháp nhân giống vơ tính in vitro cho hệ số nhân giống cao, sinh trưởng phát triển đồng đều, giữ tính trạng mẹ, bệnh số lượng lớn thời gian ngắn, đặc tính di truyền mẹ lưu giữ truyền cho đời con, đảm bảo giống đem trồng biết rõ tính trạng, giúp người trồng Gấc có kế hoạch biện pháp canh tác hợp lý nhất, mang lại hiệu kinh tế cao Trên sở đó, chúng tơi thực nghiên cứu “ Xây dựng quy trình sản xuất giống Gấc nếp phương pháp nuôi cấy mô” nhằm đưa phương pháp cung cấp nguồn giống Gấc đảm bảo yêu cầu chất lượng Mục tiêu Xây dựng quy trình sản xuất giống Gấc nếp đạt hệ số nhân giống cao, giống sinh trưởng phát triển đồng đều, bệnh Giới hạn nghiên cứu Nhiệm vụ KHCN thực giống Gấc nếp, nghiên cứu xây dựng qui trình nhân giống in vitro Gấc nếp tới giai đoạn in vitro Do giới hạn thời gian nên chưa tiến hành khảo sát tất giống Gấc có Việt Nam CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Gấc Gấc loài thân thảo, dây leo thuộc chi mướp đắng, hoa sắc vàng, hình bầu dục, đáy nhọn, ngồi có nhiều gai, sắc xanh, chín chuyển sang màu đỏ cam Thịt Gấc màu đỏ cam, hạt Gấc màu nâu thẫm, hình dẹp, có khía (Phạm Hoàng Hộ,1999) Các nghiên cứu khoa học cho thấy Gấc chứa nhiều vitamin, đặc biệt giàu β-carotene, lycopene vi chất thiên nhiên cần thiết cho thể người Lycopene β-carotene chứng minh chất chống oxy hóa, có khả trung hòa gốc tự do, chống lại già nua tế bào thể, giúp trẻ hóa da, sửa chữa tổn thương cấu trúc thể, giúp ngăn ngừa bệnh ung thư bệnh gan, mật Lycopene carotenoid có khả ngăn ngừa chứng nhồi máu tim, bảo vệ gen khỏi bị tổn thương có khả hạn chế biến chứng bệnh tiểu đường (Lê Đình Lương cs., 1988) Hình 1.1 Cây trái Gấc Các nhà nghiên cứu thừa nhận Gấc loại sạch, an tồn có hiệu chống oxy hóa cao cà chua cà rốt nhiều lần, tăng khả miễn dịch sức đề kháng cho thể, loại bỏ phần tác hại môi trường tia xạ, thuốc trừ sâu, giúp thể khỏe mạnh, da dẻ mịn màng Phần ăn Gấc chứa lượng β-carotene (chiếm gần 1/2 tổng carotenoid có dầu Gấc) cao gấp hai lần so với dầu gan cá thu khoảng 10 lần so với cà rốt (Nguyễn Tường Vy, 2008) Đó nguồn β-carotene thiên nhiên túy nên có tác dụng chống lão hóa mạnh nhất, đồng thời bổ sung nguồn vitamin A hợp lý an toàn Khi vào thể, β-carotene tác dụng men carotenase có tron gan thành ruột chuyển hóa thành vitamin A, sử dụng Gấc khơng có tượng thừa vitamin A Thành phần carotenoid có Gấc phụ thuộc nhiều vào giống, đất trồng, với hàm lượng dao động 3.768-7.516 µg/g Trong Gấc màng hạt phận có hàm lượng acid béo cao, bao gồm acid béo không no thành phần gọi chất béo có lợi có tác dụng tốt hệ tim mạch thông qua việc giảm huyết áp, cải thiện cấu trúc mạch vành giúp giảm nguy mắc bệnh lý tim mạch (Nguyễn Tường Vy, 2008) 1.2 Nguồn gốc, phân loại đặc điểm thực vật học Gấc 1.2.1 Phân bố gieo trồng Cây Gấc trồng rải rác khắp nước ta, ngồi cịn thấy Lào, Campuchia, nước phía Nam Đơng Nam Á Ấn Độ, Thái Lan, nam Trung Quốc, Nhật Bản (Đỗ Tất Lợi, 2003) 1.2.2 Đặc điểm thực vật học Cây Gấc có tên khoa học Momordica Cochinchinensis (Lour.) Spreng thuộc: Giới: Plantae Ngành: Magnoliophyta Lớp: Magnoliosida Bộ: Cucubitales Họ: Bầu bí Cucurbitaceae Chi: Momordica Lồi: M cochinchinensis (Phạm Hồng Hộ, 1999) Cây Gấc thuộc họ bầu bí, dây leo, đa niên, đơn tính khác gốc, có mang hoa đực, mang hoa Đây sống nhiều năm, năm lụi lần lại đâm chồi từ gốc cũ lên vào mùa xuân năm sau, leo cao nhờ có tua mọc từ nách Lá Gấc mọc so le có màu xanh lục đậm, đường kính phiến 12 đến 20 cm, phía đáy hình trái tim, mặt phiến sờ ram ráp Hoa nở vào tháng đến tháng Hoa đực riêng biệt, to hình bầu dục dài từ 15 - 20cm, nhọn có nhiều gai 1.2.3 Đặc điểm sinh trưởng, phát triển Ánh sáng: Cây Gấc ưa ánh sáng ngắn ngày, ưa khí hậu ấm áp độ ẩm khơng khí cao, chịu hạn chịu rét Cây sinh trưởng tốt điều kiện cường độ chiếu sáng mạnh phát triển tốt điều kiện chiếu sáng giảm Giai đoạn lớn gặp ánh sáng chiếu trực tiếp dễ bị rám, thối sớm rụng Nhiệt độ: Nhiệt độ trung bình cho Gấc phát triển từ 25 – 27oC, hạt Gấc nảy mầm nhiệt độ 13 – 15oC, tốt 25oC Đất đai: Gấc không chịu úng ngập, đọng nước, trồng tốt nên làm vồng, ụ hay trồng nơi có khả tiêu nước tốt Giai đoạn từ trồng đến trước hoa yêu cầu độ ẩm đất đạt 65 - 70%, độ pH 5,6 - 7,0 Kĩ thuật trồng thu hoạch: Gấc loại dễ trồng trồng hạt hay giâm cành vào tháng - Tuy nhiên, trồng hạt tỷ lệ đực cao cái, nên trồng dây Khi trồng nên kết hợp hai loại để có tỷ lệ hoa đực, hoa phù hợp nâng cao tỷ lệ thụ phấn sai Trồng năm thu hoạch nhiều năm, mùa thu hoạch tháng - đến tháng - năm sau Sau đó, lụi sang xuân lại nẩy chồi mọc (Huda cs., 2006) 1.2.4 Công dụng Gấc Đối với người dân địa, Gấc đánh giá có nhiều lợi ích sức khoẻ quan trọng Được trồng Việt Nam vùng khác Nam Á, Gấc đánh giá "trái từ thiên đường" đánh giá cao khả để thúc đẩy tuổi thọ, sức sống sức khoẻ (Burke cs., 2005, Parks cs., 2013) Một số công dụng Gấc kể đến như: - Màng Gấc: Nhân dân ta dùng đồ xôi, ăn xôi màng Gấc - Dầu Gấc: Dầu Gấc có tác dụng thuốc có vitamin A, dùng bơi lên vết thương, vết loét, vết bỏng làm cho da chóng lành Uống dầu Gấc, người bệnh chóng lên cân, tăng sức chống đỡ bệnh tật thể, chất caroten tác dụng men carotenase có nhiều gan tách β- caroten thành hai phần tử vitamin A Dùng cho trẻ em chậm lớn, bệnh khô mắt, quáng gà - Hạt Gấc: Trong lịch sử nhà đông y sử dụng hạt Gấc để trị bệnh, uống ngâm cồn thuốc để xoa bóp Hạt Gấc vị đắng, ngọt, tính ấm, có độc, dùng chữa chứng bệnh mụn nhọt độc, tràng nhạt, eczema, viêm da thần kinh, trĩ, phụ nữ sưng vú - Rễ Gấc: Sao vàng, tán mỏng, dùng uống chữa tê thấp sưng chân gọi Phòng kỷ nam (Nguyễn Trung Phong, 2005) - Lá Gấc: Viện Đông y dùng Gấc với tầm gửi đắp làm thuốc tiêu sưng tấy (Đỗ Tất Lợi, 2003) 1.3 Tình hình nghiên cứu Gấc 1.3.1 Tình hình nghiên cứu mặt dược lý Gấc a Tình hình nghiên cứu nước Đại học Bách Khoa Hà Nội Viện Dinh Dưỡng Việt Nam nghiên cứu bột Gấc, dùng cho gà ăn thấy tồn số gà ăn bột Gấc không bị chết dịch cho chất lượng lịng đỏ trứng tốt Điều chứng tỏ gà ăn thức ăn có bột Gấc có sức đề kháng cao, khơng bị nhiễm dịch bệnh chất lượng thịt trứng cao Từ năm 1941, Bộ môn dược liệu Đại học Dược Hà Nội bước đầu xác định màng đỏ bao quanh hạt Gấc có chứa beta-caroten tỷ lệ dầu thảo mộc cao Một số nhà khoa học Đại học y Hà Nội Đại học Dược Hà Nội thời chứng minh dầu màng đỏ bao quanh hạt Gấc có tác dụng giống vitamin A có tác dụng tăng trọng cho súc vật người (Đỗ Tất Lợi, 2003) Năm 1951, Nguyễn Văn Đàn cs mang dược liệu sang nghiên cứu Đức xác định ngồi β-caroten phần Gấc cịn chứa lycopen chất chống lão hóa mạnh Ngành dược Việt Nam sản xuất số chế phẩm có chứa dầu màng Gấc làm thuốc bổ, điều trị suy dinh dưỡng cho trẻ em số bệnh mắt, đặc biệt, khoảng thời gian 20 - 30 năm gần đây, bác sĩ sử dụng dầu màng Gấc để phòng điều trị số bệnh ung thư Việt Nam (Đỗ Tất Lợi, 2003) Năm 2001, Nguyễn Công Suất cs khởi xướng việc sản xuất viên nang dầu Gấc với thương hiệu VINAGA, thị trường Mỹ nước tin dùng (Đỗ Tất Lợi, 2003) b Tình hình nghiên cứu giới Các nhà khoa học Mỹ sau gần chục năm nghiên cứu Gấc sản phẩm từ Gấc thừa nhận Gấc loại nhất, an tồn có hiệu chống ơxy hóa cao cà chua cà rốt nhiều lần Các hãng dược phẩm lớn Mỹ gọi trái Gấc loại đến từ thiên đường Một số nghiên cứu Mỹ công bố gần cho thấy hợp chất βCaroten, Lycopen, Alphatocopherol có dầu Gấc có tác dụng làm vơ hiệu hóa 75% chất gây ung thư nói chung, ung thư vú phụ nữ (Burke cs., 2005) Các nghiên cứu cho thấy màng dầu hạt nguồn tuyệt vời Betacarotenes Lycopene giúp thị lực hoạt động tốt (Voung cs., 2003) ức chế gia tăng tế bào ung thư Lycopene trái Gấc cao so với nguồn thực vật khác báo cáo West Poortvliet (1993), Gấc nguồn cung cấp tocopherol alpha-vitamin A (Voung cs., 2006) chất có đặc tính kháng vi sinh vật chống tiểu đường (Parks cs., 2013) 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nhân giống Gấc 1.3.2.1 Tình hình nghiên cứu giới a Nghiên cứu nhân giống theo phương pháp truyền thống Trên giới có vài cơng trình nghiên cứu dược cách nhân giống Gấc theo kiểu truyền thống (gieo hạt, giâm hom) kết hợp với yếu tố đại (như trồng nhà lưới điều khiển yếu tố dinh dưỡng điều kiện sống) công bố nghiên cứu Sophie cs (2013) Nhóm 10 Bảng 3.5 Chi phí sản xuất dự kiến cho 1000 Gấc phương pháp nuôi cấy mô TT Đơn giá Nội dung Đơn vị Nguyên vật liệu sản xuất 300.000 /1000 Công lao động 400.000 /1000 Điện, nước, xăng dầu 800.000 /1000 Tổng