0795 nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính gây độc tế bào của cây bạch trinh biển (hymenocallis littoralis) việt nam luận văn tốt nghiệp

BỘGIÁODỤCVÀ ĐÀOTẠO TRƯỜNGĐẠIHỌCBÁCHKHOAHÀNỘI ĐinhThị PhươngAnh NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNHGÂYĐỘCTẾBÀOCỦACÂYBẠCHTRINH BIỂN(HYMENOCALLIS LITTORALIS) VIỆTNAM LUẬNÁNTIẾNSĨHĨAHỌC HàNội -2014 BỘGIÁODỤCVÀ ĐÀOTẠO TRƯỜNGĐẠIHỌCBÁCHKHOAHÀNỘI ĐinhThị PhươngAnh NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNHGÂYĐỘCTẾBÀOCỦACÂYBẠCHTRINH BIỂN(HYMENOCALLIS LITTORALIS) VIỆTNAM Chunngành: HóahũuCaMãso: 62440114 LUẬNÁNTIẾNSĨHĨAHỌC NGƯỜIHƯỚNGDẪNKHOAHỌC: PGS.TS VŨĐÌNHHỒNG TS.TRẦNBẠCHDƯƠNG HàNội -2014 MỤCLỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG1:TỔNGQUAN 1.1 Thực vật họ Thủy tiên (Amaryllidaceae), chi Bạch trinh (Hymenocallis) loàiBạchtrinhbiển(Hymenocallislittoralis) 1.1.1 Thựcvậthọ Thủytiên(Amaryllidaceae) 1.1.2 Thựcvật chiBạchtrinh(Hymenocallis)vàloàiBạchtrinhbiển(Hymenocallislittoralis) .3 1.2 ThànhphầnhóahọchọThủytiên(Amaryllidaceae),chiBạchtrinh(Hymenocallis)vàlo àiBạchtrinhbiển(Hymenocallislittoralis) 1.2.1 Thành phần hóa học họThủy tiên (Amaryllidaceae) 1.2.2 Thành phần hóa học chi Bạch trinh (Hymenocallis) loài Bạch trinh biển(Hymenocallislittoralis) 11 1.3 Hoạt tính sinh học họ Thủy tiên (Amaryllidaceae), chi Bạch trinh(Hymenocallis)vàlồiBạchtrinhbiển(Hymenocallis littoralis) 27 1.3.1 Hoạt tínhsinhhọc củahọThủy tiên (Amaryllidaceae) 27 1.3.2.Hoạt tính sinh học chi Bạch trinh (Hymenocallis) loài Bạch trinh biển(Hymenocallislittoralis) 30 CHƯƠNG2: THỰCNGHIỆM 33 2.1 Mẫuthựcvật 33 2.2 Phươngpháp phânlập cáchợpchất .33 2.2.1 Sắckýlớp mỏng(TLC) 33 2.2.2 Sắc kýcột(CC) 33 2.2.3 Sắckýlỏnghiệunăngcao(HPLC) 33 2.3 Phươngpháp xácđịnhcấutrúccáchợpchất 33 2.3.1 Phổ hồngngoại(FT-IR) .34 2.3.2 Phổkhốilượng(ESI-MS) .34 2.3.3 Phổ khốilượngphângiảicao(FT-ICR-MS) 34 2.3.4 Phổcộnghưởngtừhạt nhân(NMR) 34 2.3.5 Điểmnóngchảy 34 2.3.6 Độquaycựcriêng 34 2.4 Phươngpháp thửhoạttínhsinhhọc 35 2.5 Phânlậpcáchợpchất 35 2.5.1 Xửlýmẫu thựcvậtvà chiết táchcây Bạch trinhbiển 35 2.5.2 Phânlậpcác hợpchất từcặnHLF 36 2.5.2.1 PhânlậpcáchợpchấtHLB2,HLB4,HLB5từcặnHLF .36 2.5.2.2.PhânlậpcáchợpchấtHLB1,HL53,HLB12,HLB13vàHLB14 .38 2.5.3 Phânlậpcáchợpchất 41 2.5.3.1 PhânlậpcáchợpchấtHLB8,HLB9,HLB10vàHL22 41 3.5.3.2 Phânlập cáchợpchấtHLB6,HLB7,HLB11và HLB17 42 2.6 Chuyểnhóamộtsốalkaloid 44 2.6.1 Axetylhóatazettine .44 2.6.2 Axetylhóalycorine .45 2.6.3.Axetylhóahaemanthamine 45 2.7 Hằngsốvậtlývàcácdữliệuphổcủacáchợpchấtđãphânlập 46 2.7.1 HợpchấtHLB1 46 2.7.2 HợpchấtHLB2 47 2.7.3 HợpchấtHLB4 47 2.7.4 HợpchấtHLB13 48 2.7.5 HợpchấtHL53 49 2.7.6 HợpchấtHLB5 49 2.7.7 HợpchấtHLB12 50 2.7.8 HợpchấtHLB14 50 2.7.9 HợpchấtHLB6 51 2.7.10 HợpchấtHLB7 51 2.7.11 HợpchấtHLB8 52 2.7.12 HợpchấtHLB9 53 2.7.13 HợpchấtHLB10 .54 2.7.14 HợpchấtHLB11 .54 2.7.15 HợpchấtHLB17 .55 2.7.16 HợpchấtHL22 56 2.8 Hằngsốvật lývà dữliệuphổcủa cácdẫnxuấtaxetyl hóa alkaloid .57 2.8.1 HợpchấtTA2 57 2.8.2 HợpchấtLY1 58 2.8.3 HợpchấtLY2 58 2.8.4 HợpchấtHA1 .59 2.9 Hoạt tínhsinhhọccủa cáccặnchiết,hợpchất đãphân lập vàbán tổnghợp .60 CHƯƠNG3:KẾTQUẢVÀTHẢOLUẬN 63 3.1 Mẫuthựcvật 63 3.2 Phânlậpcáchợpchất 63 3.3 Xác địnhcấu trúchóahọc cáchợpchấtphânlập đượctừcâyBạchtrinhbiển63 3.3.1 HợpchấtHLB1 63 3.3.2 HợpchấtHLB2 66 3.3.3 HợpchấtHLB4 68 3.3.4 HợpchấtHLB13 69 3.3.5 HợpchấtHL53(chấtmới) 71 3.3.6 HợpchấtHLB5 78 3.3.7 HợpchấtHLB12 79 3.3.8 HợpchấtHLB14 81 3.3.9 HợpchấtHLB6 82 3.3.10 HợpchấtHLB7 84 3.3.11 HợpchấtHLB8 86 3.3.12 HợpchấtHLB9 88 3.3.13 HợpchấtHLB10 .90 3.3.14 HợpchấtHLB11 .92 3.3.15 HợpchấtHLB17 .93 3.3.16 HợpchấtHL22(chấtmới) 95 3.4 Tổnghợpcác dẫnxuất mộtsốalkaloid phân lập đượctừcâyBạchtrinh biển(Hymenocallislittoralis) 102 3.4.1 HợpchấtTA2 105 4.4.2 HợpchấtLY1 107 4.4.3 HợpchấtLY2 108 4.4.4 HợpchấtHA1 110 3.5 Hoạttínhgây độc tếbào Bạchtrinhbiển (Hymenocallis littoralis) 112 3.5.1 Hoạttínhgâyđộctếbàocủacácdịchchiết,cáchợpchấtphânlập 113 3.5.1.1 Hoạttínhgâyđộctếbàocủacácdịchchiết .113 3.5.1.2 Hoạttínhgâyđộctếbàocủacácflavonoidvàchromone 113 3.5.1.3 Hoạttínhgâyđộctếbàocủacácalkaloid 115 3.5.2 Hoạttínhgâyđộctếbàocủacácdẫnxuấtaxetylhóacácalkaloid 116 KẾTLUẬN 121 TÀILIỆUTHAMKHẢO 123 DANHMỤCCÁCCƠNGTRÌNHĐÃCƠNGBỐ 141 PHỤLỤC 142 DANHMỤCCÁCCHỮVIẾTTẮT h Giờ IC50 Nồngđộứcchế50% đốitượngthử TBƯT Tếbào ungthư DMSO Dimethylsunfoxide OD mậtđộquanghọc(Optical Density) SRB SulforhodamineB FBS Fetalbovineserum NCI NationalCancerInstitute TCA Trichloraceticacid MeOH Methanol EtOH Ethanol EtOAc Ethylacetate CHCl3 Chloroform δ Độ chuyển dịchhóa học J Hằngsốtươngtác ĐC Đốichứng TLC Thin Layer Chromotography(Sắckýlớpm ỏng) NMR Nuclear magnetic resonance(Phổcộnghưởngtừh ạtnhân) IR Infrared spectroscopy(Phổhồng ngoại) ESI-MS Electrospray Ionisation Mass Spectrometry(Phổkhốilượngthơngquaionhóa điệntử) Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Spectrometry (Phổkhốilượngphân giảicao) FT-ICR-MS UV Ultraviolet (Tửngoại) Mass DANHMỤCHÌNHVẼ,SƠĐỒ Hình1.1.CâyBạchtrinhbiển Sơđồ2.1:Sơđồchiếtmẫucây Bạchtrinhbiển(Hymenocallis littoralis) 36 Sơđồ2.2:SơđồphânlậpHLB2,HLB4vàHLB5 37 Sơđồ2.3:SơđồphânlậpHLB1,HLB53,HLB12,HLB13vàHLB14 39 Sơđồ2.4:SơđồphânlậpHLB8,HLB9,HLB10vàHL22 41 Sơđồ2.5:SơđồphânlậpHLB6,HLB7,HLB11vàHLB17 .43 Sơđồ2.6:Sơđồphảnứngaxetylhóatazettine 44 Sơđồ2.7:Sơđồphảnứngaxetylhóalycorine 45 Sơđồ2.8:Sơđồphảnứngaxetylhóahaemanthamine .46 Hình3.1:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọccủaHLB1 64 Hình3.2:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọccủaHLB2 66 Hình3.3:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a HLB4 68 Hình3.4:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a HLB13 70 Hình3.5:PhổkhốilượngESI-MSc ủ a HL53 71 Hình3.6:PhổkhốilượngFT-CIR-MSc ủ a HL53 72 Hình3.7:Phổ1HNMRcủaHL53 73 Hình3.8:Phổ13CNMRcủaHL53 74 Hình3.9:PhổHSQCcủaHL53 74 Hình3.10:PhổHMBCcủaHL53 75 Hình3.11:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọccủaHL53 76 Hình3.13:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a HLB5 78 Hình3.14:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a HLB12 80 Hình3.15:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a HLB14 81 Hình3.16:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a HLB6 83 Hình3.17:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a HLB7 84 Hình3.18:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a HLB8 86 Hình 3.20:T n g tácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a H L B 90 Hình3.21:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a HLB11 92 Hình3.22:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a HLB17 94 Hình3.23:PhổkhốilượngFT-CIR-MSc ủ a HL22 .96 Hình3.24:Phổ1HNMRcủahợpchấtHL22 .97 Hình3.25:Phổ1CNMRcủahợpchấtHL22 98 Hình3.26:PhổDEPTcủahợpchấtHL22 98 Hình3.27:PhổHSQCcủahợpchấtHL22 .99 Hình3.28:PhổHMBCcủahợpchấtHLB9 100 Hình3.29:PhổHMBCcủahợpchấtHL22 100 Hình3.30:TươngtácxaHMBC(H→C)vàcấutrúchóahọcc ủ a HL22 101 Sơđồ3.1.Phảnứngaxetylhóahaemanthamine,tazettinevàlycorine 104 Sơđồ3.2.Cơchếphảnứngaxetylhóa 104 Hình3.31:Cấutrúchóahọcc ủ a TA2 105 Hình3.32:Cấutrúchóahọcc ủ a LY1 107 Hình3.33:Cấutrúchóahọcc ủ a LY2 109 Hình3.34:Cấutrúchóahọcc ủ a HA1 111 DANHMỤCBẢNGBIỂU Bảng1.1:CácdạngalkaloidtronghọThủytiên(Amaryllidaceae) .7 Bảng1.2:MộtsốalkaloidtrongchiHymenocallis 14 Bảng 1.3:Cácthànhphầndễbay hơiđượckhảosáttừtinhdầucâyBạchtrinhbiển 26 Bảng3.1:Độchuyểndịchδ1Hvàδ13CcủaHLB1 .65 Bảng3.2:Độchuyểndịch  H và HLB2 67 C H và C củaHLB4 68 H và C củaHLB13 70 H và C củaHL53 77 H và HLB5 79 C H và HLB12 80 C H và Bảng3.3:Độchuyểndịch Bả ng 3.4: Đ ộ c h u y ể n d ị c h  B ảng 3.5: Độ chuyển dịch Bảng3.6:Độchuyểndịch Bảng3.7:Độchuyểndịch Bảng3.8:Độchuyểndịch 13 13 13 13 Bảng3.9:Độchuyểndịch  13 13 củaHLB14 82 13 C và HLB6 83 13 H C Bảng3.10:Độchuyểndịch  v àH HLB7 85 13 Bảng3.11:Độchuyểndịch  v àH HLB8 87 13 Bảng3.12:Độchuyểndịch Bản H và HLB9 88 C H và HLB10 91 C H và HLB11 92 C H và HLB17 94 C H và HL22 101 C H và TA2 105 C g 3.13 : Đ ộ c h u y ể n d ị c h  B ảng 3.14: Độ chuyển dịch Bảng 3.15:Độc h u y ể n dịch Bảng 13 13 13 13 13 13 3.16: Độ chuyển dịch Bảng và LY1 .107 H C chuyển và 3.17: Độ LY2 .109 H C dịch Bảng 3.18: Độ dịch và HA1 111 H C 13 13 13 chuyển Bảng3.19:Độdịchchuy ển Bảng chuyển 3.20: Độ dịch Bảng3.21:Kếtquảthửhoạttínhgâyđộctếbàocủacácdịchchiết .113 Bảng3.22:Kết thửhoạttínhgây độctế bào củacác flavonoidvà chromone .114 Bảng3.23:Kếtquảthửhoạttínhgâyđộctếbàocủacácalkaloid 115 Bảng3.24:Kếtquảthửhoạttínhgâyđộctếbàocủacácdẫnxuấtaxetyl .116