Tài liệu hướng dẫn thực hành xét nghiệm huyết học chương trình đào tạo cử nhân xét nghiệm y học dự phòng

TRUNG TÂM XÉT NGHIỆM H P TÀI LIỆU HƯỚNG DẪN THỰC HÀNH XÉT NGHIỆM HUYẾT HỌC U (Chương trình đào tạo Cử nhân xét nghiệm y học dự phòng) H Hà Nội, 2016 Chủ biên TS.BS Nguyễn Ngọc Dũng Tham gia biên soạn TS.BS Nguyễn Ngọc Dũng CN Phan Thị Quỳnh Thư ký biên soạn CN Phan Thị Quỳnh H P U H Lưu hành nội LỜI NÓI ĐẦU Trong năm gần đây, nhờ thành tựu phát triển khoa học kỹ thuật mà y học giới nước ngày phát triển mạnh, có lĩnh vực xét nghiệm Huyết học – Truyền máu Cùng với phát triển chung đó, Trường Đại học Y tế Công cộng mở mã ngành đào tạo Xét nghiệm Y học dự phịng góp phần nâng cao cơng tác chăm sóc sức khỏe nhân dân Đây mã ngành để phục vụ cho công tác giảng dạy trường, biên soạn “Tài liệu Hướng dẫn thực hành xét nghiệm Huyết học” để phục vụ cho đối tượng cử nhân Xét nghiệm Y học dự phòng Cuốn sách cung cấp kiến thức bản, cập nhật kỹ thuật xét nghiệm Huyết học – Truyền máu, sách có phần, gồm 20 giảng phân bố sau: H P Phần 1: Xét nghiệm Huyết học (Huyết học tế bào) có 10 Phần 2: Xét nghiệm Huyết học (Huyết học Đông – cầm máu Miễn dịch Truyền máu) có 10 Mỗi có phần: Mục tiêu, nguyên lý kỹ thuật, chuẩn bị dụng cụ hóa chất bệnh phẩm, tiến hành kỹ thuật, đánh giá kết nguyên nhân gây sai lầm, bảng kiểm/câu hỏi lượng giá nhằm phục vụ cho việc dạy học đạt hiệu cao U Hy vọng sách tài liệu đào tạo xét nghiệm Huyết học cho cử nhân Xét nghiệm Y học dự phòng, mà tài liệu tham khảo cho số cán làm việc quan tâm đến lĩnh vực xét nghiệm Huyết học – Truyền máu H Trong q trình biên soạn khơng thể tránh khỏi thiếu sót, mong nhận ý kiến đóng góp đồng nghiệp độc giả để sách hoàn chỉnh Xin chân thành cảm ơn TM NHÓM BIÊN SOẠN Chủ biên TS.BS.Nguyễn Ngọc Dũng DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Stt Ký hiệu viết tắt Ý nghĩa WBC Số lượng bạch cầu (White blood cell) RBC Số lượng hồng cầu (Red blood cell) HGB/Hb Lượng huyết sắc tố (Hemoglobin) HCT Thể tích khối hồng cầu (Hematocrit) MCV Thể tích trung bình hồng cầu (Mean corpus Cular Volume) MCH Lượng huyết sắc tố trung bình hồng cầu (Mean corpus Cular Hemoglobine) MCHC Nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu (Mean corpus Cular Hemoglobine Concentration) RDW Độ dao động đường kính hồng cầu (Red distribution Wide) PLT Số lượng tiểu cầu (Platelet) 10 CTBC Công thức bạch cầu 11 BC 12 NEUT 13 LYM 14 MONO 15 EO Bạch cầu ưa acid (Eosinophil) 16 BASO Bạch cầu ưa basơ (Basophil) 17 SLHC Số lượng hồng cầu 18 SLBC Số lượng bạch cầu 19 SLTC Số lượng tiểu cầu H P U H Bạch cầu Bạch cầu trung tính (Neutrophil) Bạch cầu lympho (Lymphocyte) Bạch cầu mono (Monocyte) 20 HCL Hồng cầu lưới 21 ARN Acid ribonucleic 22 APTT Activated partial thromboplastin time (thời gian hoạt hóa thromboplastin phần 23 PT Prothrombin time (Thời gian prothrombin) 24 TT Thrombin time (Thời gian Thrombin) 25 TCK Temps de Cephalin - Kaolin 26 XN Xét nghiệm 27 EDTA Ethylene Diamine Tetraacetate 28 HCM Hồng cầu mẫu 29 HTM Huyết mẫu 30 KN Kháng nguyên 31 KT Kháng thể 32 BT Bleeding Time 33 INR (International Normalized Ratio) 34 BN 35 KTV U H P H Bệnh nhân Kỹ thuật viên MỤC LỤC PHẦN 1: XÉT NGHIỆM HUYẾT HỌC BÀI 1: NGUYÊN TẮC LẤY, BẢO QUẢN VÀ XỬ LÝ BỆNH PHẨM MÁU XÉT NGHIỆM HUYẾT HỌC TẾ BÀO BÀI 2: KỸ THUẬT LẤY MÁU LÀM TIÊU BẢN VÀ NHUỘM 10 BÀI 3: KỸ THUẬT ĐẾM SỐ LƯỢNG HỒNG CẦU, BẠCH CẦU, TIỂU CẦU 24 BÀI 4: KỸ THUẬT LẬP CÔNG THỨC BẠCH CẦU 36 BÀI 5: ĐỊNH LƯỢNG HUYẾT SẮC TỐ 41 BÀI 6: ĐO THỂ TÍCH KHỐI HỒNG CẦU 47 BÀI 7: KỸ THUẬT ĐẾM SỐ LƯỢNG HỒNG CẦU LƯỚI 51 H P BÀI 8: TỐC ĐỘ MÁU LẮNG 55 BÀI : MÁY ĐẾM TẾ BÀO NGUYÊN TẮC HOẠT ĐỘNG VÀ SỬ DỤNG 60 BÀI 10: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM HUYẾT ĐỒ 64 PHẦN 2: XÉT NGHIỆM HUYẾT HỌC 77 BÀI 1: NGUYÊN TẮC LẤY, BẢO QUẢN VÀ XỬ LÝ BỆNH PHẨM MÁU XÉT NGHIỆM ĐÔNG MÁU 77 BÀI 2: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM THỜI GIAN MÁU CHẢY, THỜI GIAN MÁU ĐÔNG VÀ CO CỤC MÁU 80 U BÀI 3: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM THỜI GIAN HOWELL 90 BÀI 4: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM THỜI GIAN THROMBOPLASTIN H TỪNG PHẦN HOẠT HÓA 94 BÀI 5: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM THỜI GIAN QUICK 98 BÀI 6: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM THỜI GIAN THROMBIN 103 Bài 7: MÁY XÉT NGHIỆM ĐÔNG MÁU NGUYÊN TẮC HOẠT ĐỘNG VÀ SỬ DỤNG 107 BÀI 8: KỸ THUẬT ĐỊNH NHÓM MÁU HỆ ABO 112 BÀI 9: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM COOMBS 123 BÀI 10: KỸ THUẬT CÁC XÉT NGHIỆM HÒA HỢP PHÁT MÁU 132 PHẦN 1: XÉT NGHIỆM HUYẾT HỌC BÀI 1: NGUYÊN TẮC LẤY, BẢO QUẢN VÀ XỬ LÝ BỆNH PHẨM MÁU XÉT NGHIỆM HUYẾT HỌC TẾ BÀO MỤC TIÊU Sau học xong này, sinh viên có khả năng: Nêu nguyên tắc lấy bệnh phẩm máu xét nghiệm huyết học tế bào Nêu nguyên tắc bảo quản xử lý bệnh phẩm máu xét nghiệm huyết học tế bào H P NỘI DUNG Giới thiệu xét nghiệm huyết học tế bào Xét nghiệm huyết học tế bào thường bao gồm:  Tổng phân tích tế bào máu ngoại vi (cơng thức máu): Biết số lượng hồng cầu số liên quan đến hồng cầu, biết số lượng bạch cầu công thức bạch cầu, biết số lượng tiểu cầu thông số liên quan đến tiểu cầu  Số lượng hồng cầu số liên quan đến hồng cầu bao gồm: U  RBC (số lượng hồng cầu)  HGB (lượng huyết sắc tố)  HCT (thể tích khối hồng cầu) H  MCV (thể tích trung bình hồng cầu)  MCH (lượng huyết sắc tố trung bình hồng cầu)  MCHC (nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu)  RDW (độ dao động đường kính hồng cầu)  Số lượng bạch cầu công thức bạch cầu bao gồm:  WBC (Số lượng bạch cầu)  % NEUT (Tỷ lệ bạch