So sánh tác động của a prf+ và i prf lên khả năng tăng sinh và di cư của tế bào gốc nhú chóp răng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN HỒNG SƠN SO SÁNH TÁC ĐỘNG CỦA A-PRF+ VÀ I-PRF LÊN KHẢ NĂNG TĂNG SINH VÀ DI CƯ CỦA TẾ BÀO GỐC NHÚ CHÓP RĂNG LUẬN VĂN THẠC SĨ RĂNG – HÀM – MẶT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN HỒNG SƠN SO SÁNH TÁC ĐỘNG CỦA A-PRF+ VÀ I-PRF LÊN KHẢ NĂNG TĂNG SINH VÀ DI CƯ CỦA TẾ BÀO GỐC NHÚ CHÓP RĂNG Ngành: RĂNG HÀM MẶT Mã số: TS 8720501 LUẬN VĂN THẠC SĨ RĂNG – HÀM – MẶT NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS LÊ HỒNG SƠN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa công bố Tác giả luận văn Nguyễn Hồng Sơn MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT i THUẬT NGỮ ANH - VIỆT iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC BIỂU ĐỒ v DANH MỤC HÌNH vi ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan về sợi huyết giàu tiểu cầu 1.2 Tế bào gốc nhú chóp 18 1.3 Các kĩ thuật điều trị nội nha chưa đóng chóp 24 1.4 Tình hình nghiên cứu Việt Nam giới 28 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Thiết kế nghiên cứu 33 2.2 Đối tượng nghiên cứu 33 2.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 33 2.4 Cỡ mẫu nghiên cứu 33 2.5 Dụng cụ vật liệu nghiên cứu 33 2.6 Quy trình nghiên cứu 35 2.7 Thu thập phân tích số liệu 44 2.8 Kiểm soát sai lệch nghiên cứu 45 2.9 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 45 2.10 Sơ đờ tóm tắt quy trình nghiên cứu 47 Chương KẾT QUẢ 48 3.1 Mẫu sợi huyết giàu tiểu cầu tế bào gốc nhú chóp thu nhận 48 3.2 Tác động A-PRF+ i-PRF lên tăng sinh TBG nhú chóp 50 3.3 Đánh giá tác động A-PRF+ i-PRF lên di cư TBG nhú 58 chóp Chương BÀN LUẬN 63 4.1 Sợi huyết giàu tiểu cầu (PRF) 63 4.2 Tế bào gốc nhú chóp 65 4.3 Sự tăng sinh tế bào gốc nhú chóp tác động A-PRF+ 66 i-PRF 4.4 Sự ảnh hưởng A-PRF+ i-PRF lên di cư tế bào gốc nhú 69 chóp 4.5 Tiềm năng, hạn chế ứng dụng đề tài 71 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Viết tắt Tiếng Việt cs Cộng ĐHQG Đại học Quốc gia TBG Tế bào gốc Tp.HCM Thành phố Hờ Chí Minh TNV Tình nguyện viên Viết tắt Tiếng Anh Tên viết tắt Tiếng Anh ALP Alkaline phosphatase A-PRF Advanced platelet-rich fibrin BSP Bone sialoprotein CGF Concentrated growth factor DFSCs Dental follicle stem cells DMEM/F12 Dulbecco's modified Eagle Tiếng Việt Sợi huyết giàu tiểu cầu cải tiến Tế bào gốc bao medium/nutrient mixture F-12 DMP-1 Dentin matrix protein-1 DPSCs Dental pulp stem cells DSPP Dentin sialophosphoprotein EGF Epidermal growth factor Yếu tố tăng trưởng biểu bì FBS Fetal bovine serum Huyết thai bò FGF2 Fibroblast growth factor Yếu tố tăng trưởng nguyên bào Tế bào gốc tủy sợi i-PRF Injectable platelet-rich fibrin Sợi huyết giàu tiểu cầu dạng lỏng IGF Insulin-like growth factor Yếu tố tăng trưởng giống insulin L-PRF Leukocyte platelet-rich fibrin Sợi huyết giàu tiểu cầu hệ đầu ii tiên MSCs Mesenchymal stem cells MTA Mineral trioxide aggregate PBS Phosphate buffered saline PCR Polymerase chain reaction Tế bào gốc trung mô Phản ứng chuỗi polymerase hay phản ứng khuếch đại gen PDGF Platelet derived growth factor Yếu tố tăng trưởng có nguồn gốc từ tiểu cầu PDLSCs Periodontal ligament stem cells Tế bào gốc dây chằng nha chu PRF Platelet-rich fibrin Sợi huyết giàu tiểu cầu PRP Platelet-rich plasma Huyết tương giàu tiểu cầu PPP Platelet poor plasma Huyết tương nghèo tiểu cầu SCAPs Stem cells from the apical Tế bào gốc nhú chóp papilla SHED Stem cell from human Tế bào gốc sữa exfoliated deciduous teeth REPs Regenerative endodontics Nội nha tái tạo TGF-β Transforming growth factor Yếu tố tăng trưởng chuyển dạng beta beta von Willebrand factor Yếu tố von Willebrand vWF iii THUẬT NGỮ ANH – VIỆT Tiếng Anh Tiếng Việt Apical cell rich zone Vùng giàu tế bào chóp Apical papilla Nhú chóp Chemotaxis Hóa ứng động Bio-Root engineering Tạo chân sinh học Fibrin Sợi huyết Fibrin matrix Khung sợi huyết Multilineage differentiation Biệt hóa đa dòng Revascularisation Tái thông mạch máu Synchronous Đờng bợ Self-renewal Tính chất tự làm Scratch assay Đường rạch đĩa thí nghiệm iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Tình hình nghiên cứu giới 28 Bảng 3.1 Số lượng TBG nhú chóp nuôi cấy môi trường 50 khác thời điểm ngày 2, 4, 6, 8, 10 Bảng 3.2 Phần trăm diện tích vùng vơ bào ở nhóm thử nghiệm T0, T1 (24 giờ), T2 (48 giờ) T3 (72 giờ) 58 v DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Sự thay đổi số lượng TBG nhú chóp ở nhóm thí nghiệm 51 2, ngày 4, ngày 6, ngày ngày 10 Biểu đồ 3.2 Sự thay đổi số lượng TBG nhú chóp nhóm theo 53 ngày Biểu đồ 3.3 So sánh tăng sinh nhóm theo ngày 2, 4, 6, 54 10 Biểu đồ 3.4 Sự thay đổi phần trăm diện tích vùng vơ bào nhóm 59 thời điểm Biểu đồ 3.5 So sánh phần trăm diện tích vùng vơ bào nhóm thí nghiệm thời điểm 60 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh growth factor release, biocompatibility, and cellular response Journal of periodontology 2017;88(1):112-121 55 Miron RJ, Fujioka-Kobayashi M, Hernandez M, et al Injectable platelet rich fibrin (i-PRF): opportunities in regenerative dentistry? Clinical oral investigations 2017;21(8):2619-2627 56 Dohan Ehrenfest DM, Doglioli P, de Peppo GM, Del Corso M, Charrier JB Choukroun's platelet-rich fibrin (PRF) stimulates in vitro proliferation and differentiation of human oral bone mesenchymal stem cell in a dose-dependent way Arch Oral Biol Mar 2010;55(3):185-94 doi:10.1016/j.archoralbio.2010.01.004 57 Huang GT, Gronthos S, Shi S Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs those from other sources: their biology and role in regenerative medicine J Dent Res Sep 2009;88(9):792-806 doi:10.1177/0022034509340867 58 Miron RJ, Chai J, Zheng S, Feng M, Sculean A, Zhang Y A novel method for evaluating and quantifying cell types in platelet rich fibrin and an introduction to horizontal centrifugation J Biomed Mater Res A Oct 2019;107(10):2257-2271 doi:10.1002/jbm.a.36734 59 Feter Y, Afiana N, Chandra J, Abdullah K, Shafira J, Sandra F Dental Mesenchymal Stem Cell: Its role in tooth development, types, surface antigens and differentiation potential Molecular and Cellular Biomedical Sciences 08/29 2017;1:50 doi:10.21705/mcbs.v1i2.15 60 Bernardo ME, Zaffaroni N, Novara F, et al Human bone marrow derived mesenchymal stem cells not undergo transformation after longterm in vitro culture and not exhibit telomere maintenance mechanisms Cancer Res Oct 2007;67(19):9142-9 doi:10.1158/0008-5472.Can-06-4690 61 Chen G, Yue A, Ruan Z, et al Monitoring the biology stability of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells during long-term culture in serum-free medium Cell and Tissue Banking 2014/12/01 2014;15(4):513-521 doi:10.1007/s10561-014-9420-6 62 Camacho-Fernández C, Hervás D, Rivas-Sendra A, Marín MP, SeguíSimarro JM Comparison of six different methods to calculate cell densities Plant Methods 2018/04/16 2018;14(1):30 doi:10.1186/s13007-018-0297-4 63 Wang X, Zhang Y, Choukroun J, Ghanaati S, Miron RJ Effects of an injectable platelet-rich fibrin on osteoblast behavior and bone tissue formation in comparison to platelet-rich plasma Platelets 2018/01/02 2018;29(1):4855 doi:10.1080/09537104.2017.1293807 64 Alberts B, Johnson A, Lewis J, et al Molecular Biology of the Cell Garland Science; 2014 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 65 Achille V, Mantelli M, Arrigo G, et al Cell-cycle phases and genetic profile of bone marrow-derived mesenchymal stromal cells expanded in vitro from healthy donors J Cell Biochem Jul 2011;112(7):1817-21 doi:10.1002/jcb.23100 66 Bi J, Liu Y, Liu X-M, Lei S, Chen X Platelet-rich Fibrin Improves the Osteo-/Odontogenic Differentiation of Stem Cells from Apical Papilla via the Extracellular Signal–regulated Protein Kinase Signaling Pathway Journal of Endodontics 05/01/2020;46(5):648-654 doi:10.1016/j.joen.2020.02.004 67 Zheng S, Zhang X, Zhao Q, Chai J, Zhang Y Liquid platelet-rich fibrin promotes the regenerative potential of human periodontal ligament cells Oral Diseases 2020;26(8):1755-1763 doi:10.1111/odi.13501 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC PHIẾU THU THẬP THƠNG TIN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Số hờ sơ nghiên cứu: …………………… I HÀNH CHÍNH - Họ tên (viết tắt tên) Năm sinh Giới tính: Nam - Địa (thành phố, tỉnh) - Ngày thực hiện: BẢNG CÂU HỎI PHỎNG VẤN THÔNG TIN CHUNG DÀNH CHO ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Trước hết, xin mời Anh trả lời một số câu hỏi liên quan đến sức khỏe tổng quát của Anh Anh có mắc bệnh toàn thân khơng? Nếu có, vui lịng ghi rõ mục ghi Có (1) Khơng (2) Ghi chú…………………………………………………………………………… Tiếp theo một số câu hỏi có liên quan đến việc dùng thuốc thời gian tháng gần Hiện tại, anh có dùng thuốc để điều trị bệnh thực phẩm chức không? Nếu có, vui lịng ghi tên thuốc mục ghi chú bên Có (1) Khơng (2) Ghi chú…………………………………………………………………………… Bảng câu hỏi kết thúc Xin cảm ơn Anh tham gia nghiên cứu! Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC BẢN THƠNG TIN DÀNH CHO NGƯỜI NGHIÊN CỨU VÀ CHẤP THUẬN THAM GIA NGHIÊN CỨU I THÔNG TIN VỀ NGHIÊN CỨU Tên nghiên cứu: So sánh tác động của A-PRF+ i-PRF lên khả tăng sinh di cư của tế bào gốc nhú chóp Nghiên cứu viên chính: Bác sĩ Nguyễn Hồng Sơn Đơn vị chủ trì: Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Chúng tơi kính mời anh tham gia nghiên cứu Trước định có tham gia vào nghiên cứu hay khơng, mời anh tìm hiểu thơng tin liên quan đến nghiên cứu Anh vui lòng đọc kỹ những thơng tin anh muốn có thể thảo luận với những người khác Anh có thể hỏi không rõ muốn biết thêm thông tin Anh dành thời gian suy nghĩ kỹ trước đồng ý không đồng ý tham gia vào nghiên cứu Cảm ơn anh đọc thông tin Mục đích tiến hành nghiên cứu Viêm tủy viêm quanh chóp mợt bệnh lý nha khoa thường gặp nhất Tuy nhiên, điều trị nội nha chưa trưởng thành (răng chưa đóng chóp) một thách thức bác sĩ Việc phát triển kỹ thuật tái thông mạch máu với vật liệu trám bít có tính tương hợp sinh học đem lại một số kết khả quan về mặt lâm sàng Khi kết hợp vật liệu tương hợp sinh học với giá thể sinh học tăng hiệu điều trị tiên lượng tốt Trong số giá thể sinh học, sợi huyết giàu tiểu cầu – PRF (Platelet-Rich Fibrin) nhận quan tâm nhiều nhất sản phẩm tự thân, có đặc tính sinh học ưu việt sản phẩm khác với tỉ lệ thành công lên đến 100% chứng minh qua một số nghiên cứu Hiện nay, có nhiều sản phẩm PRF với đặc tính vật lý sinh học khác Việc chọn lựa một sản phẩm tối ưu giúp bác sĩ lâm sàng có lựa Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh chọn tốt nhất cho việc điều trị Nghiên cứu nhằm đánh giá tác động loại sợi huyết giàu tiểu cầu tối ưu A-PRF+ i-PRF lên tế bào gốc nhú chóp nhằm tạo sở khoa học về mặt tế bào cho bác sĩ lâm sàng ứng dụng điều trị nội nha chưa đóng chóp Tại mời anh tham gia? Anh mời vào nghiên cứu anh nằm nhóm những tình nguyện viên mà muốn lấy mẫu máu để tham gia nghiên cứu Những đối tượng bao gồm: - Nam giới độ tuổi từ 20 đến 30 tuổi - Sức khỏe tồn thân khỏe mạnh - Khơng mắc bệnh nhiễm trùng tồn thân - Khơng sử dụng thuốc thực phẩm chức Anh có bắt ḅc phải tham gia nghiên cứu khơng? Khơng, anh có tồn qùn định tham gia hay khơng Nếu anh định tham gia vào nghiên cứu, gửi anh thông tin anh ký vào giấy tự nguyện đồng ý tham gia Kể anh ký giấy đồng ý, anh có thể từ chối khơng tham gia nữa mà khơng cần giải thích thêm Các hoạt đợng diễn sau anh đồng ý tham gia nghiên cứu? Sau đồng ý tham gia nghiên cứu trả lời phiếu thu thập thông tin, xin phép lấy máu tương đương 25mL máu, đó: - 5mL máu dùng để xét nghiệm công thức máu tổng quát để xác định sức khỏe tồn thân anh Tồn bợ chi phí xét nghiệm nghiên cứu viên chi trả - 20 mL máu dùng điều chế sợi huyết giàu tiểu cầu để thực thí nghiệm Khoa Sinh học – Cơng nghệ Sinh học Phịng thí nghiệm Kỹ nghệ mô Vật liệu Y sinh, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM Tồn bợ chi Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh phí lấy máu, điều chế nghiên cứu nghiên cứu viên chi trả, anh đóng bất kì mợt loại phí Địa điểm lấy máu Bộ môn Phẫu Thuật Miệng, Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược Thành phố Hờ Chí Minh Máu lấy bởi một điều dưỡng chuyên nghiệp tuyệt đối đảm bảo vệ sinh vô trùng Các nguy bất lợi anh tham gia nghiên cứu? Việc lấy một lượng máu nhỏ (25 mL) hồn tồn khơng ảnh hưởng đến sức khỏe tồn thân anh Lượng máu chúng tơi sử dụng nghiên cứu 1/10 lượng máu tối thiểu mà một người khoẻ mạnh có thể hiến tặng tháng Ngoài ra, việc hiến máu phù hợp chứng minh đem lại lợi ích cho người hiến về mặt sức khoẻ thể chất tinh thần (Nguồn: http://vienhuyethoc.vn/loi-ichcua-hien-mau/) Khi lấy máu đảm bảo vệ sinh vô trùng tuyệt đối anh một điều dưỡng chuyên nghiệp thực lấy máu Ngoài khơng còn nguy khác suốt q trình nghiên cứu Các lợi ích có thể có tham gia vào nghiên cứu? Khi tham gia vào nghiên cứu này, anh khơng hưởng lợi ích trực tiếp anh đóng góp vào việc nghiên cứu hiệu loại sợi huyết giàu tiểu cầu lên tăng sinh di cư tế bào gốc nhú chóp răng, góp phần làm sở cho việc ứng dụng PRF điều trị nội nha cho những chưa đóng chóp, mang lại nhiều lợi ích cho những bệnh nhân sau Việc anh tham gia nghiên cứu được giữ bí mật? Thơng tin cá nhân kết xét nghiệm máu anh bảo mật tuyệt đối sử dụng cho mục đích nghiên cứu Tên anh viết tắt nghiên cứu Ai người chủ trì tài trợ cho nghiên cứu? Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Nghiên cứu chủ trì bởi Đại học Y Dược Thành phố Hờ Chí Minh nghiên cứu viên bác sĩ Nguyễn Hồng Sơn Nghiên cứu không nhận bất kì tài trợ Người cần liên hệ để biết thông tin chi tiết? Nghiên cứu viên: Bác sĩ Nguyễn Hồng Sơn Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược Tp Hờ Chí Minh Địa chỉ: 652 Nguyễn Trãi, phường 11, Quận 5, Tp Hờ Chí Minh Điện thoại: 0939866098 Email: nhson.chrhm20@ump.edu.vn II CHẤP THUẬN THAM GIA NGHIÊN CỨU Chữ ký của người tham gia: Tôi đọc hiểu thông tin đây, có hội xem xét đặt câu hỏi về thông tin liên quan đến nội dung nghiên cứu Tôi nói chuyện trực tiếp với nghiên cứu viên trả lời thỏa đáng tất câu hỏi Tôi nhận một Bản Thông tin cho đối tượng nghiên cứu chấp thuận tham gia nghiên cứu Tôi tự nguyện đồng ý tham gia Họ tên _ Chữ ký _ Ngày tháng năm _ Chữ ký của Nghiên cứu viên/người lấy chấp thuận: Tôi, người ký tên đây, xác nhận bệnh nhân/người tình nguyện tham gia nghiên cứu ký chấp thuận đọc tồn bợ thơng tin đây, thơng tin Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh giải thích cặn kẽ cho Ông/Bà Ông/Bà hiểu rõ chất, nguy lợi ích việc Ơng/Bà tham gia vào nghiên cứu Họ tên _ Chữ ký _ Ngày tháng năm _ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC DANH SÁCH ĐỐI TƯỢNG THAM GIA NGHIÊN CỨU Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM MÁU ĐỐI TƯỢNG THAM GIA NGHIÊN CỨU Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn