Khảo sát hoạt tính độc tế bào in vitro và tác động kháng khối u trên chuột nhắt gây u bằng dimethylbenzaanthracen (dmba) của cao chiết tam thất (panax notoginseng (burkill) f h chen)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH LÊ THỊ THU VÂN KHẢO SÁT HOẠT TÍNH ĐỘC TẾ BÀO IN VITRO VÀ TÁC ĐỘNG KHÁNG KHỐI U TRÊN CHUỘT NHẮT GÂY U BẰNG DIMETHYLBENZ[A]ANTHRACEN (DMBA) CỦA CAO CHIẾT TAM THẤT (Panax notoginseng (Burkill) F.H Chen) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH LÊ THỊ THU VÂN KHẢO SÁT HOẠT TÍNH ĐỘC TẾ BÀO IN VITRO VÀ TÁC ĐỘNG KHÁNG KHỐI U TRÊN CHUỘT NHẮT GÂY U BẰNG DIMETHYLBENZ[A]ANTHRACEN (DMBA) CỦA CAO CHIẾT TAM THẤT (Panax notoginseng (Burkill) F.H Chen) CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LÝ - DƯỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 8720205 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THẦY HƯỚNG DẪN: PGS.TS ĐỖ THỊ HỒNG TƯƠI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn PGS.TS Đỗ Thị Hồng Tươi Kết số liệu luận văn trung thực chưa công bố nghiên cứu khoa học trước Thành phố Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2022 Tác giả luận văn Lê Thị Thu Vân TÓM TẮT Khảo sát hoạt tính độc tế bào in vitro tác động kháng khối u chuột nhắt gây u 7,12-dimethyl-benz[a]anthracen (DMBA) cao chiết Tam thất Học viên: Lê Thị Thu Vân Thầy hướng dẫn: PGS.TS Đỗ Thị Hồng Tươi Mở đầu: Trong năm gần đây, nhiều cơng trình nghiên cứu cho thấy Tam thất, đặc biệt Tam thất chế theo kiểu Hồng Sâm (hấp nhiệt độ cao) có tác dụng ức chế phát triển tế bào ung thư in vitro ức chế tăng trưởng khối u in vivo Tuy nhiên, Việt Nam, nghiên cứu tác động hỗ trợ điều trị ung thư Tam thất cịn hạn chế Vì lý trên, đề tài tiến hành để khảo sát hoạt tính độc tế bào in vitro, độc tính cấp tác động kháng khối u cao chiết Tam thất Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Khảo sát hoạt tính độc tế bào cao chiết Tam thất chế biến điều kiện nhiệt độ thời gian khác (100 o C 120 oC thời gian - - - - 10 giờ) dòng tế bào A549 Xác định điều kiện chế biến thích hợp để chế biến cao chiết Tam thất cho thử nghiệm chuột Khảo sát độc tính cấp cao chiết Tam thất chuột khỏe mạnh tác động kháng khối u chuột nhắt gây u DMBA Kết quả: Tam thất chế biến cách hấp nhiệt độ 100 oC - 10 nhiệt độ 120 oC - - - 10 ức chế tăng sinh tế bào ung thư phổi A549 so với mẫu Tam thất chưa chế biến mẫu Tam thất chế biến điều kiện lại Tam thất chế điều kiện 120 oC chọn để chế biến cao chiết cho thử nghiệm chuột Cao chiết Tam thất độc tính cấp đường uống chuột nhắt Cao chiết Tam thất không ảnh hưởng tỉ lệ sống/chết chuột gây u DMBA, làm giảm trọng lượng thể chuột, giảm tăng kích thước khối u da làm tăng tượng hoại tử tế bào ung thư phổi Kết luận: Quá trình chế biến cách hấp điều kiện nhiệt độ thời gian khác làm tăng hoạt tính ức chế tế bào ung thư phổi A549 Tam thất so với mẫu chưa chế biến Cao chiết Tam thất độc tính cấp đường uống chuột nhắt, có hoạt tính độc tế bào in vitro tác động kháng khối u chuột gây u DMBA ABSTRACT Study on in vitro cytotoxic activity and anti-tumor effect of Panax notoginseng extract in mice induced tumor by 7,12-dimethylbenz[a]anthracen (DMBA) Le Thi Thu Van Supervisor: Assoc Prof Do Thi Hong Tuoi Introduction: In recent years, some studies have reported that streamed Panax notoginseng extract has in vitro cytotoxic activity and antitumor effect However, studies on the antitumor effect of P notoginseng in Vietnam are limited Therefore, this study was conducted in order to evaluate in vitro cytotoxic activity, acute oral toxicity and antitumor effect of P.notoginseng extract in mice induced tumor by 7,12-dimethylbenz[a]anthracen (DMBA) Materials and methods: Investigate of cytotoxic activity of streamed P notoginseng extract prepared at various