chi phí 1.500.000 /1000 36 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Xây dựng thành công quy trình nhân giống in vitro Gấc nếp từ giai đoạn vô mẫu tới giai đoạn tạo rễ tạo in vitro hoàn chỉnh Đoạn thân Gấc nếp khử trùng trongThủy ngân clorua 1o/oo 10 phút Sau đặt mơi trường tái tạo chồi MS + 0,2 mg/L BA+0,01mg/L IBA+ 10%v/v nước dừa + 2% đường Chồi non chuyển qua môi trường nhân nhanh cụm chồi MS + 0,5 mg/L BA +0,01mg/L IBA+ 10%v/v nước dừa + 2% đường Cuối chồi Gấc đặt qua trôi trường tái tạo rễ MS + 0,5mg/L IBA+ 10%v/v nước dừa + 2% đường 4.2 Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu thêm ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng khác lên phát triển chồi cụm chồi Gấc - Khảo sát thêm ảnh hưởng số dịch chiết tự nhiên (nước dừa) đến phát triển chồi, cụm chồi Gấc in vitro 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước Đỗ Tất Lợi (2003), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất y học, Trang 886 Lê Thị Hảo, Ngô Xuân Bình, 2011,“Nghiên cứu nhân giống Gấc (Momordica cochinchinensis) phương pháp ni cấy mơ”,Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn, Số (2011), trang 26-30 Lê Văn Hòa, Nguyễn Văn Ây, Nguyễn Thị Kim Chung, Nguyễn Thị Phương Dung, Trang Ngọc Diệp, 2009, “Nhân giống Gấc(Momordica cochinchinensis) kỹ thuật nuôi cấy mô”, Tạp chí Khoa học, Số 11, trang163172 Lê Đình Lương, Hà Văn Mạo, Mai Hồng Bàng (1988) Tác dụng sửa chữa AND bị tổn thương tia tử ngoại dầu Gấc Việt Nam Tạp chí di truyền học Ứng dụng, số 2: tr.8 Nguyễn Tường Vy (2008) Nghiên cứu thành phần hố học góp phần tiêu chuẩn hoá chất lượng dầu Gấc Việt Nam dùng thuốc Luận án tiến sỹ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Trung Phong (2005) Phân lập,nhận dạng cấu trúc khảo sát hoạt tính sinh học saponin từ rễ Gấc(momordica cochinchinensis (lour.) spreng) Tạp chí Dược học số 356, T14-16,28 Phan Nguyễn Thảo Linh, Lê Thị Mỹ Nga, Đỗ Đăng Giáp, Nguyễn Thị Huyền Trang, Thái Xuân Du, Trần Trọng Tuấn, 2013,Ảnh hưởng cytokinin, auxin, mơi trường khống hệ thống chiếu sáng đơn sắc lên khả tái sinh Gấc (Momordica Cochinchinensis (Lour.) Spreng) in vitro, Trường Đại học Lạc Hồng, Đồng Nai - Viện Sinh học Nhiệt đới, Viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam.Phạm Hoàng Hộ (1999) Cây cỏ Việt Nam (Quyển 1), Nhà xuất Trẻ, trang 568 38 Phạm Hoàng Hộ ,1999 Cây cỏ Việt Nam (Quyển 1), Nhà xuất Trẻ, trang 568 Tài liệu nước Debnath B., Sinha S., Sinha R K., (2013), In vitro diferentiation and regeneration of Momordica cochinchinensis (Lour.) Spreng, Indian Journal of Plant Sciences, No 2, pp 17-21 10 Debnath B.,, Sinha S., Rabindra, K.,2013 Rapid in vitro differentiation and regeneration of Momordica dioica Roxb Indian Journal of Plant Sciences, Vol (3), pp.43-47 11 Bharathi