Giáo trình hóa sinh hóa sinh chuyển hóa các chất

TR B YT NG Đ I H C Y T CƠNG C NG H P GIÁO TRÌNH HĨA SINH HĨA SINH CHUY N HÓA CÁC CH T Tài liệu đào tạo Cử nhân xét nghiệm y học dự phòng U H HÀ N I 2015 GIÁO TRÌNH HĨA SINH HÓA SINH CHUY N HÓA CÁC CH T H P Chủ biên: PGS.TS Ph m Vĕn Trân TS Bùi Th Ng c Hà U Biên soạn: PGS.TS Ph m Vĕn Trân H ThS Lê Thanh Hà TS Bùi Th Ng c Hà Thư kí biên soạn: CN Nguy n Ph ng Thoa M CL C L I NÓI Đ U 10 H C PH N I LÝ THUY T 11 BÀI 1: CHUY N HÓA GLUCID VÀ B NH ĐÁI THÁO Đ NG 12 BÀI 1: CHUY N HÓA GLUCID VÀ B NH ĐÁI THÁO Đ NG 12 1.CHUY N HÓA GLUCID 12 1.1 Tiêu hoá, h p thu v n chuy n glucid 12 1.2 Chuy n hoá glucose 13 1.3 Chuy n hoá glycogen 24 2.BÊNH ĐÁI THÁO Đ NG 25 2.1 Ngu n g c đ ng máu 25 2.2 N ng đ đ ng máu 25 2.3 Đi u hoà đ ng máu 25 2.4 Tiêu chu n ch n đoán b nh ti u đ ng 27 2.5 Các xét nghi m hóa sinh s d ng b nh ti u đ ng 28 TÀI LI U THAM KH O 29 BÀI 2: CHUY N HÓA LIPID VÀ B NH X V A Đ NG M CH 30 1.CHUY N HOÁ LIPID 30 1.1 Tiêu hóa, h p thu, v n chuy n lipid 30 1.2 Chuy n hoá acid béo 32 1.3 Chuy n hóa triglycerid 40 1.4 Chuy n hóa c a glycerophospholipid 42 1.5 Chuy n hóa cholesterol 43 1.6 Chuy n hóa lipid t ch c m 46 1.7Các d ng v n chuy n lipid máu 47 M T S B NH LÝ LIÊN QUAN Đ N R I LO N CHUY N HÓA LIPID 48 2.1 M t s b nh lý th ng gặp liên quan đ n r i lo n chuy n hóa lipid 48 2.2 B nh x v a đ ng m ch 49 CÂU H I L NG GIÁ 51 BÀI 3: CHUY N HÓA PROTID VÀ ACID MIN 52 CHUY N HÓA ACID AMIN 52 1.1 Thoái bi n chung c a acid amin 52 1.2 Thoái bi n riêng c a acid amin 59 1.3 Sinh t ng h p acid amin 69 SINH T NG H P PROTEIN VÀ MÃ DI TRUY N 72 2.1 Các thành ph n tham gia t ng h p protein 73 2.2 Các giai đo n sinh t ng h p protein 73 H P U H 2.3 G i protein t i đích 79 2.4 Thối protein hóa b i h th ng tiêu protein t bào 80 TÀI LI U THAM KH O 81 BÀI 4: CHUY N HÓA HEMOGLOBIN VÀ CÁC B NH DO R I LO N CHUY N HÓA HEMOGLOBIN 82 CHUY N HÓA C A HEMOGLOBIN 82 1.1.Thoái bi n c a hemoglobin 82 1.2 T ng h p hemoglobin 85 B NH DO R I LO N CHUY N HÓA HEMOGLOBIN 88 2.1 B nh r i lo n chuy n hóa hem 88 2.2 B nh thay đ i c u trúc chu i globin (Hemoglobinopathies) 91 TÀI LI U THAM KH O 92 CÂU H I L NG GIÁ 92 BÀI 5: CHUY N HÓA N C VÀ CÁC MU I VÔ C 93 Đ I C NG 93 VAI TRÒ C A N C VÀ MU I VƠ C TRONG C TH 93 2.1 Vai trị c a n c 93 2.2 Vai trò c a mu i vô c 93 NHU C U V N C VÀ MU I TRONG C TH 94 HÀM L NG VÀ S PHÂN B N C, MU I TRONG C TH 94 4.1 Hàm l ng s phân b c a n c 94 4.2 Hàm l ng s phân b c a mu i 96 H P THU VÀ ĐÀO TH I N C VÀ MU I 97 5.1 H p thu đào th i n c (bilan c a n c) 97 5.2 H p thu đào th i mu i 98 S V N CHUY N N C VÀ MU I TRONG C TH 98 6.1 S v n chuy n n c mu i gi a huy t t ng d ch gian bào 99 6.2 Trao đ i n c, mu i gi a d ch gian bào d ch t bào 100 ĐI U HÒA TRAO Đ I N C, MU I TRONG C TH 102 7.1 Vai trò c a th n kinh 102 7.2 Vai trò c a hormon 103 R I LO N TRAO Đ I N C, MU I 104 8.1 Tình tr ng n c mu i 104 8.2 Tình tr ng m t n c mu i 105 8.3 Các r i lo n trao đ i n c, mu i h n h p 105 TÀI LI U THAM KH O 107 BÀI 6: CÂN B NG ACID-BAZ VÀ CÁC TR NG THÁI VÀ R I LO N CÂN B NG ACID-BAZ 108 Đ I C NG 108 CÁC C CH N Đ NH CÂN B NG ACID-BAZ 109 H P U H 2.1 C ch ho t đ ng c a h đ m 109 2.2 Ho t đ ng sinh lý c a ph i tham gia u hoà cân b ng acid-baz 112 2.3 Ho t đ ng sinh lý c a th n tham gia u hoà cân b ng acid-baz 112 CÁC THƠNG S CHÍNH ĐÁNH GIÁ TR NG THÁI CÂN B NG ACID-BAZ 113 3.1 pH máu 113 3.2 pCO2 114 3.3 Bicarbonat 114 3.4 Bicarbonat th c (Actual Bicarbonat -AB) 114 3.5 Bicarbonat chu n (Standard bicarbonat -SB) 114 3.6 CO2 toàn ph n (Total CO2 = tCO2) 115 3.7 Baz đ m (Bufer base -BB) 115 3.8 Baz d (Base excess -BE) 115 CÁC R I LO N CÂN B NG ACID-BAZ 115 4.1 Gi n đ Davenport 116 4.2 Các r i lo n cân b ng acid-baz 116 TÀI LI U THAM KH O 121 CÂU H I L NG GIÁ 121 BÀI 7: CHUY N HOÁ XENOBIOTIC 122 QUÁ TRÌNH BI N Đ I CHUNG C A XENOBIOTIC 122 1.1 Gi i phóng (Liberation kí hi u L) 122 1.2 H p thu (Absorption kí hi u A) 122 1.3 Phân b 123 1.4 Chuy n hoá (Metabolism = M) 124 1.5 Th i tr (excretion = E) xenobiotic 125 CHUY N HOÁ CÁC XENOBIOTIC TRONG T BÀO 125 2.1 Enzym chuy n hoá xenobiotic 125 2.2 Thành ph n c u t o c a h th ng enzym chuy n hóa xenobiotic 126 2.3 Chu trình ph n ng Cyt.P450 h th ng MMFO 128 CÁC PH N NG TRONG CHUY N HOÁ XENOBIOTIC 129 3.1 Các ph n ng giai đo n (ph n ng không t ng h p) 129 3.2 Các ph n ng giai đo n (các ph n ng liên h p hay t ng h p) 130 Hi n t ng c m ng thu c 130 TÀI LI U THAM KH O 133 CÂU H I L NG GIÁ 133 BÀI 8: HÓA SINH DINH D NG 134 NHÓM CH T DINH D NG ĐA L NG CUNG C P NĔNG L NG 135 1.1 Ch t b t đ ng (carbohydrate, glucid) 135 H P U H 1.2 Ch t béo (lipid) 137 1.3 Ch t đ m (protid) 139 NHÓM CH T DINH D NG VI L NG 141 2.1 Vitamin 141 2.2 Ch t khoáng vi l ng 145 NHÓM CH T DINH D NG ĐA L NG NH NG KHÔNG CUNG C P NĔNG L NG 145 3.1 Ch t khoáng đa l ng 145 3.2 Ch t x 146 3.3 N c 146 TÀI LI U THAM KH O 147 CÂU H I L NG GIÁ 147 H C PH N II TH C HÀNH 148 BÀI 1: K THU T C B N TRONG XÉT NGHI M 149 HÓA SINH LÂM SÀNG 149 S D NG M T S D NG C TRONG XÉT NGHI M HÓA SINH 149 1.1 D ng c đong th tích 149 2.2 Máy ly tâm 150 L Y VÀ B O QU N B NH PH M XÉT NGHI M HÓA SINH 151 2.1 Máu 151 2.2 N c ti u 153 2.3 Các b nh ph m khác 155 BÀI 2: Đ NH L NG GLUCOSE VÀ XÉT NGHI M HĨA SINH CH N ĐỐN TI U Đ NG (PH N 1) 156 Đ NH L NG Đ NG MÁU 156 1.1 Ph ng pháp Folin-Wu 156 1.2 Ph ng pháp enzym quang h c 158 1.3 Giá tr tham kh o 159 1.4 Ý nghĩa lâm sàng 159 PHÁT HI N GLUCOSE TRONG N C TI U (GLUCOSE NI U) 160 2.1 Phát hi n glucose n c ti u b ng thu c th Benedict 160 2.2 Phát hi n glucose n c ti u b ng que th 161 2.3 Ý nghĩa lâm sàng 162 ĐO T TR NG, pH N C TI U B NG QUE TH 163 3.1 Nguyên lý 163 3.2 Ch t th thu c th 163 3.3 Ti n hành 163 3.4 Đ c k t qu 163 3.5 Giá tr tham kh o 163 H P U H 3.6 Ý nghĩa lâm sàng 164 BÀI 3: Đ NH L NG GLUCOSE VÀ XÉT NGHI M HÓA SINH CH N ĐOÁN TI U Đ NG (PH N 2) 165 NGHI M PHÁP TĔNG Đ NG MÁU THEO Đ NG U NG 165 1.1 Gi i thi u 165 1.2 Chu n b b nh nhân 165 1.3 Ti n hành 166 1.4 Đánh giá k t qu 166 1.5 Ý nghĩa lâm sàng 167 PHÁT HI N CETON NI U 167 2.1 Phát hi n ceton ni u b ng thu c th natrinitroprussiat 167 2.2 Phát hi n ceton ni u b ng que th 168 2.3 Ý nghĩa lâm sàng 169 BÀI 4: Đ NH L NG LIPID VÀ XÉT NGHI M TRONG B NH LÝ X V A Đ NG M CH I 170 Đ NH L NG TRIGLYCERID HUY T THANH THEO PH NG PHÁP ENZYM ĐO MÀU 170 1.1 Nguyên lý 170 1.2 Ch t th thu c th 170 1.3 Ti n hành 171 1.4 Giá tr tham kh o 171 1.5 Ý nghĩa lâm sàng 172 Đ NH L NG CHOLESTEROL TOÀN PH N TRONG HUY T THANH THEO PH NG PHÁP ENZYM ĐO MÀU 172 2.1 Nguyên lý 172 2.2 Ch t th thu c th 172 2.3 Ti n hành 173 2.4 Giá tr tham kh o 173 2.5 Ý nghĩa lâm sàng 174 BÀI 5: Đ NH L NG LIPID VÀ XÉT NGHI M TRONG B NH LÝ X V A Đ NG M CH II 175 Đ NH L NG HDL-C HUY T T NG THEO PH NG PHÁP ENZYM ĐO MÀU 175 1.1 Nguyên lý 175 1.2 Ch t th thu c th 176 1.3 Ti n hành 176 1.4 Giá tr tham kh o 177 1.5 Ý nghĩa lâm sàng 177 Đ NH L NG LDL-C HUY T T NG THEO PH NG PHÁP ENZYM ĐO MÀU 177 H P U H 2.1 Nguyên lý 177 2.2 Ch t th thu c th 178 2.3 Ti n hành 179 2.4 Giá tr tham kh o 179 2.5 Ý nghĩa lâm sàng 180 BÀI 6: K THU T Đ NH L NG PROTEIN I 181 Đ NH L NG PROTEIN TOÀN PH N TRONG MÁU THEO PH NG PHÁP GORNALL 181 1.1 Nguyên lý 181 1.2 Ch t th thu c th 181 1.3 Ti n hành 181 1.4 Ý nghĩa 182 1.5 Cách pha thu c th 183 Đ NH L NG PROTEIN N C TI U 183 2.1 Ph ng pháp đo đ đ c (theo Kingsburry) 183 2.2 Ph ng pháp đo màu 185 2.3 Ý nghĩa lâm sàng 186 BÀI 7: K THU T Đ NH L NG PROTEIN II 187 Đ NH L NG FIBRINOGEN TRONG MÁU (K thu t Natelson- dùng ph n ng biure) 187 1.1 Nguyên lý 187 1.2 Ch t th thu c th 187 1.3 Ti n hành 187 1.4 Nh n đ nh k t qu 188 Đ NH L NG ALBUMIN TRONG MÁU 189 2.1 Nguyên lý 189 2.2 Ch t th thu c th 189 2.3 Ti n hành 189 2.4 Ý nghĩa lâm sàng 190 BÀI 8: K THU T PHÁT HI N S C T M T VÀ Đ NH L NG ACID URIC TRONG N C TI U 191 PHÁT HI N S C T M T (BILIRUBIN) TRONG N C TI U (th nghi m Harrison) 191 1.1 Nguyên lý 191 1.2 Ch t th thu c th 191 1.3 Ti n hành 191 1.4 Nh n đ nh k t qu 191 1.5 ng d ng lâm sàng 191 1.6 Cách pha thu c th 192 Đ NH L NG ACID URIC TRONG N C TI U 192 H P U H 2.1 Nguyên lý 192 2.2 Ch t th thu c th 192 2.3 Ti n hành 193 2.4 Giá tr tham kh o 193 2.5 Ý nghĩa 194 TÀI LI U THAM KH O 195 H P U H L I NĨI Đ U Hóa sinh chuy n hóa ch t m t mơn h c đóng m t vai trị quan tr ng ch ng trình đào t o c nhân xét nghi m b i cung c p ki n th c n n t ng v trình chuy n hóa ch t m t s b nh lý liên quan đ n trình chuy n hóa ch t c th Mơn h c cung c p c s n n t ng cho xét nghi m hóa sinh cho mơn ti p theo ch ng trình đào t o c nhân xét ngh m bao g m: xét nghi m hóa sinh ch c nĕng c quan, xét nghi m s c kh e môi tr ngs c kh e b nh ngh nghi p… Mơn h c đặt n n móng đ sinh viên có th nh n bi t đ c q trình chuy n hóa ch t m t s b nh lý liên quan đ n trình chuy n hóa ch t c th môn h c tiên quy t cho môn h c: xét nghi m Hóa sinh ch c nĕng c quan, xét nghi m đ c ch t h c, xét nghi m s c kh e môi tr ng – ngh nghi p ch ng trình đào t o c nhân xét nghi m YHDP H P Khi k t thúc môn h c, sinh viên đ c cung c p ki n th c c b n v chuy n hóa ch t m t s b nh lý liên quan đ n q trình chuy n hóa ch t c th ; có kh nĕng ti n hành m t s xét nghi m ki m tra trình chuy n hóa glucid, lipid, hemoglobin… Sách "Hóa sinh chuy n hóa ch t" s d ng cho sinh viên c nhân xét nghi m đ c xu t b n l n bao g m ch ng Trong ph n chuy n hóa ch t chúng tơi trình bày chuy n hóa r i lo n chuy n hóa c a h p ch t c b n c a s s ng nh chuy n hóa glucid, lipid, protid hemoglobin Ph n cân b ng n i môi đ c p đ n trao đ i n c mu i cân b ng acid-base Chúng tơi trình bày chuy n hóa xenobiotic hóa sinh dinh d ng Cu i m i ch ng có câu h i ơn t p đ sinh viên d dàng t ki m tra ki n th c U H Hy v ng cu n sách đáp ng đ c nhu c u h c t p v hóa sinh c a sinh viên c nhân xét nghi m nh nhu c u tham kh o tài li u c a đ c gi mu n tìm hi u v Hóa sinh y h c Mặc dù đ c chuyên gia chuyên ngành Hóa sinh y h c biên so n công phu nh ng không th tránh đ c nh ng sai sót, chúng tơi r t mong nh n đ c nh ng nh n xét góp ý c a b n đ c đ cu n sách ngày đ c hoàn thi n Thay mặt tác giả PGS TS Ph m Vĕn Trân 10 BÀI 6: K THU T Đ NH L NG PROTEIN I M c tiêu h c: Sau kết thúc học sinh viên - Trình bày đ c nguyên lý ý nghĩa xét nghi m đ nh l ph n máu n c ti u - Làm đ c đánh giá đ máu n c ti u c k t qu xét nghi m đ nh l ng protein toàn ng protein toàn ph n Đ NH L NG PROTEIN TOÀN PH N TRONG MÁU THEO PH PHÁP GORNALL NG 1.1 Nguyên lý Các liên k t peptid phân t protein k t h p v i ion Cu++ môi tr ng ki m t o thành ph c h p màu xanh tím C ng đ màu xanh t l v i n ng đ protein (s l ng liên k t peptid) có huy t Đo m t đ quang h c so v i chu n tính đ c k t qu Ph n ng x y nh sau: OH Liên k t peptid/protein + H P - U Đ nh y: xét nghi m xác Ph c h p xanh tím tớm n ng đ protein t – 120 g/L 1.2 Ch t th thu c th - Huy t thanh, huy t t ng, d ch màng b ng, d ch màng ph i… - N c c t - Dung d ch protein chu n (Cs =60 g/l) - Thu c th Gornall Kali natri tartate thu c th Gornall có vai trò ngĕn c n s k t t a c a đ ng hydroxid đ ng th i kali iodua ngĕn c n ph n ng t kh c a ion đ ng H 1.3 Ti n hành Cho vào ng nghi m dung tích 10 ml: B ng 9: S đ ph n ng đ nh l ng protein toàn ph n b ng ph ng pháp Gornall Thu c th ng tr ng (B) ng chu n (S) ng th (T) N cc t 20 µl ml Dung d ch protein chu n 20 µl Huy t 0 20 µl Thu c th Gornall ml ml ml 181 L c đ u Đ yên nhi t đ phòng 10 phút Đo m t đ quang h c b c sóng 530 nm Đ i chi u v i ng tr ng đ tính đ c m t đ quang h c th c c a ph c h p màu xanh tím t o ng chu n (AS) ng th (AT) N ng đ protein ng th (CT) đ c tính theo cơng th c: AT - AB CT =  x CS (g/l) AS - AB Trong đ y CS = 60 g/l 1.4 Ý nghĩa Protein toàn ph n huy t đ c t ng h p ch y u gan, t bào máu, h ch lympho, lách t y x ng Bình th ng, n ng đ protein tồn ph n huy t 60 - 80 g/L Khi b b nh, n ng đ protein toàn ph n nh thành ph n protein có th thay đ i Trong lâm sàng s gi m n ng đ protein huy t đ c quan tâm h n - Gi m protein huy t th ng gặp: + Do gi m cung c p: Gặp tr ng h p ch đ ĕn thi u protein, suy dinh d ng, b nh Kwashiorkor tiêu hoá h p thu gặp m t s b nh đ ng tiêu hoá nh b nh spru (r i lo n tiêu hóa, h p thu protein), b nh Crohn’s (viêm đ i tràng t mi n), thi u h t enzym tiêu hoá, thi u h t h th ng v n chuy n acid amin, + Do gi m t ng h p: Ch y u gặp b nh gan nh x gan, viêm gan gan t ng h p 100% albumin, 80% globulin huy t + Do m t protein: B nh th n: Đi n hình h i ch ng th n h , đào th i nhi u protein qua n c ti u N ng đ protein m u gi m d n đ n gi m áp l c keo lịng m ch gây phù Ngồi cịn gặp viêm c u th n m n, suy th n B nh b ng nặng: M t máu huy t t ng qua v t b ng Các tr ng h p ch y máu, m t máu nói chung + Do dùng thu c: Thu c gây gi m protein huy t bao g m estrogen thu c tránh thai đ ng u ng - Tĕng protein huy t thanh: Ít gặp Tĕn t ng đ i gặp tr ng h p máu cô m t n c, m t n gi i nặng H P U H 182 Tĕng t đ i gặp tr ng h p tĕng t ng h p lo i protein b t th ng đó, ví d b nh đa u tu x ng xu t hi n protein Bence-Jones (protein nhi t tan) làm cho protein máu tĕng cao, có th t i 160 g/L Garo lâu l y máu có th gây tĕng nhẹ protein M t s thu c có th gây tĕng protein tồn ph n huy t thanh, VD steroids, androgens, corticosteroids, dextran, hóc mơn sinh tr ng, insulin, phenazopyridine progesterone 1.5 Cách pha thu c th - Thu c th Gornall: CuSO4.5H2O 1,5 g Na,K-tartrat 6,0 g NaOH 30 g (hoặc 42 ml NaOH bão hòa) KI: 1,0 g N cc tv ađ 1000 ml B o qu n chai màu nâu, tránh ánh sáng Đ NH L 2.1 Ph NG PROTEIN N H P C TI U ng pháp đo đ đ c (theo Kingsburry) 2.1.1 Nguyên lý K t t a protein b ng acid sulphosalicylic 3% Đo đ đ c tính k t qu theo dung d ch protein chu n U 2.1.2 Ch t th thu c th - D.d sulphosalicylic 3% - D.d protein chu n 0,3 g/l - N c ti u 24 gi : L y n c ti u 24 gi , l c l y 5-10 ml đ làm xét nghi m K t qu xét nghi m máu th ng n ng đ ch t Nh ng k t qu đ nh l ng n c ti u th ng tính s l ng đ c đào th i 24 gi Đó ch t l ng n c ti u th ng không đ ng đ u t i th i m ngày Đ đánh giá xác tình tr ng b nh lý, nên tính s l ng đào th i 24 gi Do ph i đo th tích n c ti u 24 gi Cách l y n c ti u 24 gi : B c 1: Sau ng d y, ti u h t vào b n v sinh mà không l y m u n c ti u th i m B c 2: Thu th p toàn b l ng n c ti u th i gian l i c a ngày hơm bu i t i, gom vào bình đ ng s ch Có th cho kho ng 10 – 20 ml toluen đ b o qu n H 183 B c 3: Đúng 24 gi sau B vào bình đ ng Đo th tích c 1, thu th p m u n c ti u cu i đ d n 2.1.3 Ti n hành Cho vào ng nghi m nh : B ng 11: S đ ph n ng đ nh l ng n ng đ protein n c ti u theo đ đ c Ch t li u ng tr ng (B) ng chu n (S) ng th (T) D.d sulphosalicylic 3% ml ml ml N cc t 0,5 ml D.d protein chu n 0,5 ml N c ti u 24 gi 0,5 ml Tr n đ u Đ yên 10 phút Đo đ h p th quang b c sóng 590 nm, c a ng tr ng, ng chu n c a ng th N ng đ protein đ c tính theo cơng th c: H P AT - AB CT =  x CS AS - AB (g/l) L ng protein th i n c ti u 24 gi = CT x V (g/24h) Trong đó: AB: đ h p th quang c a ng tr ng AS: đ h p th quang c a ng chu n AT: đ h p th quang c a ng th CS: n ng đ dung d ch chu n (0,2 g/l) CT: n ng đ protein m u th n c ti u (g/l) V: th tích n c ti u 24 gi (lít) U H 2.1.4 Giá tr tham kh o Protein n c ti u: 0,024- 0,141 g/24 gi Trong lâm sàng có th cho phép t i 0,3 g/24 gi 2.1.5 Cách pha thu c th - Dung d ch sulphosalicylic 3%: Hoà tan 30 g acid sulphosalicylic hồn thành lít bình đ nh m c b ng n c c t - Dung d ch protein chu n 0,3g/l: Pha t dung d ch protein có n ng đ bi t 184 2.2 Ph ng pháp đo màu Ph ng pháp đo màu xác h n ph ng pháp đo đ đ c Tuy nhiên, n ng đ protein n c ti u (cũng nh protein d ch não t y) th p h n nhi u so v i n ng đ protein huy t nên không dùng thu c th Gornall đ c Hi n có m t s thu c th đo màu đ đ nh y đ đ nh l ng protein n c ti u d ch não t y Ví d nh thu c th Coomassie 2.2.1 Nguyên lý Protein k t h p v i thu c th Coomassie môi tr ng acid phosphoric t o thành s n ph m có màu xanh C ng đ màu t l thu n v i n ng đ protein Đo màu b c sóng 578 nm, song song ti n hành v i m u chu n đ đ nh l ng 2.2.2 Ch t th thu c th - N c ti u 24 gi - Dung d ch chu n protein: 0,2 g/l (200 mg/l) - Thu c th : sẵn dùng, g m Coomassie G-250, phosphoric acid H P 2.2.3 Ti n hành Phản ứng Cho vào ng nghi m: B ng 12: S đ ph n ng đ nh l ng n ng đ protein n c ti u b ng ph ng pháp đo màu Ch t li u ng tr ng (B) ng chu n (S) ng th (T) Thu c th ml ml ml N cc t 10 l D.d protein chu n 10 l N c ti u 24 gi 10 l Tr n đ u Đ phút Đo đ h p th quang b c sóng 578 nm, c a ng tr ng (AB), ng chu n (As) c a ng th (AT) N ng đ protein đ c tính theo cơng th c: U H AT - AB CT =  x CS (g/l) AS - AB L ng protein th i n c ti u 24 gi = CT x V (g/24h) Trong đó: AB: đ h p th quang c a ng tr ng AS: đ h p th quang c a ng chu n 185 AT: đ CS: n CT: n V: th h p th quang c a ng th ng đ dung d ch chu n (0,2 g/l) ng đ protein m u th n c ti u (g/l) tích n c ti u 24 gi (lít) 2.3 Ý nghĩa lâm sàng - Tĕng protein n c ti u ch y u gặp b nh th n B nh th n ngun phát th phát có th gây tĕng tính th m c u th n, đặc bi t th n h nhi m m , protein l t qua màng l c c u th n, xu t hi n n c ti u N u m t nhi u protein qua th n s làm protein huy t t ng gi m xu ng, áp l c keo gi m, gây tri u ch ng phù n c d ch gian bào - Protein ni u nguyên nhân sau th n th ng nhi m khu n t n th ng đ ng ti t ni u Trong tr ng h p này, th ng xu t hi n h ng c u, b ch c u n c ti u - Protein ni u cịn có th nguyên nhân tr c th n (hi m gặp) Đó r i lo n t ng h p protein b nh đa u t y x ng (b nh Kahler) Protein huy t t ng đ c s n xu t v i s l ng nhi u (120 – 160g/l), nh ng phân t l ng nh , n c ti u Protein ni u lo i protein Bence-Jones hay g i protein “nhi t tan” H P U H 186 BÀI 7: K THU T Đ NH L NG PROTEIN II M c tiêu h c: Sau kết thúc học sinh viên - Trình bày đ albumin c nguyên lý ý nghĩa xét nghi m đ nh l - Làm đ c đánh giá đ máu n c ti u c k t qu xét nghi m đ nh l ng fibrinogen ng protein toàn ph n Đ NH L NG FIBRINOGEN TRONG MÁU (Kỹ thu t Natelson- dùng ph n ng biure) 1.1 Nguyên lý Fibrinogen m t protein (glucoproteid có 25 % glucid) TLPT 340000, gan s n xu t D i tác d ng c a thrombin, fibrinogen t o thành s i fibrin có tác d ng vi c đông máu n di huy t t ng, fibrinogen n m gi a globulin Fibrinogen huy t t ng đ c két t a b i CaCl2 Đem ly tâm đ tách c c fibrinogen r i dùng thu c th biure t o ph c h p m u tím Đ m đ m u t l v i n ng đ fibrinogen huy t t ng Đo m t đ quang h c, so v i dung d ch chu n protein đ tính k t qu H P U 1.2 Ch t th thu c th - Huy t thanh, huy t t ng, d ch màng b ng, d ch màng ph i,… - N c c t - Dung d ch protein chu n (Cs =60 g/l) - Thu c th Gornall - Dung d ch t a CaCl2 2,5% - Dung d ch Natriclorua 0,9% Kali natri tartate thu c th Gornall có vai trò ngĕn c n s k t t a c a đ ng hydroxid đ ng th i kali iodua ngĕn c n ph n ng t kh c a ion đ ng H 1.3 Ti n hành Cho vào ng nghi m khác: Huy t t ng : 0,3 ml Dung d ch Natriclorua 0,9%: 0,5 ml Dung d ch CaCl2 2,5% : 0,5 ml L c đ u, đ yên nhi t d phòng cho đ n đông, l y que thu tinh ch n tách c c fibrin qu n vào đ u que đ ép h t n c Ly tâm 6000vòng/phút 10 187 phút G n b ph n n c trong, gi l i c c fibrin, ti p t c cho thêm 3ml dung dich NaCl 0,9% l c nhẹ, r i ly tâm, g n b n c, làm nh v y l n đ r a s ch Fibrinogen G n khô n c ( ng th ) Cho vào ng nghi m dung tích 10 ml: B ng 13: S đ đ nh l ng fibrinogen máu b ng k thu t Natelson Thu c th ng tr ng (B) ng chu n (S) ng th (T) N cc t 20 µl ml Dung d ch protein chu n 20 µl Huy t 20 µl Thu c th Gornall ml ml ml L c đ u đ 37oC th i gian 30 phút, th nh tho ng l c cho tan h t c c fibrin Sau l c đ u, đo m t đ quang h c b c sóng 530 nm Đ i chi u v i ng tr ng đ tính đ c m t đ quang h c th c c a ph c h p màu xanh tím t o ng chu n (AS) ng th (AT) N ng đ protein ng th (CT) đ c tính theo cơng th c: H P AT - AB CT =  x CS AS - AB U Trong đ y CS = 60 g/l (g/l) 1.4 Nh n đ nh k t qu Bình th ng 2,5 - 4g/l Fbrinogen tĕng tr ng h p: - Nhi m trùng c p,có q trình phân rã t ch c viêm nên đặc hi u gây tĕng t c đ máu l ng - B nh ch t t o keo - Th n h - Nh i máu c tim, ch n th ng, b ng nhi t, sau ph u thu t Gi m tr ng h p: - Suy gan, t n th ng gan nặng - Tình tr ng suy ki t nĕng, lao, nhi m đ c - R i lo n t ng h p m c đ v a ph i: Các b nh v máu( thi u máu ác tính, đa h ng c u b nh tu x ng ), b nhchuy n hố, t n th ng h th ng võng mơ H 188 Đ NH L NG ALBUMIN TRONG MÁU 2.1 Nguyên lý pH = 4,1, albumin tác d ng v i bromocresol green (BCG ) t o thành ph c h p có màu xanh đ m (blue green) pH = 4,1 Albumin + BCG Ph c h p Albumin-BCG Đ m đ màu t l v i n ng đ albumin đ c đo b ng máy đo quang b c sóng 600 nm 2.2 Ch t th thu c th Huy t thanh, huy t t ng, d ch màng b ng, d ch màng ph i… Tùy theo hãng s n xu t thu c th mà có cách pha ch đóng gói thu c th khác Đ i v i kít c a hãng Beckman Coulter, n ng đ ch t dung d ch ph n ng là: Đ m succinat (pH 4.2) 100 mmol/L Bromocresol green 0.2 mmol/L Ch t b o qu n H P 2.3 Ti n hành + Cài đặt ch ng trình máy xét nghi m bán t đ ng Chú ý thông s quan tr ng: - Ph ng pháp đo: Đo m cu i (Endpoint) - B c sóng (wavelength): 600/800nm - Giá tr chu n: Tùy theo lo i d ch chu n đ c s d ng mà có giá tr khác - Đ n v tính (g/L) - Nhi t đ : 37oC - Gi i h n n tính: 15 – 60 g/L + Đ i v i kít c a hãng Beckman Coulter, tr c làm, tr n thu c th v i n c c t theo t l 29:121 Cho vào ng nghi m nh thành ph n thu c th ch t th nh sau: B ng 14 S đ ph n ng xác đ nh n ng đ albumin máu b ng ph ng pháp enzyme quang h c Thu c th ng tr ng ng chu n ng th H n h p thu c th 900 µl 900 µl 900 µl N cc t l Albumin chu n l Huy t l - U H Tr n đ u, đ phút nhi t đ phòng 189 Đo máy theo ch ng trình l n l t ng tr ng, ng chu n ng th Máy s t đ ng tính k t qu tính k t qu t ng t nh đ i v i fibrinogen 2.4 Ý nghĩa lâm sàng Albumin huy t ng i bình th ng: Ng i l n : 35 - 52 g/l Trẻ s sinh : 28 - 44 g/l Albumin protein chi m t l 55-65 % t ng s protein máu Ch c nĕng sinh h c c a v n chuy n, d tr ch t trì áp l c th m th u Albumin đ c coi nh m t ngu n acid amin n i sinh Albumin liên k t hịa tan h p ch t phân c c nh nh bilirubin t do, acid béo chu i dài có th g n v i r t nhi u thu c Tĕng albumin máu gặp th ng đ c gây b i tình tr ng m t n c nghiêm tr ng tĩnh m ch m c Gi m albumin máu có th gặp tr ng h p sau: - Gi m t ng h p b nh gan ch đ ĕn thi u ch t đ m - Tĕng d hóa k t qu c a t n th ng mô viêm - Gi m h p thu acid amin b nh đ ng tiêu hóa suy dinh d ng - M t protein h i ch ng th n h b ng Gi m albumin máu nghiêm tr ng làm gi m áp l c keo lịng m ch, n c kho ng gian bào gây tri u ch ng phù n Ngoài ra, gi m albumin máu kéo theo gi m n ng đ ion canxi magiê ion đ c g n v i albumin H P U H 190 BÀI 8: K THU T PHÁT HI N S C T M T VÀ Đ NH L URIC TRONG N C TI U NG ACID M c tiêu h c: Sau kết thúc học sinh viên l - Trình bày đ c nguyên lý ý nghĩa xét nghi m xác đ nh s c t m t đinh ng acid uric n c ti u l - Làm đ c đánh giá đ ng acid uric n c ti u PHÁT HI N S C T nghi m Harrison) c k t qu xét nghi m xác đ nh s c t m t đinh M T (BILIRUBIN) TRONG N C TI U (th 1.1 Nguyên lý Oxy hóa bilirubin thành biliverdin có màu xanh b ng thu c th Fouchet (FeCl3 acid trichloacetic) 1.2 Ch t th thu c th - N c ti u t i - Dung d ch BaCl2 10% - Thu c th Fouchet - Dung d ch (NH4)2 SO4 bão hoà H P U 1.3 Ti n hành Cho vào ng nghi m to: - N c ti u m i l y ml - BaCl2 10% ml L c đ u, cho thêm - gi t amonisunfat bão hoà L c đ u đ yên 10 phút L c b ng gi y l c, gi l y t a gi y l c Th m khô t a b ng gi y th m Nh lên t a 1gi t thu c th Fouchet H 1.4 Nh n đ nh k t qu Ph n ng d ng tính (có bilirubin n quanh gi t thu c th Fouchet sau 1vài phút 1.5 c ti u), n u có vịng xanh xung ng d ng lâm sàng N u có bilirubin n c ti u lo i bilirubin tr c ti p (bilirubin liên h p) lo i tan n c Lo i bilirubin gián ti p (bilirubin t do) khơng tan n c, máu k t h p v i albumin làm kích th c phân t l n nên không qua đ c màng l c c u th n 191 Bilirubin ni u d ng tính gặp tr ng h p viêm gan t c m t Trên lâm sàng, k t h p v i xét nghi m bilirubin huy t đ ch n đoán nguyên nhân gây vàng da 1.6 Cách pha thu c th - Dung d ch BaCl2 10% pha n c - Thu c th Fouchet: hoà tan 25 gam acid trichloacetic 100 ml n Thêm vào 10 ml dung d ch BaCl2 10% tr n đ u c - Dung d ch amonisunfat bão hoà : (NH4)2SO4 80 g Hoà tan 100 ml H2O - Dung d ch iod alcol etylic: Iod 0,7 g KI 0,5 g H2 O ml Tr n đ u cho thêm: alcol 950 95 ml Tr n đ u Đ NH L H P NG ACID URIC TRONG N C TI U 2.1 Nguyên lý Acid uric b oxy hóa b i uricase H2O2 t o thành, d i s xúc tác c a peroxidase, ph n ng v i acid 3,5-dichloro-2-hydroxybenzensulfonic (DCHBS) 4aminophenazon (PAP) t o thành quinonimin có màu đ tím Uricase Uric + O2 + H2O Allantoin + CO2 + H2O2 Peroxidase H2O2 + DCHBS + PAP N-(4-antipyryl)-3-chloro-5-sulfonat-pbenzoquinon imin (quinonimin) + HCl + H2O U H 2.2 Ch t th thu c th - N c ti u pha loãng 10 l n (1+9) b ng n c c t + Thu c th : - Tùy theo hãng s n xu t thu c th mà có cách pha ch đóng gói thu c th khác Đ i v i kít c a hãng Beckman Coulter, n ng đ ch t dung d ch ph n ng là: Đ m phosphate (pH 7.5) 42 mmol/L MADB 0.15 mmol/L 4-Aminophenazone 0.30 mmol/L 192 Peroxidase ≥ 5.9 kU/L (98 μkat/L) Uricase ≥ 0.25 kU/L (4.15 μkat/L) Ascorbate Oxidase ≥ 1.56 kU/L (26 μkat/L) Ch t b o qu n Khi làm pha theo t l h ng d n ghi h p thu c th - Dung d ch acid uric chu n 476 mol/l (8 mg/dl) 2.3 Ti n hành + Cài đặt ch ng trình đo n ng đ acid uric máy xét nghi m bán t đ ng Chú ý thông s quan tr ng: - Ph ng pháp đo: Đo m cu i (Endpoint) - B c sóng: 546 nm - Giá tr chu n: Tùy theo lo i d ch chu n đ c s d ng mà có giá tr khác - Đ n v tính: µmol//L - Nhi t đ : 37oC - Gi i h n n tính: 119 – 23800 μmol/L + Cho vào ng nghi m dung tích ml: B ng 15 S đ xác đ nh hàm l ng acid uric b ng ph ng pháp enzyme Thu c th ng tr ng ng chu n ng th H P U Thu c th Dung d ch chu n acid uric 476 mol/l ml ml ml - 20 l - Huy t n c ti u pha loãng 20 l 1/10 Tr n đ u, đ yên 10 phút nhi t đ phòng Đo m t đ quang h c b c sóng 546 nm c a ph c h p đ quinonimin t o thành ng tr ng (AB), ng chu n (AS) ng th (AT) N ng đ acid uric đ c tính k t qu theo cơng th c: H AT - AB CT =  x CS AS - AB CS n ng đ dung d ch acid uric chu n 2.4 Giá tr tham kh o - Nam : 200 - 420 mol/L -N : 150 - 350 mol/L - N c ti u: 1488 – 4463 μmol/24 gi 193 2.5 Ý nghĩa Acid uric s n ph m cu i c a trình thoái bi n purin Acid uric đ c t o thành x y gan đ c đào th i qua th n Trong máu th ng t n t i d i d ng monosodium urate Gi i h n hoà tan c a mu i urat kho ng 6,8 mg/dl nhi t đ 37oC n ng đ cao h n tinh th urate s b k t t a Tuy nhiên, m t s tr ng h p tinh th urate không b k t t a, nh h ng c a m t s ch t hòa tan máu Ph n l n acid uric máu d ng t do, ch kho ng