temperature and time conditions (at 100 oC and at 120 oC for - - - - 10 h) on human lung cancer cell line A549 in order to determine suitable condition to prepare P notoginseng extract for the in vivo study Acute oral toxicity P notoginseng extract is carried out on healthy mice and antitumor effect on DMBA-induced tumor mice Results: Streamed P notoginseng at 100 oC for - 10 h and at 120 oC for - - - 10 h inhibited the proliferation of A549 cells compared with unstreamed P notoginseng and streamed P notoginseng at remaining conditions Streamed P notoginseng at 120 oC for 4h was chosen to prepare the extract for the study on mice The extract had no oral acute toxicity The extract did not affect on survival/mortality of mice, reduced body weight, reduced the skin tumor size and exhibit the necrosis of lung cancer cells Conclusion: Streamed P notoginseng had the antiproliferative activity on A549 cells compared with unstreamed Streamed P notoginseng extract had no oral acute toxicity, in vitro cytotoxic activity and antitumor effect on the DMBA-induced tumor mice LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Quý Thầy Cô khoa Dược - Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, Bộ mơn Dược lý Bộ môn Dược liệu,… giúp đỡ, hướng dẫn tạo điều kiện tốt môi trường, trang thiết bị nghiên cứu suốt q trình tơi thực luận văn tốt nghiệp Đặc biệt, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Cô PGS.TS Đỗ Thị Hồng Tươi – người tạo hội, dẫn dắt, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm tận tình giúp đỡ suốt thời gian từ lúc bắt đầu hồn thành luận văn Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn đến tất anh chị, bạn em monitor Bộ môn Dược lý nhiệt tình hỗ trợ suốt trình thực đề tài luận văn tốt nghiệp Trân trọng cảm ơn Lê Thị Thu Vân MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT i DANH MỤC HÌNH .iii DANH MỤC BẢNG iv MỞ ĐẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Tam thất 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Phân loại thực vật 1.1.3 Phân bố sinh thái 1.1.4 Bộ phận dùng 1.1.5 Thành phần hóa học .4 1.1.6 Phương pháp chế biến Tam thất .4 1.1.7 Tác dụng dược lý 1.1.8 Độc tính Tam thất 1.2 Tổng quan ung thư 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Dịch tễ học .7 1.2.3 Các nguyên nhân gây ung thư 1.2.4 Các phương pháp điều trị ung thư 10 1.2.5 Paclitaxel 13 1.3 Mơ hình tiền lâm sàng khảo sát tác động kháng ung thư 14 1.3.1 Mơ hình in vitro 14 1.3.2 Mơ hình ex vivo 16 1.3.3 Mơ hình in vivo 16 CHƯƠNG II PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.1 Cao chiết Tam thất .21 2.1.2 Động vật thử nghiệm 22 2.1.3 Dòng tế bào 22 2.1.4 Hóa chất .22 2.1.5 Thiết bị 23 2.1.6 Dụng cụ 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Khảo sát hoạt tính độc tế bào in vitro cao chiết Tam thất 24 2.2.2 Khảo sát độc tính cấp đường uống cao chiết Tam thất 26 2.2.3 Khảo sát tác động kháng khối u cao chiết Tam thất chuột nhắt gây khối u DMBA77 .27 2.2.4 Xử lý kết 29 CHƯƠNG III KẾT QUẢ .30 3.1 Hoạt tính độc tế bào ung thư phổi A549 mẫu thử từ Tam thất .30 3.2 Độc tính cấp đường uống chuột nhắt cao chiết Tam thất .33 3.2.1 Độc tính cấp đường uống chuột nhắt cao lỏng Tam thất 33 3.2.2 Độc tính cấp đường uống chuột nhắt cao đặc Tam thất 33 3.3 Tác động kháng khối u cao chiết Tam thất 34 3.3.1 Tác động lên tỉ lệ sống/chết chuột thử nghiệm .34 3.3.2 Tác động lên trọng lượng thể chuột 35 3.3.3 Tác động kháng khối u 36 CHƯƠNG IV BÀN LUẬN 49 4.1 Hoạt tính độc tính tế bào cao chiết Tam thất 49 4.2 Độc tính cấp đường uống chuột nhắt cao chiết Tam thất .50 4.3 Mơ hình gây u chuột nhắt DMBA .51 4.4 Tác động kháng khối u cao chiết Tam thất 51 4.4.1 Tác động lên tỷ lệ sống/chết chuột thử nghiệm 51 4.4.2 Tác động lên trọng lượng thể chuột thử nghiệm 52 4.4.3 Tác động kháng khối u da cao chiết Tam thất 52 4.5 Tác động kháng khối u phổi cao chiết Tam thất 53 4.6 Cơ chế tác động kháng khối u cao chiết Tam thất 54 CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 55 5.1 Kết luận 55 5.2 Đề nghị .55 TÀI LIỆU THAM KHẢO .1 PHỤ LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT STT Từ viết tắt Từ nguyên tiếng nước Acquired Từ nguyên tiếng Việt immunodeficiency Hội chứng suy giảm AIDS syndrome miễn dịch mắc phải AOM Azoxymethan Azoxymethan N-nitrosobis BOP N-nitrosobis (2-oxopropyl) amin CYP Cytochrome P450 DEN Diethylnitrosamin (2- oxopropyl) amin Liều cao không làm Dmax DMBA chuột chết 7,12-dimethyl benza[a]anthracen Dulbecco's Modified Eagle DMEM Medium Môi trường DMEM DMSO Dimethyl sulfoxid Dimethyl sulfoxid 2,2-diphenyl-1- 10 DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl picrylhydrazyl 11 EMEM Eagle’s minimal essential medium Môi trường MEM 12 FBS Fetal bovine serum Huyết bào thai bê Mơ hình chuột biến đổi 13 GEM Genetically engineered mouse gen Yếu 14 IGF1 Insulin-like Growth Factor -1 tố tăng trưởng giống insulin Lethal dose for 100% of the animal Liều gây chết 100% thú 15 LD 100 test population vật thử nghiệm Lethal dose for 50% of the animal Liều gây chết 50% thú 16 LD 50 test population vật thử Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 4.8 4.9 4.10 4.11 4.12 4.13 Chuột 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9 5.10 5.11 5.12 Chuột 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 39,8 43,0 41,5 37,5 24,0 44,8 48,8 43,2 41,6 29,5 44,3 Ngà y 41,0 28,4 47,7 32,8 43,6 40,2 38,2 40,5 44,7 42,0 40,2 37,0 Ngà y 35,3 43,1 48,5 39,2 35,5 36,0 46,0 40,1 40,3 42,6 40,5 36,3 19,6 45,0 47,6 43,1 39,5 28,5 39,7 37,8 41,3 40,5 35,9 36,7 42,5 41,0 35,9 42,3 39,6 35,8 41,0 35,7 36,8 39,1 38,1 36,8 36,3 35,0 36,4 41,4 42,8 45,5 44,7 42,2 35,5 45,0 36,5 45,4 42,5 42,7 44,1 42,3 35,6 33,3 35,7 35,0 34,6 35,4 35,8 34,7 40,1 41,2 40,4 36,6 36,9 40,6 39,6 41,1 Cân nặng chuột lô cao đặc Tam thất (g) Ngày Ngà Ngày Ngày Ngà Ngày Ngà Ngày Ngày y 10 13 y 19 y 25 28 16 22 38,2 35,0 34,1 36,2 32,3 30,0 27,2 31,9 33,3 28,1 27,7 47,5 46,3 46,3 46,9 48,0 46,8 47,3 48,5 49,0 30,6 29,4 27,4 27,2 29,3 30,0 29,8 30,7 32,3 42,8 43,1 41,8 43,1 44,1 44,5 44,8 45,2 46,3 37,7 33,6 32,3 34,0 35,6 36,0 35,7 34,9 33,4 37,3 36,5 36,4 36,0 36,9 37,1 35,2 34,5 29,5 38,8 31,4 35,5 37,4 39,9 39,0 38,7 40,8 40,4 43,3 43,4 44,6 40,6 36,9 32,4 32,1 34,0 38,3 39,0 34,5 35,9 28,7 37,6 33,8 30,0 28,3 28,6 25,9 24,3 27,4 27,8 Cân nặng chuột lô Paclitaxel + cao đặc Tam thất (g) Ngày Ngà Ngày Ngày Ngà Ngày Ngà Ngày Ngày y 10 13 y 19 y 25 28 16 22 42,6 43,8 39,0 30,8 34,6 44,7 39,0 34,0 38,8 30,6 42,3 35,2 34,6 34,2 34,9 35,8 36,3 35,5 35,6 34,1 36,0 37,7 37,0 35,3 32,9 40,2 37,4 33,4 33,5 32,4 30,3 31,7 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 6.9 6.10 6.11 6.12 6.13 6.14 49,2 41,7 39,6 34,4 28,0 29,8 47,5 42,0 38,3 34,1 45,4 39,8 34,8 33,2 42,2 37,7 32,2 32,9 44,8 38,5 32,9 30,7 30,9 30,1 26,4 24,8 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 45,6 39,9 34,7 29,7 47,8 41,2 35,3 27,5 45,3 42,9 34,5 29,2 48,7 42,8 36,6 29,3 49,4 42,9 37,6 31,7 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục Kết số lượng kích thước khối u phổi Mã Số Lơ chuột lượng Tổng kích thước u (mm3) Chứng bệnh 1.1 0,00300 1.2 0,00213 1.3 0,00219 1.4 0,00113 1.5 16 0,00744 1.6 13 0,00863 1.7 0,00456 1.8 0,00119 Paclitaxel 2.1 0,00200 2.2 12 0,00988 2.3 28 0,00350 2.4 0,00056 2.5 0,00556 2.6 0,00025 Cao lỏng Tam thất 3.1 21 0,02319 3.2 0,00138 3.3 16 0,01269 3.4 0,00425 3.5 0,00113 3.6 14 0,00700 3.7 0,00056 3.8 0,00144 Paclitaxel + cao lỏng Tam 4.1 0,03800 thất 4.2 0,00238 4.3 0,00231 4.4 0,00331 4.5 0,00238 Cao đặc Tam thất 5.1 0,01019 5.2 16 0,00275 5.3 0,00163 5.4 12 0,00456 5.5 0,00081 5.6 12 0,01519 Paclitaxel + cao lỏng Tam 6.1 0,00050 thất 6.2 19 0,02000 6.3 0,00225 6.4 17 0,01056 6.5 0,00113 6.6 0,00506 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 6.7 10 Phụ lục 10 Hình vi thể da chuột thử nghiệm 0,00238 Chuột U nhú gai Chuột Tăng sản tuyến bã + viêm loét da mạn tính Chuột U nhú gai Chuột U nhú gai Chuột Carcinom tế bào gai Chuột U nhú gai Chuột U nhú gai Lô chứng bệnh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chuột Carcinơm tế bào gai hoại tử Chuột Carcinôm tế bào gai hoại tử trung tâm xung quanh Chuột U nhú gai Chuột U nhú gai Chuột Carcinom tế bào gai hoại tử trung tâm Lô paclitaxel Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chuột U nhú gai Chuột U nhú gai Chuột Tăng sản tuyến bã, viêm loét da mạn tính Chuột Tăng sản tuyến bã Chuột U nhú gai Chuột Tăng sản tuyến bã Chuột U nhú gai Chuột Tăng sản tuyến bã Lô cao lỏng Tam thất Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chuột U nhú gai Chuột Ccarcinom tế bào gai hoại tử trung tâm Chuột U nhú gai + tăng sản tuyến bã Chuột U nhú gai Chuột Carcinom tế bào gai hoại tử trung tâm Lô paclitaxel + cao lỏng Tam thất Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chuột Carcinom tế bào gai Chuột U nhú gai Chuột U nhú gai Chuột U nhú gai Chuột U nhú gai Chuột Tăng sản tuyến bã viêm loét da mạn tính Chuột U nhú gai Chuột Carcinom tế bào gai hoại tử trung tâm Lô cao đặc Tam thất Chuột U nhú gai Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Chuột nhú gai Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chuột U nhú gai Chuột U nhú gai Chuột U nhú gai Lô paclitaxel + cao đặc Tam thất Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 11 Hình vi thể phổi chuột thử nghiệm Chuột Carcinom tuyến với hoại tử Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u quanh khối u Chuột Carcinom tuyến Chuột Carcinom tuyến Chuột Carcinom tuyến Chuột Carcinom tuyến Chuột Carcinom tuyến Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u Lô chứng bệnh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chuột Carcinom tuyến với hoại tử Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u khối u Chuôt Carcinom tuyến Chuột Carcinom tuyến quanh khối u Chuột Carcinom tuyến Chuột Viêm phổi mô kẽ Lô paclitaxel Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u Chuột Carcinom tuyến với hoại tử khối u Chuột Carcinom tuyến Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u Chuột Carcinom tuyến với hoại tử Chuột Viêm phổi mô kẽ quanh khối u Chuột Carcinom tuyến Lô cao lỏng Tam thất Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chuột Carcinom tuyến Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u Chuột 3.Viêm phổi mô kẽ Chuột Carcinom tuyến với hoại tử khối u Chuột Carcinom tuyến Chuột Carcinom tuyến với hoại tử khối u Lô paclitaxel + cao lỏng Tam thất Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chuột Viêm phổi mô kẽ Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u Chuột Carcinom tuyến với hoại tử Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u khối u Chuột Carcinom tuyến Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u Chuột Carcinom tuyến với hoại tử Chuột arcinom tuyến với hoại tử quanh khối u khối u Lô cao đặc Tam thất Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Chuột Carcinom tuyến với hoại tử Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u quanh khối u Chuột Carcinom tuyến với hoại tử Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u quanh khối u Chuột Carcinom tuyến với hoại tử Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u quanh khối u Chuột Carcinom tuyến với hoại tử quanh khối u Lô paclitaxel + cao đặc Tam thất Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn