So sánh ảnh hưởng của xi măng trám bít ống tủy nền calcium silicate và nền nhựa epoxy lên tế bào gốc nhú chóp răng nghiên cứu in vitro

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN CAO HOÀI LINH SO SÁNH ẢNH HƯỞNG CỦA XI MĂNG TRÁM BÍT ỐNG TUỶ NỀN CALCIUM SILICATE VÀ NỀN NHỰA EPOXY LÊN TẾ BÀO GỐC NHÚ CHÓP RĂNG - NGHIÊN CỨU IN VITRO LUẬN VĂN THẠC SĨ RĂNG – HÀM – MẶT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN CAO HOÀI LINH SO SÁNH ẢNH HƯỞNG CỦA XI MĂNG TRÁM BÍT ỐNG TUỶ NỀN CALCIUM SILICATE VÀ NỀN NHỰA EPOXY LÊN TẾ BÀO GỐC NHÚ CHÓP RĂNG - NGHIÊN CỨU IN VITRO NGÀNH: RĂNG – HÀM – MẶT MÃ SỐ: 8720501 LUẬN VĂN THẠC SĨ RĂNG – HÀM – MẶT NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS.NGÔ THỊ QUỲNH LAN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ii DANH MỤC ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ VIỆT – ANH iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC BIỂU ĐỒ v DANH MỤC HÌNH vi MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan xi măng trám bít ống tủy 1.2 Các loại xi măng trám bít ống tuỷ dùng nghiên cứu 1.3 Tổng quan phương pháp đánh giá tính tương hợp sinh học in vitro vật liệu 1.4 Sơ lược tình hình nghiên cứu tính tương hợp sinh học xi măng trám bít ống tuỷ calcium silicate trộn sẵn xi măng trám bít ống tuỷ nhựa epoxy sử dụng nghiên cứu 13 1.5 Tế bào gốc nhú chóp 18 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Thiết kế nghiên cứu 21 2.2 Vật liệu dòng tế bào nghiên cứu 21 2.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 22 2.4 Hoá chất phương tiện nghiên cứu 23 2.5 Phương pháp nghiên cứu 24 2.6 Biến số nghiên cứu 34 2.7 Thu thập xử lý số liệu 35 2.8 Kiểm soát sai lệch 35 2.9 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 35 Chương KẾT QUẢ 37 3.1 Độc tính dịch chiết loại xi măng trám bít ống tuỷ lên tế bào gốc nhú chóp thử nghiệm Alamar Blue 37 3.2 Ảnh hưởng loại dịch chiết xi măng trám bít ống tuỷ lên chết theo chương trình tế bào gốc nhú chóp 41 3.3 Ảnh hưởng dịch chiết loại xi măng trám bít ống tuỷ lên di cư tế bào gốc nhú chóp 43 Chương BÀN LUẬN 53 4.1 Đặc điểm tế bào nhú chóp dùng nghiên cứu 53 4.2 Các vật liệu trám bít ống tuỷ phương pháp chuẩn bị vật liệu sử dụng nghiên cứu 53 4.3 Ảnh hưởng xi măng trám bít ống tuỷ lên khả sống tế bào gốc nhú chóp 55 4.4 Ảnh hưởng vật liệu lên chết theo chương trình tế bào gốc nhú chóp 62 4.5 Ảnh hưởng vật liệu trám bít ống tuỷ lên khả di cư tế bào nhú chóp 64 4.6 Ý nghĩa ứng dụng đề tài 69 4.7 Hạn chế đề tài 70 KẾT LUẬN 71 KIẾN NGHỊ 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 PHỤ LỤC LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả Nguyễn Cao Hồi Linh DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DMEM/F12 Dulbecco's Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture F-12 EDTA Ethylene diaminetetraacetid acid FBS Fetal bovine serum FU Fluoresence unit KHV Kính hiển vi MTT 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide NBT Nitroblue tetrazolium PBS Phosphate buffer saline qPCR Quantitative polymerase chain reaction SCAPs Stem cells from the apical papilla SEM Scanning Electron Microscope TBOT Trám bít ống tuỷ XTT 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenly)-5-[(phenylamino) carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide i DANH MỤC ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ VIỆT – ANH Chứng âm Negative control Chứng dương Positive control Độc tính in vitro In vitro cytotoxicity Huyết thai bị Fetal bovine serum Kính hiển vi điện tử qt Scanning Electron Microscope (SEM) Mật độ quang Optical density (OD) Môi trường tiêu chuẩn Complete medium PCR định lượng Quantitative polymerase chain reaction Tăng sinh Proliferation Tế bào sống Viable cell Tế bào gốc nhú chóp Stem cells from the apical papilla (SCAPs) Tế bào gốc trung mô Mesenchymal stem cell Thử nghiệm dịch chiết Text on extracts Tính tương hợp sinh học Biocompatibility Xi măng trám bít ống tuỷ Root canal sealer DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần cấu tạo loại xi măng TBOT dùng nghiên cứu Bảng 1.2 Đặc tính học ba loại xi măng TBOT sử dụng nghiên cứu Bảng 1.3 Cơ sở khoa học, ưu điểm nhược điểm ba phương pháp thử nghiệm vật liệu Bảng 1.4 Tổng kết thử nghiệm sử dụng để đánh giá tính tương hợp sinh học in vitro xi măng TBOT 12 Bảng 1.5 Tóm tắt nghiên cứu đánh giá tính chất sinh học xi măng TBOT calcium silicate trộn sẵn 14 Bảng 1.6 Tóm tắt số nghiên cứu đánh giá tính chất sinh học xi măng TBOT nhựa epoxy 15 Bảng 2.1 Các xi măng TBOT sử dụng nghiên cứu 22 Bảng 2.2 Dụng cụ sử dụng thực thí nghiệm 23 Bảng 2.3 Thiết bị sử dụng thí nghiệm 24 Bảng 2.4 Các biến số phụ thuộc nghiên cứu 34 Bảng 3.1 Phần trăm tế bào sống, phần trăm tế bào chết theo chương trình sớm, phần trăm tế bào chết theo chương trình muộn phần trăm tế bào hoại tử SCAPs sau tiếp xúc với dịch chiết xi măng TBOT calcium silicate (Nhóm 1), xi măng TBOT nhựa epoxy (Nhóm 2) nhóm chứng 41 Bảng 4.1: So sánh quy trình thực thử nghiệm MTT thử nghiệm Alamar Blue 56 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phần trăm tế bào sống sau thử nghiệm Alamar Blue thời điểm 24 đồng độ dịch chiết vật liệu khác 37 Biểu đồ 3.2 Phần trăm tế bào sống sau thử nghiệm Alamar Blue thời điểm 48 đồng độ dịch chiết vật liệu khác 38 Biểu đồ 3.3 Phần trăm tế bào sống sau thử nghiệm Alamar Blue thời điểm 72 đồng độ dịch chiết vật liệu khác 39 Biểu đồ 3.4 So sánh phần trăm tế bào sống, phần trăm tế bào chết theo chương trình sớm, phần trăm tế bào chết theo chương trình muộn phần trăm tế bào hoại tử SCAPs sau tiếp xúc với dịch chiết xi măng TBOT calcium silicate trộn sẵn, xi măng TBOT nhựa epoxy nhóm chứng 24 42 Biểu đồ 3.5 Phần trăm diện tích vùng trống SCAPs nhóm chứng thời điểm nghiên cứu 48 Biểu đồ 3.6 Phần trăm diện tích vùng trống SCAPs thời điểm nghiên cứu nhóm dịch chiết xi măng TBOT calcium silicate trộn sẵn 48 Biểu đồ 3.7 Phần trăm diện tích vùng trống SCAPs thời điểm nghiên cứu nhóm dịch chiết xi măng TBOT nhựa epoxy 50 Biểu đồ 3.8 So sánh phần trăm tế bào sống, phần trăm tế bào chết theo chương trình sớm, phần trăm tế bào chết theo chương trình muộn phần trăm tế bào hoại tử SCAPs sau tiếp xúc với dịch chiết xi măng TBOT calcium silicate trộn sẵn, xi măng TBOT nhựa epoxy nhóm chứng thời điểm nghiên cứu 51 i DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Phản ứng cộng diepoxide (một diglycidyl ether bisphenol-A), với oligomer có đầu tận amine (1- aminoadamantane N, N'-dibenzyl-5oxanonandiamine-1,9) tạo polymer có trọng lượng phân tử cao Hình 1.2 Phản ứng đông xi măng TBOT calcium silicate trộn sẵn Hình 2.1 Hình ảnh hai loại xi măng TBOT sử dụng nghiên cứu 22 Hình 2.2 Cơ chế thử nghiệm Alamar Blue 26 Hình 2.3 Cơ chế thử nghiệm chết theo chương trình tế bào sử dụng kit Annexin V-FITC 29 Hình 2.4 Tóm tắt quy trình nghiên cứu 33 Hình 3.1 SCAPs ni cấy đĩa giếng, quan sát vật kính 4x 44 Hình 3.2 Sự di cư SCAPs nhóm chứng, dịch chiết xi măng TBOT calcium silicate trộn sẵn nồng độ dịch chiết xi măng TBOT nhựa epoxy nồng độ thời điểm nghiên cứu 45 Hình 3.3 Sự di cư SCAPs nhóm chứng, dịch chiết xi măng TBOT calcium silicate trộn sẵn nồng độ 1:2 dịch chiết xi măng TBOT nhựa epoxy nồng độ 1:2 thời điểm nghiên cứu 46 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC Tên thương mại Hãng sản xuất loại xi măng TBOT sử dụng nghiên cứu Loại xi măng Xi măng TBOT calcium silicate trộn sẵn Xi măng TBOT nhựa epoxy Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Tên thương mại Ceraseal AH Plus Hãng sản xuất Meta Biomed (Hàn Quốc) Densply (Đức) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC Hình minh họa phân tích kết thử nghiệm tạo đường rạch mô tổn thương phần mềm phân tích hình ảnh Image-Analysis J.145S A B C A Hình chụp kính hiển vi B Hình phần mềm C Số liệu từ phần mềm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC Hình minh hoạ phân tích kết thử nghiệm Flow Cytometry xác định tỷ lệ phần trăm tế bào chết theo chương trình Đọc kết quả: - Tế bào chết theo chương trình: 38,2% Tế bào chết theo chương trình sớm: 11,8% Tế bào chết theo chương trình muộn: 26,5% Tế bào sống: 57,7% Tế bào hoại tử: 3,93% Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn