Xác định thành phần hóa học và thử nghiệm một số hoạt chất sinh học có khả năng ức chế tế bào ung thư và ức chế a glucosidase của cây dương đầu, olax imbricata roxb, olacaceae

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP BỘ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ HOẠT CHẤT SINH HỌC CÓ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ VÀ ỨC CHẾ α-GLUCOSIDASE CỦA CÂY DƯƠNG ĐẦU, OLAX IMBRICATA ROXB, OLACACEAE MÃ SỐ: B2017.SPK.04 SKC 0 Tp Hồ Chí Minh, tháng 10/2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP BỘ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ HOẠT CHẤT SINH HỌC CÓ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ VÀ ỨC CHẾ α-GLUCOSIDASE CỦA CÂY DƯƠNG ĐẦU, OLAX IMBRICATA ROXB, OLACACEAE Mã số: B2017.SPK.04 Chủ nhiệm đề tài: TS VÕ THỊ NGÀ Tp Hồ Chí Minh, Tháng 10 năm 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP BỘ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ THỬ NGHIỆM MỘT SỐ HOẠT CHẤT SINH HỌC CÓ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ VÀ ỨC CHẾ α-GLUCOSIDASE CỦA CÂY DƯƠNG ĐẦU, OLAX IMBRICATA ROXB, OLACACEAE Mã số: B2017.SPK.04 Xác nhận tổ chức chủ trì Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên, đóng dấu) (ký, họ tên) Tp Hồ Chí Minh, Tháng 10 năm 2019 Danh sách thành viên tham gia nghiên cứu đề tài: TS Võ Thị Ngà Đơn vị công tác lĩnh vực chuyên môn Trường ĐH Sư phạm Kỹ thuật TPHCM GS TS Nguyễn Kim Phi Phụng Trường ĐH Khoa học Tự nhiên TPHCM Nguyễn Thị Mỹ Hương Trường ĐH Khoa học Tự nhiên TPHCM Huỳnh Thị Minh Sương Trường ĐH Tài nguyên Môi trường Nguyễn Thị Ngọc Hiếu Đại học Sài Gòn Phạm Thi Nhân Đại học Sài Gòn TT Họ tên Đơn vị phối hợp chính: Tên đơn vị nước Trung tâm nghiên cứu sản xuất dược liệu miền Trung (KCN Hịa hiệp Nam, huyện Đơng Hịa, Phú Yên) Nội dung phối hợp nghiên cứu Họ tên người đại diện đơn vị Trung tâm cung cấp nguồn ngun liệu cho Ơng Hồng Xn nhóm nghiên cứu Lâm Nếu nghiên cứu thành công, Trung tâm tiếp nhận kết nghiên cứu đưa vào triển khai ứng dụng MỤC LỤC Trang Mục lục Danh mục bảng biểu Danh mục hình ảnh Danh mục chữ viết tắt MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Mô tả thực vật 1.2 Những nghiên cứu dược học 1.3 Những nghiên cứu hoá học CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 2.1 Trích ly lập hợp chất 10 10 2.1.1 Hố chất thiết bị 10 2.1.2 Nguyên liệu 11 2.1.3 Điều chế loại cao 11 2.1.4 Cô lập hợp chất hữu 12 2.1.5 Thuỷ giải phần đường số hợp chất 15 2.2 Thử nghiệm hoạt tính sinh học 16 2.1.1 Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 16 2.1.2 Hoạt tính gây độc tế bào 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 Biện luận cấu trúc hóa học 19 3.1.1 Hợp chất OI16 19 3.1.2 Hợp chất OI18 21 3.1.3 Hợp chất OI2 25 3.1.4 Hợp chất OI5 27 3.1.5 Hợp chất OI3 28 3.1.6 Hợp chất OI15 31 3.1.7 Hợp chất OI7 32 3.1.8 Hợp chất MH1 35 3.1.9 Hợp chất OI1 41 3.1.10 Hợp chất MH7 43 3.1.11 Hợp chất MH8 44 3.1.12 Hợp chất MH13 46 3.1.13 Hợp chất MH2 48 3.1.14 Hợp chất OLAX5 50 3.1.15 Hợp chất OLAX4 51 3.1.16 Hợp chất OLAX2 54 3.2 Kết thử nghiệm hoạt tính sinh học 60 3.2.1 Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 61 3.2.2 Hoạt tính gây độc tế bào 65 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 PHỤ LỤC DANH MỤC HÌNH ẢNH Trang Hình 1.1: Hình ảnh dương đầu, Olax imbricata Hình 1.2: Hình ảnh phận dương đầu, Olax imbricata Hình 1.3: Cấu trúc hố học hợp chất lập từ chi Olax Hình 3.1: Một số tương quan COSY, HMBC, NOESY OI16 20 Hình 3.2: Cấu trúc phần OI16 21 Hình 3.3: Một số tương quan COSY, HMBC, NOESY OI18 23 Hình 3.4: Cấu trúc phần OI18 24 Hình 3.5: Một số tương quan HMBC OI2 OI5 25 Hình 3.6: Cấu trúc hố học số tương quan HMBC OI3 29 Hình 3.7: Cấu trúc hoá học số tương quan HMBC OI15 32 Hình 3.8: Cấu trúc hố học số tương quan COSY, HMBC, NOESY OI7 Hình 3.9: Cấu trúc hoá học MH1 (1), OI1 (2), MH7 (3), MH8 (4) 35 37 Hình 3.10: Một số tương quan COSY, HMBC, NOESY MH1 (1), OI1 (2), MH7 (3), MH8 (4) 38 Hình 3.11: Biểu đồ ORTEP MH1 38 Hình 3.12: Phổ ECD MH1, OI1, MH7, MH8 39 Hình 3.13: Phổ CD tính tốn MH7 MH8 theo tính tốn lý thuyết phần mềm Gaussian09 39 Hình 3.14: Cấu trúc hố học số tương quan HMBC MH13 48 Hình 3.15: Cấu trúc hố học MH2 49 Hình 3.16: Một số tương quan HMBC OLAX5 51 Hình 3.17: Một số tương quan HMBC OLAX4 52 Hình 3.18: Một số tương quan HMBC OLAX2 54 Hình 3.19: Cấu trúc hố học hợp chất polyacetylenic có nguồn gốc từ tảo biển, Callyspongia truncate 63 DANH MỤC SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 2.1: Quy trình điều chế loại cao chiết từ dương đầu, Olax imbricata 13 Sơ đồ 2.2: Quy trình lập hợp chất tinh khiết từ cao ethyl acetate 14 Sơ đồ 2.3: Quy trình cô lập hợp chất tinh khiết từ cao methanol 15 DANH MỤC BẢNG BIỂU Trang Bảng 3.1: Dữ liệu phổ NMR OI16 OI8 24 Bảng 3.2: Dữ liệu phổ NMR OI2 OI5 26 Bảng 3.3: Dữ liệu phổ 13C-NMR phần aglycone OI15, OI3 OI7 29 Bảng 3.4: Dữ liệu phổ NMR phần đường OI15, OI3 OI7 30 Bảng 3.5: Dữ liệu phổ 1H-NMR MH1, OI1, MH7, MH8 40 Bảng 3.6: Dữ liệu phổ 13C-NMR MH1, OI1, MH7, MH8 41 Bảng 3.7: Dữ liệu phổ NMR MH13 47 Bảng 3.8: Dữ liệu phổ NMR MH2 49 Bảng 3.9: Dữ liệu phổ NMR OLAX5 51 Bảng 3.10: Dữ liệu phổ NMR OLAX4 53 Bảng 3.11: Dữ liệu phổ NMR OLAX2 55 Bảng 3.12: Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase cao chiết 61 Bảng 3.13: Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase hợp chất tinh khiết Bảng 3.14: Kết thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào cao chiết 62 65 Bảng 3.15: Kết thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào hợp chất tinh khiết 66 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT APCI-MS Atmospheric Pressure Chemical Ionization Mass Spectroscopy br broad, rộng COSY COrrelation SpectroscopY CTPT Công Thức Phân Tử d doublet, mũi đôi DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO DiMethyl SulfOxid ECD Electromagnetic Circular Dichroism EtOAc Ethyl acetate FBS Fetal Bovine Serum GC-MS Gas Chromatography–Mass Spectrometry HepG2 Hepatocellular carcinoma – ung thư gan HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HRESIMS High Resolution ElectroSpray Ionization Mass Spectroscopy HSQC Heteronuclear Singlet Quantum Correlation HPLC High-Performance Liquid Chromatography IC50 Half Maximal Inhibitory Concentration J Hằng số ghép cặp KCN Khu Công Nghiệp LU Human Lung carcinoma – ung thư phổi m multiplet, mũi đa M Khối lượng phân tử MCF7 Human breast carcinoma – ung thư vú MeOH Methanol NCI National Cancer Institute NMR Nuclear Magnetic Resonance NOESY Nuclear Overhauser Enhancement SpectroscopY OD Optical Density ORTEP Oak Ridge Thermal-Ellipsoid Plot Program s singlet, mũi đơn SKC Sắc Ký Cột Phụ lục 14c: Phổ 13C-NMR OLAX5 Phụ lục 14d: Phổ HSQC OLAX5 Phụ lục 14e: Phổ HMBC OLAX Phụ lục 15a: Phổ APCI-MS OLAX4 Phụ lục 15b: Phổ 1H-NMR OLAX4 Phụ lục 15c: Phổ 13C-NMR OLAX4 Phụ lục 15d: Phổ HSQC OLAX4 Phụ lục 15e: Phổ HMBC OLAX4 Phụ lục 16a: Phổ APCI-MS OLAX2 Phụ lục 16b: Phổ 1H-NMR OLAX2 Phụ lục 16c: Phổ 13C-NMR OLAX2 Phụ lục 16d: Phổ HSQC OLAX2 Phụ lục 16e: Phổ HMBC OLAX2 )NG NGI{E VIET NAM VIEN HOA HQC ffi PHoNG HoA srNH ulvc DUNG Tel:1+S4) 04.37914586 Phdng601.NhdA18 18Hodngeu6c vieL cAuGi6y,Hd Nqi KET QUA THUHOAT TINHDQC TE BAO Nguoi grii m6u:vo Thi Ngd- Eai hgcK! Thuptno crri Minh SOm6u:09 m6u Ngdygui miu: 6/5/20t8 STT Gi6 tri ICso(pglml) mAl I en mau MCFT HepG2 Lu I MHI 4r05 8,50 1,99 MH7 >256 >256 >256 MHI3 >256 >256 >256 MH14 >256 >256 >256 OLAXz >256 125,92 136,0 OLAX5 >256 124,4 l3g,l7 OLAXI >256 236,77 >256 or2 256 l57,lg 162,66 or3 >64 64r0 36,69 Ellipticine ViQnH6a hgc x6c nhfln Bd Nguy6n Thi rhuHeh Pff.Hfnp#$UftHSUD 0,22 0,40 0,35 NSdy 05 thdng ndm 20IB Ph6 trucrngphdng Ngudi tri k6t qu6 Nguy6n Thi Thu Hd LC Thi Tir Anh KT TR[-ldr{q PH0NG QLTH Jnc prtoNc Neuy6i Thi Lan Anh 'Eu9p71rf pl Eu4ugqdqclr EugrronEuggE 002 ?W eut,lzuegqcc4rrlup 1eoqquiB rgx @qdEuonq4 96 elp ugrl ugFIcnqt conp aseprsocnlE-n t dgqd Euonq6 € VSn - )iIJOIg gqd Euenb,(gtu :iq tgTgJ '(uurEr5'S-gg-LgoN fqretulql SVJ) ep1xoglns '(euErg 'L-7,0-001oN '(uurErg'0-gz-LgrEoN SVJ) loueqdoruN-t SVf,) eprsou€rfdocnlE '(eruErg'L-ZV-I006 oN -C-?r-1,(ueqdorllN-d - 7l ut0zue :lgqc €gH SVJ) eseprsocnlE t :iq lglqt 'lgqr ugg 'z 'oseprsocnlE - n ou,(zue enc 9P tuoq l{ug ugrld gp enb 'e; qqs loueqdortlN-d ulgUdugs Suonl qug ugqd 'Eu4 ugqdnes 14qd0E ruglp Ieql q ruu OIt Eugscgng ru1Eu4 ugrlddoq ugr{€{rcnqr dgu 9CI (8upnnpru) louar;da:uN-d+ *sss{"}f$-ff-?} {'EEEFiEffii5r *prsGsfils-il-n lfiuaqdo-4lN-d '3uennptu gc 'eseprsocnp- n eur,(zue loueqdorlr5i-dpl tugqdugsEugqdtpF 9p enb enc Sugp cgtel{u eplsou€r,(docnlE-C-n-lfueqdorllN-d tgqc oc tgc ugqd 8u4 ugr{dugrt enq 4rll dgqdBBrII ug.(n8g 'I :ngur14E{p851 BI0T,lSl9 'qulw ngur60 :ngurgs Ir{3 gH }gnq}6) cotlpG - pENiqr pn :ngrur4ErqnEp flSYOISOJNTO-I}IAtrAZt\IfgHJ JO HNII rvOH$Hr Yno rgx yur ngrHd IgN PH - fgtO.VJ - lgt1 c9n0 Eupo11 8I - 8IV pr{N-I09 E.rQ.ta :tel 989V\6LE'tZog+) 3NOO CNo HNrS YgH sNQHd JOH VOH , NIIIA IAIVNJgIA gIICN CNOJ vA COHVOrDr IAIY'INvr{ NAIA / IXVTO 997,< !\" uo 992< t rJr EIO 9L'IE osoqJecv s't8l *\_ - - "_ f fnr 'Fr/8d 9gT,uoq gqu gp Eugu e fpu w.(zue gqc c4 qull teoq uf5{ QWSuetp1pl uQcngtu cgJ ' PrTErlg'117, PI osJIirl gl? Ig^ qqq 8unr1c4ur e e$prsocnlE-n ut,lzuegqc c4 rTullleorl uOFI?rD VIHhI ngur rgJ ' ptprl g;VE pn pryEr1 V9'67,'1wprlSI'E RIRI].onlugl osCIir19f pn querues€plsocnlE-n ut,lzue9I{c c4 tlu}1leoq ufF{ gtl} EIOp^ SXVTO 'ZXy'IO ngrrrcg) - :r?xuvq^l SXVTO ?9'62 1' ,k ftu7nd) osJIlrt glc ngur ugJ nglqc ruuql lgr{J IHhI 997,< l,HI^tr 997,< L TIHI^I 9SZ< 'IHI^tr 9'LIZ ZXV]O sI'€ IIS (ruFrl) osJI irl glc ngtu ugl I v C Z I IIS esuplsocnl8-rc urr{zuegrlc 14 rlup ltoq +rll gnb l9X V 'onrncelqeJurgurupUdEupgqull conp 'eseprsocnlE-naut,lzue enc SugPleoq %09 gqc c4 ql{t lgqc gp Eugue1(uorlerluocuoc,i.rotlqFlurIerurx€rrr JI€q)osJI %00t " nvru)y- (rus3u4qc f*u sutqclVo)y rVn)y] : (olohrlc c4 gCI [(+ur -n ean0zuo :c4tll EugcEuqgquip cgx conp +ql ngtu e+c es€prsocnlE gqc c4 Erryugq) '(V) ulu ut ugrl quip cex conp 017 6ugscgnq Ig^ )EIOIS Eu4 ugtld eqrcnqt dgu gcl 'toJzuN tri ool EupqEuep conp su4 uggd 'lqrqd0E nes 'J olE gp lglrlu o n conp urfryEu IqI 'Eu4 u?qd rufp Eugg,(uql conp +ql ngur 'wg Eu4qc I9p ngur p 'n6u g'7 eptsouer,{docnp-q-n '+q1ngur 'ltu/n g'g asuprsocnlS SZ 1,(ueqdo4r.u-dV1 tri OI -n Id SZ' g'g Hd Wur 00I reJJnqeleqdsoq4 td Ol :urgEoeq Eu4 ugqd ugqd qupql cgJ ;* ure{} }grlcruRI Eunpns conp osoqrecv'Eupo1eqd 9t It oeql cglDtgp Sugucgcp^ lutprl gSZpl Eu4 ugqdEuorl 8u4c Ignc 9p Euguugp Euprt g^ lgc cgnu p^ yo00l OShIC EupqEupoleqd conp qr{l nghtr Khe ndngric chiSenrymeo- glucosidasecria m6u thri dugc x5c dinh bdng c6ng thr?c: - A1-i.,,r,.iy1 DQric cn} y"1- [A1a6i / Alaoichrmg) x 100% chimg) ICso(half maximal inhibitory concentration)ld n6ng d0 ch6t thri ric ch€ 50% ho4t dQng criaenzymea-glucosidase,dugc tinh bing phanm6m Tablecurve K6t qui thfr ho4t tfnh ftc ch6 enzymecr- glucosidase o/" irc ch6 t4i cdc ndng tlQ (pglml) Gi6 tri ICso 0.25 0.062s 0.0156 (pglml) mAi STT I en mau 256 64 l6 I I Cao n-hexan 93 9l 90 78 75 Cao EtOAc 58 56 43 30 26 4l.84tl14 Cao MeOH 42 28 l8 t4 1l >256 67 57 48 0.02+0,001 151,0+ 2,5 ChAttham kh6o Acarbose Tiri tiQutham khio Kim Y M., WangM H., RheeH I (2004),"A novel a-glucosidase inhibitorfrom pine bark", Carbohydr Res.,339, 7151 17 Li T., Zhang X D., Song Y W., Liu J W (2005), "A Microplate-BasedScreening Method for cr-Glucosidase Inhibitors",Nat Prod Res.Dev.,10, 1128-1134 Haimin Chen,Xiaojun Yan, Wei Lin, Li Zheng,Weiwei Zharrg(200q, "A New Method for Screeninga-GlucosidaseInhibitors and Application to Marine Microorganisms", PharmaceuticalBiologt, 42 (6), 41642I HakamatoW, Kurihara M, Okuda H, Nishio T, Oku T (2009), "Design and screening strategiesfor alpha-glucosidase inhibitors basedon enzymologicalinformation", Curr Top.Med.Chem.,9(1), 3-12 Hd N|i, ngdy ViQnH6a hgc x6c nh?n bd Nguy6n Thi Thu He H Ph6 trucmgphdng HSUD thdng 03 ndm 2019 Ngudi tr6 k6t qui TL.vlfi-Nrntidxc ffi'{fiqPHOI'fG QLTII {/u*, :/ r{l Nguy6nThi Thu Hd l\ H0A t-tCI V' o s'E Neuy6i fhi Lan Anh vIEJ HANrAu KHoA Hec va cONGNGHpvrcT NAM vrEN HOA HQC PHONG HOA SINH U}'.TCDUNG Tel: 1+S4)024.37914586 Phong601.NhdA18 l8 HodngQu6cViet, CAuGi6y,Ha Ngi KET QUA THUHOAT TINHDQC TE BAO Ngudi gui m6u:VO Thi Ngd,TP HCM Ngdygui mdu:312019 lT \ ? i SOluqngm6u:03 m6u Gi6 tri IC56tr0n cfc ddngtii biro STT TGnmfiu HepG2 Lu MCFT I Cao n-hexan 67,94+2,05 54,69+2,4665,49+1,95 Cao EtOAc 79,12+3,02 57,09t2,67 88,04*3,02 a Cao MeOH J Ellipticine Vi0n H6a hoc x6c nh4n bdJrlguy6nThi > 129 89.44+1.1889,42+I,97 0,35+0,0I 0,40+0,02 0.47+0.02 rhuHdlarnoVn$orr$Wdn$nsuD PHONGQLTH KT TR,I"IdNG PHOrnd#uc FHdNC Ngdy 28 thdng ndm 2019 Ph6 trucrngphong HSUD Nguoi tri k6t qui M Nguy6nThi Thu Hd gutye"Thi Lan Anh W /- I Nguy6nThanhTrd ... Thông tin chung: - Tên đề tài: Xác định thành phần h? ?a học thử nghiệm số hoạt chất sinh học có khả ức chế tế bào ung thư ức chế α -glucosidase dương đầu, Olax imbricata Roxb, Olacaceae - Mã số: B2017.SPK.04... acetate 430 g cao methanol 3.4 Bộ phổ cấu trúc 15-20 chất 3.5 Báo cáo kết thử nghiệm hoạt chất sinh học ức chế ? ?glucosidase ức chế tế bào ung thư dương đầu, Olax imbricata Roxb, họ Olacaceae 15-20... hố học Những nghiên cứu h? ?a học chi Olax quan tâm số loài Olax andronensis, Olax glabriflora, Olax puttacorum, Olax phyllanthi Olax mannii Hiện ch? ?a có tài liệu nghiên cứu loài Olax imbricata