Nghiên cứu quy trình công nghệ khai thác các hoạt chất sinh học từ sao biển để sản xuất thực phẩm chức năng

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM TRUNG TÂM NHIỆT ĐỚI VIỆT - NGA SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CHI NHÁNH PHIÁ NAM - BÁO CÁO NGHIỆM THU ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ KHAI THÁC CÁC HOẠT CHẤT SINH HỌC TỪ SAO BIỂN ĐỂ SẢN XUẤT THỰC PHẨM CHỨC NĂNG CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: ThS CÙ NGUYÊN ĐỊNH TS NGUYỄN HUY NAM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 4/ 2016 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NGHIỆM THU ĐỀ TÀI (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu) NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ KHAI THÁC CÁC HOẠT CHẤT SINH HỌC TỪ SAO BIỂN ĐỂ SẢN XUẤT THỰC PHẨM CHỨC NĂNG CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI ThS CÙ NGUYÊN ĐỊNH TS NGUYỄN HUY NAM CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 4/ 2016 TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Nghiên cứu phân tích hoạt chất sinh học (các acid amin, hormone steroid nguyên tố vi lượng) loài biển: Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula khai thác từ vùng biển Hải Phịng, Bình Thuận, Kiên Giang – Việt Nam Kết thu nhận loài biển giàu acid amin, hormone steroid nguyên tố vi lượng: - Hai lồi biển Asterias rubin, Anthenea pentagonula có 17 loại acid amin có loại acid amin khơng thay thế; Lồi biển Asterias forbesi có 18 loại acid amin có loại acid amin khơng thay - Ba lồi biển có nhóm hormone steroid: Testosteron, Cortisol, Oetradiol, Progesteron - Các nguyên tố vi lượng Fe, Cu, Mn, Zn, Se có lồi biển với hàm lượng cao Kết nghiên cứu cho thấy loài biển Asterias forbesi biển Việt Nam nguồn cung cấp hoạt chất có hoạt tính sinh học tốt cho sức khỏe người Nhóm nghiên cứu xây dựng thành cơng quy trình chiết xuất nhóm hoạt chất sinh học (các acid amin, hormone steroid nguyên tố vi lượng) từ loài biển Asterias forbesi tạo sản phẩm thực phẩm chức viên nang Sanamine Kết thực nghiệm động vật (chuột, thỏ) cho thấy viên nang Sanamine an toàn có tác dụng tốt Nhóm nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở cho sản phẩm viên nang Sanamine từ loài biển Asterias forbesi I SUMMARY OF RESEARCH CONTENT Analysis of amino acids, steroid hormones and trace elements in three species of starfish: Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula from the sea in Hai Phong, Binh Thuan, Kien Giang - Vietnam Results obtained in three species of starfish are very rich in amino acids, steroid hormones and trace elements: - Two species of starfish Asterias rubin, Anthenea pentagonula has 17 amino acids of which amino acids are not replaced; starfish Asterias forbesi has 18 amino acids of which amino acids are not replaced - Three species of starfish are four groups of steroid hormones: Testosterone, Cortisol, Oetradiol, Progesterone - The trace elements Fe, Cu, Mn, Zn, Se are in three species of starfish with relatively high levels Research results also showed that starfish Asterias forbesi Vietnam is a source of the active substance is biologically active is good for human health The team has successfully built a team process extracts the biologically active substances (amino acids, steroid hormones and trace elements) from the starfish Asterias forbesi create functional food products Sanamine capsules The experimental results in animals (rats, rabbits) showed Sanamine capsule safe and works well The team has developed basic standards for the capsule Sanamine from starfish Asterias forbesi II MỤC LỤC Trang Tóm tắt đề tài I Mục lục III Danh sách hình VI Danh sách bảng VII Danh sách đồ thị IX Danh sách sơ đồ X THÔNG TIN CHUNG VỀ ĐỀ TÀI PHẦN MỞ ĐẦU CHƢƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số đặc điểm sinh học chung biển 1.1.1 Lớp Sao biển (Asteroidea) 1.1.2 Một số đặc điểm ba loài Sao biển Asterias forbesi, A 11 rubens, Anthenea pentagonula 1.2 Hoạt chất sinh học nguồn dinh dƣỡng, thực phẩm thuốc có giá trị quan trọng với sức khỏe ngƣời 13 1.2.1 Vai trò tác dụng protein, amino acid thể 13 1.2.2 Vai trị ngun tố vi khống thể 13 1.2.3 Vai trò hormon steroid thể 15 1.3 Mối liên quan Testosteron, Lactat Dehydrogenase (LDH) acid lactic vấn đề mệt mỏi hồi phục thể ngƣời lao động nặng 21 1.4 Tình hình nghiên cứu trong, ngồi nƣớc sản xuất thực phẩm chức từ Sao biển 23 1.4.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 23 III Tình hình nghiên cứu nước 24 CHƢƠNG II: NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 27 2.1.1 Nguyên liệu 27 2.1.2 Động vật thử nghiệm 27 2.2 Nội dung nghiên cứu 27 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 28 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Nghiên cứu thành phần hoạt chất sinh học loài Sao biển Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula số vùng biển Việt Nam 32 3.1.1 Kết xác định thành phần amino acid có mẫu ngun liệu thơ lồi biển Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula 32 3.1.2 Kết xác định thành phần hormon steroid có mẫu 35 1.4.2 thô loại Sao biển Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula 3.1.3 Kết xác định thành phần chất vi khống có mẫu thơ thu loài biển Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula 37 3.2 Kết nghiên cứu quy trình tạo bột nguyên liệu cho chế phẩm Sanamine 39 3.2.1 Kết lựa trọn enzym điều kiện thủy phân 39 3.2.2 Kết nghiên cứu thành phần amino acid có mẫu bột nguyên liệu biển Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula sau thuỷ phân 41 3.2.3 Các kết nghiên cứu hormon steroid có mẫu bột lồi biển Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea 44 IV pentagonula trước sau thuỷ phân 3.2.4 Kết nghiên cứu chất vi khống có mẫu bột 45 loài biển Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula trước sau thuỷ phân 3.2.5 Sơ đồ quy trình cơng nghệ sản xuất bột Sanamine 48 3.3 Kết nghiên cứu độc tính cấp tính độc tính bán 48 trƣờng diễn bột Sanamine 3.4 Kết nghiên cứu quy trình tạo viên nang Sanamine 51 3.4.1 Nghiên cứu phối trộn tạo viên nang Sanamine 51 3.4.2 Sơ đồ quy trình tạo viên nang Sanamine 51 3.5 Tiêu chuẩn sở viên nang Sanamine 52 3.6 Kết nghiên cứu tác dụng viên nang Sanamine động vật thử nghiệm 54 3.6.1 Tác dụng viên nang Sanamine lên số tiêu huyết học chuột cống trắng 54 3.6.2 Tác dụng viên nang Sanamine lên thể lực sức bền 55 chuột Tác dụng viên nang Sanamine lên số tiêu sinh học tinh dịch thỏ 56 CHƢƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 59 4.1 Kết luận 59 4.2 Đề nghị 60 PHỤ LỤC 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO 63 3.6.3 V DANH SÁCH HÌNH SỐ TÊN HÌNH ẢNH TRANG 1.1 Hình dạng ngồi Sao biển (theo Hickman) 1.2 Hệ mạch máu Sao biển (theo Hickman) 1.3 Sao biển ăn mồi (sị, ốc) 1.4 Q trình biến thái Sao biển (theo Hickman) 10 1.5 Loài Sao biển Asterias forbesi (Desor, 1848) 11 1.6 Loài Sao biển Asterias rubin (Linnaeus, 1758) 12 1.7 Loài Sao biển Anthenea pentagonula (Lamarck, 1816) 13 1.8 Công thức cấu tạo hormon steroid 16 1.9 Cơ chế tác dụng testosteron 18 hình ảnh thực đề tài (phần phụ lục) VI 61 - 62 DANH SÁCH BẢNG SỐ TÊN BẢNG SỐ LIỆU TRANG 1.1 Hàm lượng testosteron máu nam giới lứa tuổi 19 khác (nmol/l) 3.1 Thành phần hàm lượng amino acid có mẫu thơ 32 lồi biển (Ðơn vị tính: %g amino acid/100g mẫu) 3.2 So sánh thành phần hàm lượng amino acid khơng thay 33 lồi biển với số đối tượng khác (Ðơn vị tính: %g a.amine/100g mẫu) 3.3 Hàm lượng hormon steroid có mẫu thơ lồi 35 biển 3.4 Hàm lượng vi khống có mẫu thơ loại biển 37 3.5 Kết phân tích mẫu bột biển Asterias forbesisau thuỷ 40 phân loại enzym với điều kiện khác 3.6 Thành phần amino acid có mẫu bột biển Asterias 41 forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula sau thuỷ phân (n= 30 p ≤0,05) 3.7 So sánh hàm lượng hoạt chất steroid có mẫu bột 44 loài biển Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula trước sau thủy phân (n= 30 p ≤0,05) 3.8 So sánh hàm lượng vi khoáng có mẫu bột lồi 45 biển Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula trước sau thuỷ phân papain 3.9 Bảng nghiên cứu tỷ lệ sống chết (để xác định liều độc LD50) 48 chuột nhắt trắng uống bột Sanamine(n=12) 3.10 Bảng kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn bột 49 Sanamine chuột nhắt trắng (n=12) 3.11 Tiêu chuẩn sở viên Sanamine thành phần hàm lượng Amino acid VII 52 3.12 Tiêu chuẩn sở viên Sanamine thành phần hàm 53 lượng hormon steroid 3.13 Tiêu chuẩn sở viên Sanamine thành phần hàm 53 lượng chất vi khoáng 3.14 Tiêu chuẩn sở viên Sanamine thành phần hàm 53 lượng chất không mong muốn 3.15 Tiêu chuẩn sở viên Sanamine tiêu vi sinh 53 3.16 Bảng kết kiểm tra tiêu huyết học chuột dùng 54 thử nghiệm chế phẩm 3.17 Bảng kết kiểm tra thời gian bơi chuột 55 3.18 Chỉ tiêu sinh học tinh dịch thỏ trước bổ sung viên Sanamine, Placebo 56 3.19 Chỉ tiêu sinh học tinh dịch thỏ sau 10 ngày bổ sung viên Sanamine, Placebo 56 3.20 Chỉ tiêu sinh học tinh dịch thỏ sau 20 ngày bổ sung viên Sanamine, Placebo 57 VIII Sản phẩm viên nang Sanamine sản xuất thử nghiệm dây chuyền thiết bị đại đạt tiêu chuẩn Công ty Công nghệ Intecpharm 3.5 TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CỦA VIÊN NANG SANNAMINE Tiêu chuẩn chất lượng sở sản phẩm viên nang Sanamine nhóm nghiên cứu đề xuất kiểm nghiệm Công ty Intecpharrm, gồm tiêu chuẩn sau: Tên sản phẩm: Thực phẩm chức Sanamine Tính chất: Bột màu vàng, đồng nhất, mùi đặc trưng Hàm lượng protein tổng số (%): 58,64 Hàm lượng cacbuahydrat tổng số (%): 1,37 Thành phần hàm lượng amino acid (Bảng 3.11) Bảng 3.11 Tiêu chuẩn sở viên Sanamine thành phần hàm lượng Amino acid Thành phần Amino acid (%g) Amino acid/100g Acid aspartic 2,98 Acid glutamic 4,02 Threonine 0,80 Serine 3,00 Glycine 4,37 Tyrosine 2,56 Alanine 3,85 Arginine 4,30 Histidine 1,24 10 Valine 2,96 11 Methionine 4,32 12 Phenylalanine 5,99 13 Isoleucine 3,18 14 Leucine 4,07 15 Lysine 3,15 16 Hydroxyproline 3,00 17 Cysteine 2,87 18 Proline 4,78 52 Thành phần hormon steroid (Bảng 3.12) Bảng 3.12 Tiêu chuẩn sở viên Sanamine thành phần hàm lượng hormon steroid Testosteron Cortisol Progesteron Oestradiol (mg/kg vck) (mg/kg vck) (mg/kg vck) (mg/kg vck) 40,00 38,89 37,20 72,00 Hàm lượng chất vi khoáng (Bảng 3.13) Bảng 3.13 Tiêu chuẩn sở viên Sanamine thành phần hàm lượng chất vi khoáng K Ca Cu Fe Zn Mn Se (%) (%) (mg/kg vck) (mg/kg vck) (mg/kg vck) (mg/kg vck) (mg/kg vck) 0,54 0,58 37,12 198,20 137,22 22,24 42,12 Hàm lượng chất không mong muốn (Bảng 3.14) Bảng 3.14 Tiêu chuẩn sở viên Sanamine thành phần hàm lượng chất không mong muốn TT Tên tiêu Đơn vị