cầu trung tính)  % EO (Tỷ lệ bạch cầu ưa acid)  % BASO (Tỷ lệ bạch cầu ưa basơ)  % LYM (Tỷ lệ bạch cầu lympho)  % MONO (Tỷ lệ bạch cầu mono)  Số lượng tiểu cầu thông số liên quan đến tiểu cầu bao gồm: PLT (số lượng tiểu cầu), độ tập trung tiểu cầu  Máu lắng (Thời gian máu lắng): Biết thời gian máu lắng sau  Huyết đồ: Đánh giá trình trạng sinh lý, bệnh lý bệnh nhân thơng qua hình thái số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, thể tích khối hồng cầu, huyết sắc tố, hồng cầu lưới, công thức bạch cầu Nguyên tắc chuẩn bị mẫu máu làm xét nghiệm 2.1 Nguyên tắc chung Việc lấy bảo quản bệnh phẩm huyết học quan trọng, chiếm 50% kết xét nghiệm, ảnh hưởng tới chất lượng xét nghiệm Để xét nghiệm có giá trị cho chẩn đốn, cần tn thủ tuyệt đối số nguyên tắc sau: H P  Đúng tên bệnh nhân  Lấy bệnh phẩm quy cách  Thực quy trình, kỹ thuật bảo quản vận chuyển 2.2 Nguyên tắc lấy, vận chuyển xử lý mẫu máu  Trước lấy máu:  Kiểm tra lại định, phiếu yêu cầu với điều kiện phịng xét nghiệm (có khả đáp ứng hay không) U  Đối chiếu giấy xét nghiệm với họ tên, tuổi, số giường, bệnh bệnh nhân  Ghi lên nhãn ống máu họ tên, tuổi, số giường, phòng bệnh giấy xét nghiệm bệnh nhân H  Chọn vị trí lấy máu thích hợp (xem - mục 1, mục 2), không lấy qua đường truyền  Thời điểm lấy: thường lấy máu vào buổi sáng, bệnh nhân chưa ăn thể nghỉ ngơi thoải mái Nên tránh lấy máu gần bữa ăn, sau vận động  Trong lấy:  Nếu lấy máu mao mạch: ý khơng lấy máu nơi bị phù nề, có u, nơi nghi tắc mạch, tránh nặn bóp nhiều  Nếu lấy máu tĩnh mạch: bơm máu lên thành ống nghiệm, máu lấy vào ống chống đông lắc trộn nhẹ nhàng, nút kín  Khơng lấy máu lâu, máu dễ bị đông dây  Tùy loại xét nghiệm định mà chọn ống nghiệm phù hợp (nếu xét nghiệm tổng phân tích tế bào máu ngoại vi 18 thơng số lấy máu vào ống chống đông EDTA)  Lấy số lượng theo tỷ lệ chống đông  Máu lấy đạt yêu cầu là: loại ống, đủ số lượng, không đông, không vỡ hồng cầu  Sau lấy máu:  Mẫu máu: bảo quản 20 - 25oC phải xét nghiệm vòng kể từ lấy máu, q thời gian tính chất lý hóa máu thay đổi làm ảnh hưởng tới kết xét nghiệm  Nếu cần vận chuyển cần nhẹ nhàng, tránh làm vỡ tế bào  Xử lý bệnh phẩm:  Khi nhận mẫu để xét nghiệm: cần kiểm tra lại thông tin phiếu yêu cầu xét nghiệm với thông tin nhãn ống máu, kiểm tra số lượng mẫu, chất lượng ống máu Yêu cầu mẫu máu: lấy loại ống, đủ số lượng, không bị đông dây, khơng vỡ hồng cầu, khơng nhiễm trùng nhận mẫu Nếu không đảm bảo yêu cầu trên, yêu cầu lấy lại mẫu H P  Khi chạy máy đếm tế bào tự động cần lắc trộn kỹ ống máu trước tiến hành chạy mẫu LƯỢNG GIÁ Nêu nguyên tắc lấy bệnh phẩm máu xét nghiệm huyết học tế bào? U Nêu nguyên tắc bảo quản xử lý bệnh phẩm máu xét nghiệm huyết học tế bào? H BÀI 2: KỸ THUẬT LẤY MÁU LÀM TIÊU BẢN VÀ NHUỘM MỤC TIÊU Sau học xong này, sinh viên có khả năng: Chuẩn bị đúng, đủ dụng cụ, hóa chất, bệnh nhân để lấy máu mao mạch, tĩnh mạch, làm tiêu nhuộm Thao tác quy trình, kỹ thuật lấy máu mao mạch, tĩnh mạch, làm tiêu nhuộm Nhận xét kết thực hành lấy máu mao mạch, tĩnh mạch, làm tiêu nhuộm H P NỘI DUNG Quy trình kỹ thuật lấy máu mao mạch 1.1 Chuẩn bị  Dụng cụ: kim chích vơ trùng, bơng y tế  Hóa chất: cồn 70o  Bệnh nhân: U  Thời gian lấy máu: thường lấy máu vào buổi sáng, bệnh nhân chưa ăn thể nghỉ ngơi thoải mái  Vị trí: đầu ngón tay 3, người lớn, ngón chân gót chân trẻ nhỏ (hình 2.1) 1.2 Tiến hành H  Sát khuẩn vị trí chích bơng cồn 70o  Để khơ  Dùng kim vơ trùng chích sâu khoảng 1- 1,5 mm  Lau bỏ giọt máu đầu (tại vết chích) bơng  Sau vuốt nhẹ nhàng ngón tay cách xa chỗ chích (khơng nên nắn bóp nhiều để máu chảy nhanh), lấy đủ lượng máu để làm tiêu  Khi lấy đủ máu lau vị trí chích máu cho bệnh nhân Lưu ý: Khơng lấy máu nơi bị phù nề, có u, nghi tắc mạch, tránh nặn bóp nhiều 10 BẢNG KIỂM Kỹ thuật xét nghiệm phản ứng Coombs gián tiếp Họ tên sinh viên: Người đánh giá: Lớp: A Tiêu chuẩn phải đạt ĐÁNH GIÁ NHẬN THỨC Đạt Khơng đạt Trình bày ngun tắc kỹ thuật xét Đúng nguyên nghiệm phản ứng Coombs gián tiếp tắc B ĐÁNH GIÁ KỸ NĂNG TT Các bước thực H P Tiêu chuẩn phải đạt Chuẩn bị đầy đủ dụng cụ, hoá chất, bệnh Đúng đủ phẩm Kiểm tra đối chiếu mẫu máu với phiếu xét Đối chiếu nghiệm thông tin Đánh dấu ống nghiệm: Ống HC “O” Rh+ Tiến hành rửa, ống HC “O” Rh+ rửa 5%, ống gián kỹ thuật tiếp (ống GT) Trong ống HC “O” Rh+ rửa: Nhỏ giọt Tiến hành hồng cầu khối “O” Rh+, rửa lần với kỹ thuật NaCl 0,9% Trong ống HC “O” Rh+ rửa 5%: nhỏ Tiến hành giọt hồng cầu rửa+ 19 giọt nước muối kỹ thuật 0,9% Trong ống GT: U H Tiến hành - Nhỏ giọt hồng cầu “O” Rh+ rửa 5%, kỹ thuật giọt huyết bệnh nhân, ủ bình cách thủy 37oC 45 phút - Lấy lắc đều, rửa lần NaCl 0,9% để loại bỏ thành phần thừa - Sau lần rửa thứ thu giọt cặn 130 Đạt Không đạt hồng cầu “O” Rh+ cảm nhiễm - Nhỏ giọt huyết Coombs vào ống GT - Lắc - Ly tâm 1000 vòng/phút 20 giây Lắc nhẹ ống ly tâm, dùng pipet pasteur Đọc kết quả, lấy giọt hỗn dịch nhỏ lên lam kỹ thuật kính Đọc kết kính hiển vi xác C LƯỢNG GIÁ Nhận xét kết Nêu nguyên nhân làm sai lệch kết quả? H P Nhận xét người đánh giá: U Phản hồi Sinh viên: H Chú thích: (*) Nếu sinh viên khơng thực bị trượt 131 BÀI 10: KỸ THUẬT CÁC XÉT NGHIỆM HÒA HỢP PHÁT MÁU MỤC TIÊU Sau học xong này, sinh viên có khả năng: Chuẩn bị đúng, đủ dụng cụ, hóa chất, bệnh nhân để làm phản ứng chéo Thao tác quy trình, kỹ thuật phản ứng chéo Nhận xét xác kết phản ứng chéo NỘI DUNG Ngun lý Để kiểm tra hịa hợp nhóm máu người cho người nhận, người ta trộn huyết người nhận với hồng cầu người cho hồng cầu người nhận với huyết tương người cho xem xét tượng ngưng kết Xét nghiệm gọi xét nghiệm “phản ứng chéo” H P Quy trình kỹ thuật 1.1 Kỹ thuật hoà hợp phát máu ống nghiệm 1.1.1 Chuẩn bị  Dụng cụ: ống nghiệm nhỏ, lam kính, pipet Pasteur, kính hiển vi, máy li tâm  Hóa chất: hồng cầu mẫu, huyết mẫu, dung dịch NaCl 0,9%  Mẫu xét nghiệm: U + Lấy ml máu tĩnh mạch vào ống nghiệm không chống đông để lấy huyết H + Lấy ml máu tĩnh mạch vào ống chống đông để lấy hồng cầu làm xét nghiệm 1.1.2 Tiến hành  Bước 1:  Xếp ống nghiệm lên giá, đánh số thứ tự (ống máu BN ống chéo)  Chuẩn bị hồng cầu 5% bệnh nhân người cho (1 giọt hồng cầu bệnh nhân + 19 giọt NaCl 0,9 %)  Định nhóm máu bệnh nhân ABO-Rh  Lấy từ tủ trữ theo nhóm máu, loại chế phẩm số lượng duyệt  Định lại nhóm máu túi máu  Tuỳ loại chế phẩm truyền mà làm chéo sau :  Nếu truyền khối hồng cầu, khối bạch cầu: ống  Nếu truyền khối tiểu cầu, huyết tương, tủa VIII: ống 132  Nếu truyền máu toàn phần: ống ống  Bước : Tiến hành xét nghiệm hòa hợp: 2.1 Xét nghiệm hòa hợp ống nhiệt độ phòng xét nghiệm môi trường nước muối ống nghiệm chéo, nhỏ:  giọt huyết bệnh nhân  giọt hỗn dịch 5% hồng cầu người cho  Lắc nhẹ ống chéo để trộn KN – KT, ly tâm 1000 vòng / phút x 20 giây, đọc kết ngưng kết hồng cầu kính hiển vi Lưu ý: Ống chéo ngưng kết dương tính dừng lại đọc kết Nếu ngưng kết âm tính cần tiến hành tiếp xét nghiệm hịa hợp điều kiện 37oC, điều kiện kháng globulin người (hay gọi điều kiện AHG, điều kiện Coombs - mục 2.3) H P 2.2 Xét nghiệm hòa hợp ống nhiệt độ phịng xét nghiệm mơi trường nước muối ống nghiệm chéo, nhỏ :  giọt huyết tương người cho  giọt hỗn dịch 5% hồng cầu bệnh nhân  Lắc nhẹ ống chéo để trộn KN – KT, ly tâm 1000 vòng / phút x 20 giây, đọc kết ngưng kết hồng cầu kính hiển vi U 2.3 Xét nghiệm hòa hợp ống nhiệt độ 37oC, mơi trường có kháng Gammaglobulin ống nghiệm chéo, nhỏ :  giọt huyết bệnh nhân  giọt hỗn dịch 5% hồng cầu người cho o H  Ủ 37 C 45 phút, sau rửa lần nước muối 0,9 %  Lần cuối bỏ trên, nhỏ giọt huyết Coombs  Lắc nhẹ ống chéo để trộn KN – KT, ly tâm 1000 vòng / phút x 20 giây, đọc kết ngưng kết hồng cầu kính hiển vi *** Chú ý phải tiến hành song song chứng âm chứng dương *** Hoặc thực kỹ thuật phương pháp cao (Gelcard/Scangel) 2.2 Kỹ thuật hoà hợp phát máu gelcard (áp dụng cho làm chéo 1) 2.2.1 Chuẩn bị  Dụng cụ: Máy ly tâm chuyên dụng, máy ly tâm thường để tách huyết thanh, giá đựng gelcard, máy ủ chuyên dụng, pipet bán tự động  Hóa chất: 133 + Gelcard (đã có sẵn hóa chất cột) + Dung dịch để pha loãng khối hồng cầu  Mẫu xét nghiệm: + Tách huyết bệnh nhân: ly tâm mẫu máu 2500 vòng / phút + Pha loãng hồng cầu người cho thành hỗn dịch 1% (500 μl LISS + 25 μl khối hồng cầu người cho) + Pha loãng hồng cầu bệnh nhân thành hỗn dịch 1% (500 μl LISS + 25 μl hồng cầu bệnh nhân) 2.2.2 Tiến hành Bước 1: Bật hệ thống máy: máy ủ, máy ly tâm, máy đọc, ly tâm card trước sử dụng H P Bước 2: Điền thơng tin bệnh nhân ( Họ tên, tuổi, khoa phịng) điền mã đơn vị máu lên gelcard, bóc bỏ nhôm phủ giếng Bước 3: Nhỏ mẫu + Hút 25 μl huyết bệnh nhân vào giếng (4) ENZ- Neutral; (5) AHG; (6) AHG + Hút 50 μl hồng cầu bệnh nhân 1% vào giếng (1) (ABO1) A; (2) (ABO2) B; (3) (Rh1) D; (6) AHG U - - - 25µl 25µl 25µl 50µl 50µl 50µl - - 50µl 50µl 50µl 50µl 50µl 50µl - + Hút 50 μl hồng cầu người cho (túi máu) 1% vào giếng (1) (ABO1) A; (2) (ABO2) B; (3) (Rh1) D; (4) ENZ- Neutral; (5) AHG Bảng 9.1 Lượng bệnh phẩm phân phối vào gelcard H Matrix Forward Grouping and Crossmatch Card HT Bệnh nhân HC Bệnh nhân HC người cho A B D ENZ AHG AHG (ABO1) (ABO2) (Rh1) Neutral Bước 4: Đậy kín nắp nhơm , ủ 15 phút 37oC Bước 5: Ly tâm cột gel tốc độ 1000 vòng/phút x 10 phút Bước 6: Đọc kết máy Card Reader Bước 7: Lưu kết vào máy tính, in kết quả`  Yêu cầu:  Thực quy trình, kỹ thuật  Lấy đủ bệnh phẩm 134  Tác phong: sẽ, nhanh gọn Đánh giá kết 3.1 Đánh giá kỹ thuật ống nghiệm Có khả xảy ra: Bảng 9.2 Đánh giá kết làm phản ứng chéo Ống I Ống II (-) (-) - Máu phù hợp, truyền (Ví dụ: A cho A, B cho B) (-) (+) - Máu không phù hợp (VD: A cho AB, B cho AB, O cho AB) - Nếu cần, truyền với số lượng - Máu khơng phù hợp (VD: A cho O, B cho O) - Không truyền - Máu không phù hợp (VD: A cho B, B cho A) - Không truyền (+) (+) (-) (+) Khả Chú ý: H P U  Phải đọc kết kính hiển vi (khi quan sát mắt thường thấy ống chéo âm tính)  Truyền máu khác nhóm (A cho AB, B cho AB, O cho A,… theo sơ đồ truyền máu cổ điển): cần truyền phải hội ý với bác sĩ lâm sàng để định) H  Lưu ống máu chéo người cho người nhận 4oC, sau 24 - 48 hủy 3.2 Đánh giá kỹ thuật gelcard  Kết nhận xét phù hợp nhóm máu người nhận nhóm máu người cho đồng nhất, phản ứng chéo âm tính, tự chứng âm tính  Nếu thấy có hình ảnh ngưng kết khơng phù hợp (truyền máu khác nhóm) xin ý kiến bác sĩ phụ trách cho định  Bắt buộc phải đối chiếu với KTV làm kỹ thuật hòa hợp ống nghiệm điều kiện 22oC Khi có kết trùng khớp kết luận hòa hợp phát máu  Tất trường hợp tiếp nhận dự trù ghi rõ ràng, khơng tẩy xóa sổ Quản lý yêu cầu cấp phát máu, kể trường hợp làm phản ứng hòa hợp dương tính khơng truyền được, sau nhân viên thực điều dưỡng lĩnh máu ký nhận theo yêu cầu 135 Các yếu tố ảnh hưởng  Lam kính, ống nghiệm bẩn, thao tác chưa chuẩn gây ngưng kết giả  Ly tâm với tốc độ cao  Ngưng kết lạnh (cần ý đảm bảo nhiệt độ phịng thí nghiệm)  Mẫu máu lấy chưa quy cách LƯỢNG GIÁ: Dùng bảng kiểm để lượng giá H P U H 136 BẢNG KIỂM Kỹ thuật xét nghiệm phản ứng hòa hợp phát máu (Truyền khối hồng cầu) Họ tên sinh viên: Người đánh giá: Lớp: A Tiêu chuẩn phải đạt ĐÁNH GIÁ NHẬN THỨC Đạt Khơng đạt Trình bày ngun tắc kỹ thuật xét Đúng nguyên nghiệm phản ứng hòa hợp phát máu tắc B ĐÁNH GIÁ KỸ NĂNG TT Các bước thực H P Tiêu chuẩn phải đạt Chuẩn bị đầy đủ dụng cụ, hoá chất, bệnh Đúng đủ phẩm Kiểm tra đối chiếu tên bệnh nhân với Đối chiếu phiếu xét nghiệm thông tin - Lấy ml máu tĩnh mạch người nhận Tiến hành vào ống nghiệm không chống kỹ thuật đông để lấy huyết U H - Lấy ml máu tĩnh mạch người nhận vào ống chống đông để lấy hồng cầu làm xét nghiệm Đánh dấu ống nghiệm: ống chéo (Ống I + Tiến hành Tên bệnh nhân), HC 5% người cho kỹ thuật Pha hồng cầu người nhận nồng độ 5% , Tiến hành pha hồng cầu người cho nồng độ 5% (1 kỹ thuật giọt hồng cầu + 19 giọt nước muối 0,9%) Định nhóm máu người nhận Tiến hành người cho (máu người nhận định nhóm kỹ thuật máu phương pháp, khối hồng cầu người cho định nhóm phương pháp huyết mẫu) 137 Đạt Không đạt Tiến hành Nhỏ giọt huyết người nhận kỹ thuật giọt hồng cầu 5% người cho vào ống chéo I  Lắc  ly tâm 1000 vòng/phút x 20 giây  lấy đọc kết mắt thường kính hiển vi Phản ứng chéo ống 1: Nếu ống có ngưng kết: máu khơng Tiến hành truyền kỹ thuật Nếu ống khơng ngưng kết: làm tiếp bước sau H P Đặt ống chéo vào bình cách thủy 37oC Tiến hành 45 phút, sau rửa lần nước kỹ thuật muối 0,9 % Lần cuối bỏ bên 10 Nhỏ giọt huyết Coombs vào ống Tiến hành chéo I  Lắc  ly tâm 1000 kỹ thuật vòng/phút x 20 giây  lấy đọc kết mắt thường kính hiển vi 11 Kết quả: Nếu ống I khơng có tượng Đọc kết quả, ngưng kết máu người cho người kỹ thuật nhận phù hợp Nếu ống I ngưng kết xác không truyền C LƯỢNG GIÁ Nhận xét kết Nêu nguyên nhân làm sai lệch kết quả? U H Nhận xét người đánh giá: Phản hồi Sinh viên: Chú thích: (*) Nếu sinh viên khơng thực bị trượt 138 BẢNG KIỂM Kỹ thuật xét nghiệm phản ứng hòa hợp phát máu (Truyền huyết tương) Họ tên sinh viên: Người đánh giá: Lớp: A Tiêu chuẩn phải đạt ĐÁNH GIÁ NHẬN THỨC Trình bày nguyên tắc kỹ thuật xét Đúng nguyên nghiệm phản ứng hòa hợp phát máu tắc B ĐÁNH GIÁ KỸ NĂNG H P Tiêu chuẩn phải đạt TT Các bước thực Chuẩn bị đầy đủ dụng cụ, hoá chất, bệnh Đúng đủ phẩm Kiểm tra đối chiếu tên bệnh nhân với Đối chiếu phiếu xét nghiệm thông tin - Lấy ml máu tĩnh mạch người nhận Tiến hành vào ống nghiệm không chống kỹ thuật đông để lấy huyết U H - Lấy ml máu tĩnh mạch người nhận vào ống chống đông để lấy hồng cầu làm xét nghiệm Đánh dấu ống nghiệm: ống chéo (Ống II + Tiến hành Tên bệnh nhân), HC 5% người nhận kỹ thuật Pha hồng cầu người nhận nồng độ 5% (1 Tiến hành giọt hồng cầu + 19 giọt nước muối 0,9%) kỹ thuật Định nhóm máu người nhận Tiến hành người cho (máu người nhận định nhóm kỹ thuật máu phương pháp, huyết tương người cho định nhóm phương pháp hồng cầu mẫu) Phản ứng chéo ống 2: Tiến hành Nhỏ giọt huyết tương người cho kỹ thuật 139 Đạt Đạt Không đạt Không đạt giọt hồng cầu 5% người nhận vào ống chéo II  Lắc  ly tâm 1000 vòng/phút x 20 giây  lấy đọc kết mắt thường kính hiển vi Đọc kết Đọc kết quả, kỹ thuật xác C LƯỢNG GIÁ Nhận xét kết Nêu nguyên nhân làm sai lệch kết quả? H P Nhận xét người đánh giá: Phản hồi Sinh viên: U Chú thích: (*) Nếu sinh viên khơng thực bị trượt H 140 BẢNG KIỂM Kỹ thuật xét nghiệm phản ứng hòa hợp phát máu (Truyền máu toàn phần) Họ tên sinh viên: Người đánh giá: Lớp: A Tiêu chuẩn phải đạt ĐÁNH GIÁ NHẬN THỨC Trình bày nguyên tắc kỹ thuật xét Đúng nguyên nghiệm phản ứng hòa hợp phát máu tắc B ĐÁNH GIÁ KỸ NĂNG H P Tiêu chuẩn phải đạt TT Các bước thực Chuẩn bị đầy đủ dụng cụ, hoá chất, bệnh Đúng đủ phẩm Kiểm tra đối chiếu tên bệnh nhân với Đối chiếu phiếu xét nghiệm thông tin - Lấy ml máu tĩnh mạch người nhận Tiến hành người cho vào ống nghiệm kỹ thuật không chống đông để lấy huyết U H - Lấy ml máu tĩnh mạch người nhận người cho vào ống chống đông để lấy hồng cầu làm xét nghiệm Đánh dấu ống nghiệm: ống chéo (Ống I, Tiến hành ống II), HC 5% người nhận, HC 5% kỹ thuật người cho Pha hồng cầu 5% người nhận hồng Tiến hành cầu 5% người cho (1 giọt hồng cầu + kỹ thuật 19 giọt nước muối 0,9%) Định nhóm máu người nhận Tiến hành người cho (bằng phương pháp huyết kỹ thuật mẫu hồng cầu mẫu) 141 Đạt Đạt Không đạt Không đạt Tiến hành Nhỏ giọt huyết người nhận kỹ thuật giọt hồng cầu 5% người cho vào ống chéo I  Lắc  ly tâm 1000 vòng/phút x 20 giây  lấy đọc kết mắt thường kính hiển vi -Phản ứng chéo ống 1: -Phản ứng chéo ống 2: Nhỏ giọt huyết người cho giọt hồng cầu 5% người nhận vào ống chéo II  Lắc  ly tâm 1000 vòng/phút x 20 giây  lấy đọc kết mắt thường kính hiển vi H P Nếu ống có ngưng kết: máu không Tiến hành truyền kỹ thuật Nếu ống khơng ngưng kết: làm tiếp bước sau Đặt ống chéo vào bình cách thủy 37oC Tiến hành 45 phút, sau rửa lần nước kỹ thuật muối 0,9 % Lần cuối bỏ bên 10 Nhỏ giọt huyết Coombs vào ống Tiến hành chéo I  Lắc  ly tâm 1000 kỹ thuật vòng/phút x 20 giây  lấy đọc kết mắt thường kính hiển vi 11 Đọc kết C LƯỢNG GIÁ Nhận xét kết Nêu nguyên nhân làm sai lệch kết quả? U H Tiến hành kỹ thuật 142 Nhận xét người đánh giá: Phản hồi Sinh viên: Chú thích: (*) Nếu sinh viên khơng thực bị trượt H P U H 143 TÀI LIỆU THAM KHẢO GS.TSKH.Đỗ Trung Phấn, Kỹ thuật xét nghiệm Huyết học Truyền máu ứng dụng lâm sàng, NXB Y học, Hà Nội, 2013 TS Hà Thị Anh, Kỹ thuật xét nghiệm Huyết học Truyền máu, NXB Y học, Hà Nội, 2009 GS.TSKH.Đỗ Trung Phấn CS, Chỉ số máu ngoại vi bình thường giai đoạn 1995 – 2000 Kết bước đầu nghiên cứu số tiêu sinh học người Việt Nam, NXB Y học, 2003 Đại học Kỹ thuật y tế Hải Dương, Giáo trình Các kỹ thuật Xét nghiệm Huyết học, NXB Y học, Hà Nội, 2004 PGS.TS.Phạm Quang Vinh CS, giáo trình Huyết học - Truyền máu bản, NXB Y học, Hà Nội, 2013 H P GS.TSKH.NGND Đỗ Trung Phấn, Truyền máu đại ứng dụng điều trị bệnh, NXB Giáo dục Việt Nam, 2014 U H 144