Nghiên cứu cải tiến môi trường tạo stroma nhộng trùng thảo cordyceps militais trung tâm nghiên cứu và phát triển nông nghiệp công nghệ cao

HCM TRUN T MN N ỨU V P T TR ỂN N N N P N N O BÁO CÁO NGHI M THU NGHIÊN CỨU CẢI TIẾN M TRƢỜNG TẠO STROMA NHỘNG TRÙNG THẢO (Cordyceps militaris) KS Nguyễn Thị Ngọc Sương Th nh ph h inh, h ng 01/2017 BAN QU N LÝ KHU NÔNG NGHI P CÔNG NGH CAO TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHI P CÔNG NGH CAO BÁO CÁO NGHI M THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đ ng nghiệm thu) NGHIÊN CỨU CẢI TIẾN M TRƢỜNG TẠO STROMA NHỘNG TRÙNG THẢO (Cordyceps militaris) Ơ QU N Ủ TRÌ (Ký tên, đóng dấu xác nhận) Th nh ph CHỦ NHI M ĐỀ TÀI (Ký tên) h inh, h ng 01/2017 TÓM TẮT Nhộng trùng thảo (Cordyceps militaris) loại dược liệu quí với hàm lượng hoạt chất cao ăm 2015, đề tài nuôi trồng stroma Nhộng trùng thảo thực với môi trường sử dụng nguồn đạm nhộng tằm Tuy nhiên nhộng tằm dạng nguyên liệu không phổ biến, thời gian bảo quản ngắn gây khó khăn cho cơng tác đảm bảo nguồn ngun liệu sản xuất Nghiên cứu thực nhằm nguy n liệu th y th ch hợp làm tăng suất strom mà v n đảm ảo hàm lượng hoạt chất c o Kết thu nguyên liệu ye st e tr ct kết hợp với l ng đ trứng gà ch n làm nguy n liệu th y cho nhộng tằm hối lượng nguy n liệu th ch hợp cho việc nuôi trồng hộng trùng thảo 0,3017 g/bình ye st e tr ct kết hợp 4,4653 g/bình l ng đ trứng gà ăng suất strom thu 17,98 g nh, tr ng lượng khô c strom 2,69 g nh, hàm lượng cordycepin 6,7041 mg g, hàm lượng denosine 4,5059 mg g Trang ii BM20-QT.QLKH MỤ LỤ Trang r ng phụ i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH SÁCH B NG vi DANH SÁCH HÌNH vii ĐỀ TÀI MỞ ĐẦU hương 1.1 ỔNG QUAN Giới thiệu Cordyceps militaris 1.1.1 Phân loại nấm Cordyceps militaris 1.1.2 Đặc điểm sinh h c nấm Cordyceps militaris 1.2 Một số hoạt chất sinh h c c a Cordyceps 1.2.1 Nucleotides 1.2.2 Sterol 1.2.3 Protein amino acid 1.2.4 Acid béo 1.2.5 Polysaccharide 1.3 Một số tác dụng dược lý c a nấm Cordyceps 1.3.1 Hiệu chống ung thư 1.3.2 ác động điều hòa miễn dịch 1.3.3 ác động bảo vệ gan 1.3.4 ác động bảo vệ thận Trang iii BM20-QT.QLKH 1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến tạo thành stroma C militaris 1.4.1 Nhu cầu dinh dưỡng cho hình thành phát triển stroma 1.4.2 nh hưởng c a yếu tố môi trường 1.5 Nuôi trồng Cordyceps militaris nguyên liệu khác 10 1.5.1 Trên nhộng tằm 11 1.5.2 Trên nguyên liệu khác 11 1.6 Nguyên liệu l ng đ trứng nuôi cấy nấm ký sinh côn trùng 12 hương ỘI DUNG NGHIÊN CỨU 13 2.1 Thời gi n đị điểm thực 13 2.2 Vật liệu thiết bị 13 2.2.1 Vật liệu 13 2.2.2 hiết ị 13 2.3 ội dung nghi n cứu 13 2.4 hương pháp nghi n cứu 14 2.4.1 Nội dung 1: Khảo sát nguồn nguyên liệu thay cho nguyên liệu nhộng tằm 14 2.4.2 Nội dung 2: Xác định khối lượng nguyên liệu thay thích hợp 15 hương III KẾT QU VÀ TH O LUẬN 18 3.1 Nội dung 1: Khảo sát nguồn nguyên liệu thay cho nguyên liệu nhộng tằm 18 3.1.1 Hiệu tạo stroma Nhộng trùng thảo c a nguyên liệu thí nghiệm 18 3.1.2 àm lượng hoạt chất cordycepin adenosine có stroma Nhộng trùng ni cấy tr n nguy n liệu khác 20 