Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính gây độc tế bào của cây lạc tiên (passiflora foetida l ) ở tỉnh thừa thiên huế bằng dung môi hữu cơ phân cực

ĐẠI HỌC HUẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HUỲNH THỊ TÝ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO CỦA CÂY LẠC TIÊN (PASSIFLORA FOETIDA L.) Ở TỈNH THỪA THIÊN HUẾ BẰNG DUNG MÔI HỮU CƠ PHÂN CỰC Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 01 44 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC TS NGUYỄN CHÍ BẢO Thừa Thiên Huế, năm 2016 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu ghi luận văn trung thực, đồng tác giả cho phép sử dụng chưa công bố cơng trình khác Họ tên tác giả Huỳnh Thị Tý ii Lời Cảm Ơn Luận văn hồn thành täi phịng thí nghiệm hp chỗt t nhiờn, trng ọi hc s phọm Hu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chån thành såu sắc đến TS Nguyễn Chí Bâo người hướng dẫn tận tình, chu đáo täo điều kiện giúp đỡ thời gian thực luận văn Tơi xin chân thành câm ơn thỉy giáo khoa Hóa nói chung tổ Hóa hữu nói riêng giúp đỡ nhiệt tình để tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ kính trọng câm ơn tới Ban Giám hiệu, phòng Đào täo Sau Đäi học, trường Đäi học Sư phäm Huế täo điều kiện thuận lợi giúp thực đề tài Cuối cùng, xin chân thành câm ơn gia đình, bän bè cổ vũ, động viên để tơi có thêm nghị lực say mê nghiên cứu khoa học Tôi xin trân trọng câm ơn! Tác giâ luận văn Huỳnh Thị Tý iii MỤC LỤC Trang TRANG PHỤ BÌA i LỜI CAM ĐOAN ii LỜI CẢM ƠN iii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT .3 DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài .6 Đối tượng phạm vi nghiên cứu .6 Nội dung đề tài Phương pháp nghiên cứu .7 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .7 Cấu trúc luận văn Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung họ Passifloraceae chi Passiflora 1.1.1 Vài nét họ Passifloraceae .8 1.1.2 Vài nét chi Passiflora 10 1.1.3 Hoạt tính sinh học loài thuộc chi Passiflora .11 1.2 Sơ lược Lạc tiên (Passiflora foetida L.) 17 1.2.1 Vị trí phân loại 17 1.2.2 Đặc điểm thực vật 17 1.2.3 Thành phần hoá học 18 1.2.4 Công dụng 20 1.2.5 Hoạt tính sinh học 21 1.3 Các sản phẩm ứng dụng thị trường 22 1.3.1 Các sản phẩm ứng dụng số loài thuộc chi Passiflora 22 1.3.2 Các sản phẩm ứng dụng Lạc tiên (Passiflora foetida L.) 26 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .30 2.1 Đối tượng nghiên cứu .30 2.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị nghiên cứu .30 2.2.1 Hóa chất 30 2.2.2 Dụng cụ thiết bị 30 2.3 Phương pháp nghiên cứu 31 2.3.1 Phương pháp thu hái, định danh xử lý mẫu 31 2.3.2 Phương pháp chiết xuất 31 2.3.3 Phương pháp phân lập 32 2.3.4 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học 33 2.4 Phương pháp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào .33 2.4.1 Thiết bị nghiên cứu 33 2.4.2 Các dòng tế bào 33 2.4.3 Phương pháp .33 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .35 3.1 Định danh loài 35 3.2 Hàm lượng cao chiết .35 3.3 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào cao chiết 37 3.4 Phân lập khảo sát cao chiết 38 3.4.1 Phân lập chất từ cao chiết ethyl acetate 38 3.4.2 Khảo sát cao chiết methanol SKLM 42 3.5 Nhận dạng hợp chất phân lập 43 3.5.1 Hợp chất PFE2 43 3.5.2 Hợp chất PFE1 49 KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC P1 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Các phƣơng pháp phổ H-NMR 13 C-NMR IR Proton Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt Resonance Spectroscopy nhân proton Carbon-13 Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt Resonance Spectroscopy nhân carbon 13 Infrared Spectroscopy Phổ hồng ngoại Hằng số tương tác tính J (Hz) Hz δ(ppm) ppm = part per million Độ dịch chuyển hóa học tính phần triệu Các dòng tế bào Hep-G2 Human hepatocellular Ung thư gan Carcinoma KB Human epidermoid Ung thư biểu mô carcinoma LU Human bronchogenic Ung thư phổi carcinoma MCF-7 Ung thư vú Human breast adenocarcinoma Các ký hiệu viết tắt khác DMSO Dimethyl sulfoxide EC50 Effective Concentration 50% Nồng độ hiệu 50% ED50 Effective Dose 50% Liều lượng hiệu 50% IC50 Inhibitory Concentration 50% Nồng độ ức chế 50% Rf Retardation factor Yếu tố chậm trễ SKC (TLC) Thin Layer Chromatography Sắc ký cột SKLM Sắc ký lớp mỏng TLTK Tài liệu tham khảo UV Ultraviolet Tia tử ngoại DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Danh mục loài thuộc họ Lạc tiên (Passifloraceae) Việt Nam Bảng 1.2 Các loài thuộc chi Passiflora Việt Nam 11 Bảng 1.3 Hoạt tính sinh học loài thuộc chi Passiflora 12 Bảng 1.4 Hiệu gây độc tế bào cao chiết ethanol lồi Passiflora incarnata L với dịng tế bào EAC 14 Bảng 1.5 Hoạt tính kháng oxi hóa Passiflora edulis 14 Bảng 1.6 Các sản phẩm ứng dụng số loài thuộc chi Passiflora 23 Bảng 1.7 Các sản phẩm từ Lạc tiên (Passiflora foetida L.) 27 Bảng 3.1 Hàm lượng cao chiết phần mặt đất Lạc tiên 37 Bảng 3.2 Hoạt tính gây độc tế bào cao chiết phần mặt đất Lạc tiên 37 Bảng 3.3 Số liệu phổ NMR hợp chất PFE2 (DMSO, 125/500 MHz) daucosterol (DMSO, 125/500 MHz) 46 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Hình ảnh số phận Lạc tiên 30 Hình 3.1 Cành, Lạc tiên (Passiflora foetida L.) 35 Hình 3.2 Sơ đồ chiết xuất cao chiết từ Lạc tiên (Passiflora foetida L.) 36 Hình 3.3 SKLM chất PFE1 hệ dung môi dichlorometane:methanol [97:3] 40 Hình 3.4 SKLM chất PFE2 hệ dung môi dichloromethane:methanol [90:10] 41 Hình 3.5 Sơ đồ phân lập chất từ cao chiết ethyl acetate 42 Hình 3.6 SKLM cao chiết methanol Lạc tiên hệ dung môi khác 43 Hình 3.7 Phổ IR hợp chất PFE2 43 Hình 3.8 Phổ 1H-NMR hợp chất PFE2 44 Hình 3.9 Phổ 13C-NMR hợp chất PFE2 45 Hình 3.10 Phổ DEPT hợp chất PFE2 45 Hình 3.11 Cấu trúc hợp chất PFE2 (daucosterol) 48 Hình 3.12 Phổ 1H-NMR hợp chất PFE1 49 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ngày nay, sản phẩm từ thiên nhiên có hoạt tính sinh học tốt ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực khác đời sống, có y học Những năm gần đây, nhiều hợp chất thiên nhiên sản phẩm tổng hợp, bán tổng hợp từ hợp chất thiên nhiên sử dụng hiệu việc phòng ngừa điều trị số bệnh, đặc biệt bệnh hiểm nghèo Tại Việt Nam, giai đoạn 2010-2015, năm có 150.000 trường hợp mắc ung thư, có khoảng 75.000 trường hợp tử vong số có xu hướng tăng lên năm [68] Các phương pháp điều trị ung thư thơng thường phẫu thuật, hóa trị xạ trị hay để lại tác dụng phụ Các tác dụng không mong muốn gây nhiều khó chịu, ảnh hưởng đến chất lượng sống bệnh nhân Vì vậy, việc tìm giải pháp điều trị ung thư yêu cầu cấp thiết Hiện nay, Lạc tiên (Passiflora foetida L.) thu hút quan tâm nhiều nhà khoa học nước giới Nghiên cứu ban đầu cho thấy Passiflora foetida có hoạt tính gây độc tế bào tiềm [10] Cao chiết ethanol từ lồi thể hoạt tính tốt dịng tế bào ung thư vú (SKBR3) với giá trị IC50 tương đối thấp [40] Bên cạnh đó, theo kinh nghiệm dân gian, Lạc tiên sử dụng để trị đau bụng, chữa ho, hồi hộp, ngủ suy nhược thần kinh [62], [67], [69] Vì vậy, Passiflora foetida cần nghiên cứu sâu thành phần hóa học hoạt tính gây độc tế bào để làm tăng giá trị Đồng thời, để góp phần giải thích tác dụng chữa bệnh từ loại dược liệu này, chúng tơi chọn đề tài “Nghiên cứu thành phần hố học hoạt tính gây độc tế bào Lạc tiên (Passiflora foetida L.) tỉnh Thừa Thiên Huế dung môi hữu phân cực” Mục tiêu đề tài Cung cấp thơng tin thành phần hóa học cao chiết phân cực hoạt tính gây độc tế bào Lạc tiên (Passiflora foetida L.) Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu phần mặt đất Lạc tiên (Passiflora foetida L.) tỉnh Thừa Thiên Huế Nội dung đề tài - Thu thập mẫu nguyên liệu định danh loài - Xử lý mẫu, chiết xuất với dung mơi có độ phân cực tăng dần - Phân lập cấu tử từ cao chiết dung môi phân cực xác định cấu trúc hóa học cấu tử phân lập - Khảo sát hoạt tính gây độc tế bào từ cao chiết Phƣơng pháp nghiên cứu - Phương pháp thu hái, định danh xử lý mẫu - Phương pháp chiết xuất phân lập + Phương pháp chiết rắn - lỏng + Phương pháp sắc ký cột hấp thu + Phương pháp sắc ký lớp mỏng - Xác định cấu trúc hợp chất phân lập + Phương pháp phổ hồng ngoại (IR) + Phương pháp phổ cộng hưởng từ nhân: 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Lần nghiên cứu để xác định thành phần hóa học cao chiết dung môi phân cực khảo sát hoạt tính gây độc tế bào Lạc tiên (Passiflora foetida L.) tỉnh Thừa Thiên Huế nhằm giải thích kinh nghiệm sử dụng dược liệu người dân địa phương Cấu trúc luận văn Luận văn gồm 71 trang với chương, 10 bảng, 13 hình, 75 tài liệu tham khảo 12 phụ lục Luận văn có bố cục sau: Mở đầu: trang Chương Tổng quan: 22 trang Chương Đối tượng phương pháp nghiên cứu: trang Chương Kết thảo luận: 15 trang Kết luận khuyến nghị: trang Tài liệu tham khảo: trang Phụ lục: 13 trang III Website 57 A.Vogel Helpline (2012), “Passiflora and Avena sativa, avogel.co.uk, 15/09/2016 58 Bio-health (2016), “Passiflora Herb Capsules”, bio-health.co.uk, 30/08/2016 59 Công ty TNHH La Va (2016), “Cao Lạc tiên – Trị chứng ngủ thường xuyên”, lavaviet.com, 19/08/2016 60 Công ty TNHH La Va (2016), “Trị dứt chứng ngủ đơn giản từ thảo dược Lạc tiên”, suckhoexanh.net, 31/08/2016 61 Công ty TNHH Thôn Trang Xanh (2013), “Trà Lạc tiên”, thontrangxanh.com, 05/12/2016 62 Nguyễn Văn Dũng (2016), “4 tác dụng chữa bệnh Lạc tiên”, tacdungcua.net, 21/05/2016 63 Erba vita (2016), “Capsule Monoplanta – Passiflora”, iafstore.com, 29/08/2016 64 Healthaid (2016), “Passiflora Flower (Passiflora incarnata) 50 mL Liquid”, healthaid.co.uk, 05/08/2016 65 Healthstore (2016), “Bio-Health Passiflora Herb 300 mg 60 Capsules”, healthstore.uk.com, 12/08/2016 66 Herbashop Produse Naturiste online (2009), “Passiflora extract”, herbashop.allshops.ro, 03/09/2016 67 Thúy Hằng (2013), “Cao Lạc tiên vị thuốc an thần chống ngủ”, vatgia.com, 30/09/2013 68 Phạm Huyền (2016), “Ăn chết, người Việt mắc ung thư nhanh giới”, vietnamnet.vn, 04/08/2016 69 Quỳnh Hương (2015), “Tác dụng Lạc tiên”, Tamduoc.com, 03/08/2016 70 Trần Việt Hưng (2015), “Dây mát hay Lạc tiên trứng”, ucchau.ndclnh.com, 19/09/2015 71 Ray sahelian (2016), Passion Flower herb and extract for stress relief, raysahelian.com, 20/01/2016 72 Rxhomeo (2016), “Passiflora incarnata”, rxhomeo.com, 15/09/2016 57 73 Thuốc quý sức khỏe vàng (2016), “Tác dụng Lạc tiên”, thuocquy.net, 10/09/2016 74 Phạm Tiếp (2013), “Cây Lạc tiên – thuốc an thần kỳ diệu”, vntrades.com, 17/04/2013 75 Phạm Tiếp (2014), “Cây Lạc tiên – thuốc an thần kỳ diệu chữa ngủ tốt”, rongbay.com, 09/09/2014 58 PHỤ LỤC P.1 PHỤ LỤC I Phổ IR, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT daucosterol P1 Phổ IR daucosterol P.2 P2 Phổ 1H-NMR daucosterol P.3 P3 Phổ 1H-NMR giãn rộng daucosterol (1) P.4 P4 Phổ 1H-NMR giãn rộng daucosterol (2) P.5 P5 Phổ 13C-NMR daucosterol P.6 P6 Phổ 13C-NMR giãn rộng daucosterol (1) P.7 P7 Phổ 13C-NMR giãn rộng daucosterol (2) P.8 P.8 Phổ C13CPD DEPT daucosterol P.9 PHỤ LỤC IV Phổ 1H-NMR hợp chất PFE1 P9 Phổ 1H-NMR hợp chất PFE1 P.10 P10 Phổ 1H-NMR giãn rộng PFE1 P.11 PHỤ LỤC II Giấy xác nhận giám định tên khoa học Lạc tiên P.12 PHỤ LỤC III Kết thử hoạt tính gây độc tế bào P.13 ... phân cực hoạt tính gây độc tế bào L? ??c tiên (Passiflora foetida L. ) Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu phần mặt đất L? ??c tiên (Passiflora foetida L. ) tỉnh Thừa Thiên Huế Nội dung. .. ? ?Nghiên cứu thành phần hố học hoạt tính gây độc tế bào L? ??c tiên (Passiflora foetida L. ) tỉnh Thừa Thiên Huế dung môi hữu phân cực? ?? Mục tiêu đề tài Cung cấp thông tin thành phần hóa học cao chiết phân. .. L. ) 1.2.1 Vị trí phân loại Cây L? ??c tiên (Passiflora foetida L. ) có vị trí phân loại sau: Họ L? ??c tiên (Passifloraceae) Chi Passiflora Loài Passiflora foetida L Passiflora foetida L lồi thực vật có