Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, kháng oxy hóa của cây lạc tiên (passiflora foetida l ) ở tỉnh thừa thiên huế bằng dung môi hữu cơ ít phân cực

ĐẠI HỌC HUẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN NHỊ HỒNG THỦY NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM, KHÁNG OXI HĨA CỦA CÂY LẠC TIÊN (PASSIFLORA FOETIDA L.) Ở TỈNH THỪA THIÊN HUẾ BẰNG DUNG MƠI HỮU CƠ ÍT PHÂN CỰC LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Thừa Thiên Huế, Năm 2016 ĐẠI HỌC HUẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN NHỊ HỒNG THỦY NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM, KHÁNG OXI HÓA CỦA CÂY LẠC TIÊN (PASSIFLORA FOETIDA L.) Ở TỈNH THỪA THIÊN HUẾ BẰNG DUNG MƠI HỮU CƠ ÍT PHÂN CỰC Chun ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS NGUYỄN CHÍ BẢO Thừa Thiên Huế, Năm 2016 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu, kết nghiên cứu nêu luận văn trung thực, đồng tác giả cho phép sử dụng chưa cơng bố cơng trình khác Họ tên tác giả Nguyễn Nhị Hồng Thủy ii LỜI CẢM ƠN Luận văn hồn thành phịng thí nghiệm hợp chất tự nhiên, trường Đại học Sư phạm Huế Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Chí Bảo, người thầy tận tình hướng dẫn tơi suốt q trình thực Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo khoa Hóa nói chung tổ Hóa hữu nói riêng đóng góp nhiều ý kiến quý báu chun mơn giúp tơi hồn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, phòng Đào tạo Sau Đại học trường Đại học Sư phạm Huế tạo điều kiện thuận lợi giúp thực đề tài Xin chân thành cảm ơn! Học viên thực Nguyễn Nhị Hồng Thủy iii MỤC LỤC TRANG PHỤ BÌA i LỜI CAM ĐOAN ii LỜI CẢM ƠN iii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Đối tượng mục đích nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Bố cục luận văn CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Giới thiệu chi Passiflora 1.1 Đặc điểm thực vật 1.2 Một số loài thuộc chi Passiflora phân bố Việt Nam 1.3 Các nghiên cứu thành phần hóa học số loài thuộc chi Passiflora 10 1.3.1 Các hợp chất flavonoid 12 1.3.2 Các hợp chất alkaloid 15 1.3.3 Các hợp chất cyanogen glycoside 16 1.3.4 Các hợp chất khác 18 1.4 Giới thiệu lạc tiên 20 1.4.1 Đặc điểm thực vật 20 1.4.2 Phân bố sinh thái lạc tiên 21 1.4.3 Công dụng lạc tiên 21 1.4.4 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học lạc tiên 22 1.4.4.1 Thành phần hóa học 22 1.4.4.2 Hoạt tính sinh học 23 CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 24 2.1 Phương pháp xử lí mẫu thực vật 24 2.1.1 Thu xử lí mẫu 24 2.1.2 Xác định tên khoa học 24 2.2 Hóa chất dụng cụ, thiết bị nghiên cứu 24 2.3 Phương pháp nghiên cứu 24 2.3.1 Phương pháp chiết mẫu 24 2.3.2 Phương pháp thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm cao chiết lạc tiên 27 2.3.3 Phương pháp đánh giá hoạt tính chống oxi hóa 28 2.3.4 Xác định thành phần chất dễ bay cao chiết n-hexan lạc tiên29 2.3.5 Phân lập xác định cấu trúc cấu tử tách 29 2.3.5.1 Phân lập chất 29 2.3.5.2 Xác định cấu trúc 34 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, kháng