Nghiên cứu xây dựng quy trình lên men thu nattokinase tái tổ hợp trong bacillus subtilis và ứng dụng sản xuất thực phẩm chức năng hỗ trợ ngăn ngừa sự hình thành huyết khối

ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP.HCM TRUNG TÂM KHOA HỌC CƠNG NGHỆ DƯỢC SÀI GỊN CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH LÊN MEN THU NATTOKINASE TÁI TỔ HỢP TRONG BACILLUS SUBTILIS VÀ ỨNG DỤNG SẢN XUẤT THỰC PHẨM CHỨC NĂNG HỖ TRỢ NGĂN NGỪA SỰ HÌNH THÀNH HUYẾT KHỐI Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Khoa học Cơng nghệ Dược Sài Gòn Chủ nhiệm nhiệm vụ: PGS.TS Trần Cát Đơng Thành phố Hồ Chí Minh - 2018 ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CÔNG NGHỆ DƯỢC SÀI GỊN TRUNG TÂM KHOA HỌC CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH LÊN MEN THU NATTOKINASE TÁI TỔ HỢP TRONG BACILLUS SUBTILIS VÀ ỨNG DỤNG SẢN XUẤT THỰC PHẨM CHỨC NĂNG HỖ TRỢ NGĂN NGỪA SỰ HÌNH THÀNH HUYẾT KHỐI (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 18/12/2018) Chủ nhiệm nhiệm vụ Trần Cát Đơng Cơ quan chủ trì nhiệm vụ TÓMG NGHIÊN CỨU TRUNG TÂM KHOA HỌC CỘNG HỒ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM CƠNG NGHỆ DƯỢC SÀI GÒN Độc lập - Tự - Hạnh phúc HCM, ngày 02 tháng 11 năm 2018 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Nghiên cứu xây dựng quy trình lên men thu nattokinase tái tổ hợp Bacillus subtilis ứng dụng sản xuất thực phẩm chức hỗ trợ ngăn ngừa hình thành huyết khối Thuộc: Chương trình/lĩnh vực (tên chương trình/lĩnh vực): Công nghệ Dược phẩm Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Trần Cát Đông Ngày, tháng, năm sinh: 21/10/1972 Nam/ Nữ: Nam Học hàm, học vị: PGS.TS Chức danh khoa học: PGS Chức vụ: Giám đốc TT KHCN Dược Sài Gòn Điện thoại: Tổ chức 08 38295641 Fax: 028 3822 5435 Mobile: 0907011100 E-mail: trancatdong@ump.edu.vn Tên tổ chức công tác: Trung tâm khoa học Cộng nghệ Dược Sài Gịn Địa tổ chức: 41 Đinh Tiên Hồng, Quận 1, TP.HCM Địa nhà riêng: 6/10A Hồ Xuân Hương, P.14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm khoa học Cộng nghệ Dược Sài Gòn Điện thoại: 08 38295641 ; Fax: 3822 5435 Địa chỉ: 41 Đinh Tiên Hoàng, Quận 1, TP.HCM Họ tên thủ trưởng tổ chức: PGS.TS Trần Cát Đông Số tài khoản: 3713.0.3017044.00000 Kho bạc: Nhà nước Q1, Tp.HCM Tên quan chủ quản đề tài: Sở Khoa học Công nghệ TP.HCM II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng 09/2016 đến tháng 09/2018 - Thực tế thực hiện: từ tháng 09/2016 đến tháng 12/2018 - Được gia hạn (nếu có): + Lần từ tháng 09/2018 đến tháng 01/2019 Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 950 tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 950 tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: tr.đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Theo kế hoạch Số TT Thực tế đạt Ghi Thời gian Kinh phí Thời gian Kinh phí (Số đề nghị (Tháng, năm) (Tr.đ) (Tháng, năm) (Tr.đ) toán) 09/2016 475 10/2017 475 09/2017 380 10/2018 380 c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng Theo kế hoạch Tổng NSKH Thực tế đạt 406,74 406,74 Nguồn khác Tổng NSKH 406,74 406,74 Nguồn khác 420,71 420,71 420,71 420,71 0 0 0 0 0 0 122,55 950 122,55 950 122,55 950 122,55 950 Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: Số Số, thời gian ban TT hành văn Tên văn Ghi Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức Tên tổ chức đăng ký theo tham gia Thuyết minh thực Công ty GONSA Công ty GONSA Nội dung tham gia chủ yếu Tham gia bào chế viên nang nattokinase Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* Viên nang nattokinase - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, khơng q 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân Tên cá nhân đăng ký theo tham gia Thuyết minh thực PGS.TS Trần Cát Đông PGS.TS Trần Cát Đông TS Đinh Minh Hiệp TS Đinh Minh Hiệp TS Lê Thị Thúy Ái TS Lê Thị Thúy Ái Nội dung tham gia Quản lý chung; Xây dựng tiêu chuẩn nguyên liệu viên nang; Viết báo cáo Lựa chọn chất phụ gia, nghiên cứu điều kiện phối trộn ổn định enzym (lactose, avicel, manitol, sorbitol, …) Xác định điều kiện bảo quản chế phẩm enzym thích hợp (nhiệt độ, thời gian) Phát triển kết nghiên cứu Sản phẩm chủ yếu đạt Tiêu chuẩn nguyên liệu, viên nang, báo cáo nghiệm thu Phụ gia thích hợp cho việc bảo quản, điều kiện bảo quản thích hợp Chủng biểu enzym Ghi chú* ThS Trần Quốc Tuấn Đinh Thị Lan Anh TS Vũ Thanh Thảo KS Nguyễn Thị Linh Giang ThS Nguyễn Minh Thái ThS Trần Quốc Tuấn chủng biểu nattokinase mạnh điều kiện lên men; Xác định lại điều kiện nuôi cấy quy mơ lớn 10lít 50lít; Nghiên cứu điều kiện tinh thu nhận enzym Nghiên cứu điều kiện thu tủa/cô đặc enzym ngoại bào từ dịch lên men điều kiện tinh enzym Nghiên cứu điều kiện lên men điều kiện tinh enzym nattokinse điều kiện nuôi cấy quy mô 10 l, 50 l, quy trình tinh chế enzym Điều kiện lên men fedbacth, điều kiện tinh enzym Đinh Thị Lan Điều kiện lên Anh men fedbacth, điều kiện tinh enzym TS Vũ Đánh giá tính an tồn Tính an tồn Thanh Thảo viên nang, mơ enzym hình huyết khối nattokinse, Xây dựng quy trình mơ hình gây bào chế, kiểm huyết khối nghiệm viên nang quy trình bào chế kiểm nghiệm viên nang KS Nguyễn Đánh giá tính an Tính an tồn Thị Linh tồn, sinh khả dụng enzym Giang viên nang nattokinse, Xây dựng mơ hình mơ hình gây huyết khối huyết khối chuột ThS Lê Tuấn Xác định tuổi thọ Tuổi thọ củ Anh nguyên liệu pellet; nguyên liệu, Xây dựng tiêu chuẩn viên nang và quy trình bào chế, pellet; quy kiểm nghiệm viên trình bào chế nang kiểm nghiệm viên Thay đổi thành viên DS Lê Kim Ngân ThS Hồ Lê Trúc Linh Xây dựng quy trình bào chế viên nang nang Quy trình bào chế viên nang Thay đổi thành viên - Lý thay đổi ( có): Thay đổi thành viên ThS Nguyễn Minh Thái học nước DS Lê Kim Ngân nghỉ việc, có đơn xin thay đổi thành viên gửi cho Sở KHCN TP.HCM Tình hình hợp tác quốc tế: Theo kế hoạch Thực tế đạt Số (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa TT điểm, tên tổ chức hợp tác, số điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) đoàn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Số TT Theo kế hoạch Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa (Nội dung, thời gian, kinh điểm ) Ghi chú* phí, địa điểm ) - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Số TT 1.a Các nội dung, công việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Xây dựng quy trình công nghệ lên men mẻ bổ sung (fed-batch) quy mô 50 lít Xây dựng cơng thức mơi trường lên men Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) Theo Thực tế kế đạt hoạch 9/2016- 9/20166/2017 6/2017 9/20166/2017 9/20166/2017 Người, quan thực Trần Quốc Tuấn ĐH KHTN; Lê Thị Thúy Ái: Khu NNCNC, 1.b Xác định thơng số lên men thích hợp quy mơ 10 lít 9/20166/2017 9/20166/2017 1.c Xác định thơng số lên men thích hợp quy mơ 50 lít 9/20166/2017 12/20179/2018 Xây dựng quy trình thu nhận, tinh tạo nguyên liệu enzym nattokinase Xây dựng quy trình thu nhận tinh nattokinase từ dịch lên men Nghiên cứu lựa chọn phụ gia thích hợp điều kiện bảo quản ổn định hoạt tính enzym Đánh giá tuổi thọ nguyên liệu nattokinase Xây dựng tiêu chuẩn sở cho nguyên liệu nattokinase Xây dựng tiêu chuẩn 1/20177/2017 1/20179/2018 1/20177/2017 1/20174/2018 1/20177/2017 1/20174/2018 1/20177/2017 5/20179/2017 5/20179/2017 5/20179/2017 1/20179/2018 5/20179/2018 5/20175/2018 5/20175/2018 2.a 2.b 2.c 3.a 3.b Xây dựng phương pháp kiểm nghiệm 3.c Áp dụng tiêu chuẩn nguyên liệu thu Xây dựng quy trình bào chế viên nang thực phẩm chức chứa nattokinase Nghiên cứu lựa chọn tá dược bào chế 5/20179/2017 9/20172/2018 5/20179/2018 9/20172/2018 9/20172/2018 9/20172/2018 4.b Nghiên cứu tối ưu hóa công thức bào chế 9/20172/2018 9/20172/2018 4.c Xây dựng quy trình đóng nang 9/20172/2018 9/20173/2018 4.d Xác định tuổi thọ pellet Xây dựng tiêu chuẩn sở viên nang nattokinase Xây dựng tiêu chuẩn 9/20172/2018 1/20185/2018 1/20185/2018 2/20189/2018 1/20189/2018 1/20189/2018 4.a 5.a Đinh Thị Lan Anh: ĐH KHTN Trần Quốc Tuấn ĐH KHTN; Lê Thị Thúy Ái: Khu NNCNC, Đinh Thị Lan Anh: ĐH KHTN Trần Quốc Tuấn ĐH KHTN; Lê Thị Thúy Ái: Khu NNCNC Đinh Thị Lan Anh: ĐH KHTN Trần Quốc Tuấn ĐH KHTN; Lê Thị Thúy Ái: Khu NNCNC, Đinh Thị Lan Anh: ĐH KHTN Đinh Minh Hiệp: Khu NNCNC Đinh Thị Lan Anh: ĐH KHTN Đinh Minh Hiệp: Khu NNCNC Đinh Thị Lan Anh: ĐH KHTN Trần Quốc Tuấn ĐH KHTN; Lê Thị Thúy Ái: Khu NNCNC Trần Quốc Tuấn ĐH KHTN; Lê Thị Thúy Ái: Khu NNCNC Trần Cát Đông: Sapharcen Trần Quốc Tuấn ĐH KHTN; Lê Thị Thúy Ái: Khu NNCNC ThS.Lê Tuấn Anh: Sapharcen ThS.Hồ Lê Trúc Linh: Sapharcen, Gonsa Lê Tuấn Anh: Sapharcen Hồ Lê Trúc Linh: Sapharcen, Gonsa Hồ Lê Trúc Linh: Sapharcen, Gonsa Lê Tuấn Anh: Sapharcen Vũ Thanh Thảo: Sapharcen Lê Tuấn Anh: Sapharcen Trần Cát Đông: Sapharcen Lê Tuấn Anh: Sapharcen 5.b 5.c 6.a 6.b 6.c Xây dựng phương pháp kiểm nghiệm Áp dụng tiêu chuẩn viên nang nattokinase Đánh giá sinh khả dụng tác động dược lý sản phẩm Đánh giá tính an tồn viên nang mơ hình chuột Xây dựng mơ hình huyết khối cảm ứng carrageenan chuột Đánh giá tác động viên nang nattokinase huyết khối mơ hình chuột Viết báo cáo 1/20185/2018 1/20185/2018 1/20189/2018 1/20189/2018 Trần Cát Đông: Sapharcen Vũ Thanh Thảo: Sapharcen Trần Cát Đông: Sapharcen Lê Tuấn Anh: Sapharcen 1/20186/2018 1/20186/2018 1/20186/2018 1/20186/2018 1/20186/2018 1/20186/2018 7/2018 10/2018 Vũ Thanh Thảo: Sapharcen Nguyễn T Linh Giang: Sapharcen Vũ Thanh Thảo: Sapharcen Nguyễn T Linh Giang: Sapharcen Vũ Thanh Thảo: Sapharcen Nguyễn T Linh Giang: Sapharcen Trần Cát Đơng: Sapharcen - Lý thay đổi (nếu có): III SẢN PHẨM KH&CN CỦA NHIỆM VỤ Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Quy trình cơng nghệ lên men thu nhận nattokinase tái tổ hợp quy mơ 50 lít/mẻ, Chỉ tiêu: Chứa nattokinase với hàm lượng ≥ 500 FU/ml Quy trình thu nhận, tinh bảo quản nattokinase phối trộn tạo nguyên liệu enzym Chỉ tiêu: Hoạt tính 20.000FU/g; Quy trình đạt hiệu suất khả thu hồi  75% hoạt tính Nguyên liệu  12 tháng Đơn vị đo Quy trình Quy trình Quy trình bào chế viên nang thực phẩm chức năng, Quy trình Số lượng Theo kế hoạch Quy trình lên men nattokinase với hàm lượng ≥ 500 FU/ml Thực tế đạt Có quy trình cơng nghệ lên men sản xuất nattokinase tái tổ hợp quy mơ 50 lít/mẻ với hoạt tính 545 FU/ml Hoạt tính 20.000FU/g; Quy trình đạt hiệu suất khả thu hồi  75% hoạt tính Nguyên liệu  12 tháng Đạt tiêu chuẩn Dược Điển Việt Quy trình đạt hiệu suất 77% hoạt tính Nguyên liệu bảo quản 15 tháng Đã xây dựng quy trình bào chế viên nang nattokinase đạt tiêu Chỉ tiêu: Đạt tiêu chuẩn Dược Điển Việt Nam IV Nguyên liệu nattokinase, Chỉ tiêu: Đạt TCCS Nam IV g Sản phẩm viên nang với viên đặc tính chất lượng cụ thể Chỉ tiêu: Đạt TCCS Tiêu chuẩn sở nguyên Tiêu liệu nattokinase, chuẩn Chỉ tiêu: Bộ tiêu chí phương pháp kiểm nghiệm Tiêu chuẩn sở viên nang nattokinase Chỉ tiêu: Bộ tiêu chí phương pháp kiểm nghiệm Tiêu chuẩn 1000 Nguyên liệu đạt tiêu chuẩn sở 10000 Viên nang đạt tiêu chuẩn sở Bộ tiêu chí phương pháp kiểm nghiệm Bộ tiêu chí phương pháp kiểm nghiệm chuẩn sở theo DĐVN IV Nguyên liệu nattokinse hoạt tính 20.000 FU/g, lượng 1000 g, đạt tiêu chuẩn sở Viên nang nattokinse đạt tiêu chuẩn sở Đã xây dựng tiêu chí thẩm định phương pháp kiểm nghiệm cho nattokinse nguyên liệu Đã xây dựng tiêu chí thẩm định phương pháp kiểm nghiệm cho viên nang nattokinse b) Sản phẩm Dạng II: Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học cần đạt Theo Thực tế kế đạt hoạch 1 Hồ sơ độ an toàn sản phẩm viên nang Hồ sơ tuổi thọ nguyên liệu viên nang Hồ sơ tác động dược lý viên nang 1 Ghi Đã khảo sát độ an toàn nguyên liệu làm viên nang, lượng enzym cần thử nghiệm cao lượng enzym chứa viên nang Hồ sơ tuổi thọ nguyên liệu viên nang điều kiện dài hạn điều kiện già hóa Đã khảo sát tác động ngăn ngừa huyết khối nattokinase mơ hình chuột gây huyết khối cảm ứng với carragenan c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học cần đạt Theo Thực tế kế hoạch đạt Số lượng, nơi cơng bố (Tạp chí, nhà xuất bản) 30 31 32 33 34 35 36 37 Urano, T., Ihara, H., Umemura, K., et al (2001), The profibrinolytic enzyme subtilisin NAT purified from Bacillus subtilis Cleaves and inactivates plasminogen activator inhibitor type 1, J Biol Chem, 276(27), pp 24690-6 Weng, Y., Yao, J., Sparks, S., et al (2017), Nattokinase: An Oral Antithrombotic Agent for the Prevention of Cardiovascular Disease, Int J Mol Sci, 18(3) Wirth-Dzięciołowska, E., Karaszewska, J., Pysniak, K., et al (2008) Selected peripheral blood cell parameters in twelve inbred strains of laboratory mice Vol 27 Wu, S.-M., Zhong, C.F and Huan, L.-D (2011), Enhanced production of recombinant nattokinase in Bacillus subtilis by promoter optimization, World Journal of Microbiology and Biotechnology, 27(1), pp 99–106 Yabe, K and Agr., B.C (1977), National Federation of Cooperatives on Natto, Food Pionia, pp 1-367 Yan, F., Yan, J., Weiting, S., et al (2009) Thrombolytic effect of Subtilisin QK on carrageenan induced thrombosis model in mice Vol 28 444-8 Young Kim, J., Nae Gum, S., Paik, J., et al (2008) Effects of Nattokinase on Blood Pressure: A Randomized, Controlled Trial Vol 31 1583-8 Japan Nattokinase association http://j-nattokinase.org/jnka_nk_english.html [cited 2018 29/11] 107 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết trình lên men theo thời gian Bảng Hoạt tính nattokinase dịch lên men theo thời gian lên men theo mẻ môi trường khác Thời gian (giờ) 10 11 12 13 14 MT1 MT2 MT3 MT4 38,5 43,4 50,6 54,3 65,7 72,3 85,5 95,1 120,7 136,4 150,8 38,5 43,4 50,6 54,3 65,7 72,3 85,5 95,1 110,0 136,4 125,0 38,5 43,4 50,6 54,3 65,7 72,3 85,5 95,1 120,7 136,4 205,0 12,0 15,0 23,0 25,0 35,0 43,0 54,0 57,0 59,0 64,0 79,0 Thời gian (giờ) 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 MT1 MT2 MT3 MT4 163,1 173,7 167,6 160,0 148,8 125,4 94,5 81,0 66,1 36,4 145,0 163,0 172,0 150,0 140,0 110,0 113,0 92,0 91,0 62,0 198,0 202,0 192,0 182,0 172,0 167,0 123,0 123,0 110,0 87,0 87,0 87,0 96,0 95,0 73,0 77,0 65,0 36,0 37,0 38,0 Bảng Khả sinh trưởng Bacillus subtilis DB104 TTH hàm lượng đường khử dịch lên men lên men fed-batch Thời gian (giờ) 10 11 12 OD600nm 0,025 0,046 0,178 0,685 1,250 1,596 1,820 2,067 2,205 2,250 2,220 2,110 1,870 Lượng đường khử (g/L) 9,98 9,00 7,92 7,21 6,18 4,77 3,55 2,00 2,25 3,66 6,51 11,25 22,09 108 Hoạt tính nattokinase (FU/ml) 27,36 37,90 47,30 75,50 95,33 125,50 168,29 172,21 198,56 Bảng Giá trị mật độ quang hoạt tính nattokinase dịch lên men theo thời gian lên men theo mẻ lên men fed-batch Thời gian (h) OD600nm Hoạt tính (FU/ml) Lên men Lên men theo mẻ Fed-batch Lên men theo mẻ Lên men Fed-batch 0,019 0,02 - - 0,044 0,032 - - 0,185 0,178 - - 0,671 0,724 - - 1,294 1,19 38,514 40,362 1,605 1,567 43,415 47,899 1,815 1,834 50,620 55,784 1,895 2,047 54,339 84,070 1,916 2,191 65,739 110,464 1,918 2,306 72,276 134,725 10 1,928 2,363 85,493 168,294 11 1,906 2,458 95,074 186,211 12 1,906 2,531 120,737 224,361 13 1,915 2,545 136,361 249,393 14 1,912 2,537 150,755 293,808 15 1,920 2,558 163,133 354,561 16 1,905 2,514 173,714 377,342 17 1,903 2,553 167,617 436,079 18 1,918 2,559 160,024 473,856 19 1,933 2,546 148,821 522,824 20 1,892 2,527 125,446 575,969 21 1,840 2,522 94,498 567,621 22 1,813 2,536 81,028 569,138 23 1,752 2,504 66,074 552,415 24 1,637 2,518 36,397 523,526 109 Phụ lục Xử lý thống kê so sánh Anova độ tăng khối lượng thử nghiệm độc tính cấp (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 3.47100 3.42841 3.52000 3.42841 -.88900 3.42841 -1.45100 3.42841 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -2.84100 3.23911 -1.29700 3.23911 4.87900 3.23911 4.20000 3.23911 317 310 797 674 385 691 787 701 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -3.4342 10.3762 -3.3852 10.4252 -7.7942 6.0162 -8.3562 5.4542 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -9.3649 3.6829 -7.8209 5.2269 -5.6449 7.4029 -2.3239 10.7239 Phụ lục 3: Xử lý thống kê so sánh Anova thơng số sinh hóa thử nghiệm độc tính cấp Glucose (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 95% Confidence Interval Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound -91.50000 99.17134 392 -334.1635 151.1635 17.50000 99.17134 866 -225.1635 260.1635 -72.16667 99.17134 472 -78.7122 161.1735 -63.66667 88.70154 500 -280.7115 153.3782 Mean (J) group Difference (I-J) Std Error Sig M10 106.00000* 32.15371 M40 -98.33333* 29.35219 M60 -60.50000 32.15371 M100 -2.00000 32.15371 * The mean difference is significant at the 0.05 level (I) group MC 016 015 109 952 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 27.3227 184.6773 -170.1555 -26.5111 -139.1773 18.1773 -80.6773 76.6773 615 175 217 511 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -40.9022 63.5689 -19.4022 85.0689 -23.3177 -33.3876 60.0542 Cholesterol (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 11.33333 21.34754 32.83333 21.34754 15.83333 19.09382 13.33333 19.09382 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 95% Confidence Interval Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound 00000 17.10344 1.000 -41.8506 41.8506 -20.66667 15.61324 234 -58.8709 17.5375 -17.00000 17.10344 359 -58.8506 24.8506 -33.50000 17.10344 098 -75.3506 8.3506 (J) group Mean Difference (I-J) HDL (I) group Std Error 110 Sig 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound FC F10 F40 F60 F100 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 13.33333 19.83333 6.83333 8.33333 12.82991 12.82991 10.81225 11.47542 339 173 525 495 Mean Difference (I-J) Std Error Sig .00000 10.05540 1.000 -12.83333 9.17928 212 -12.00000 10.05540 278 -19.00000 10.05540 108 -18.0603 44.7270 -11.5603 51.2270 -20.1206 37.7211 -19.7460 36.4127 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -24.6047 24.6047 -35.2942 9.6276 -36.6047 12.6047 -43.6047 5.6047 LDL Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.60000 3.07299 15000 2.74857 66667 2.51882 1.66667 2.74857 Mean (I) group (J) group Difference (I-J) Std Error Sig MC M10 05000 1.63631 M40 -3.75000* 1.49374 M60 -3.45000 1.63631 M100 -4.55000* 1.63631 * The mean difference is significant at the 0.05 level (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 852 526 515 566 977 046 080 032 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -8.1193 6.9193 -3.3693 11.6693 -4.3024 8.2153 -5.0588 8.3922 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -3.9539 4.0539 -7.4050 -.0950 -7.4539 5539 -8.5539 -.5461 Triglycerid (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -25.66667 15.81724 1.33333 15.81724 -12.63333 12.8735 -14.33333 14.14737 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -10.50000 18.42176 -28.33333 16.81669 -18.50000 18.42176 -17.50000 18.42176 (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 7.83333 11.29364 8.83333 11.29364 -5.8333 9.1251 -7.33333 10.10134 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -13.50000 12.90349 -14.00000 11.77922 -19.00000 12.90349 -14.50000 12.90349 589 143 354 379 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -64.3701 13.0367 -17.3701 16.0367 -50.1207 22.1420 -48.9507 20.2840 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -55.5764 34.5764 -69.4823 12.8156 -63.5764 26.5764 -62.5764 27.5764 514 599 615 495 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -19.8012 35.4679 -19.8012 34.4679 -30.0104 18.3813 -32.0504 17.3838 336 280 191 304 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -45.0737 18.0737 -42.8227 14.8227 -50.5737 12.5737 -46.0737 17.0737 156 226 370 350 ALT AST 111 (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -38.16667 46.79100 -37.16667 46.79100 -40.83333 47.7052 -44.33333 41.85115 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -80.50000 63.03042 -74.00000 57.53863 -46.50000 63.03042 -26.00000 63.03042 446 468 422 330 249 246 489 694 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -36.3268 192.6601 -37.3268 171.6601 -35.3211 182.1661 -146.7394 58.0727 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -234.7299 73.7299 -214.7920 66.7920 -200.7299 107.7299 -180.2299 128.2299 Creatinin 894 060 089 176 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -.2985 2052 -.1585 3452 -.2016 1053 -.2619 1886 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -.1654 1854 -.3117 0084 -.3204 0304 -.2854 0654 967 964 937 950 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -2.8513 2.7513 -2.7513 2.8513 -2.5173 2.1423 -2.5722 2.4389 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.70000 1.34071 -2.50000 1.22389 -2.80000 1.34071 -2.05000 1.34071 620 087 082 177 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -3.9806 2.5806 -5.4948 4948 -6.0806 4806 -5.3306 1.2306 (J) group F10 F40 F100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig .01667 00998 02167 00998 00667 00892 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 146 -.0077 0411 073 -.0027 0461 483 -.0152 0285 (J) group M10 M40 M60 M100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.03500 04106 -.01167 03748 -.05500 04106 -.02500 04106 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -.1355 0655 -.1034 0801 -.1555 0455 -.1255 0755 (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.04667 10292 09333 10292 03117 09158 -.03667 09205 Mean Difference (I-J) Std Error Sig .01000 07167 -.15167 06542 -.14500 07167 -.11000 07167 (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.05000 1.14484 -.05010 1.14484 0510 1.2113 -.06667 1.02397 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 (I) group FC (I) group MC 666 399 754 704 Protein Bilirubin 112 427 766 229 565 Phụ lục 4: Xử lý thống kê so sánh Anova thông số huyết học thử nghiệm độc tính cấp WBC (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 1.58500 1.28900 1.28000 1.28900 2.07000 1.28900 -.66500 1.28900 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 3.08000 1.67859 3.00500 1.67859 2.02167 1.53234 2.62500 1.53234 (J) group F10 F40 F60 F100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig .55000 4.78372 1.05000 4.78372 8.65000 4.78372 -.55000 4.78372 274 366 169 628 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -1.7285 4.8985 -2.0335 4.5935 -1.2435 5.3835 -3.9785 2.6485 109 117 229 130 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -.8892 7.0492 -.9642 6.9742 -1.6017 5.6451 -.9984 6.2484 987 835 830 913 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -9.7469 14.8469 -11.2469 13.3469 -3.6469 20.9469 -12.8469 11.7469 L% (I) group FC Mean (J) group Difference (I-J) Std Error Sig M10 -20.20000 10.27176 M40 -29.95000* 10.27176 M60 -21.88333 9.37679 M100 -26.61667* 9.37679 * The mean difference is significant at the 0.05 level (I) group MC 090 022 052 025 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -44.4889 4.0889 -54.2389 -5.6611 -44.0559 2893 -48.7893 -4.4441 M% (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 2.55000 4.78372 1.05000 4.78372 8.65000 4.78372 -.55000 4.78372 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 2.20000 2.85397 78500 2.85397 1.70833 2.60531 21833 2.60531 (J) group Mean Difference (I-J) 617 835 130 913 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -9.7469 14.8469 -11.2469 13.3469 -3.6469 20.9469 -12.8469 11.7469 466 791 533 936 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -4.5486 8.9486 -5.9636 7.5336 -4.4522 7.8689 -5.9422 6.3789 RBC (I) group Std Error 113 Sig 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound FC F10 F40 F60 F100 2.55000 1.05000 8.65000 -.55000 4.78372 4.78372 4.78372 4.78372 617 835 130 913 -9.7469 -11.2469 -3.6469 -12.8469 14.8469 13.3469 20.9469 11.7469 HGB (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 1.00000 8.57904 9.00000 8.57904 7.00000 8.57904 5.00000 8.57904 912 342 452 585 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -21.0531 23.0531 -13.0531 31.0531 -15.0531 29.0531 -17.0531 27.0531 HCT Mean Difference (I-J) Std Error Sig -2.35000 7.08357 65000 7.08357 75000 7.08357 2.15000 7.08357 Mean (I) group (J) group Difference (I-J) Std Error Sig MC M10 4.80000* 1.71575 M40 10000 1.71575 M60 50000 1.56626 M100 1.56667 1.56626 * The mean difference is significant at the 0.05 level (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 027 955 759 350 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -11.8589 24.5589 -7.4589 28.9589 -17.4589 18.9589 -16.0589 20.3589 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 7429 8.8571 -3.9571 4.1571 -3.2036 4.2036 -2.1370 5.2703 525 044 194 757 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -5.9584 3.4584 -9.6084 -.1916 -7.4584 1.9584 -4.1084 5.3084 682 286 317 730 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -4.5273 6.5273 -8.2273 2.8273 -7.3457 2.7457 -4.2790 5.8123 411 990 920 774 MCV Mean (J) group Difference (I-J) Std Error Sig F10 -1.25000 1.83167 F40 -4.90000* 1.83167 F60 -2.75000 1.83167 F100 60000 1.83167 * The mean difference is significant at the 0.05 level (I) group FC (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 1.00000 2.33748 -2.70000 2.33748 -2.30000 2.13382 76667 2.13382 MCH (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 (I) group MC (J) group M10 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -3.20000 3.42272 -5.25000 3.42272 -.30000 3.42272 05000 3.42272 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.40000 47081 114 393 186 934 989 424 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -11.9984 5.5984 -14.0484 3.5484 -9.0984 8.4984 -8.7484 8.8484 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -1.5133 7133 M40 M60 M100 -.85000 -.76667 10000 47081 42979 42979 114 118 823 -1.9633 -1.7830 -.9163 2633 2496 1.1163 MCHC (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -56.50000 60.03166 -68.00000 60.03166 10.50000 60.03166 -3.00000 60.03166 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -16.00000 10.18870 -1.00000 10.18870 -2.00000 9.30096 -4.33333 9.30096 390 309 868 962 160 925 836 655 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -210.8163 97.8163 -222.3163 86.3163 -143.8163 164.8163 -157.3163 151.3163 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -40.0924 8.0924 -25.0924 23.0924 -23.9933 19.9933 -26.3266 17.6600 PLT (I) group FC (J) group F10 F40 F60 F100 (I) group MC (J) group M10 M40 M60 M100 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 161.00000 69.04853 113.50000 69.04853 -30.00000 69.04853 106.00000 69.04853 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -103.00000 119.35731 -49.50000 119.35731 -224.00000 108.95782 -137.66667 108.95782 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 067-16.4949 338.4949 161-63.9949 290.9949 682-207.4949 147.4949 185-71.4949 283.4949 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 417 -385.2352 179.2352 691 -331.7352 232.7352 079 -481.6443 33.6443 247 -395.3110 119.9776 Phụ lục Xử lý thống kê so sánh Anova độ tăng khối lượng thử nghiệm độc tính bán trường diễn Mean (J) group Difference (I-J) Std Error Sig F2000 16.94510* 6.89512 F4000 23.97215* 6.89512 F2000 FC -16.94510* 6.89512 F4000 7.02705 6.50078 F4000 FC -23.97215* 6.89512 F2000 -7.02705 6.50078 * The mean difference is significant at the 0.05 level (I) group FC Mean (J) group Difference (I-J) Std Error Sig M2000 -12.67775 7.22166 M4000 -24.49718* 7.50276 M2000 MC 12.67775 7.22166 M4000 -11.81943 7.87948 M4000 MC 24.49718* 7.50276 M2000 11.81943 7.87948 * The mean difference is significant at the 0.05 level (I) group MC 115 021 002 021 290 002 290 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 2.7443 31.1459 9.7714 38.1729 -31.1459 -2.7443 -6.3616 20.4157 -38.1729 -9.7714 -20.4157 6.3616 093 004 093 148 004 148 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -27.6546 2.2991 -40.0570 -8.9374 -2.2991 27.6546 -28.1605 4.5216 8.9374 40.0570 -4.5216 28.1605 Phụ lục Xử lý thống kê so sánh Anova trọng lượng tương đối quan chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn Gan (I) group FC (J) group F2000 F4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig .04000 37908 -.60667 37908 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 917 -.7680 8480 130 -1.4147 2013 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.72000 33205 -.31000 33205 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 057 -1.4277 -.0123 365 -1.0177 3977 Mean (J) group Difference (I-J) Std Error Sig F2000 05167 10947 F4000 -.13167 10947 Dependent Variable: lách Mean (I) group (J) group Difference (I-J) Std Error Sig MC M2000 -.06000 08839 M4000 -.09333 08839 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 644 -.1817 2850 248 -.3650 1017 Lách (I) group FC 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 508 -.2484 1284 308 -.2817 0951 Thận (I) group FC (J) group F2000 F4000 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig .09833 13845 -.27000 13845 Mean Difference (I-J) Std Error Sig .23000 14567 17833 14567 488 070 135 240 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -.1968 3934 -.5651 0251 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -.0805 5405 -.1322 4888 Phụ lục 7: Xử lý thống kê so sánh Anova thông số sinh hóa thử nghiệm độc tính bán trường diễn Đường huyết (I) group FC (J) group F2000 F4000 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 13.00000 12.10142 11.00000 12.10142 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 12.50000 13.98312 -6.16667 13.98312 324 398 412 678 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -16.6111 42.6111 -18.6111 40.6111 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -23.4448 48.4448 -42.1114 29.7781 Cholesterol (I) group FC (J) group F2000 F4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -33.66667 22.21111 -45.66667 22.21111 116 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 180 -88.0153 20.6820 086 -100.0153 8.6820 (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -24.83333 12.76606 -6.83333 12.76606 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 109 -57.6495 7.9829 615 -39.6495 25.9829 (I) group FC (J) group F2000 F4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -22.00000 12.46328 -27.00000 12.46328 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 128 -52.4965 8.4965 073 -57.4965 3.4965 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -2.31667 2.40064 -.61667 2.40064 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 379 -8.4877 3.8544 808 -6.7877 5.5544 Mean (J) group Difference (I-J) Std Error Sig F2000 -3.63333* 1.37652 F4000 -5.20000* 1.37652 * The mean difference is significant at the 0.05 level 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 039 -7.0016 -.2651 009 -8.5682 -1.8318 (I) group MC HDL LDL (I) group FC (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -33.50000 13.49794 -1.83333 13.49794 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 056 -68.1976 1.1976 897 -36.5309 32.8642 Triglycerid (I) group FC (J) group F2000 F4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -30.33333 28.10957 -21.66667 28.10957 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 322 -99.1150 38.4483 470 -90.4483 47.1150 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 1.33333 19.13403 21.00000 19.13403 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 947 -47.8523 50.5189 322 -28.1856 70.1856 (I) group FC (J) group F2000 F4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -18.33333 13.30831 -5.33333 13.30831 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 218 -50.8976 14.2309 702 -37.8976 27.2309 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 78.16667 66.35155 110.50000 66.35155 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 292 -92.3954 248.7287 157 -60.0621 281.0621 (J) group F2000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 60.66667 48.56306 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 258 -58.1628 179.4962 ALT AST (I) group FC 117 F4000 (I) group MC (J) group M2000 M4000 69.00000 48.56306 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.15833 09723 -.00500 09723 205 -49.8295 187.8295 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 164 -.4083 0916 961 -.2549 2449 Creatinin 95% Confidence Interval Mean (J) group Difference (I-J) Std.Error Sig Lower Bound Upper Bound F2000 -.22667* 05048 004 -.3502 -.1031 F4000 -.21333* 05048 006 -.3369 -.0898 F2000 FC 22667* 05048 004 1031 3502 F4000 01333 05048 801 -.1102 1369 * The mean difference is significant at the 0.05 level 95% Confidence Interval Mean (I) group (J) group Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound MC M2000 -1.50000 1.33208 311 -4.9242 1.9242 M4000 43333 1.33208 758 -2.9909 3.8576 (I) group FC Protein Mean (J) group Difference (I-J) Std Error Sig F2000 -3.26667* 39347 F4000 -2.83333* 39347 F2000 FC 3.26667* 39347 F4000 43333 39347 * The mean difference is significant at the 0.05 level (I) group FC 000 000 000 313 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -4.2294 -2.3039 -3.7961 -1.8706 2.3039 4.2294 -.5294 1.3961 Mean Difference (I-J) Std Error Sig .02833 04200 03833 04200 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 530 -.0796 1363 403 -.0696 1463 Mean (J) group Difference (I-J) Std Error Sig F2000 -.01333 00981 F4000 -.04333* 00981 F2000 FC 01333 00981 F4000 -.03000* 00981 * The mean difference is significant at the 0.05 level 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -.0373 0107 -.0673 -.0193 -.0107 0373 -.0540 -.0060 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Bilirubin (I) group FC (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig .02833 04200 03833 04200 118 223 004 223 022 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 530 -.0796 1363 403 -.0696 1463 Phụ lục 8: Xử lý thống kê so sánh Anova thông số huyết học thử nghiệm độc tính bán trường diễn WBC (I) group FC (J) group F2000 F4000 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 5.14667 2.50347 3.65333 2.50347 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.59000 1.01288 -1.62000 1.01288 Mean (J) group Difference (I-J) Std Error Sig M2000 -4.22333* 1.02705 M4000 -5.25333* 1.02705 * The mean difference is significant at the 0.05 level (I) group MC 086 195 581 161 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -.9791 11.2724 -2.4724 9.7791 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -3.0684 1.8884 -4.0984 8584 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 006 -6.7364 -1.7102 002 -7.7664 -2.7402 L% (I) group FC (J) group F2000 F4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 16.00000 12.43329 3.80000 12.43329 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 246 -14.4232 46.4232 770 -26.6232 34.2232 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig 13.30000 11.98737 22.93333 11.98737 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 310 -16.0320 42.6320 104 -6.3987 52.2654 (I) group FC (J) group F2000 F4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.64333 2.78777 42333 2.78777 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -15.43000 16.64292 -18.89667 16.64292 M% 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 825 -7.4648 6.1781 884 -6.3981 7.2448 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 390 -56.1538 25.2938 300 -59.6204 21.8271 RBC (I) group FC (J) group F2000 F4000 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig .56333 82873 -.29667 82873 Mean Difference (I-J) Std Error Sig .87000 71611 1.41667 71611 119 522 733 270 095 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -1.4645 2.5912 -2.3245 1.7312 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -.8823 2.6223 -.3356 3.1689 HGB 95% Confidence Interval Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound 3.33333 10.23791 756 -21.7179 28.3846 -9.33333 10.23791 397 -34.3846 15.7179 95% Confidence Interval Mean (I) group (J) group Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound MC M2000 9.66667 8.94013 321 -12.2090 31.5424 M4000 27.33333* 8.94013 022 5.4576 49.2090 * The mean difference is significant at the 0.05 level (I) group FC (J) group F2000 F4000 HCT Mean Difference (I-J) Std Error Sig 2.20000 5.17365 -1.06667 5.17365 Mean (I) group (J) group Difference (I-J) Std Error Sig MC M2000 3.63333 3.33933 M4000 9.53333* 3.33933 * The mean difference is significant at the 0.05 level (I) group FC (J) group F2000 F4000 685 843 318 029 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -10.4595 14.8595 -13.7261 11.5928 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -4.5377 11.8044 1.3623 17.7044 MCV (I) group FC (J) group F2000 F4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.80000 1.69902 56667 1.69902 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 654 -4.9574 3.3574 750 -3.5907 4.7240 (I) group MC (J) group M2000 M4000 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.86667 1.28149 2.50000 1.28149 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 524 -4.0024 2.2690 099 -.6357 5.6357 Mean Difference (I-J) Std Error Sig -.66667 54092 -.53333 54092 Mean (I) group (J) group Difference (I-J) Std Error Sig MC M2000 -.36667 38490 M4000 60000 38490 * The mean difference is significant at the 0.05 level 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -1.9902 6569 -1.8569 7902 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound -1.3085 5752 -.3418 1.5418 MCH (I) group FC (J) group F2000 F4000 264 362 378 170 MCHC (I) group FC (J) group F2000 F4000 (I) group MC (J) group M2000 M4000 95% Confidence Interval Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound -8.66667 16.55742 619 -49.1812 31.8479 -15.33333 16.55742 390 -55.8479 25.1812 95% Confidence Interval Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound -2.00000 4.22515 653 -12.3386 8.3386 -3.66667 4.22515 419 -14.0052 6.6719 120 PLT (I) group FC (J) group F2000 F4000 (I) group MC (J) group M2000 M4000 95% Confidence Interval Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound -218.00000 126.05554 134 -526.4468 90.4468 -206.00000 126.05554 153 -514.4468 102.4468 95% Confidence Interval Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound -124.66667 259.55503 648 -759.7750 510.4416 338.33333 259.55503 240 -296.7750 973.4416 Phụ lục Xử lý thống kê so sánh Anova % đoạn huyết khối/đuôi thử nghiệm khả làm tiêu sợi huyết nattokinase (I) group PBS-24 PBS-48 PBS-72 NK-NL-24 NK-NL-48 NK-NL-72 (J) group NK-NL-24 NK-TM-24 NK-NL-24 NK-TM-24 NK-NL-24 NK-TM-24 NK-TM-24 NK-TM-48 NK-TM-72 95% Confidence Interval Mean Difference (IUpper J) Std Error Sig Lower Bound Bound 27.8000* 5.73457 000 15.7521 39.8479 16.6333* 5.00554 004 6.1171 27.1496 29.48000* 5.73457 000 17.4321 41.5279 36.14667* 5.00554 000 25.6304 46.6629 30.40000* 6.85412 000 16.0000 44.8000 35.50000* 6.25693 000 22.3547 48.6453 -11.16667 6.25693 091 -24.3120 1.9786 6.66667 6.25693 301 -6.4786 19.8120 5.10000 6.25693 426 -8.0453 18.2453 121