Nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng sinh học của cây tam phân (Paramignya trimera (Oliv.) Guill.) và cây Nhó đông (Morinda longissima Y.Z. Ruan) (tt)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẦN THU HƯỜNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY XÁO TAM PHÂN (PARAMIGNYA TRIMERA (OILV.) GUILL.) VÀ CÂY NHĨ ĐƠNG (MORINDA LONGISSIMA Y Z RUAN) Chuyên ngành: Hóa học hợp chất thiên nhiên Mã số chuyên ngành: 9.44.01.17 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SỸ HĨA HỌC Hà Nội, 2020 Cơng trình hồn thành tại: Học viện Khoa học Cơng nghệ Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học 1: PGS TS Nguyễn Mạnh Cường Người hướng dẫn khoa học 2: PGS TS Đỗ Thị Thảo Phản biện 1: … Phản biện 2: … Phản biện 3: … Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án tiến sĩ cấp Học viện, họp Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi … ’, ngày … tháng … năm 2020 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Việt Nam MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Ở Việt Nam, bẩy loài Paramignya phân bố chủ yếu miền nam Lồi Paramignya trimera (Oliv.) Guill.) có tên địa phương thần dược Xáo tam phân Cây đặc hữu Việt Nam Thân rễ được dùng để điều trị bệnh gan, đặc biệt xơ gan Morinda longissima Y Z Ruan (Rubiaceae) loài nhỏ phân bố chủ yếu khu vực phía bắc Việt Nam Đồng bào Thái tỉnh Sơn La Lai Châu sử dụng thân rễ rễ để chữa bệnh gan, viêm phù nề Do đó, nhiệm vụ nghiên cứu thành phần hóa học thân rễ lồi Xáo tam phân Nhó đơng nước ta quan trọng cần thiết Từ đó, chúng tơi chọn đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học Xáo tam phân (Paramignya trimea (Oliv.) Guill.) Nhó đơng (Morinda longissima Y Z Ruan)” Mục tiêu nghiên cứu luận án Phân lập xác định cấu trúc hóa học số hợp chất từ thân rễ loài Xáo tam phân (Paramignya trimera (Oliv.) Guill.) Nhó đơng (Morinda longissima Y Z Ruan) Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan kháng virus viêm gan B cao chiết hợp chất Những nội dung nghiên cứu luận án - Đánh giá tác dụng bảo vệ gan tác dụng kháng virus viêm gan B cao chiết tổng - Phân lập hợp chất từ thân rễ lồi Xáo tam phân Nhó đơng - Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập - Đánh giá tác dụng bảo vệ gan kháng virus viêm gan B số hợp chất Bố cục Luận án: Luận án bao gồm 139 trang với 45 bảng, 21 hình, sơ đồ phân lập 137 tài liệu tham khảo Luận án bao gồm chương: Giới thiệu (2 trang), Chương 1: Tổng quan (28 trang); Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu (02 trang); Chương 3: Kết (10 trang), Chương 4: Thảo luận (83 trang); Kết luận (2 trang); Kiến nghị (1 trang); Các báo liên quan đến luận án (1 trang); Tài liệu tham khảo (15 trang); Phụ lục (31 trang) CHƯƠNG 1.TỔNG QUAN Phần tổng quan đề cập đến vấn đề sau: - Thành phần hóa học hoạt tính sinh học chi Paramignya - Thành phần hóa học hoạt tính sinh học chi Morinda - Tổng quan kỹ thuật đánh giá tác dụng bảo vệ gan kháng virus viêm gan B CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Thân rễ Xáo tam phân (Paramignya trimera (Oliv.) Guillaum) (C-499) thu hái vào tháng 2/2013 xã Ninh Vân, huyện Ninh Hòa, tỉnh Khánh Hòa Thân rễ Nhó đơng (Morinda longissima Y Z Ruan) (C-547) thu hái vào tháng 4/2013 xã Chiềng An, tỉnh Sơn La Tên khoa học hai loài xác định TS Nguyễn Quốc Bình, Bảo tàng thiên nhiên Việt Nam, Viện KH&CN Việt Nam Mẫu tiêu hai lưu trữ phòng Hoạt chất sinh học, Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên, kí hiệu mẫu C-499 C-547 2.2 Phương pháp Phương pháp hóa học Phương pháp sắc ký mỏng TLC, phương pháp phân lập sắc ký cột với chất hấp phụ silica gel pha thường, pha đảo, Diaion HP-20, Sephadex LH-20 Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập xác định cách kết hợp phương pháp vật lý hóa học, sử dụng phương pháp phổ bao gồm phổ ESI-MS, HR-ESI-MS, 1D 2D-NMR Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học Các cặn chiết hợp chất đánh giá phương pháp sau: - Tác dụng kháng virus viêm gan B (HBV) in vitro dòng HepG2.2.15 nhiễm HBV dựa giá trị ức chế mức độ biểu HBsAg (IC50) - Đánh giá tác dụng bảo vệ gan in vivo chuột BALB/c mơ hình gây độc gan paracetamol CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1 Đánh giá tác dụng sinh học cao chiết phân đoạn 3.2 Phân lập hợp chất từ loài Xáo tam phân Từ thân rễ Xáo tam phân phân lập xác định cấu trúc 10 hợp chất, gồm coumarin, ostruthin (PT-1), ninhvanin (PT-2, mới), 6-(6-hydroxy-3,7-dimethylocta-2,7-dienyl)-7hydroxycoumarin (PT-6), ninhvanin B (PT-7, mới), hai hợp chất biscoumarin monoterpen glycosides, paratrimerin A (PT-8, mới) paratrimerin B (PT-9, mới), 01 cromen, 6-(2-hydroxyethyl)-2,2dimethyl-2H-1-benzopyran (PT-3),01 alcaloid, citrusinine-I (PT4),01 ancol, paramitrimerol (PT-5, mới) 01 hợp chất limonoid glucoside mới, parabacunoic acid (PT-10, mới) Các đặc điểm, tính chất thông số phổ 10 hợp chất phân lập được trình bày phần 3.3 Phân lập hợp chất từ lồi Nhó đơng Từ thân rễ lồi Nhó đơng phân lập xác định cấu trúc 22 hợp chất gồm: 12 hợp chất anthranoid, damnacanthal (ML-1), lucidin-ω-methyl ether (ML-2), soranjidiol (ML-3), morindone -5methyl ether (ML-4), rubiadin (ML-5), rubiadin-3-methyl ether (ML-6), damnacanthol (ML-7), morindone (ML-8), 1-hydroxy-2methyl-6-methoxy anthraquinone (ML-9), morindone-6-methyl ether (ML-10), morindone-6-O-β-gentiobioside (ML-11), lucidin-3-O-βprimeveroside (ML-12), 02 naphtalen glycosid mới, morinlongoside A (ML-13, mới), morinlongoside B (ML-14, mới), 02 iridoid glycosid, morinlongoside C (ML-15, mới), geniposidic acid (ML16), 05 hợp chất glycosid, 3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1-6)-β-Dlucopyranosyl]-(3R)-l-octen-3-ol (ML-17), acteoside (ML-18), cistanoside E (ML-19), ethyl-β-D-galatopyranoside (ML-20), isoacteoside (ML-21) flavonoid quercetin (ML-22) Đặc điểm, tính chất thơng số phổ 22 hợp chất phân lập trình bày phần 3.4 Đánh giá tác dụng sinh học hợp chất CHƯƠNG THẢO LUẬN KẾT QUẢ Chương trình bày thảo luận kết đánh giá tác dụng sinh học cao chiết phân đoạn, phân lập xác định cấu trúc hợp chất hoạt tính sinh học hợp chất 4.1 Đánh giá tác dụng sinh học cao chiết phân đoạn 4.1.1 Đánh giá tác dụng kháng viêm gan virus B Bảng Ảnh hưởng cao chiết đến khả sống tế bào HepG2.2.15 stt Ký hiệu Loài Mẫu Giá trị OD 　Mẫu trắng 　DMSO P.trimera cao chiết MeOH PR P trimera cao nước P trimera phân đoạn dianion cao nước phân đoạn dianion cao nước phân đoạn dianion cao nước phân đoạn dianion cao nước phân đoạn dianion cao nước PT PR1 P trimera PR2 P trimera PR3 P trimera PR4 P.trimera PR5 % sống sót 0,049 　 0,805 100 0,920 114,23 0,799 99,27 0,811 100,70 0,832 103,31 0,895 111,13 0,805 100,02 0,192 23,84 10 ML M longissima EtOH extract 0,86 102,25 11 W M longissima cao chiết nước 0,82 107,28 - Có cao chiết cho tỷ lệ sống tế bào HepG2.2.15 80%, cao đánh giá tiếp khả ức chế mức độ biểu kháng nguyên bề mặt HBsAg Bảng Khả ức chế biểu HBsAg tế bào HepG2.2.15 cao chiết STT Ký hiệu Mẫu trắng DMSO Lamivudine PT Phân đoạn Nồng độ 　 µM 50 µM cao chiết MeOH 60 µg/ml Giá trị OD (450nm) SE 0,190 1,228 0,635 1,351 Mức độ biểu HBsAg ( %) 0,140 0,016 100 0,022 42,86 0,026 111,88 PR PR1 PR2 PR3 PR4 cao nước phân đoạn dianion cao nước phân đoạn dianion cao nước phân đoạn dianion cao nước phân đoạn dianion cao nước 60 µg/ml 1,647 0,066 140,37 60 µg/ml 1,393 0,011 115,89 60 µg/ml 1,406 0,016 117,19 60 µg/ml 1,310 0,035 107,93 60 µg/ml 1,269 0,014 103,98 0,91 0,028 69,37 0,06 85,04 10 ML EtOH extract 60 µg/ml 11 W cao chiết nước 60 µg/ml 1,051 Kết cao etanol cao nước lồi Nhó đơng có tác dụng làm giảm mức độ biểu HBsAg tế bào HepG2.2.15 Bảng Nồng độ ức chế biểu HBsAg tế bào HepG2.2.15 cao chiết Trắng DMSO Lamivudine 　ML 　 　W Nồng độ 　 µM 50 µM 15 µg/ml 30 µg/ml 60 µg/ml 7,5 µg/ml 7,5 µg/ml 15 µg/ml 30 µg/ml 60 µg/ml 　 　 Abs 450 0,071 1,911 0,905 1,856 1,754 1,567 1,966 1,917 1,894 1,843 1,841 SE 0,007 0,018 0,040 0,001 0,081 0,129 0,000 0,008 0,038 0,028 0,107 Ức chế (%) 100 45,30 97,02 91,48 81,31 102,98 100,34 99,09 96,29 90,77 IC50 (μg/ml) 19,92±0,18 146,90±30,17 297,76±58,14 　 Cao tổng etanol (ML) cao nước (W) thân rễ loài Morinda longissima có tác dụng kháng HBV in vitro 4.1.2 Đánh giá tác dụng bảo vệ gan in vivo - Cao metanol cao nước rễ Xáo tam phân có tác dụng bảo vệ gan mơ hình chuột BALB/c bị nhiễm độc paracetamol Bảng 4 Ảnh hưởng cao metanol cao nước lên nồng độ aminotransferase huyết Lô Thuốc liều lượng Đối chứng sinh lý Đối chứng bệnh lý AST (UI/L) 87,80 ± 1,48 715,75 ± 253,94 p