oxi hóa cao chiết lạc tiên 35 3.1.1 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm 35 3.1.2 Kết thử hoạt tính kháng oxi hóa 36 3.2 Kết xác định thành phần hóa học chất dễ bay cao chiết n-hexan từ lạc tiên 36 3.3 Các hợp chất phân lập từ cao chiết điclometan lạc tiên 37 3.3.1 Hợp chất PED1 38 3.3.2 Hợp chất PED4 40 3.3.3 Hỗn hợp PED2 PED3 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Tên gọi Từ viết tắt 13 C-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C ĐCM Điclometan EtOAc Etyl axetat EtOH Etanol GC/MS Sắc ký khí ghép khối phổ Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton H-NMR HTSH Hoạt tính sinh học IR Phổ hồng ngoại Me Metyl MeOH Metanol P Passiflora SKBM Sắc ký mỏng SKC Sắc ký cột TPHH Thành phần hóa học DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH  DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Các loài thuộc chi Passiflora phân bố Việt Nam Bảng 1.2 Thành phần hóa học số loài thuộc chi Passiflora 10 Bảng 1.4 Thành phần hóa học lạc tiên 22 Bảng 2.2 Kết sắc ký cột cao chiết điclometan lạc tiên 31 Bảng 3.1 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm cao chiết lạc tiên 35 Bảng 3.2 Kết thử hoạt tính kháng oxi hóa cao chiết lạc tiên 36 Bảng 3.4 Các cấu tử dễ bay định danh cao chiết n-hexan lạc tiên 37 Bảng 3.16 Số liệu phổ 1H-NMR hỗn hợp chất PED2 PED3 với hỗn hợp stigmasterol -sitosterol 45  DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Quy trình chiết mẫu 26 Sơ đồ 2.3 Phân lập chất từ cao chiết điclometan lạc tiên 33  DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.3 Một số hình ảnh lạc tiên 21 Hình 3.3 Sắc ký đồ GC cao chiết n-hexan 36 Hình 3.5 Phổ hồng ngoại hợp chất PED1 38 Hình 3.6 Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất PED1 38 Hình 3.7 Phổ 13C-NMR hợp chất PED1 39 Hình 3.8 Phổ ESI-MS (+) hợp chất PED1 40 Hình 3.9 Phổ 13C-NMR hợp chất PED4 41 Hình 3.10 Phổ 13C-NMR DEPT hợp chất PED4 41 Hình 3.11 Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất PED4 42 Hình 3.12 Phổ ESI-MS (+) hợp chất PED4 43 Hình 3.13 Phổ 1H-NMR hợp chất PED2 PED3 44 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Cây lạc tiên hay gọi nhãn lồng có tên khoa học Passiflora foetida L thuộc họ lạc tiên (Passifloraceae); dây leo thân cỏ, có ăn Cây có nguồn gốc từ tây nam Hoa Kỳ, Mexico, vùng Caribe, Trung Mỹ Nam Mỹ Loài lạc tiên du nhập đến vùng nhiệt đới toàn giới Đông Nam Á hay Hawai [39] Theo Đơng y, nhờ có tính ngọt, tính bình nên ban đầu tác dụng lạc tiên đơn giản để nhiệt, giải độc, lợi thủy, chữa ho phế nhiệt, chữa ung nhọt, lở loét Khi sử dụng lạc tiên số thảo dược khác thái nhỏ, phơi khơ có tác dụng tốt như: giúp an thần, mát gan, chữa trị đau đầu [35] Theo nghiên cứu Tây Âu, tác dụng nghiên cứu Đông y, lạc tiên cịn chữa trị bệnh như: hỗ trợ đặc trị chứng ngủ, ngủ hay mơ, chống stress, căng thẳng thần kinh, suy nhược thể, tim mạch Bên cạnh cịn giúp chống co thắt trơn, làm giãn chữa chứng đau co thắt, đường tiêu hóa, tử cung [35] Theo chúng tơi biết, giới có số cơng trình khoa học nghiên cứu thành phần hóa học (TPHH) hoạt tính sinh học (HTSH) lạc tiên họ Passifloraceae nhằm nâng cao giá trị sử dụng Tuy nhiên, Việt Nam nghiên cứu cụ thể TPHH HTSH lạc tiên hạn chế Xuất phát từ thực tế trên, chọn đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, kháng oxi hóa lạc tiên (Passiflora foetida L.) tỉnh Thừa Thiên Huế dung môi hữu phân cực” Đối tƣợng mục đích nghiên cứu * Đối tƣợng nghiên cứu Cây lạc tiên (Passiflora foetida L.) tỉnh Thừa Thiên Huế * Mục đích nghiên cứu: Khảo sát TPHH, phân lập xác định cấu trúc số cấu tử cao chiết dung mơi hữu phân cực: n-hexan, điclometan Thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, kháng oxi hóa cao chiết từ lạc tiên tỉnh Thừa Thiên Huế Phƣơng pháp nghiên cứu * Phƣơng pháp nghiên cứu lý thuyết Phương pháp nghiên cứu hợp chất tự nhiên Tổng quan tài liệu đặc điểm thực vật, TPHH, HTSH số thuộc chi Passiflora * Phƣơng pháp nghiên cứu thực nghiệm Sử dụng phương pháp chiết rắn - lỏng để điều chế cao chiết lạc tiên dung mơi n-hexan, điclometan, EtOAc, MeOH Thử hoạt tính sinh học cao chiết thu Đo GC/MS cao chiết n-hexan để xác định thành phần cấu tử dễ bay Phân lập 1-2 cấu tử từ cao chiết dung mơi phân cực (n-hexan, điclometan) phương pháp sắc ký mỏng (SKBM), sắc ký cột (SKC)… Xác định cấu trúc cấu tử tách phương pháp phổ: IR, MS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT Bố cục luận văn Luận văn bao gồm: 51 trang Mục lục: trang Danh mục ký hiệu chữ viết tắt: trang Danh mục bảng biểu, hình ảnh, sơ đồ: trang Phần mở đầu: trang Phần nội dung: 40 trang Chương Tổng quan: 17 trang Chương Thực nghiệm: 11 trang Chương Kết nghiên cứu thảo luận: 12 trang Phần kết luận kiến nghị: trang Phần tài liệu tham khảo: trang Hình P6 Phổ 1H-NMR hợp chất PED1 P6 Hình P7 Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất PED1 P7 Hình P8 Phổ 13C-NMR hợp chất PED1 P8 Hình P9 Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất PED1 P9 Hình P10 Phổ ESI-MS (+) hợp chất PED1 P10 Hình P11 Phổ 1H-NMR hợp chất PED4 P11 Hình P12 Phổ 1H-NMR giãn rộng hợp chất PED4 P12 Hình P13 Phổ 13C-NMR hợp chất PED4 P13 Hình P14 Phổ 13C-NMR giãn rộng hợp chất PED4 P14 Hình P15 Phổ 13C-NMR-DEPT hợp chất PED4 P15 Hình P16 Phổ 13C-NMR-DEPT giãn rộng hợp chất PED4 P16 Hình P17 Phổ ESI-MS (+) hợp chất PED4 P17 Hình P18 Phổ 1H-NMR hỗn hợp PED2 PED3 P18 Hình P19, P20 Phổ 1H-NMR giãn rộng hỗn hợp PED2 PED3 P19 Hình P20 P20 ... kháng khuẩn, kháng nấm, kháng oxi hóa l? ??c tiên (Passiflora foetida L. ) tỉnh Thừa Thiên Huế dung môi hữu phân cực? ?? Đối tƣợng mục đích nghiên cứu * Đối tƣợng nghiên cứu Cây l? ??c tiên (Passiflora foetida. ..ĐẠI HỌC HUẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN NHỊ HỒNG THỦY NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM, KHÁNG OXI HĨA CỦA CÂY L? ??C TIÊN (PASSIFLORA FOETIDA L. ) Ở TỈNH THỪA THIÊN... 3,5-dihydroxy-4’,7-dimethoxy flavanone (6 3), 2”-xylosyl vitexin (6 4) Alkaloid: harmane (2 4), harmalol (2 7), harmine (2 6), harmaline (2 8) Axit linoleic (4 9) axit linolenic (5 0) (5 6) (5 7) R= H (5 8) R=