Ảnh hưởng của kinetin và sự kết hợp giữa kinetin và 2,4d đến quá trình hình thành protocorm like bodies ở cây lan kim tuyến (anoectochilus setaceus blume)

ẢNH HƯỞNG CỦA KINETIN VÀ SỰ KẾT HỢP GIỮA KINETIN VÀ 2, 4-D ĐẾN QUÁ TRÌNH HÌNH THÀNH PROTOCORM-LIKE BODIES Ở CÂY LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus setaceus Blume) Trần Thị Hồng Thúy 1 , La Việt Hồng 2 , Phạm Bích Ngọc 3 , Chu Hoàng Hà 4 Tóm tắt:     Anoectochilus setaceus    phong lan (Orchidaceae), Chi Anoectochilus,  Anoectochilus setaceus      protocorm-      .L -1  2, 4-  ml.L -1  0,5 mg.L -1    86,25%, PLBs si- -1  -1            nghi  Từ khóa: protocorm-like bodies, in vitro, kinetin, lan kim tuyến, vi nhân giống 1. ĐẶT VẤN ĐỀ  Anoectochilus setaceus Blume hay Anoectochilus roxburghii Wall. Ex Lindl)   Phong lan (Orchidaceae cao [1 -                    k 2    1].   -like bo                  (Cymbidium in vitro protocorm-like bodies (PLBs) [5]. Theo Ishiiet al (1998) [13], Huan et al  1 Học viên Cao học, K16, Trường ĐHSP Hà Nội 2 2 Th, Trường ĐHSP Hà Nội 2 3 TS, Viện Công nghệ Sinh học, Viện Hàn lâm KH&CN Việt Nam 4 PGS.TS, Viện Công nghệ Sinh học, Viện Hàn lâm KH&CN Việt Nam          Phalaenopsis  Oncidium (Jheng et al. 2006) [14]. PLBs      in vitro  in vitro.     in vitro  2. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 2.1. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 2.1.1. Vật liệu nghiên cứu in vitro               -D (2, 4- Dichlorophenoxy acetic acid). 2.1.2. Phương pháp nghiên cứu Bố trí thí nghiệm     --like bodies.  + 100 ml.L -1  mg.L -1  + 100 ml.L -1  mg.L -1  + 100 ml.L -1  3: 1,5 mg.L -1  + 100 ml.L -1   + 100 ml.L -1   X         4-         100 ml.L -1     1,5 mg.L -1 kinetin + 0,5 mg.L -1 2, 4-D   + 100 ml.L -1  1,0 mg.L -1 kinetin + 0,5 mg.L -1 2, 4-D   + 100 ml.L -1   mg.L -1 kinetin + 0,5 mg.L -1 2, 4-D   + 100 ml.L -1 . in vitro     0 C,  Phương pháp xác định chỉ tiêu nghiên cứu C;        ;  ; ,  2.2. Kết quả và thảo luận 2.2.1. Ảnh hưởng của kinetin đến sự hình thành protocorm-like bodies từ chồi của lan kim tuyến Protocorm-        -      protocorm-  Bảng 1: Ảnh hưởng của kinetin đến sự hình thành protocorm-like bodies từ chồi của lan kim tuyến       LBs     PLBs CT ĐC - 0 0 - CT 1 12 86,25 0,23 ± 0,004 Cụm PLB s khỏe, nhiều PLB s nhỏ/cụm PLB s , màu trắng xanh CT 2 12 83,20 0,18 ± 0,040 Số PLB s /Cụm PLB s ít, màu trắng xanh CT 3 10 48,34 0,21 ± 0,060 Nhiều cụm PLB s bị teo nhỏ, màu thâm nâu                     -    -1  1 (0,5 mg.L -1  -1   -1    -1     -1    -1    -1   Hình 1: Quá trình hình thành protocorm-like bodies của cây lan kim tuyến từ chồi trên môi trường bổ sung kinetin 0,5 mg.L -1 . A: mẫu chồi, B, C, D, E, F, G, H: hình thành cụm PLBs trong 30 ngày, Thanh kẻ ngang màu trắng: tương ứng 1 mm 2.2.2. Ảnh hưởng của 2, 4-D kết hợp kinetin đến sự hình thành protocorm-like bodies từ chồi của lan kim tuyến  -  Bảng 2: Ảnh hưởng của kinetin kết hợp 2, 4-D đến sự hình thành protocorm-like bodies từ chồi của lan kim tuyến            PLBs CT ĐC - 0 0 - CT 1 7 73,20 0,15 ± 0,004 Cụm PLB s phồng to, màu trắng CT 2 7 77,11 0,15 ± 0,010 Cụm PLB s phồng to, màu trắng CT 3 7 84,25 0,16 ± 0,008 Cụm PLB s phồng to, màu trắng   -1 2, 4-            - -1  - - Onchidium [7], [15]. Hình 2: Protocorm-like bodies của cây lan kim tuyếntừ chồi trên môi trường bổ sung kinetin kết hợp 2, 4-D sau 30 ngày nuôi cấy 3. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ in vitro  ch  -like bodies. M       -l   ml.L -1 au  -1 -D 0,5 mg.L -1 -like bodies  TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Nguyn Ti Danh lục các loài thực vật Việt Nam, T nghip, H,. 2005. 2. B Khoa h, Sách đỏ Việt Nam (Phn II. Thc vt - 320 tr), Nxb Khoa hc T , H., 2007. 3.  c CHXHCN Vit Nam, Ngh nh s -CP, 2006. 4. , Nguyn Mp, Công nghệ sinh học, T dc, H., 2010. 5. Arditti J, Ernst R., Micropropagation of orchids, John Wiley, New York, USA. 1993. 6. Chen J. T, Chang C, Chang W. C., Direct somatic embryogenesis on leaf explants of Oncidium ‘Gower Ramsey’ and subsequent plant regeneration, Plant Cell Reports, 19:pp.143-149, 1999. 7. Chen J. T, Chang W. C., Effects of auxins and cytokinins on direct somatic embryogenesis on leaf explants of Oncidium ‘Gower Ramsey’, Plant Growth Regul, 34: pp.229-232, 2001. 8. Chen J. T, Chang W.C., Effect ofGA3, ancymidol, cycocel and paclobutrazol on direct somatic embryogenesis of Oncidium in vitro, Plant Cell Tissue Org. Cult. 72, pp.105- 108, 2003. 9. Gow W. P, Chen J. T, Chang W. C., Influence of growth regulators on direct embryo formation from leaf explants of Phalaenopsis orchids, Acta Physiol. Plant, 30:pp.507- 512. 2008. 10. Gow W. P, Chen J. T, Chang W. C., Effects ofgenotype, light regime, explant position and orientation on direct somatic embryogenesis from leafexplants of Phalaenopsis orchids, Acta Physiol. Plant, 31:pp.363-369. 2009. 11. Huan L. V. T, Takamura T, Tanaka M., Callus formation and plant regeneration from callus through somatic embryo structures in Cymbidium orchid, Plant Science, 166:pp.1443-1449, 2004. 12. Ichihashi S., Micropropagation of Phalaenopsis through the culture of lateral buds from young flower stalks, Lindleyana, 7:pp.208-215, 1992. 13. Ihhii Y, Takamura T, Goi M, Tanaka M., Callus induction and somatic embryogenesis of Phalaenopsis, Plant Cell Reports, 17:pp.446-450, 1998. 14. Jheng F. Y, Do Y. Y, Liauh Y.W, Chung J. P, Huang P. L., Enhancement of growth and regeneration efficiency from embryogenic callus cultures of Oncidium ‘Gower Ramsey’ by adjusting carbohydrate sources, Plant Science, 170:pp.1133-1140. 2006. 15. Mayer J. L. S, Stancato G. C, Appezzato-Da-  Direct regeneration of protocorm-like bodies (PLBs) from leaf apices of Oncidium flexuosum Sims (Orchidaceae), Plant Cell Tiss Organ Cult, 103(3):pp.411-416, 2010. 16. Mprel G. M., Producing virus-free cymbidiums, American Orchid Society Bulletin. 29: pp.495-497, 1960. 17. Park S. Y, Murthy R. H, Paek K. Y., Protocorm-like body induction and subsequent plant regeneration from root tip cultures of Doritaenopsis, Plant Science, 164:pp.919- 923, 2003. 