tính Kết Asen ppm Chì ppm Thiếc ppm Thủy ngân ppm Cadimi ppm Các tiêu vi sinh (Bảng 3.15) Bảng 3.15 Tiêu chuẩn sở viên Sanamine tiêu vi sinh TT Tên tiêu Đơn vị tính Kết TSVKHK Khuẩn lạc/gam Salmonella Khuẩn lạc/gam Coliform Khuẩn lạc/gam E.coli Khuẩn lạc/gam Cl.perfringen CFU/gam B.cereus CFU/gam 53 3.6 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VỀ TÁC DỤNG CỦA VIÊN NANG SANAMINE TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM 3.6.1 Tác dụng viên nang Sanamine lên số tiêu huyết học chuột cống trắng Bảng 3.16 Bảng kết kiểm tra tiêu huyết học chuột dùng thử nghiệm chế phẩm Lơ thí nghiệm dùng viên Sanamine Lô đối chứng dùng viên Placebo Tên CT WBC (x10 WBC / l) RBC HGB / l) (x10 RBC HGB Số lượng tuyệt (x10 /  l) (g/dL) Số lượng tuyệt (x10 /  l) (g/dL) đối bạch cầu Số lượng Huyết sắc tố đối bạch cầu Số lượng hồng Huyết sắc tố đoan trung tính hồng cầu đoan trung tính cầu Trước Sau Tr Sau Tr Sau Tr Sau Tr Sau Tr Sau X 2.30 2.27 3.33 4.04 12.76 14.02 2.00 2.10 3.34 3.39 12.78 12.67 ± SD 0.22 0.22 0.48 0.67 0.55 0.84 0.18 0.16 0.43 0.46 0.73 0.68 6 * Giá trị thống kê với: n = 10, p ≤ 0,05 Kết bảng 3.16 cho thấy sau cho chuột cống trắng ăn bổ sung viên tăng lực Sanamine 20 ngày làm thay đổi số tiêu huyết học quan trọng chuột Số lượng hồng cầu (RBC) trung bình chuột nhóm (TN1) cho ăn bổ sung chế phẩm Sanamine trước thí nghiệm 3.33(x106/  l), sau thí nghiệm 4.04(x106/  l) Tăng 0.91(x106/  l) Trong nhóm đối chứng (ÐC 2) cho ăn viên Sanamine giả (Placebo) trước thí nghiệm 3.34(x106/  l), sau thí nghiệm 3.39(x106/  l) Tăng 0.02(x106/  l), tiêu cho thấy hồng cầu lô đối chứng trước sau thí nghiệm có thay đổi tăng khơng đáng kể Số lượng Hemoglobin (HGB) trung bình chuột lô (TN1) cho ăn viên tăng lực Sanamine trước thí nghiệm 12.76(g/dl), sau thí nghiệm 14.02(g/dl) Tăng 1.26(g/dl) lô (ÐC2) cho ăn viên Sanamine giả (Placebo) trước thí nghiệm 12.78(g/dl), sau thí nghiệm 12.67(g/dl) giảm 0.11(g/dl) Số lượng bạch cầu (WBC) trung bình chuột lơ thí nghiệm có thay đổi khơng đáng kể Ở lơ thí nghiệm (TN1) cho ăn bổ sung viên tăng lực Sanamine trước thí nghiệm 2.3(x103/  l ), sau thí nghiệm 2.27(x103/  l ) lô 54 (ÐC) cho ăn viên Sanamine giả (Placebo) trước thí nghiệm 2.0(x103/  l), sau thí nghiệm 2.10(x103/  l) Sự tăng giảm bạch cầu lơ đối chứng thí ngiệm khơng có ý nghĩa Qua kết thí nghiệm cho thấy viên tăng lực Sanamine thực có tác dụng kích thích tạo máu, tạo hồng cầu hemoglobin Sự tăng số lượng hồng cầu có nghĩa tăng cường cung cấp oxy cho tế bào, điều cần thiết cho trình vận động hoạt động bắp việc tăng cường thể lực thể 3.6.2 Tác dụng viên nang Sanamine lên thể lực sức bền chuột Chỉ tiêu đánh giá thời gian chuột bắt đầu bơi đến lúc chúng chìm lần đầu Bảng 3.17 Bảng kết kiểm tra thời gian bơi chuột Lô đối chứng Lơ thí nghiệm bổ sung Sanamine Chuột TN TrướcTN Sau TN 15ngày TrướcTN Sau TN 15 ngày Chuột 3g36’ 3g41’ 3g26’ 4g07’ Chuột đực 3g25’ 3g35’ 3g28’ 4g02’ X 3g31’ 3g38’ 3g27’ 4g05’ * Giá trị thống kê với: n = 10, p ≤ 0,05 Qua kết bảng 3.17 cho thấy lô đối chứng thí nghiệm có khác rõ rệt, chí khác cịn thể kết lơ thí nghiệm tự đối chứng - Lơ đối chứng thời gian bơi trung bình chuột trước thí nghiệm 3g31 sau đợt thí nghiệm 3g38 kết có khác khơng nhiều - Lơ thí nghiệm chuột thí nghiệm cho ăn bổ sung chế phẩm Sanamine thời gian bơi trung bình cải thiện tăng 0g38 trước thí nghiệm 3g27, sau thí nghiệm kết 4g05 Các kết thực nghiệm chứng minh cho thấy chế phẩm Sanamine thực có tác dụng tăng cường thể lực chuột thí nghiệm thể thời gian bơi chuột kéo dài hơn, sức chịu đựng chuột tốt Ðiều lý giải chế phẩm cung cấp bổ sung thêm chất dinh dưỡng hoạt chất sinh học, hormone steroid (Testosterone, progesterone…), chất vi khoáng Fe, Zn, Cu acid amine cần thiết trình vận động tiêu hao lượng chuột 55 3.6.3 Tác dụng viên nang Sanamine lên số tiêu sinh học tinh dịch thỏ Kết đánh giá tiêu sinh học tinh dịch thỏ trước sau bổ sung chế phẩm trình bày bảng 3.18, 3.19, 3.20 Bảng 3.18 Chỉ tiêu sinh học tinh dịch thỏ trước bổ sung viên Sanamine, Placebo Chỉ tiêu theo dõi Trước bổ sung viên Sanamine Trước bổ sung viên (Lô 1) Placebo(Lô 2) Lượng tinh dịch (ml) 0,56 ± 0,11 0,58 ± 0,10 Hoạt lực tiến thẳng (A %) tinh trùng 65,86 ± 5,14 66,77 ± 3,27 Nồng độ tinh trùng (triệu/ml) 250,15 ± 16,42 248,05 ± 16,74 Tổng số tinh trùng tiến thẳng (V.A.C) (triệu/ lần lấy tinh) 106,27 ± 15,73 110,45 ± 13,79 Tỷ lệ kì hình (%) tinh trùng 20,52 ± 4,35 19,60 ± 5,36 Tỷ lệ sống (%) tinh trùng 74,51 ± 7,38 73,29 ± 9,61 Sức kháng tinh trùng (NaCl 1%) 538 ± 14,36 532 ± 16,75 pH tinh dịch 6,75 ± 0,22 6,80 ± 0,10 Bảng 3.19 Chỉ tiêu sinh học tinh dịch thỏ sau 10 ngày bổ sung viên Sanamine, Placebo Chỉ tiêu theo dõi Bổ sung viên Bổ sung viên Sanamine Placebo Lượng tinh dịch (ml) 0,78 ± 0,17 0,56 ± 0,16 Hoạt lực tiến thẳng (A %) tinh trùng 72,45 ± 4,25 60,84 ± 4,28 Nồng độ tinh trùng (triệu/ml) 270,94 ± 15,65 215,17 ± 15,73 Tổng số tinh trùng tiến thẳng (V.A.C) 153,11 ± 14,62 73,31 ± 15,78 Tỷ lệ kì hình (%) tinh trùng 21,74 ± 3,51 25,00 ± 4,73 Tỷ lệ sống (%) tinh trùng 79,39 ± 2,62 67,48 ± 3,73 Sức kháng tinh trùng (NaCl 1%) 565 ± 17,85 524 ± 14,83 pH tinh dịch 6,79 ± 0,15 6,80 ± 0,21 (triệu/ lần lấy tinh) 56 Bảng 3.20 Chỉ tiêu sinh học tinh dịch thỏ sau 20 ngày bổ sung viên Sanamine, Placebo Chỉ tiêu theo dõi Bổ sung viên Bổ sung viên Sanamine Placebo Lượng tinh dịch (ml) 0,87 ± 0,15 0,63 ± 0,17 Hoạt lực tiến thẳng (A %) tinh trùng 74,70 ± 4,16 62,73 ± 3,25 Nồng độ tinh trùng (triệu/ml) 279,84 ± 14,72 225,84 ± 11,84 Tổng số tinh trùng tiến thẳng (V.A.C) 181,87 ± 14,62 89,25 ± 15,78 Tỷ lệ kì hình (%) tinh trùng 18,80 ± 3,66 24,72 ± 3,96 Tỷ lệ sống (%) tinh trùng 80,72 ± 3,69 69,83 ± 4,74 Sức kháng tinh trùng (NaCl 1%) 572 ± 14,84 528 ± 15,61 pH tinh dịch 6,81 ± 0,12 6,83 ± 0,15 (triệu/ lần lấy tinh) Kết cho thấy bổ sung viên Sanamine có tác dụng làm tăng có ý nghĩa phẩm chất tinh dịch thỏ so với bổ sung Placebo Trước bổ sung chế phấm, lượng tinh dịch thỏ khác khơng có ý nghĩa lơ thí nghiệm Sau 10 ngày bổ sung, lượng tinh dịch lơ 1: 0,78ml cao có ý nghĩa so với lượng tinh dịch lô 2: 0,56ml trước bổ sung Sau 20 ngày bổ sung chế phẩm, lượng tinh dịch lô cao khơng có ý nghĩa so với sau 10 ngày Lượng tinh dịch lơ cao có nghĩa nghĩa so với lô Trước bổ sung chế phẩm, hoạt lực tiến thẳng tinh trùng khác khơng có ý nghĩa lơ thí nghiệm Sau 10 ngày bổ sung chế phẩm, có tác dụng tốt làm tăng hoạt lực tiến thẳng tinh trùng lô Sau 20 ngày, hoạt lực tiến thẳng tinh trùng lơ1: 74,70% cao có ý nghĩa so với lô2: 62,73% Hoạt lực tiến thẳng tinh trùng lô sau bổ sung chế phẩm cao có ý nghĩa so với trước bổ sung Nồng độ tinh trùng khác khơng có ý nghĩa trước bổ sung chế phẩm Bổ sung chế phẩm có tác dụng tăng có ý nghĩa nồng độ tinh trùng lô so với lô trước bổ sung 57 Bổ sung chế phẩm có tác dụng tăng tổng số tinh trùng tiến thẳng Sau 20 ngày bổ sung, tổng số tinh trùng có hoạt lực tiến thẳng lô 1: 181,87 triệu, cao có ý nghĩa so với lơ 2: 89,25 triệu/lần Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng trước bổ sung chế phẩm khác khơng có ý nghĩa Sau 10 