L.K., John K.J., (2013) Descreption and crop production Momodica genus in Asia: An overview Springer India, No.978, pp 81-322 12 Burke D S., Smidt C.R., Vuong L.T., (2005) Momordica cochinchinensis, rosa roxburghii, wolfberry, and sea buckthorn—highly nutritional fruits supported by tradition and science Current Topics in Nutraceutical Research Vol 3, No 4, pp 259-266 13 Butenko R.G.et al, 1999 Biology of higher plants cells in vitro and biotechnology based on them // FBK-PRESS 172p 14 Govind K.R, Major S., Neha P.R Bhardwaj D.R., Sanjeev K., 2012 In vitro propagation of spine gourd (Momordica dioica Roxb.) and assessment of genetic fidelity of micropropagated plants using RAPD analysis Physiol Mol Biol Plants 18(3):273–280 15 Huda A K M N, B Sikdar (2006) In vitro plant production through apical meristem culture of Bitter Gourd ( Momordica charantia L.) Plant Tissue Cult & Biotech, pp 31-36 16 Muthu T., Min C., Se-Chul C., 2012 Influence of polyamines on in vitro organogenesis in bitter melon (Momordica charantia L.) Journal of Medicinal Plants Research,Vol 6(19), pp 3579-3585 39 17 Muthu T., Rekha, K T., 2010 High-frequency shoot regeneration from leaf explants through organogenesis in bitter melon (Momordica charantia L.) Plant Biotechnology Reports, Volume 4, Issue 4, pp 321–328 18 Patel M G., Ishnava K B , (2015), Momordica dioica Roxb (Spine Gourd): Multiple shoot induction from nodal cultures and its antidiabetic activity, Journal of Medicinal Plants Studies, Vol 3, No 6, pp 82 -88 19 Parks S., Nguyen M., Gale D., Murray C., (2013), Assessing the Potential for a Gac (Cochinchin gourd) Industry in Australia, Rural Industries Research and Development Corporation (ISSN 1440-6845), Publication No 13/060 20 Sophie E.P , Carly T.M., David L.G., Basem A., 2013 Propagation and production of gac (Momordica cochinchinensis spreng.), a greenhouse case study spreng.), a greenhouse case study Cambridge university,volume 49, pp 234-243 21 Varisai S M., Yang C.H., Jayabalan N., 2006 Development of an embryogenic suspension culture of bitter melon (Momordica charantia L.) Scientia Horticulturae Volume 109, Issue 2, Pages 123-129 22 Voung L.T., Franke A.A., Custer L.J and Murphy S.P., 2006 Momordica cochinchinensis Spreng (gac) fruit carotenoids reevaluated Journal of food composition analysis 19(6) 664-668 23 Vuong T.L and King J.C., 2003 A method of preserving and testing the acceptability of gac fruit oil, a good source of b-carotene andessential fatty acids Food and Nutrition Bulletin 24 (2) 224–230 24 West C.E and Poortvliet E.J., 1993 The carotenoid content of foods with special reference to developing countries USAID-VITAL, Washington DC 40 PHỤ LỤC Sản phẩm nhiệm vụ a Quy trình nhân giống in vitro Gấc nếp Sơ đồ quy trình Đoạn thân Gấc nếp khỏe mạnh Khử trùng: HgCl2 o/oo 10 phút Môi trường cảm ứng tạo chồi: MS + 0,2 mg/L BA+0,01mg/L IBA+ 10%v/v nước dừa + 2% đường Môi trường cảm ứng tạo cụm chồi: MS + 0,5 mg/L BA +0,01mg/L IBA+ 10%v/v nước dừa + 2% đường Môi trường rễ: MS + 0,5mg/L IBA+ 10%v/v nước dừa + 2% đường 41 Diễn giải quy trình - Bước (Khử trùng mẫu cấy): Đoạn thân Gấc nếp sau q trình làm xơ xà phịng rửa vòi nước sạch, khử trùng cồn 70o 30 giây, sau lắc dung dịch Thủy ngân clorua 0,01% 10 phút tween 20, rửa lại nước tiệt trùng 3-5 lần - Bước (Nuôi cấy tạo nguồn mẫu ban đầu): Mẫu sau khử trùng cắt thành đoạn nhỏ chứa mắt ngủ đặt môi trường MS + 0,2 mg/L BA+0,01mg/L IBA+ 10%v/v nước dừa + 2% đường Điều kiện nuôi cấy nhiệt độ 25 ± 2oC, thời gian chiếu sáng 12h, cường độ chiếu sáng 2000 lux - Bước (Nhân nhanh cụm chồi): Chồi Gấc in vitro chuyển qua môi trường nhân nhanh chồi MS + 0,5 mg/L BA +0,01mg/L IBA+ 10%v/v nước dừa + 2% đường Điều kiện nuôi cấy nhiệt độ 25 ± 2oC, thời gian chiếu sáng 12h, cường độ chiếu sáng 2000 lux - Bước (Ra rễ tạo hồn chỉnh): Chồi Gấc chuyển vào mơi trường kích thích tạo rễ MS + 0,5mg/L IBA+ 10%v/v nước dừa + 2% đường Điều kiện nuôi cấy nhiệt độ 25 ± 2oC, thời gian chiếu sáng 12h, cường độ chiếu sáng 2000 lux 42 Phụ lục xử lý số liệu thống kê Kết xử lý thống kê thí nghiệm Tỉ lệ bật chồi TY LE NAY CHOI 09:08 Thursday, November 17, 2017 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values K 1234 T CT1 CT2 CT3 CT4 DC Number of Observations Read 20 Number of Observations Used 20 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 17243.75000 2155.46875 94.37 F K 105.00000 35.00000 1.53 0.2610 T 17138.75000 3427.75000 150.07 F Model 26970.83333 3371.35417 80.51 F K 203.12500 67.70833 1.62 0.2274 T 26767.70833 5353.54167 127.85 F Model 52.60218333 6.57527292 127.99 F K 0.38765000 0.12921667 2.52 0.0977 T 52.21453333 10.44290667 203.27 F Model 24912.50000 2768.05556 85.33 F K 603.57143 201.19048 6.20 0.0044 T 24308.92857 4051.48810 124.89 F Model 113.7654451 12.6406050 71.31 F K 1.1802136 0.3934045 2.22 0.1210 T 112.5852315 18.7642053 105.86 F Model 93.68214286 10.40912698 253.93 F K 0.51714286 0.17238095 4.21 0.0203 T 93.16500000 15.52750000 378.79 F Model 31.40987218 3.48998580 106.36 F K 0.26224575 0.08741525 2.66 0.0790 T 31.14762643 5.19127107 158.20 F Model 5774.642857 641.626984 3050.75 F K 0.714286 0.238095 1.13 0.3626 T 5773.928571 962.321429 4575.57 F Model 22.77375000 3.79562500 36.71 F K 1.07187500 0.35729167 3.46 0.0647 T 21.70187500 7.23395833 69.96 F Model 31.34875000 5.22479167 57.65 F K 1.19187500 0.39729167 4.38 0.0367 T 30.15687500 10.05229167 110.92 F Model 86.37500000 14.39583333 42.31 F K 6.68750000 2.22916667 6.55 0.0122 T 79.68750000 26.56250000 78.06