18. Park S. Y, Yeung E. C, Chakrabarty D, Paek K. Y., An efficient direct induction of protocorm-like bodies from leaf subepidermal cells of Doritaenopsis hybrid using thin section culture, Plant Cell Reports, 21:pp.46-51, 2002. 19. Tanaka M, Senda Y, Hasegawa A., Plantlet formation by root-tip culture in Phalaenopsis, American Orchid Society Bulletin, 46:pp.1022-1024, 1976. 20. Tokuhara K, Mii M., Micropropagation of Phalaenopsis and Doritaenopsis by shoot tips of flower stalk buds, Plant Cell Reports, 13:pp.7-11, 1993. 21. Tokuhara K, Mii M., Induction of embryogenic callus and cell suspension culture from shoot tips excised from flower stalk buds in Phalaenopsis (Orchidaceae), In Vitro Cellular & Developmental Biology. Plant, 37: pp.457-461, 2001. 22. Tokuhara K, Mii M., Highly efficient somatic embryogenesis from cell suspension cultures of Phalaenopsis orchids by adjusting carbohydrate sources, In Vitro Cellular & Developmental Biology. Plant, 39:pp.635-639, 2003. 23. Zhao P, Wu F, Feng FS, Wang W.J., Protocorm-like body (PLB) formation and plant regeneration from the callus culture of Dendrodbium candidum Wall ex Lindl, In Vitro Cellular & Developmental Biology Plant, 44:pp.178-185, 2008. EFFECT OF KINETIN AND KINETIN COMBINED 2, 4-D ON PROTOCORM-LIKE BODIES FORMATION OF Anoectochilus setaceus Blume Tran Thi Hong Thuy, La Viet Hong, Pham Bich Ngoc, Chu Hoang Ha Abstract Anoectochilus setaceus Blume belongs to Ochid genus and is one of rare medicinal plants in Vietnam. The generation of protocorm-like bodies (PLBs) plays an important role in micropropagating orchid process. In this study, shoots of Anoectochilus setaceus Blume were used explants to induced PLBs formation on liquid Knudson C media which was added 100 ml.L -1 coconut water and kinetin or kinetin combinated 2, 4-D. The results shown that PLBs were the highest induced in liquid cultured Knudson C contains 100 ml.L -1 coconut water, 1% saccharose and 0,5 mg.L -1- kinetin, frequency of explants regenerated PLBs was 86.25%, PLBs were strongly growth. The combination of 0.5 mg.l -1 2, 4-D with some different concentrations of kinetin has not affected PLBs formation of Anoectochilus setaceus Blume. This is the first report on inducing PLBs from shoots of Anoectochilus setaceus Blume. These results provides great potential for research and production of Anoectochilus setaceus Blume in industrial scale via PLBs formation. Keywords: Anoectochilus setaceus Blume, protocorm-like bodies, in vitro, kinetin, micropropagation . ẢNH HƯỞNG CỦA KINETIN VÀ SỰ KẾT HỢP GIỮA KINETIN VÀ 2, 4-D ĐẾN QUÁ TRÌNH HÌNH THÀNH PROTOCORM- LIKE BODIES Ở CÂY LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus setaceus Blume) Trần Thị Hồng.  2.2. Kết quả và thảo luận 2.2.1. Ảnh hưởng của kinetin đến sự hình thành protocorm- like bodies từ chồi của lan kim tuyến Protocorm-   . Thanh kẻ ngang màu trắng: tương ứng 1 mm 2.2.2. Ảnh hưởng của 2, 4-D kết hợp kinetin đến sự hình thành protocorm- like bodies từ chồi của lan kim tuyến  - 