ngày bổ sung chế phẩm, tỷ lệ kỳ hình tinh trùng lơ 1: 21,74% thấp có ý nghĩa thống kê so với lô 2: 25,00% Tỷ lệ sống tinh trùng khác khơng có ý nghĩa trước bổ sung chế phẩm Chế phẩm có ảnh hưởng tốt làm tăng tỷ lệ sống tinh trùng Sau 20 ngày bổ sung Sanamine tỷ lệ sống tinh trùng lơ 1: 80,72% cao có ý nghĩa so với lơ 2: 69,83% Chế phẩm có ảnh hưởng tăng sức kháng tinh trùng lô so với trước bổ sung, khơng có ý nghĩa Chế phẩm trì pH ổn định Viên Sanamine có tác dụng tăng phẩm chất tinh dịch thỏ 58 Chƣơng IV KẾT LUẬN VÀ ÐỀ NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Các kết nghiên cứu nguồn nguyên liệu loài biển Asterias forbesi, Asterias rubin, Anthenea pentagonula cho thấy: - Protein loại biển chứa đầy đủ amino acid: 18 amino acid loài biển Asterias forbesi có loại amino acid không thay 17 amino acid lồi biển Asterias rubin, Anthenea pentagonula có loại amino acid không thay Hàm lượng amino acid loài biển Asterias forbesi cao so với loài biển Asterias rubin, Anthenea pentagonula, đặc biệt hàm lượng amino acid không thay - Ba lồi Sao biển có nhóm hormon steroid: Testosteron, Cortisol, Oestradiol, Progesteron với hàm lượng tương đương với Cá ngựa cao so với Rắn biển, Hải sâm Trong hàm lượng hormon steroid Sao biển Asterias forbesi cao Ðiều minh chứng cho tác dụng bổ thận tráng dương, bồi bổ thể Sao biển tốt có giá trị bổ dưỡng cao - Hàm lượng nguyên tố vi lượng cần thiết cho thể Fe, Cu, Mn, Zn, Se có mẫu thơ lồi biển cao so với đối tượng động vật biển nghiên cứu Cá ngựa, Cá mú đặc biệt hàm lượng nguyên tố vi lượng quý kẽm (Zn) Selen (Se) Sự giàu có ngun tố vi khống nguyên liệu biển nguồn thực phẩm nguồn dược liệu tốt cho ngành công nghiệp chế biến dược thực phẩm chức - Sao biển Asterias forbesi có hàm lượng amino acid, nguyên tố vi lượng hoạt chất hormon steroid cao Ðiều chứng tỏ cho thấy biển nói chung biển Asterias forbesi nói riêng nguồn nguyên liệu quý cho ngành chế biến thực phẩm chức công nghiệp dược Xây dựng qui trình tách chiết hoạt chất sinh học từ Sao biển: - Ðề tài lựa chọn enzym papain để thuỷ phân biển điều kiện thủy phân (pH: 6.5, t0: 400C, Thời gian: 40', Tỷ lệ E/cơ chất: 0.5%) Tại điều kiện cho hiệu suất hàm lượng hoạt chất sinh học cao 59 - Sản phẩm sau thuỷ phân loài biển hàm lượng số lượng lượng amino acid, hormon steroid vi khoáng đạt hiệu suất thu hồi cao so với mẫu biển trước thủy phân Sản phẩm bột nguyên liệu Sanamine qua thực nghiệm động vật cho thấy an tồn có tác dụng - Bột Sanamine khơng gây độc trước hết chuột sau người lẽ: ỏ mức liều 30mg/g thể trọng chuột, hoạt chất chứa bột Sanamine không gây biểu độc chuột thí nghiệm Theo tính tốn, mức liều cao 1250 lần liều quy định sử dụng người Như LD50 bột Sanamine cao mức liều 30.000 mg/kg thể trọng nên khẳng định bột Sanamine không độc - Thực nghiệm trường diễn cho thấy bột Sanamine hồn tồn khơng gây chết động vật khoảng thời gian sử dụng 03 tháng liên tục mức liều 15.000mg/kg thể trọng (gấp 625 lần sử dụng cho người) xâm nhập vào qua đường tiêu hoá Viên nang Sanamine sản xuất theo quy trình ổn định dây chuyền thiết bị đạt tiêu chuẩn mà Bộ Y tế cho phép Công ty Cơng nghệ Intecpharm Viên nang Sanamine an tồn có tác dụng thực rõ nét thơng qua việc thực nghiệm chuột, thỏ Xây dựng TCCS cho sản phẩm viên nang Sanamine 4.2 ÐỀ NGHỊ Được tiếp tục nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ, đăng ký chất lượng xin giấy phép triển khai sản phẩm đề tài chuyển giao công nghệ 60 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI Hình Sao biển Asterias forbesi