Nghiên cứu thành phần hóa học cây lan kim tuyến ( anoectochilus setaceus blume) thu hái tại thanh hóa

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU 1 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC -------- NGUYỄN NAM PHƯƠNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY LAN KIM TUYẾN Anoectochilus set

Trang 1

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

1

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

KHOA Y DƯỢC 

NGUYỄN NAM PHƯƠNG

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY LAN KIM TUYẾN

(Anoectochilus setaceus Blume) THU HÁI TẠI THANH HÓA

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC

Hà Nội – 2019

Trang 2

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

KHOA Y DƯỢC 

Người thực hiện: NGUYỄN NAM PHƯƠNG

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY LAN KIM TUYẾN

(Anoectochilus setaceus Blume) THU HÁI TẠI THANH HÓA

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC

Người hướng dẫn: PGS.TS Lê Quang Huấn

ThS Hà Thị Thanh Hương

Hà Nội – 2019

Trang 3

i

LỜI CẢM ƠN

Qua 5 năm học tập và rèn luyện tại Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội, với sự chỉ bảo và giảng dạy nhiệt tình của Thầy Cô đã giúp cho em tiếp thu được những kiến thức về lý thuyết và thực hành vô cùng hữu ích

Khóa luận này là kết quả của việc tiếp thu, vận dụng những kiến thức đã được học cũng như sự cố gắng nỗ lực của bản thân em tại Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội và phòng Công nghệ Tế bào Động vật – Viện Công nghệ sinh học trực thuộc Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam

Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới PGS.TS Lê Quang Huấn – phòng Công nghệ Tế bào Động vật – Viện Công nghệ sinh học trực thuộc Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam và ThS Hà Thị Thanh Hương – Nghiên cứu viên Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội đã trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ, quan tâm tạo điều kiện thuận lợi để em có thể nghiên cứu và hoàn thành khóa luận này

Em xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm Khoa Y Dược - Đại học Quốc gia

Hà Nội, Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền và các anh chị nghiên cứu viên trong phòng Công nghệ Tế bào Động vật – Viện Công nghệ sinh học đã tạo điều kiện giúp đỡ em thực hiện Khóa luận tốt nghiệp

Em cũng xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, những người đã luôn theo sát động viên, quan tâm và tạo điều kiện trong thời gian em thực hiện khóa luận Trong quá trình nghiên cứu đề tài khó tránh khỏi thiếu sót Em rất mong nhận được những ý kiến đóng góp quý báu của Thầy Cô để bài luận văn của em được hoàn thiện hơn.

Em xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày 20 tháng 02 năm 2019

Sinh viên

Nguyễn Nam Phương

Trang 4

ii

MỤC LỤC

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT iv

DANH MỤC CÁC BẢNG v

DANH MỤC CÁC HÌNH v

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG I TỔNG QUAN 2

1 Vài nét về chi Anoectochilus 2

1.1 Đặc điểm hình thái 2

1.2.Phân bố 2

1.3 Công dụng và tác dụng 2

2 Tổng quan về cây Lan kim tuyến 3

2.1.Vị trí phân loại 3

2.2.Đặc điểm hình thái 4

2.3.Sinh học và sinh thái 5

2.4.Phân bố và tình trạng 5

2.5.Thành phần hóa học 5

2.6.Công dụng 10

2.7.Tác dụng sinh học của một số hợp chất trong cây Lan kim tuyến 10

2.7.1.Quercetin 10

2.7.2.Isorhamnetin 11

2.7.3.Acid ferulic 12

2.7.4.Các bài thuốc và sản phẩm được biết đến 13

2.8.Vấn đề cần giải quyết 13

CHƯƠNG II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14

2.1.Nguyên liệu, hóa chất 14

Trang 5

iii

2.2.Phương tiện nghiên cứu 14

2.3.Phương pháp nghiên cứu 14

2.3.1.Phương pháp chiết xuất cao Lan kim tuyến 14

2.3.2.Phương pháp định tính 17

.3.3.Phương pháp định lượng 17

CHƯƠNG III KẾT QUẢ 20

3.1.Kết quả định tính Quercetin, Isorhamnetin, Acid ferulic 20

3.2.Định lượng Quercetin, Isorhamnetin, Acid ferulic 21

3.2.1.Định lượng Quercetin, Isorhamnetin trong dịch chiết bằng HPLC 21

3.2.1.1.Điều kiện sắc ký 21

3.2.1.2.Kiểm tra độ thích hợp của hệ thống 21

3.2.1.3.Định lượng Quercetin, Isorhamnetin 22

3.2.1.4.Kết quả định lượng Quercetin, Isorhamnetin 25

3.2.2.Định lượng Acid ferulic trong dịch chiết bằng HPLC 26

3.2.2.1.Điều kiện sắc ký 26

3.2.2.2.Kiểm tra độ thích hợp của hệ thống 27

3.2.2.3.Định lượng Acid ferulic 28

3.2.2.4.Kết quả định lượng Acid ferulic 30

BÀN LUẬN 31

KẾT LUẬN 33

KIẾN NGHỊ 33

TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 PHỤ LỤC

Trang 6

CaCl2.2H2O Calcium Chloride

Tailling factor Hệ số kéo đuôi

Trang 7

v

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1 Cấu trúc hóa học các hợp chất đã phân lập được từ cây Lan kim tuyến 6

Bảng 3.1 Kết quả sắc ký dung dịch chuẩn 21

Bảng 3.2 Số liệu pha đường chuẩn 22

Bảng 3.3 Kết quả khảo sát mối tương quan giữa nồng độ và diện tích píc của Quercetin 23

Bảng 3.4 Kết quả khảo sát mối tương quan giữa nồng độ và diện tích píc của Isorhamnetin 24

Bảng 3.5 Kết quả định lượng Quercetin 25

Bảng 3.6 Kết quả định lượng Isorhamnetin 26

Bảng 3.7 Kết quả kiểm tra độ thích hợp của hệ thống 27

Bảng 3.8 Kết quả khảo sát mối tương quan giữa nồng độ các dung dịch 28

Bảng 3.9 Kết quả khảo sát mối tương quan giữa nồng độ và diện tích píc của Acid ferulic 29

Bảng 3.10 Kết quả xác định nồng độ Acid ferulic trong mẫu thử 30

DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây Lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) 4

Hình 1.2 Công thức cấu tạo Quercetin, C 15 H 10 O 7 11

Hình 1.3 Công thức cấu tạo Isorhamnetin, C 16 H 12 O 7 12

Hình 1.4 Công thức cấu tạo Acid ferulic, C 10 H 10 O 4 12

Hình 2.1 Phổ hấp thụ của Quercetin 17

Hình 2.2 Phổ hấp thụ của Isorhamnetin 18

Hình 2.3 Phổ hấp thụ của Acid ferulic 18

Hình 3.1 Phổ hấp thụ UV-Vis của mẫu cao lên men Lan kim tuyến 20

Hình 3.2 Đường biểu diễn mối tương quan giữa diện tích píc và nồng độ Quercetin 23

Hình 3.3 Đường biểu diễn mối tương quan giữa diện tích píc và nồng độ Isorhamnetin 24

Hình 3.4 Đường biểu diễn mối tương quan giữa diện tích píc và nồng độ Acid ferulic 29

Trang 8

Họ Lan (Orchidaceae) là họ thực vật đa dạng nhất của Việt Nam, với tổng số 865 loài thuộc 154 chi Thông thường Lan được sử dụng làm cảnh Ngoài ra, có nhiều loài

Lan còn được sử dụng làm thuốc Chi Lan kim tuyến Anoectochilus ở Việt Nam hiện thống kê được 12 loài, trong đó có loài Lan kim tuyến Anoectochilus setaceus Blume

được biết đến nhiều không những bởi giá trị làm cảnh mà bởi giá trị làm thuốc của nó [1] Do bị thu hái nhiều để bán làm thuốc từ rất lâu nên loài Lan kim tuyến đang bị đe doạ nghiêm trọng, rất có thể sẽ bị tuyệt chủng ngoài tự nhiên nếu chúng ta không có biện pháp bảo tồn hữu hiệu Hiện nay, Lan kim tuyến được xếp trong nhóm IA của Nghị định 32/2006/NĐ-CP, nghiêm cấm khai thác vì mục đích thương mại và nhóm thực vật đang nguy cấp EN A1a,c,d trong sách đỏ Việt Nam năm 2007, phần thực vật [2,3] Nhằm bảo tồn và phát triển nguồn tài nguyên quý này, nhiều đơn vị nghiên cứu trong cả nước đã tập trung vào việc nhân giống và nuôi trồng Lan kim tuyến

Khóa luận này được thực hiện nhằm mục đích tìm hiểu về thành phần hóa học của cây Lan kim tuyến Từ đó, định hướng về ứng dụng của loại dược liệu này góp phần vào công cuộc bảo tồn và nâng cao hơn giá trị sử dụng Khóa luận được thực hiện

với đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học cây Lan kim tuyến (Anoectochilus

setaceus Blume) thu hái tại Thanh Hóa” với mục tiêu:

1 Chiết xuất cao Lan kim tuyến

2 Định tính một số hợp chất trong mẫu

3 Xác định được hàm lượng của một số hợp chất trong mẫu cao bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Trang 9

2

CHƯƠNG I TỔNG QUAN

1 Vài nét về chi Anoectochilus

1.1 Đặc điểm hình thái

Chi Lan kim tuyến (Anoectochilus) là một chi thực vật có hoa thuộc họ Lan

(Orchidaceae) và phân họ cùng tên (Orchidoideae) Cái tên "Lan kim tuyến" hay "Lan kim hoàn” bắt nguồn từ những đường gân rất đẹp trên phiến lá của các loài lan này Phần lớn chúng là các thực vật sinh sống trên nền đất có kích thước nhỏ, tuy nhiên một vài loài sinh sống trên các bờ đá, với bộ lá màu xanh lục hoặc mang các màu sắc khác (tùy theo loài), có bề mặt mịn như nhung và mang một mạng lưới gân lá phức tạp Cụm hoa ở ngọn trung tâm mang một vài hoa mọc chúc xuống đất và bao phủ bởi lông với một cánh môi rất lớn và nổi bật Tràng hoa cùng với đài hoa ở mặt lưng tạo thành một cấu trúc giống như chiếc mũ trùm đầu Mỗi hoa có hai nhụy và hai nhị [25]

1.2 Phân bố

Chi Anoectochilus (Orchidaceae), bao gồm hơn 40 loài, phổ biến khắp các vùng

nhiệt đới, từ Ấn Độ, Himalayas, Đông Nam Á đến Hawaii

Trong số các loài thực vật này, A formosanus và A koshunensis chỉ phân bố ở

Đài Loan (Trung Quốc) và Okinawa (Nhật Bản)

Anoectochilus roxburghii, phân bố ở miền nam Trung Quốc, Nhật Bản, Sri

Lanka, Ấn Độ và Nepal [17]

1.3 Công dụng và tác dụng

Một số loài thuộc chi này được sử dụng trong các loại thuốc dân gian Trung

Quốc, chẳng hạn như A formosanus Hayata, A koshunensis Hayata, và A roxburghii

(Wall.) Lindl

Theo y học cổ truyền Đài Loan, A formosanus Hayata tươi hoặc khô nấu nước

uống trị các chứng bệnh đau ngực, đau bụng, tiểu đường, viêm thận, sốt, huyết áp cao, liệt dương, rối loạn gan, lá lách và chứng đau nhói ngực Người Trung Quốc cho rằng

uống trà làm từ A formosanus Hayata chữa các chứng bệnh gan và phổi [23,30]

Đại học ông nghệ Y dược và ao đẳng Y học Quốc gia Dương Minh Đài Loan

đã sử dụng A formosanus Hayata làm thuốc kháng viêm, hạ sốt, giảm suy nhược cơ

Trang 10

3

thể và kháng virus c m A Nhiều nghiên cứu đã phát hiện A formosanus Hayata chứa

hợp chất chuyển hoá arachidonic acid liên quan đến chức năng tim mạch Dịch

chiết A formosanus Hayata có khả năng kháng virus, kháng sưng viêm và bảo vệ gan Chiết xuất của cây A formosanus khô có chứa 4-hydroxycinnamic acid, β-sitosterol,

β-D-glucopyranosyloxy và butanoid glucosides acid [28] Gần đây, một hợp chất 3- β-D-glucopyranosyloxy butanolide tên là thương mại kinsenoside được chiết xuất

3(R)-từ A formosanus và A koshunensis chống tăng huyết áp hiệu quả [29]

Anoectochilus roxburghii, còn được gọi là "Vua thảo dược" để điều trị sốt, bệnh

về phổi, viêm màng phổi, bệnh về gan, tăng huyết áp và trẻ em suy dinh dưỡng ở Trung Quốc (Viện Y học cổ truyền Trung Quốc Phúc Kiến 1982)

Tuy nhiên, thông tin khoa học về hoạt tính sinh học, chức năng sinh lý và hiệu quả lâm sàng cụ thể của cây lan thảo dược này còn hạn chế Không có báo cáo nghiên

cứu về các thành phần hóa học của A roxburghii và có rất ít hồ sơ dược lý (Li et al 1995) bởi vì các nguồn tự nhiên của A roxburghii phần lớn đã cạn kiệt

2 Tổng quan về cây Lan kim tuyến

2.1 Vị trí phân loại

 Lan Kim Tuyến có tên khoa học là Anoectochilus setaceus Blume

 Tên đồng nghĩa

 Chrysobaphus roxburghii Wall 1826

 Anoectochilus roxburghii (Wall.) Wall ex Lindl 1840

 Anoectochilus regalis Blume 1858

Trang 11

4

2.2 Đặc điểm hình thái

Lan kim tuyến là cây thảo, mọc ở đất, có thân rễ mọc dài, thân trên đất mọng nước và có nhiều lông mềm, mang 2 - 4 lá mọc xòe sát đất Lá hình trứng, gần tròn ở gốc, chóp hơi nhọn và có mũi ngắn, cỡ 3 - 4 x 2 - 3 cm, có màu khác nhau với mạng gân thường nhạt hơn (màu lục sẫm với mạng gân màu lục nhạt hay màu nâu, đỏ với mạng gân màu vàng, lục hay hồng) Cuống lá dài 2 - 3 cm Cụm hoa dài 10 - 15 cm, mang 4 - 10 hoa mọc thưa Lá bắc hình trứng, chóp nhọn, dài 8 - 10 mm, màu hồng Hoa thường màu trắng, dài 2,5 - 3 cm Các mảnh bao hoa dài khoảng 6 mm, môi dài đến 1,5 cm, ở mỗi bên gốc mang 6 - 8 dải hẹp, chóp phiến rộng, chẻ hai sâu, hốc chứa mật dài 7 mm, bầu dài 1,3 cm, màu lục, có nhiều lông mềm [2]

Hình 1.1 Cây Lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) [19]

Trang 12

5

2.3 Sinh học và sinh thái

Mùa hoa của cây là tháng 2 đến tháng 4 Tái sinh bằng chồi từ thân rễ và hạt, ít

và sinh trưởng rất chậm Mọc dưới tán rừng nguyên sinh, hầu hết là nguyên thủy, rậm Chúng sinh sống trên sườn n i đá granit, riôlit, phiến sét, ở độ cao 500 - 1600 m, rải rác thành từng nhóm, vài ba cây trên đất ẩm, rất giàu mùn và lá cây rụng [2]

2.4 Phân bố và tình trạng

 Thế giới: Ấn Độ, Nepan, Butan, Trung Quốc, Mianma, Thái Lan, Lào, ampuchia, Malaixia, Inđônêxia

 Trong nước

 Lào Cai: núi Phan Xi Păng, xã Liêm Phú

 Kon Tum: núi Ngọc Linh, Vườn Quốc gia hư Mom Ray

 Đắk Lắk: Vườn Quốc gia hư Yang Sin

 Lâm Đồng: Vườn Quốc gia Bidoup - Núi Bà

 Phú Thọ: Vườn Quốc gia Xuân Sơn

 Sơn La: Khu Bảo tồn Thiên nhiên Tà Sùa

 Hà Nội: Vườn Quốc gia Ba Vì

 Thanh Hóa: Khu Bảo tồn Thiên nhiên Xuân Liên, Pù Luông

 Tình trạng

Loài có khu phân bố rộng nhưng với số lượng cá thể không nhiều, tái sinh chậm

và đòi hỏi điều kiện sống ngặt nghèo ngày càng hiếm Chúng đã bị khai thác liên tục trong nhiều năm, hiện đã trở nên giảm sút rõ rệt và có nguy cơ bị tuyệt chủng Do đó, Lan kim tuyến đã được xếp trong nhóm IA của Nghị định 32/2006/NĐ-CP, nghiêm cấm khai thác vì mục đích thương mại và nhóm thực vật đang nguy cấp EN A1a,c,d trong sách đỏ Việt Nam năm 2007, phần thực vật [2,3]

2.5 Thành phần hóa học

Từ các phân đoạn ethyl acetate và phân đoạn n-butanol của dịch chiết ethanol của

toàn bộ cây Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl (Orchidaceae) đã phân lập được

nhiều hợp chất Trên cơ sở phương pháp quang phổ, cấu trúc của các hợp chất này đã

được làm sáng tỏ là cirsilineol (1), quercetin (2), quercetin 7-O-β-D-glucopyranoside (3), quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside (4), isorhamnetin (5), isorhamnetin-7-O-β-D- glucopyranoside (6), isorhamnetin-3-O-β-D-glucopyranoside (7), kaempferol-3-O-β–

Trang 13

Năm 2008, He và cộng sự đã phân lập được hai loại sorghumol acyl este mới đó

là Sorghumol 3-O-Z-p-coumarate và sorghumol 3-O-E-p-coumarate, một alkaloid mới

là anoectochine (20) và một chất đã được biết đến từ trước sorghumol [15] Cụ thể các

hoạt chất được xác định có công thức cấu tạo hóa học như sau

Bảng 1.1: Cấu trúc hóa học các hợp chất đã phân lập được từ cây Lan kim tuyến

OH O

OH OH

OH

(2) quercetin

O O

OH O

OH OH

OH O

OH OH

O O

OH

(4) quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside

Trang 14

7

(5) isorhamnetin

O O

OH O

OH OCH 3

OH O

HO

HO OH

HO

(6) isorhamnetin-7-O-β-D-glucopyranoside

O HO

OH O

OH OCH 3

O

OH OH OH

OH

(7) isorhamnetin-3-O-β-D-glucopyranoside

O HO

OH

(8) kaempferol-3-O-β–D-glucopyranoside

O O

OH O

OH

OH O

HO

HO OH

HO

(9) kaempferol-7-O-β-D-glucopyranoside

Trang 15

8

O HO

OH O

OH

O O

OH OH OH

O O

HO OH OH

(10) isorhamnetin-3-O- β-D-rutinoside

O OH

OH O

(11) Ferulic acid

HO

OH O

Trang 16

HO

OH HO

(18) daucosterol

HO

OH O

O

(19) succinic acid

N H

NH O OH

(20) anoectochine

Trang 17

10

2.6 Công dụng

Các nghiên cứu gần đây cho thấy: Lan kim tuyến có thể chữa các bệnh như: trị lao phổi, ho do viêm phế quản, chấn thương, viêm dạ dày mãn tính, viêm gan mãn tính, suy nhược thần kinh, gi p tăng cường sức khỏe và làm khí huyết lưu thông, có tính kháng khuẩn, đau bụng, đau ngực, tiểu đường, viêm thận, sốt cao, liệt dương, rối loạn gan [8,17,22]

Những người dân tộc miền n i thường dùng Lan kim tuyến sắc uống, giúp chữa trị đau bụng, đau ruột, sốt cao hoặc đắp bên ngoài chỗ vết thương bị rắn cắn, các chỗ sưng

Lan kim tuyến là cây dược liệu dân gian quý, toàn thân cây thuốc có công dụng tăng cường sức khỏe, bổ máu, giải nhiệt, chủ trị bệnh phổi, di tinh, yếu gan, yếu tỳ, xuất tinh sớm

Cây Lan kim tuyến dùng cả cây tươi hoặc khô sắc uống Liều dùng trong ngày khoảng 20 g tươi hoặc 5 g khô Dùng ngoài: cả cây tươi giã nát đắp chỗ vết thương sưng đau [4,5]

2.7 Tác dụng sinh học của một số hợp chất trong cây Lan kim tuyến

Y học hiện đại đã phân tích và xác định được Anoectochilus chứa các thành

phần hoạt chất có dược tính cực kì quan trọng bao gồm: flavonoid (quercetin, isorhamnetin), steroid (24 ~ isopropenyl cholesterol, sterol, ergosrol, stigmasterol, campesterol, sitosterol β-), trierpenoids (friedelin, acid succinic, acid coumaric, acid ferulic, daocosterol, acid palmitic, acid aleanolic, acid bearberry), đường (Polysaccharides 13,32%, Oligosacharides 11,24% và đường đơn 9,73%), alkaloid, glycoside tim mạch, este, taurine, acid amin, nguyên tố vi lượng và các loại khoáng chất khác [8,17,20,24]

2.7.1 Quercetin

Quercetin là một flavonoid có tác dụng làm tăng tuổi thọ và cải thiện sức khỏe tim mạch, làm giảm cholesterol xấu và làm tăng cholesterol tốt Nó cũng làm giảm mảng bám trong động mạch và loại bỏ các cholesterol xấu Quercetin gi p tránh bị đột quỵ và đau tim [22]

Quercetin cũng là hợp chất rất tốt đối với bệnh nhân tiểu đường, bệnh cao huyết

áp Không một lavonoid nào có thể tốt hơn so với quercetin trong khả năng chống

Trang 18

O HO

OH OH

OH

Hình 1.2 Công thức cấu tạo Quercetin, C15H10O7

2.7.2 Isorhamnetin

Isorhamnetin thể hiện một sự ức chế mạnh mẽ đối với hoạt tính enzyme Lens

Aldose Reductase ở chuột (RLAR) in vitro, IC50 được xác định là 1,4 mM và có tác dụng ức chế tích tụ sorbitol Isorhamnetin ngăn ngừa rối loạn chức năng nội mạc, sản xuất superoxide và sự biểu hiện quá mức của p47phox (tiểu đơn vị tế bào học 47 kilodalton của phức hợp đa protein được tìm thấy trong bạch cầu trung tính) gây ra bởi angiotensin II Isorhamnetin ngăn ngừa các tổn thương tế bào trong cơ thể và hoạt động chống oxi hóa Do vậy, isorhamnetin dường như là một loại thuốc mạnh chống lại ung thư thực quản do khả năng không chỉ ức chế sự tăng sinh mà còn gây ra apoptosis của tế bào Đây là hợp chất có tiềm năng lớn để bào chế một loại thuốc mới có tác dụng phòng ngừa và/hoặc điều trị bệnh tiểu đường và các biến chứng của bệnh tiểu đường [8], [9], [13], [22]

Trang 19

12

2.7.3 Acid ferulic

Acid ferulic, giống như nhiều hợp chất phenol tự nhiên khác, được sử dụng như là thuốc chống viêm, giảm đau, bức xạ tia cực tím, chống tắc nghẽn động mạch (antithrombotic), trung hòa các gốc tự do (anti- reeradical) và tăng cường sức đề kháng của cơ thể con người Ở trong lâm sàng, nó được sử dụng để điều trị các bệnh như bệnh tim mạch vành, tai biến mạch máu não, viêm mạch máu, giảm bạch cầu và giảm tiểu cầu Nó cũng được sử dụng trong thực phẩm, mỹ phẩm với tác dụng như một chất chống oxy hoá [22]

Xu và cộng sự (2015) đã chứng minh Acid ferulic có tác dụng phòng chống xơ gan Đây là minh chứng về tác dụng bảo vệ gan của cây Lan kim tuyến Do vậy, một trong các nội dung nghiên cứu của đề tài là xác định (định tính và định lượng) Acid ferulic trong cao chiết từ Lan kim tuyến [31]

O

OH

OH O

Hình 1.4 Công thức cấu tạo Acid ferulic, C10H10O4

Hình 1.3 Công thức cấu tạo Isorhamnetin, C16H12O7

Trang 20

13

2.7.4 Các bài thuốc và sản phẩm được biết đến

Bài thuốc chữa thần kinh suy nhược, mất ngủ: 25 g lan gấm, 12 g hoa nhài, 10

g hoa thiên lý, 8 g tâm sen, 8 g ngưu tất, 15 g mạch môn, 10 g huyền sâm, 20 g quyết minh tử, 8 g cam thảo đất, 12 g hoài sơn, sắc uống Mỗi ngày sắc 1 thang, chia làm 3 lần trong ngày, dùng 3 – 5 thang

Bài thuốc chữa kém ăn: 25 g lan gấm, 8 g liên nhục, 6 g sơn tra, 5 g trần bì, 20 g

huyền sâm, 5 g quyết minh tử, 10 g hoài sơn, sắc uống Mỗi ngày sắc 1 thang, chia làm

3 lần trong ngày, dùng 5 – 7 thang

Bài thuốc chữa ho khạc ra máu: 30 g lan gấm, 15 g ngưu tất, 15 g quyết minh

tử, 20 g hoài sơn, 20 g huyền sâm, 25 g mạch môn, sắc uống Mỗi ngày sắc 1 thang, chia làm 3 lần trong ngày, dùng 5 – 7 thang [6]

Hiện nay, các sản phẩm từ cây Lan kim tuyến đã bắt đầu được sản xuất dưới dạng thực phẩm bảo vệ sức khỏe và giới thiệu ra thị trường như “Langambian G” của

Công ty cổ phần cây thuốc và hương liệu Việt gồm các thành phần thảo dược quý như

Lan kim tuyến, Vạn Thọ, Linh Chi, Cucurmin có tác dụng giúp chống oxy hóa, bảo vệ tăng cường chức năng gan trong các trường hợp viêm gan virus, xơ gan, gan nhiễm

mỡ, giải độc gan, hạn chế tổn thương gan do rượu bia hóa chất, hóa trị, xạ trị Một sản phẩm khác từ Lan kim tuyến là “Lamgambian M” (cũng là sản phẩm của Công ty cổ phần cây thuốc và hương liệu Việt) dành cho người bị mỡ trong máu cao, người bị xơ vữa mạch máu, người có sức đề kháng kém, người hóa trị, xạ trị gồm các thành phần từ một số thảo dược quý như Lan kim tuyến, Allicin, Rutin

2.8 Vấn đề cần giải quyết

Ở nước ta, hiện chưa có một công trình nghiên cứu chính thức nào về công dụng làm thuốc của cây Lan kim tuyến mà chỉ biết nó theo dạng đồn thổi, thiếu tính kiểm chứng Do đó, công dụng chữa “bách bệnh” của loại cây này cũng mới chỉ là dư luận, thiếu tính khoa học, cần được nghiên cứu rõ

Một trong những mục tiêu nghiên cứu của khóa luận này chính là định tính và định lượng một số hợp chất có tác dụng chữa bệnh có trong cao Lan kim tuyến

Trang 21

Dược liệu được phơi, sấy khô, cắt và tán nhỏ tới độ mịn khoảng 3-4 mm để tăng khả năng khuếch tán của dung môi

Nấm men là chủng lên men nổi Sacchromyces cerevisiae

Môi trường nuôi cấy men Sacchromyces cerevisiae: (NH4)2SO4, KH2PO4, MgSO4.7H2O, CaCl2.2H2O, NaCl, cao nấm men, glucoza, nước, đệm PBS

Dung môi công nghiệp dùng trong chiết xuất: methanol, ethanol, ACN

2.2 Phương tiện nghiên cứu

Thiết bị, máy móc, dụng cụ: que cấy, đèn cồn, đĩa petri, màng lọc, giấy

lọc, giấy bao gói, bông không thấm nước, bông y tế

Các dụng cụ cần thiết dùng trong quá trình thực nghiệm: bình tam giác, ống đong, ống nghiệm, pipet, cốc thủy tinh, phễu thủy tinh các kích thước

Thiết bị đo phổ hấp thụ NanoDrop-1000 (USA)

Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC Shimadzu

Máy ly tâm

Tủ lạnh

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phương pháp chiết xuất cao Lan kim tuyến

Công nghệ lên men là công nghệ mới được sử dụng trong nghiên cứu này để thu

nhận cao có các hoạt chất quý, có tác dụng chữa bệnh từ cây Lan kim tuyến Trong công nghệ lên men ứng dụng trong đề tài nghiên cứu này sẽ sử dụng chủng nấm

Saccharomyces cerevisiae để thu nhận cao thay cho công nghệ tách chiết truyền thống

Trang 22

15

bằng nước hoặc bằng cồn nhằm tăng hiệu quả tách chiết và tăng tính đa dạng các chất

có hoạt tính sinh học trong sản phẩm chiết xuất

Nấm men là các loài nấm đơn bào Kích thước đường kính mỗi tế bào men chỉ

vào khoảng 1/100 mm Chúng phân bố rộng rãi trong thiên nhiên, đặc biệt chúng có nhiều ở vùng đất trồng nho và các nơi trồng hoa quả Nhiều loài nấm men có khả năng lên men rượu bia Từ lâu người ta đã biết sử dụng nấm men để sản xuất rượu bia Nấm men sinh sôi nhanh, tế bào lại chứa nhiều vitamin, acid amin không thay thế, hàm lượng protein chiếm tới 50% trọng lượng khô của tế bào nên nhiều loại nấm men còn được sử dụng để sản xuất protein Ngoài ra nấm men còn được sử dụng trong công nghệ sản xuất bánh mì Tuy nhiên, cũng có nhiều loại nấm men có hại gây bệnh cho người và gia s c, làm hư hại lương thực, thực phẩm

Nấm men dùng trong sản xuất bia thường là các chủng thuộc

giống Saccharomyces Chúng có khả năng hấp thụ các chất dinh dưỡng trong môi

trường nước mạch nha như các loại đường hoà tan, các hợp chất nitơ (các acid amin, peptit), vitamin và các nguyên tố vi lượng…qua màng tế bào

Nấm men được sử dụng là chủng lên men nổi Sacchromyces cerevisiae

Đặc điềm hình thái: Sacchromyces cerevisiae sinh trưởng và phát triển ở nhiệt độ

cao, lơ lửng trên bề mặt là chủ yếu, nhiệt độ lên men từ 10 – 25oC

Môi trường nuôi cấy men Sacchromyces cerevisiae

Môi trường nuôi cấy Saccharomyces cerevisiae cụ thể như sau:

Định dạng
Số trang	45
Dung lượng	1,87 MB