3.2 Nội dung 2: Xác định khối lượng nguyên liệu thay thích hợp 24 hương V Ế Ậ VÀ ĐỀ Ị 29 4.1 Kết luận 29 4.2 Đề nghị 29 TÀI LI U THAM KH O 30 Trang iv BM20-QT.QLKH D N S Ữ V ẾT TẮT Viết tắt ctv Thuật ngữ tiếng việt ộng tác vi n DNA Acid eoxyribonucleic Đ Đối chứng NT RNA ghiệm thức Acid ribonucleic Trang v BM20-QT.QLKH D N Bảng S Tựa bảng ảng 2.1 ết phân t ch hàm lượng ảng 3.1 BẢN nh hưởng c Trang tổng số c nguy n liệu th nghiệm nguy n liệu th nghiệm đến suất strom hiệu suất sinh h c 18 ảng 3.2 r ng lượng khô c strom hộng trùng thảo nuôi trồng tr n nguy n liệu khác 19 ảng 3.3 àm lượng cordycepin strom hộng trùng thảo nuôi cấy tr n nguy n liệu khác nh u ảng 3.4 20 àm lượng denosine strom hộng trùng thảo nuôi cấy tr n nguy n liệu khác nh u ảng 3.5 iệu tạo strom c 21 nguy n liệu ye st e tr ct kết hợp với l ng đ trứng khối lượng khác nh u ảng 3.6 14 àm lượng cordycepin denosine có strom 24 hộng trùng thảo nuôi trồng tr n môi trường sử dụng mức khối lượng nguy n liệu khác nh u 27 Trang vi BM20-QT.QLKH DANH SÁCH HÌNH Hình Tựa hình Trang nh 3.1 Strom hộng trùng thảo C militaris tr n môi trường khác nh u nh 3.2 Strom hộng trùng thảo tr n mơi trường có khối lượng ye st e tr ct kết hợp l ng đ trứng khác nh u 22 27 Trang vii BM20-QT.QLKH THÔNG T N ĐỀ T n đề tài dự án: ghi n cứu cải tiến môi trường tạo strom (Cordyceps militaris) hộng trùng thảo h nhiệm đề tài dự án: guyễn hị g c Sương qu n ch tr : rung tâm ghi n cứu hát triển ông nghiệp ông nghệ c o hời gi n thực hiện: 12 tháng inh ph duyệt: 143.027.000 đồng Mục ti u: Xác định nguồn nguy n liệu th y cho nguy n liệu nhộng tằm cải tiến công thức môi trường tạo strom hộng trùng thảo nhằm làm tăng t nh ổn định sản uất làm tăng suất độ đồng k ch thước strom ứng dụng vào quy mô sản uất lớn ội dung đề tài: ội dung 1: hảo sát nguồn nguy n liệu th y cho nguy n liệu nhộng tằm ội dung 2: Xác định khối lượng nguy n liệu th y th ch hợp Sản phẩm c đề tài dự án: Strom hộng trùng thảo báo cáo kho h c Trang BM20-QT.QLKH MỞ ĐẦU Nhộng trùng thảo (Cordyceps militaris) thuộc chi Cordyceps loài nấm dược liệu quý Nhộng trùng thảo biết đến thuốc quý, giúp tăng cường sức kh e, hỗ trợ hệ miễn dịch, chống suy nhược, mệt m i, phòng chống ung thư, ảo vệ tim, gan, thận… Hiện nay, Nhộng trùng thảo đ ng quan tâm nghiên cứu sản xuất in vitro để tạo nguồn dược liệu cho việc sản xuất thuốc hỗ trợ điều trị bệnh, thực phẩm chức ăm 2015, thực đề tài “ ghi n cứu môi trường tạo stroma Nhộng trùng thảo (Cordyceps militaris)” với kết Nhộng trùng thảo tạo mầm mơi trường gạo lức có bổ sung nhộng tằm, khoáng vitamin sau 30 ngày cấy nhiệt độ 20oC, ánh sáng 150 - 300 lx, thời gian chiếu sáng 12 Trong nghiên cứu sử dụng nguồn đạm nhộng tằm Đây dạng nguyên liệu không phổ biến, thời gian bảo quản ngắn gây khó khăn cho cơng tác đảm bảo nguồn nguyên liệu sản xuất h m vào số lượng stroma tạo nhiều chiều dài stroma ngắn gây ảnh hưởng đến chất lượng cảm qu n Do cần tìm nguồn nguyên liệu phổ biến, dễ bảo quản để đảm bảo nguồn nguyên liệu cho sản xuất tạo stroma có chất lượng cảm quan tốt Do đề tài “ ghi n cứu cải tiến môi trường tạo stroma Nhộng trùng thảo (Cordyceps militaris)” thực nhằm tăng t nh ổn định sản xuất tăng chất lượng cảm quan cho stroma Nhộng trùng thảo tr n môi trường nuôi trồng Trang BM20-QT.QLKH Đ N1.1 N1.2 N1.3 N1.4 N1.5 N1.6 nh 3.1 Stroma Nhộng trùng thảo C militaris tr n môi trƣờng khác Trang 22 BM20-QT.QLKH Xét mặt cảm quan, stroma ni trồng ngun liệu thí nghiệm chư có đồng k ch thước, chư đạt tính cảm quan tốt Nghiệm thức N1.1, N1.2, N1.3 N1.4 stroma nh , dài số lượng stroma nhiều Nghiệm thức N1.5, N1.6 thể ngắn to Với kết thu tr n, chúng tơi có vài nhận ét s u: - guy n liệu ye st e tr ct kết hợp với peptone: có hiệu tạo strom c o nhất, suất đạt 93,9% tr ng lượng khô đạt 93,9% so với đối chứng; hàm lượng hoạt chất strom tương đối thấp, hàm lượng cordycepin đạt 40,26% so với đối chứng, hàm lượng denosine tồn dạng vết phù hợp cho việc sản uất strom ứng thị hiếu c - hư vậy, nguy n liệu hộng trùng thảo tươi nấm ăn, đáp người ti u dùng guy n liệu ye st e tr ct kết hợp với l ng đ trứng gà: cho hàm lượng cordycepin denosine strom hộng trùng thảo c o nhất, đạt 111,83%, 297,88% so với đối chứng; hiệu tạo strom tương đối thấp, tr ng lượng tươi đạt 72,17%, tr ng lượng khô đạt 64,53% so với đối chứng hư vậy, nguy n liệu có triển v ng phù hợp cho hướng sản uất strom m ng hàm lượng hoạt chất c o, làm nguồn nguy n liệu cho ngành dược Với mục ti u n đầu đề r t m nguồn nguy n liệu th y cho nhộng tằm nhằm làm tăng t nh cảm qu n cho sản phẩm, tăng t nh ổn định sản xuất làm tăng suất độ đồng k ch thước stroma uy nhi n, qu tr nh thực nghi n cứu này, kết thu nguồn nguy n liệu có tiềm th y cho nhộng tằm lại có khả tạo strom m ng hàm lượng hoạt chất c o nguy n liệu nhộng tằm ơn nữ , mục ti u chung cho hướng nghi n cứu tạo strom tr n môi trường in vitro tạo nguồn nguyên liệu có dược tính cao cho việc sản xuất thực phẩm chức năng, làm nguy n liệu cho ngành dược Do đó, nguy n liệu ch n có khả tạo strom hộng trùng thảo có hàm lượng hoạt chất c o để thực th nghiệm với mục đ ch t m khối lượng nguy n liệu th y th ch hợp nhằm làm tăng suất strom mà v n đảm ảo hàm lượng hoạt chất c o Vậy nguyên liệu ch n ye st e tr ct kết hợp với l ng đ Trang 23 BM20-QT.QLKH trứng với kết suất, hiệu suất sinh h c hàm lượng hoạt chất tr nh ày tr n 3.2 Nội dung Xác định khối lƣợng nguyên liệu thay thích hợp S u ch n nguy n liệu th y cho nhộng tằm ye st e tr ct kết hợp l ng đ trứng, tiến hành khảo sát khối lượng tối ưu c nguy n liệu cho việc nuôi trồng strom hộng trùng thảo hối lượng nguy n liệu th nghiệm 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150% khối lượng nguy n liệu thực nội dung hư vậy, khối lượng nguy n liệu cụ thể cho nghiệm thức s u: Nghiệm thức Phần trăm so với khối lƣợng nguy n liệu nội dung % Khối lƣợng yeast e tract g nh Khối lƣợng lòng đỏ trứng gà g nh N2.1 50 0,1886 2,7908 N2.2 N2.3 60 0,2263 3,349 70 0,264 3,9071 N2.4 80 0,3017 4,4653 N2.5 90 0,3394 5,0234 N2.6 100 0,3771 5,5816 N2.7 110 0,4148 6,1398 N2.8 120 0,4525 6,6979 N2.9 130 0,4902 7,2561 N2.10 140 0,5279 7,8142 N2.11 150 0,5657 8,3724 S u thực th nghiệm với khối lượng nguy n liệu tr n, thu kết cụ thể s u: Bảng 3.5 iệu tạo stroma nguy n liệu yeast e tract kết hợp với lòng đỏ trứng khối lƣợng khác Trang 24 BM20-QT.QLKH Nghiệm thức Năng suất (g/bình) N2.1 (50%) 14,51cd 2,15ed 7,17 N2.2 (60%) cb bcd 7,77 cb 8,1 a 8,97 ab 8,27 cde 7,37 ef 6,53 f N2.3 (70%) N2.4 (80%) N2.5 (90%) N2.6 (100%) N2.7 (110%) N2.8 (120%) 16,02 ab 16,48 a 17,98 ab 16,65 bcd 14,91 ed 13,18 e SDW g nh 2,33 2,43 2,69 2,48 2,21 1,96 BE (%) N2.9 (130%) 12,48 - 1,86 - 6,2 - N2.10 (140%) - - - N2.11 (150%) LSD0,05 CV% 1,87 7,1 0,25 6,46 - *Các trung bình ký tự cột khơng khác biệt có nghĩa thống kê mức xác suất p < 0,05 SDW: trọng lượng stroma khô; BE: hiệu suất sinh học Năng suất (g/bình) 20 18 16 14 12 10 Năng suất (g/bình) Biểu đồ 1: iệu tạo stroma nguy n liệu yeast e tract kết hợp với lòng đỏ trứng khối lƣợng khác ết thu nghiệm thức 2.4 (khối lượng nguy n liệu ye st e tr ct kết hợp với l ng đ trứng 80% so với khối lượng nguy n liệu nội dung 1) cho suất strom , tr ng lượng strom khô hiệu suất sinh h c c o nghiệm thức Trang 25 BM20-QT.QLKH khơng có khác iệt có ý nghĩ mặt thống k so với nghiệm thức 2.5 (90%) ác nghiệm thức 2.9, 2.10 2.11 không ghi nhận kết nghiệm thức strom tạo n n t, khơng có tiềm ứng dụng vào sản uất heo kết tr n, khối lượng nguy n liệu c o thấp th lượng strom hộng trùng thảo tạo n n giảm uy nhi n, mức khối lượng nguy n liệu từ 50 % đến 100% khơng có tăng vượt ậc suất strom tươi, tr ng lượng khô c strom hiệu suất sinh h c ăng suất strom tươi, tr ng lượng khô c strom c o tương ứng 17,98 g nh, 2,69 g nh hi so sánh kết với kết thu nghiệm thức Đ – nội dung 1, nghiệm thức 2.4 (80% - 0,3017 g/l yeast e tr ct + 4,4653 g nh l ng đ trứng) v n chư đạt tương đương ói cách khác, nguy n liệu ye st e tr ct kết hợp với l ng đ trứng gà v n chư đạt hiệu tạo lượng stroma (năng suất) tương đương với nhộng tằm N2.1 N2.2 N2.3 N2.4 N2.5 N2.6 Trang 26 BM20-QT.QLKH N2.8 N2.7 Hình 3.2 Ảnh hƣởng khối lƣợng yeast e tract kết hợp lòng đỏ trứng đến tạo stroma Nhộng trùng thảo Ở nghiệm thức 2.2 (60%), N2.3 (70%), N2.4 (80%) strom nh tương đối đồng k ch thước, số lượng strom nhiều Ở nghiệm thức 2.1 (50%), N2.5 (90%), N2.6 (100%), N2.7 (110%), N2.8 (120%) strom to đồng k ch thước, số lượng strom t S u thu, strom m ng phân t ch hàm lượng hoạt chất cordycepin denosine tương tự nội dung thu kết s u: Bảng 3.6 àm lƣợng cordycepin adenosine c stroma Nhộng trùng thảo đƣợc nuôi trồng tr n môi trƣờng với khối lƣợng nguy n liệu khác Nghiệm thức àm lƣợng cordycepin (mg/g) àm lƣợng adenosine (mg/g) N2.1 (50%) 6,6319 4,4251 N2.2 (60%) 6,6226 4,4287 N2.3 (70%) 6,6133 4,4323 N2.4 (80%) 6,7041 4,5059 N2.5 (90%) 6,6949 4,4996 N2.6 (100%) 6,6925 4,4973 N2.7 (110%) 6,3320 4,3816 N2.8 (120%) 6,3091 4,191 Trang 27 BM20-QT.QLKH Theo kết bảng 3.6, nghiệm thức N2.4 (80%) có hàm lượng cordycepin denosine c o nghiệm thức lại Mặc dù hàm lượng hoạt chất nghiệm thức không tăng đáng kể suất hiệu suất sinh h c c o nghiệm thức hư vậy, nghiệm thức 2.4 đảm bảo mục ti u đề t m khối lượng nguy n liệu th y th ch hợp nhằm làm tăng suất strom mà v n đảm ảo hàm lượng hoạt chất c o Do đó, chúng tơi ch n khối lượng ngun liệu thích hợp cho việc ni trồng nhộng trùng thảo từ nguyên liệu yeast extract kết hợp l ng đ trứng gà tương ứng 0,3017g/bình 4,4653 g/bình Trang 28 BM20-QT.QLKH hƣơng V KẾT LUẬN V ĐỀ N Ị 4.1 Kết luận - guy n liệu ye st e tr ct kết hợp với l ng đ trứng gà ch n làm nguy n liệu th y cho nhộng tằm - hối lượng nguy n liệu th ch hợp cho việc nuôi trồng hộng trùng thảo 0,3017 g/bình ye st e tr ct kết hợp 4,4653 g/bình l ng đ trứng gà - ăng suất strom thu 17,98 g nh, tr ng lượng khô c strom 2,69 g nh, hàm lượng cordycepin 6,7041 mg g, hàm lượng denosine 4,5059 mg g 4.2 Đề nghị - ghi n cứu số chất ổ sung để tăng t nh cảm qu n c sản phẩm h nh dạng, k ch thước, số lượng strom mà v n đảm ảo hàm lượng hoạt chất - ghi n cứu mở rộng quy mô nuôi trồng nhằm ứng dụng vào sản uất thực tế Trang 29 BM20-QT.QLKH T L UT M K ẢO Tiếng Việt [1] Ngô Xuân Nghiễn, Văn Vẻ, Trần Thu Hà, Nguyễn Thị ch hùy (2015), ước đầu nghiên cứu công nghệ nuôi trồng Nhộng trùng thảo (Cordyceps militaris L.ex Fr.) Việt Nam, Tạp chí Khoa học Phát triển, 13(3), Trang 445-454 [2] Vũ Xuân ạo, Vũ Văn hước, Chu Thị Thùy, Nguyễn Thị Hậu (2014), nh hưởng c a số yếu tố lên sinh trưởng c a nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris, Kỷ yếu Hội nghị Nấm h c: Nghiên cứu Ứng dụng khu vực ph n m năm 2014, ngày 23 tháng 11,Thành phố Hồ Chí Minh [3] Phạm Quang Thu (2015), Nghiên cứu xây dựng quy trình ni trồng nấm Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris (L :Fr.) Link có giá trị dược liệu thương mại cao, Viện Khoa h c Lâm nghiệp Việt Nam, 31/03/2015, Trực tuyến http://vafs.gov.vn (Ngày truy cập 15/05/2015) [4] Huỳnh hư, gộ Đại Nghiệp, Võ Thị Xuyến, Đinh Minh iệp, rương nh Nguyên (2012), Nghiên cứu khả kháng o y hó c a cao chiết từ số ch ng nấm Cordyceps sp phân lập Việt Nam, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 10(4A), Trang 10411046 [5] Huỳnh hư, gô Đại Nghiệp, Võ Thị Xuyến, Đinh Minh iệp, rương nh Nguyên (2013), Nghiên cứu tiềm c a Cordyceps sp việc bảo vệ tế bào HepG2 chống lại tác nhân oxy hóa, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 51(5B), Trang 339-343 [6] Võ Thị Xuyến, Vũ hị gân, Đỗ u ng Dương, Đinh Minh Nguyên, Ngô Kế Sương (2014), Tối ưu hó iệp, rương nh mơi trường ni cấy Cordyceps pseudomilitaris DL0015, Kỷ yếu Hội nghị Nấm h c: Nghiên cứu Ứng dụng khu vực ph n m năm 2014, ngày 23 tháng 11, hành phố Hồ Chí Minh Tiếng Anh [7] Chang, H.L., Chao, G.R., Chen, C.C and Mau, J.L (2001), Non-volatile taste components of Agaricus blazei, Antrodia camphorata and Cordyceps militaris mycelia, Food Chemistry, 74, pp 203-207 Trang 30 BM20-QT.QLKH [8] Chen, S.Z., Wu, P.J (1990), A brief introduction to bottle culture technique of Cordyceps militaris, Edible Fungi, 04, pp 31 [9] Chen, Q.W (1997), Study on Cordyceps (Fr.) fungi in Shennongjia forest district, Hubei Agricultural Sciences, 6, pp 49–52 [10] Chen, R.Y., Ichida, M (2002), Infection of the silkworm, Bombyx mori, with Cordyceps militaris, Journal of Insect Biotechnology and Sericology, 71, pp 61–63 [11] Chen, C.S., Hseu, R.S., Huang, C.T (2011a), Quality control of Cordyceps sinensis: teleomorph, anamorph, and its products, In: Shoyama Y (ed) Quality control of herbal medicines and related areas, InTech, Croatia, pp 223–238 [12] Chen, Y.S., Liu, B.L., Chang, Y.N (2011b), Effects of light and heavy metals on Cordyceps militaris fruit body growth in rice grain-based cultivation, Korean Journal of Chemical Engineering, 28, pp 875–879 [13] Dong, J.Z., Lei, C., Ai, X.R (2012), Selenium enrichment on Cordyceps militaris Link and analysis on its main active components, Applied Biochemistry and Biotechnology, 166, pp 1215–1224 [14] Du, A.L., Zhang, X., Zhang, H.Z (2010), A new high cordycepin Cordyceps militaris cultiv r „ [15] izhou 1‟, Acta Horticulturae Sinica, 37, pp 1373–1374 Gao, X.H., Wu, W., Qian, G.C (2000), Study on influences of abiotic factors on fruitbody differentiation of Cordyceps militaris, Acta Agriculturae Shanghai, 16(Suppl), pp 93–98 [16] Gao, X.H (2008), Mating system of Cordyceps militaris, Acta Edulis Fungi, 15(1), pp 6–10 [17] Gu, H.S., Liang, M.Y (1987), Study on the manual cultivation of Cordyceps militaris, Pharmaceutical Information Bulletin, 5, pp 51–52 [18] Harada, Y., Akiyama, N., Yamamoto, K (1995), Production of Cordyceps militaris fruit body on artificially inoculated pupae of Mamestra brassicae in the laboratory, Transactions of the Mycological Society of Japan, 36, pp 67–72 [19] Hardeep, S.T., Sardul, S.S., Sharma, A.K (2014), Pharmacological and therapeutic potential of Cordyceps with special reference to cordycepin, Biotech, 4(1), pp 1-12 Trang 31 BM20-QT.QLKH [20] Holiday, J., Cleaver, M., Wasser, S.P (2005), Cordyceps, Encyclopedia of Dietary Supplements, Taylor and Francis Publishing, DOI: 10.1081/E-EDS-120024882 [21] Holiday, J., Cleaver, M (2008), Medicinal value of the caterpillar fungi species of the genus Cordyceps (Fr.) Link (Ascomycetes) - A review, International Journal Medicinal Mushroom, 10(3), pp 219-234 [22] Hur, H (2008), Chemical Ingredients of Cordyceps militaris, Mycobiology, 36(4), pp 233-235 [23] Ibrahim, H.Y.E., Salam, A.M., Abdel-Mogib M (2011), Survey of entomopathogenic fungi naturally infecting cowpea aphid, Aphis craccivora KOCH, Journal of Plant Protection and Pathology - Mansoura University, 2(12), pp 1063-1070 [24] Kang, J.C., Wen, T.C., Li, G.R., Kang, C and Hyde, K.D (2014), Optimization of solid-state fermentation for fruiting body growth and cordycepin production by Cordyceps militaris, Chiang Mai Journal of Science., 41(4), pp 858-872 [25] Kobayashi, Y (1941), The genus Cordyceps and its allies, Science reports of the Tokyo Bunrika Daigaku, 5, pp 56-260 [26] Kuo, Y.C., Lin, C.Y., Tsai, W.J., Wu, C.L., Chen, C.F., Shiao, M.S (1994), Growth inhibitors against tumor cells in Cordyceps sinensis other than cordycepin and polysaccharides, Cancer Investigation,12, pp 611–615 [27] Li, X (2002), Man made cultivates of Cordyceps militaris (L) Link, Journal of Microbiology (China), 22(6), pp 56–57 [28] Li, S.P., Song, Z.H., Dong, T.T (2004), Distinction of water-soluble constituents between natural and cultured Cordyceps by capillary electrophoresis, Phytomedicine, 11, pp 684–690 [29] Liang, M.Y., Gu, H.S (1987), Success in artificial cultivation of Cordyceps, Journal of Shenyang Agricultural University, 18, pp 103–104 [30] Liang, Y., Zhang, G (2013), Improvement of fruiting body production in Cordyceps militaris by molecular assessment, Archives of Microbiology, 195, pp 579 – 585 Trang 32 BM20-QT.QLKH [31] Lin, Q.Y., Song, B., Zhong, Y.J (2006a), Optimization of some cultivation conditions of Cordyceps militaris, Edible Fungi China, 25(6), pp 17–19 [32] Lin, Q.Y., Zhong, Y.J., Li, T.H (2006b), Recent research advances in Cordyceps biology, Acta Edulis Fungi, 13(2), pp 93–98 [33] Lu, L.X., Xu, Q., Liu, Z.H., Sun, Y., Djing, Z., Li, Y.Q (2012), Optimization for Production of Intracellular Polysaccharides from Cordyceps ophioglossoides L2 in Submerged Culture and Its Antioxidant Activities in vitro, Chinese Journal of Chemical Engineering, 20(2), pp 294-301 [34] Lo, H.C., Chienyan, H., Fang, Y.L and Hsu, T.H (2013), A systematic review of the mysterious caterpillar fungus Ophiocordyceps sinensis in DongChong XiaXao and Relates Bioactive ingredients, Journal of Traditional and Complementary Medicine, 3(1), pp 16-32 [35] Mains, E.B (1958), North American entomogenous species of Cordyceps, Mycologia, 50, pp 169-222 [36] Masuda, M., Urabe, E., Sakurai, A., Sakakibara, M (2006), Production of cordycepin by surface culture using the medicinal mushroom Cordyceps militaris, Enzyme and Microbial Technology, 39(4), pp 641–646 [37] Mu, X., Jia, C.F., Chen, S (2010), Effects of light hours on growth and development of Cordyceps militaris, Journal of Hebei Agricultural Sciences, 14(12), pp 20–21 [38] Ren, S.S (1998), Technical processes for artificial cultivation of Cordyceps militaris with high quality and quantity, Edible Fungi China, 17(1), pp.22–23 [39] Sabbour, M.M., Abd-El-Rahman, A., Abd-El-Raheem, M.A and Ragei, M (2012), Pathogenicity of Entomopathogenic Fungi against olive insect pests under laboratory and field conditions in Egypt, Journal of Apllied Sciences Research, 8(7), pp 3448-3452 [40] Sánchez-Peña, S.R (1990), Some insect and spider pathogenic fungi from Mexico with data on their host ranges, The Florida Entomologist, 73, pp 517–522 Trang 33 BM20-QT.QLKH [41] Sato, H., Shimazu, M (2002b), Stromata production for Cordyceps militaris (Clavicipitales: Clavicipitaceae) by injection of hyphal bodies to alternative host insects, Applied Entomology and Zoology, 37, pp 85–92 [42] Seok, K.J., Lee, J.S., Shin, C.W., Lee, K.E and Hong, E.K (2009), Optimization of Culture Conditions and Medium Components for the Production of Mycelial Biomass and Exo-polysaccharides with Cordyceps militaris in Liquid Culture, Biotechnology and Bioprocess Engineering, 14, pp 756-762 [43] Shashidhara, M.G., Giridharc, P., Udaya, S.K., Manohar, B (2013), Bioactive principles from Cordyceps sinensis: A potent food supplement – A review, Journal of Functional foods, 5(3), pp.1013-1030 [44] Shrestha, B., Park, Y.J., Han, S.K (2004), Instability in in vitro fruiting of Cordyceps militaris, Journal of Mushroom Science and Production, 2, pp 140–144 [45] Shrestha, B., Zhang, W., Zhang, W., Liu, X (2012), The medicinal fungus Cordyceps militaris: research and development, Mycological Progress, 11 , pp 589-614 [46] Sung, J.M., Kim, C.H., Yang, K.J (1993), Studies on the distribution and utilization of Cordyceps militaris and C nutans, The Korean Journal of Mycology, 21, pp 94–105 [47] Sung, J.M (1996), The insects-born fungus of Korea in color, Kyohak Publishing Co Ltd., Seoul [48] Sung, J.M., Choi, Y.S., Lee, H.K (1999), Production of fruiting body using cultures of entomopathogenic fungal species, The Korean Journal of Mycology, 27, pp 15–19 [49] Sung, J.M., Choi, Y.S., Shrestha, B (2002), Investigation on artificial fruiting of Cordyceps militaris, The Korean Journal of Mycology, 30, pp 6–10 [50] Sung, G.H , Spatafora, J.W (2004a), Cordyceps cardinalis sp nov., a new species of Cordyceps with an east Asian-eastern North American distribution, Mycologia, 96, pp 658–666 Trang 34 BM20-QT.QLKH [51] Sung, J.M., Shrestha, B., Kim, H.K., Sung, G.H., Spatafora, J.W (2004b), Bipolar Heterothalism, a principal mating system of Cordyceps militaris in vitro, Biotechnology and Bioprocess Engineering, 9, pp 440 – 446 [52] Wang, H.J., Chu, Z., Feng, L (2010), A comparative study on effect of two plant growth promoters on the growth of Cordyceps militaris, Lishizhen Medicine and Materia Medica Research, 21, pp 541–542 [53] Wu, Y.H., Zhu, S.Y., Ding, Y.H (1996), Artificial cultivation conditions of Cordyceps militaris and the analysis of its fruitbody components, Acta Edulis Fungi, 3(2), pp 59–61 [54] Yue, C (2010), Optimization on Cordyceps militaris‟s cultiv ting conditions, Food industry, 2, pp 60–61 [55] Yun, Y.H., Han, S.H., Lee, S.J., Ko, S.K., Lee, C.K., Ha, N.J., Kim, K.J (2003), Anti-diabetic effects of CCCA, CMESS and cordycepin from C militaris and the immune responses in streptozotocin-induced diabetic mice, Natural Product Sciences, 9, pp 291– 298 [56] Zhang, J.Y., Wu, K.L., Duan, J (2010a), Influence of air permeability on growth of Cordyceps militaris, Guangdong Agricultural Sciences, 4, pp 45–47 [57] Zhang, X.K., Liu, W.X (1997), Experimental studies on planting Cordyceps militaris (L ex Fr.) Link with different culture materials, Edible Fungi China, 16(2)m, pp 21–22 [58] Zhao, C.Y., Li, H., Zhang, M (2006a), Optimization on conditions of artificial cultivation of Cordyceps militaris, Journal of Shenyang Agricultural University, 37, pp 209–212 [59] Zhao, Z.Z., Yuen, J.P.S., Wu, J.L (2006b), A systematic study on confused species of Chinese Materia Medica in the Hong Kong market, Annals Academy of Medicine Singapore, 35, pp 764–769 [60] Zhoua, X., Gonga, Z., Sua, Y., Linb, J and Tang, K (2009), Cordyceps fungi: natural products, pharmacological functions and developmental productv, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 61(3), pp 279-291 Trang 35 BM20-QT.QLKH Trang 36 BM20-QT.QLKH