sấy khơ Hình Bột Sao biển sấy sau thủy phân Hình Thử chế phẩm Sanamine chuột nhắt trắng 61 Hình 4, 5, Sản phẩm Viên nang Sanamine 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Ðỗ Tất Lợi Cây thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà Xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, 1991, 1125-1126 [2] Ðinh Ngọc Lâm, Ðặng Hồng Vân, Nguyễn Khánh Thành Hươu, nai, rắn chế phẩm dùng Y học Nhà xuất Y học 1985 [3] Lê Quí Phượng, Vũ Chung Thuỷ Sinh hoá học Thể dục Thể thao Nhà xuất Thể dục Thể thao, Hà nội 1997 [4] Lê Thị Kim Thư Hoá sinh lâm sàng Nhà xuất Y học 1998 [5] Bùi Kim Tùng Món ăn thuốc Sở KHCNMT Tỉnh Bà rịa, Vũng Tàu, 1997 1, trang 56, 77 [6] Võ Văn Chi Từ điển động vật khoáng vật làm thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học, 1998 [7] Nguyễn Tài Lương, Vũ Kim Cầu, Nguyễn Huy Nam cs Về hàm lượng axit amin Nguyên tố vi lượng thịt số loài rùa Việt Nam Tạp chí Sinh học CS , 1999.T21 N4, 54-58 1999 [8] Nguyễn Tài Lương, Nguyễn Huy Nam cs Ứng dụng công nghệ enzym tạo viên Rabiton từ rắn biển Báo cáo khoa học, Hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc, 1999, tr 684-69 [9] Nguyễn Tài Lương, Nguyễn Huy Nam Cs Kết nghiên cứu steroid hormone thịt hải sâm Báo cáo Hội nghị CNSH toàn quốc, 12-1999, 497-504, Hà nội, 1999 [10] Trịnh Hùng Thanh, Nguyễn Thị Kim Hưng, Ðào Duy Thư Dinh dưỡng loại thuốc đặc hiệu cho vận động viên Nhà xuất Thể dục Thể Thao 1999 [11] Nguyễn Văn Ðàn, Ngô Ngọc Quyến Hợp chất thiên nhiên dùng làm thuốc Nhà xuất Y học 1999 [12] Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dương Xét nghiệm sử dụng lâm sàng Nhà xuất Y học 1999 [13] Nguyễn Tài Lương, Nguyễn Huy Nam, Dương Nghiệp Chí, Nguyễn Ngọc Cừ, Nghiên cứu thực trạng dinh dưỡng số giải pháp Công nghệ sinh 63 học bổ sung dinh dưỡng, phục hồi nâng cao thể lực cho vận động viên Việt Nam Báo cáo khoa học Hội thảo dinh dưỡng thể thao TP Hồ Chí Minh 3-2000 [14] Nguyễn Ngọc Cừ, Dương Nghiệp Chí Huấn luyện thể thao với trao đổi chất chuyển hoá lượng thể Hội thảo dinh dưỡng thể thao Tp Hồ Chí Minh 3/2000 [15] Dương Nghiệp Chí Mệt mỏi, hồi phục dinh dưỡng vận động viên Hội thảo dinh dưỡng thể thao Tp Hồ Chí Minh3/2000 [16] Nguyễn Tài Lương, Nguyễn Huy Nam Cs Ứng dụng công nghệ sinh học kinh nghiệm y học dân tộc tạo chế phẩm thực phẩm Thuốc cho vận động viên Báo cáo khoa học, Hội thảo quốc tế Công nghệ sinh học, Hà Nội Việt Nam 2-5/7/2001, tr 279-285 [17] Nguyễn Tài Lương, Nguyễn Huy Nam cs Sử dụng hải sâm rắn biển làm thực phẩm thuốc tăng lực cho vận động viên Kỷ yếu Viện Công nghệ sinh học 2001 261-272 [18] Dương Nghiệp Chí, Lê Quí Phượng Nguyễn Huy Nam Chế độ dinh dưỡng cho vận động viên trình độ cao Giáo trình Cơng nghệ đào tạo vận động viên trình độ cao, NXB Thể thao 2002 [19] Dương Nghiệp Chí, Lê Quí Phượng, Nguyễn Huy Nam Nghiên cứu xây dựng phần mềm chế độ dinh dưỡng cho vận động viên Giáo trình Cơng nghệ đào tạo vận động viên trình độ cao, NXB Thể thao 2002 [20] Ðỗ Tất Lợi Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà Xuất Y học 2003 [21] Lê Ðức Trình Hormon nội tiết học Nhà xuất Y học 2003 [22] Nguyễn Thế Truyền, Nguyễn Kim Minh, Trần Quốc Tuấn Tiêu chuẩn đánh giá trình độ tập luyện tuyển chọn huấn luyện thể thao Nhà xuất Thể dục Thể thao 2003 [23] Lê Quí Phượng, Dương Nghiệp Chí, Nguyễn Huy Nam Nghiên cứu tác dụng Thuốc (Taxaton Saraton) nhằm tăng nhanh trình hồi phục cho vận động viên thể thao Báo cáo Hội nghị khoa học Thể thao Ðông Nam Á 10/2003 420-427 64 [24] Nguyễn Tài Lương, Nguyễn Thị Vĩnh, Ðồn Việt Bình, Nguyễn Huy Nam, Nguyễn Kim Dung, Tạ Thuý Lan, Nguyễn Thị Hiền, Hoàng Thị Ái Khuê Hiệu chế phẩm thức ăn chức (Funtional food) lên số tiêu sinh lý thần kinh học sinh vận động viên Báo cáo Hội nghị Công nghệ sinh học toàn Quốc Hà Nội 16-17/12/2003, tr 491-495 [25] Nguyễn Tài Lương, Ðỗ Văn Thu, Nguyễn Anh, Nguyễn Huy Nam, Nguyễn Thị Vĩnh, Ðồn Việt Bình,Nguyễn Kim Dung, Vũ Kim Cầu Chế phẩm tăng tinh trùng động vật Biostimul-TT 01 phục vụ tái sản xuất động vật cao sản Việt Nam Báo cáo Hội nghị Công nghệ sinh học toàn Quốc Hà Nội 1617/12/2003, tr 521-526 [26] Bộ Y tế Dược lâm sàng Nhà xuất Y học - 2006 [27] Nguyễn Huy Nam, Võ Thị Ninh CS Nghiên cứu hàm lượng hormon steroid nguyên tố vi lượng số loài cá biển Việt nam Tạp chí Y học T1/2005 [28] Nguyễn Huy Nam, Võ Thị Ninh CS Nghiên cứu thành phần sinh hoá hoạt chất sinh học số loài cá biển Việt Nam Hội thảo Quốc gia Sinh thái Tài nguyên sinh vật lần thứ Hà nội 17/05/2005 [29] Nguyễn Huy Nam, Võ Thị Ninh CS Nghiên cứu hoạt chất sinh dược số loài cá biển Việt nam Hội nghị khoa học sống Chương trình nghiên cứu Hà Nội 2005 [30] Nguyễn Huy Nam, Lê Quí Phượng, Võ Thị Ninh Nghiên cứu tác dụng viên tăng lực Phunamine trình hồi phục thể lực vận động viên điền kinh Tuyển tập nghiên cứu khoa học thể dục thể thao 2006, Tr.313-325 [31] Lê Quý Phượng, Nguyễn Huy Nam, Võ Thị Ninh Nghiên cứu tác dụng viên tăng lực Phunamine trình hồi phục thể lực vận động viên bóng bàn Tạp chí Khoa học No2/2007 Nhà xuất khoa học công nghệ [32] Thuốc Sức khoẻ Hội dược học Việt Nam No329 1.4.2007 Tiếng Anh [33] Raphael Ikan Natural products, Academic Press Lodon, New york and San Francisco, 1969 [34] Henry C Lukaski, Bonnita S.H, Sanđra K.G, William WB, 1992 Physical 65 training and copper, iron and zine status of swimmers J.Sport Med [35] Zubay G., Biochemistry, Coumbia University, 1993 third edition [36] Gurdeep.R.Chatwal, M.Sc.Ph.D.F.I.A.H.P.S Biochemistry Himalaya Publishing House 1998 [37] Higuchi R, Inagaki M, Tagawa K, Miyamoto T, Komori T Constituents of holothuroidae IV, Isol, and structure of three new cerebrosides, CE-2b Ce2d from the sea cucumber Cucumaria echinata/Liebigs Annalen der Chemie, Coden LACHDL, DEU ISSN 0170-2041,DA, 1998, N 1,79-81./ [38] Medical and Doping Control Sub – Committee 1999 Doping control standard operating produres, 19nd Sea Games, Brunei [39] Wang Zhi, Hennion B.,(2000), Solid phase microextraction coupled with high performance liquid chromatography for the analysis of pesticides residues in stwberres Food Additives and Contaminants [40] Jayle M.F et al Analyse des steroides hormonaux, 2001 32 [41] Gordon M Wardlaw Selected Material from Contemporary Nutrition Issues and Insights, 2003 [42] Donald Voet, Judth G Voet Biochemistry Publishing House Wiley 2004 [43] Medical and Doping Control Sub – Committee 2003 Doping control standard operating produres, 22nd Sea Games, Vietnam [44] Medical and Doping Control Sub – Committee 2005 Doping control standard operating produres, 23nd Sea Games, Philippin [45] Zinc Though rare, excessive zinc in the body can affect the adsorption of other Zinc is found mostly in meat products, such as meat, offal, seafood, eggs and milk .www.e-mart.com.sg/_home/zinc.html - 1k - Cached - More pages from this site [46] Allen G.R., Steene R., 1994 Indo – Pacific Coral Reef Field Guide Tropical Reef Research Blk 5055 Ang Mo Kio Industrial Park 2#01-1155 Singapore 2056, 376pp [47] Colin P.L., Ameson C., 1995 Tropical Pacific Invertebrates Coral Reef Press, USA, 290pp 66