nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học của dịch chiết cây rau má huyện hòa vang thành phố đà nẵng

Ngoài ra, rau má cũng là loại thảo dược có tính bổ dưỡng rất cao, có nhiều sinh tố, khoáng chất, những chất chống oxy hóa, có thể dùng để dưỡng âm, cải thiện trí nhớ, làm chậm sự lão hóa

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM

KHOA HÓA

-   -

NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG DỊCH CHIẾT CÂY RAU MÁ HUYỆN HÒA VANG – THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC

GVHD: ThS Võ Kim Thành SVTH : Hồ Thị Thu Trang

Lớp : 08CHD

MỞ ĐẦU

1 Lý do chọn đề tài

Từ xa xưa, trong quá trình đấu tranh với thiên nhiên, bệnh tật, để bảo vệ cuộc sống, con người đã biết sử dụng nguồn thực vật và cả động vật làm các bài thuốc chữa bệnh có giá trị

Ngày nay, việc dùng các loại thuốc có nguồn gốc thiên nhiên ngày càng được ưa chuộng và các công trình nghiên cứu về chúng cũng không ngừng phát triển Qua các công trình nghiên cứu cho thấy khi sử dụng các loại thuốc có nguồn gốc thực vật có ít tác dụng phụ gây hại và đây chính là lí do quan trọng mà ngày nay các loại thuốc có nguồn gốc thiên nhiên ngày càng chiếm được lòng tin của người tiêu dùng

Trong khi đó, rau má (Centella Asiatica) là nguồn nguyên liệu dễ trồng, dễ kiếm,

rẻ tiền mà lại có hiệu quả kinh tế cao Rau má là loại thân thảo mọc phổ biến ở các quốc gia vùng nhiệt đới như : Ấn Độ, Madagascar, Indonesia, Việt Nam… Người dân ở các vùng này đã sử dụng rau má làm thực phẩm như một loại rau ăn hằng ngày.Bên cạnh đó,

do có nhiều đặc tính quý nên nó được sử dụng làm thuốc trong y học cổ truyền ở nhiều nước Về mặt dược học, nhờ chứa các saponin triterpenoid như Asiaticoside, Madecassoide, rau má là một loại rau thông dụng có tác dụng sát trùng, giải độc, thanh nhiệt lương huyết Asiaticoside đã được công nhận là chất có tác dụng tái tạo mô liên kết,giúp lên da non vết thương nhanh chóng có thể ứng dụng rất rộng rãi trong dược phẩm và cả hóa mỹ phẩm Asiaticoside còn được sử dụng trong chữa trị bệnh phong, bệnh lao, làm chậm quá trình lão hóa Ngoài ra, rau má cũng là loại thảo dược có tính bổ dưỡng rất cao, có nhiều sinh tố, khoáng chất, những chất chống oxy hóa, có thể dùng để dưỡng âm, cải thiện trí nhớ, làm chậm sự lão hóa, cải thiện vi tuần hoàn và chữa nhiều chứng bệnh về da…

Ở nước ta, vùng trồng rau má phân bố rất rộng từ Bắc vào Nam với diện tích đáng

kể, đặc biệt ở các tỉnh duyên hải miền Trung, nơi khí hậu có độ ẩm khá cao và thường có loại đất sét pha cát nên thích hợp cho loại cây này phát triển Tuy vậy tiềm năng của loại

thảo dược quý này vẫn chưa được khai thác và tận dụng đúng mức, hầu như nó chỉ được

sử dụng như một loại rau quen thuộc và gần gũi trong đời sống hằng ngày

Trên thế giới, y học hiện đại đã có những nghiên cứu lâm sàng về tác dụng chữa bệnh của dịch chiết và các hợp chất trong rau má Tuy nhiên ở nước ta việc nghiên cứu chỉ mới bước đầu, chưa đi sâu vào việc xác định thành phần và hoạt tính sinh học của loài cây này Để góp phần vào nguồn tài liệu về cây rau má phục vụ nghiên cứu khoa học, tôi

chọn đề tài tài “Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học của dịch chiết cây

rau má huyện Hòa Vang – Thành phố Đà Nẵng”

2 Mục đích nghiên cứu

 Xác định một số chỉ tiêu hóa lý của rau má

 Khảo sát một số điều kiện chiết tách thích hợp

 Xác định thành phần hóa học, công thức cấu tạo của một số cấu tử chính trong dịch chiết rau má

3 Đối tƣợng và phạm vi nghiên cứu

a Đối tƣợng nghiên cứu

Cây rau má thu hái vào buổi sáng sớm tháng 3 tại huyện Hòa Vang – Thành phố

Đà Nẵng

b Phạm vi nghiên cứu

Cây rau má được trồng và thu hái tại Đà Nẵng

Nguyên liệu rau má tươi và khô

4 Phương pháp nghiên cứu

a Nghiên cứu lý thuyết

 Thu thập, tổng hợp các tài liệu, tư liệu, sách báo trong và ngoài nước có liên quan đến đề tài

 Trao đổi kinh nghiệm với các chuyên gia, thầy cô giáo và đồng nghiệp

b Phương pháp thực nghiệm

 Phương pháp hóa học xác định một số chỉ số hóa lý của nguyên liệu

 Phương pháp vật lý: quang phổ hấp thụ phân tử để khảo sát điều kiện chiết, sắc ký khí ghép khối phổ GC – MS xác định một số cấu tử chính trong dịch chiết

5 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

a Ý nghĩa khoa học

 Cung cấp những thông tin khoa học về điều kiện chiết tách, xác định thành phần

hóa học của dịch chiết rau má ở Đà Nẵng

 Cung cấp những thông tin, tư liệu làm cơ sở cho việc nghiên cứu sau này

Chương 1: Tổng quan, gồm trang

Chương 2: Các phương pháp nghiên cứu thực nghiệm, gồm trang

Chương 3: Kết quả và thảo luận, gồm trang

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN

1.1 Tổng quan về Họ Hoa tán

Họ Hoa tán hay họ Cà rốt theo tiếng Latinh là Umbelliferae hay Apiaceae (cả hai tên gọi này đều được ICBN cho phép, nhưng tên gọi họ Cà rốt là mới hơn) là một họ của các loài thực vật thường có mùi thơm với các thân cây rỗng, bao gồm các cây như mùi tây, cà rốt, thì là và các loài cây tương tự khác Nó là một họ lớn với khoảng 430-

440 chi và trên 3.700 loài đã biết Tên gọi ban đầu Umbelliferae có nguồn gốc từ sự nở hoa trong dạng "tán" kép Các hoa nhỏ là đồng tâm với 5 đài hoa nhỏ, 5 cánh hoa và 5 nhị hoa

Họ này có một số loài có độc tính cao, chẳng hạn như cây độc cần, là loài cây đã được sử dụng để hành hình Socrates và cũng được sử dụng để tẩm độc các đầu mũi tên Nhưng họ này cũng chứa nhiều loại cây có ích lợi cao cho con người như cà rốt, mùi tây, ca rum và thì là…

Nhiều loài cây trong họ này, chẳng hạn cà rốt hoang có các tính chất của estrogen (hooc môn sinh dục nữ), và được sử dụng trong y học truyền thống để kiểm soát sinh đẻ Nổi tiếng nhất trong số loài cây dùng cho việc này là loài Thì là khổng lồ đã tuyệt chủng: A ngụy (chi Ferula hay cụ thể là loài Ferula tingitana)

Một số loại cây đáng chú ý của Họ Hoa tán:

 Anethum graveolens - thì là

 Anthriscus cerefolium - hồi cần

 Chi Angelica - bạch chỉ

 Apium graveolens - cần tây

 Carum carvi - ca rum

 Centella asiatica - rau má

 Eryngium - chi nhựa ruồi biển

 Myrrhis odorata - điềm một dược

 Pastinaca sativa - củ cải vàng

 Petroselinum crispum - mùi tây

 Coriandrum sativum - mùi Tàu

 Pimpinella anisum - tiểu hồi cần

 Levisticum officinale - cây cần núi

1.2 Tổng quan về cây rau má

Rau má là loại rau dại mọc tương đối phổ biến ở các vùng đất nhiệt đới đặc biệt là

ở Châu Á Nó được biết đến với nhiều tên gọi khác nhau như: Tích tuyết thảo (Trung Quốc), Phanok (Lào), Trachiek – Kranh (Campuchia), Gotu – Kola (Sri Lanka), Pegagan (Indonesia), Takip – Kohol (Philippine), Bua – Bok (Thái Lan)…

Rau má là loại thực vật mọc lan trên mặt đất có lá trông giống như những đồng

tiền tròn được xếp nối tiếp nhau nên còn gọi là Liên tiền thảo

Tên khoa học là Centella asiatica (L.) Urb (Hydrocotyle asiatica L., Trisanthus cochinensis Lour) thuộc họ Hoa tán Apiacece (Umbelliferae)

bờ ruộng, ven suối, sườn đồi, những vùng ẩm ướt Rau má có thể thu hái cả bốn mùa nên khả năng mở rộng diện tích trồng và tăng năng suất rất dễ dàng

Bên cạnh đó, việc trồng rau má không đòi hỏi đầu tư nhiều và việc chăm sóc tương đối dễ dàng Ở đất bùn, rau má có thể đạt năng suất 1 – 1,2 tấn/ 500m2

/ lứa thu hoạch, ở đất khô thì năng suất khoảng 500kg/ 500m2/ lứa Mỗi năm có thể thu hoạch 7 –

10 lứa

1.2.3 Đặc điểm hình thái

Thân rau má gầy và nhẵn, thuộc loại thân bò lan, màu xanh lục hay lục ánh đỏ, có

rễ ở các mấu Nó có các lá hình thận, khía tai bèo rộng 2 – 5 cm, màu xanh với cuống dài

và phần đỉnh lá tròn, kết cấu trơn nhẵn với các gân lá dạng lưới hình chân vịt Các lá mọc

ra từ cuống dài khoảng 5 – 20 cm Bộ rễ bao gồm các thân rễ, mọc thẳng đứng có màu trắng kem và được che phủ bằng các lông tơ ở rễ

Hoa rau má có màu từ ánh hồng tới đỏ, mọc thành các tán nhỏ, tròn gần mặt đất Mỗi hoa được bao phủ một phần trong 2 lá bắc màu xanh Các hoa lưỡng tính này khá nhỏ (nhỏ hơn 3mm), với 5 – 6 thùy tràng hoa Hoa có 5 nhị và 2 vòi nhụy, quả có hình

Hình 1.5 Cây rau má

mắt lưới dày đặc Quả của nó chín sau 3 tháng Toàn bộ cây, bao gồm cả rễ thường được thu hái thủ công

1.2.4 Một số loại rau má

a Rau má lá sen

 Tên khoa học: Hydrocotyle bonariensis

 Mô tả

Rau má thân mọc bò, có rễ ở mấu

Lá mọc so le hoặc tụ tập nhiều lá trên

mấu, lá hơi tròn, có khía tai bèo, rộng

2-3cm, cuống dài 3-5cm, phiến lá xanh,

toàn cây khi tươi có mùi hăng, vị đắng

Lá đài nhọn có màu lục, ra hoa từ đầu

mùa xuân đến mùa thu

Quả hình bầu dục, dày 1,5- 2mm,

rộng 2,5- 3 mm, đáy và đỉnh có khía

sống lưng và phần bên gân nổi rõ

 Phân bố và sinh thái:

Cây sống dễ trong nước, những nơi đất cát, bờ biển, mương rãnh nhưng cũng chịu được môi trường khô, xuất xứ Nam Mĩ, gần đây phát hiện mọc ở Việt Nam

b Rau má mỡ

 Tên khoa học:

Hydrocotyle Sibthorpioides Lam

 Tên khác: Rau má họ, rau má chuột

 Mô tả

Cây thân cỏ nhỏ, mọc quanh năm,

thân mọc bò, mang rễ ở mấu, lá hơi tròn,

mép khía răng không đều

Hình 1.6 Rau má lá sen

Hình 1.7 Rau má mỡ

Cụm hoa nhiều tán mọc ở nách lá, mang hoa màu trắng Lá và cụm hoa đều có cuống màu trắng dài Quả dẹt nhẵn hoặc có lông nhỏ

 Phân bố và sinh thái

Cây mọc ở những nơi ẩm ướt, ven ruộng, bờ ao Ra hoa vào tháng tư

Rau má mỡ thường gặp mọc hoang khắp nơi ở nước ta và các nước châu Á, Châu Phi, ngoài ra còn phân bố ở Châu Mỹ và Ôxtrâylia

c Rau má dại

 Tên khoa học: Hydrocotyle

Chinenisis (Cunn) Craib

 Tên khác: Rau má rừng

 Mô tả

Cây thân cỏ sống dai, có thân dài, cành

mọc vươn lên dài 5 -20 cm, có lông mềm,

mang ít lá nhẵn, phiến lá hình thận mắt

chim, lõm sâu hình tim, chia 5 thùy hình

tròn hay khía tai bèo, cuống lá dài, hơi có

lông, lá kèm mỏng, hình tròn hay hình trái

xoan

Cụm hoa ở nách đối diện với lá, thường đơn độc to hơn lá, cuống tán dài hơn cuống

lá, nhẵn hay có lông dài, cuống hoa ngắn Bao chung có lá bắc nhỏ hình trái xoan, khi nguyên mang khía răng ở gốc, quả khi chín hình tròn, có màu đen, mang vòi ngắn

 Phân bố và sinh thái

Cây mọc trên đất ẩm, gần khe suối trong rừng, núi cao Ra hoa vào mùa thu Ở nước

ta thường gặp ở Cao Bằng, Sơn La, Hòa Bình vào đến KonTum

1.2.5 Thành phần hóa học

Một số nghiên cứu cho thấy thành phần hóa học của rau má rất phong phú (bảng 1.1) Ngoài ra rau má còn chứa Sterol, Saponin, Flavonol, Saccharide, Magnesium,

Hình 1.8 Rau má dại

Manganese, Potassium, Zinc, các loại vitamin B2, B3, B6 và K Tùy theo khu vực trồng hoặc mùa vụ thu hoạch mà tỉ lệ các hoạt chất trong rau má có thể sai khác nhau

Toàn bộ cây rau má đều chứa tinh dầu, dầu béo Chất béo chủ yếu là Glyceride của các loại acid: Oleic, Linoleic, Lignoceric, Palmitic và Stearic Trong rau má còn chứa một lượng Alkaloid Hydrocotylin, chất đắng Vellarin và đặc biệt là Glycoside Asiaticoside Lượng Asiaticoside này khi thủy phân cho Asiatic acid và Glucose, Rhamnose Hàm lượng Asiaticoside trong mô rau má theo từng bộ phận khác nhau sẽ chiếm tỷ lệ khác nhau

Trong thành phần hóa học của cây rau má, nhóm Saponin hay còn gọi là Triterpene được xem là nhóm chất đặc biệt có ý nghĩa nhất, nó bao gồm Triterpene acid

và Triterpene glycoside Triterpene acid chứa Asiatic acid, Brahmic acid, Isobrahmic acid, Madecassic acid và Bentulinic acid Còn hợp chất triterpene glycoside có chứa Asiaticoside, Madecassoside, Brahmoside, Brahminoside và Thankuniside Đây là nhóm những hoạt chất được nghiên cứu khá nhiều trong lĩnh vực y dược nhằm phục vụ việc chữa bệnh cho con người trong đó phải kể đến vai trò của Asiaticoside và Madecassoside

Asiaticoside là một Triterpene glycoside chiếm hàm lượng nhiều nhất Asiaticoside là 1-O-acyl-D-glucose pyranose được tìm thấy trong tự nhiên, nó là Trisacharide ester của acid Asiatic Người ta cho rằng, trong cơ thể Asiaticoside thủy phân thành đường và acid Asiatic – sản phẩm trao đổi chất chịu trách nhiệm trong việc chữa bệnh Asiaticoside có khả năng kháng khuẩn và hoạt tính diệt nấm chống lại được mầm bệnh và nấm Asiaticoside giúp chữa lành vết thương nhanh chóng nhờ vào cơ chế kích thích tạo collagen và sự tổng hợp glycosaminoglycan

Hoạt chất Asiaticoside cũng đã được ứng dụng trong điều trị bệnh phong và bệnh lao Người ta cho rằng trong những bệnh này, vi khuẩn được bao phủ bởi một màng ngoài giống như sáp khiến cho hệ kháng nhiễm của cơ thể không thể tiếp cận Chất Asiaticoside trong dịch chiết rau má có thể làm tan lớp màng mỏng này để hệ thống miễn dịch của cơ thể tiêu diệt chúng

Năm 1990, Maquart và cộng sự đã công bố công trình nghiên cứu về khả năng làm lành vết thương bị lở loét của Asiaticoside Dược tính đáng kể của hoạt chất này là giảm bớt kích thước của vùng vết thương trên da lưng ở chuột sau 9 ngày thử nghiệm

Theo nghiên cứu của Inhee và cộng sự (1999) cho thấy các dẫn xuất của chất Asiaticoside có khả năng bảo vệ thần kinh, chống lại độc tố β – amyloid gây hại đối với nơron thần kinh Ba trong số 28 dẫn xuất của Asiaticoside có thể được đưa vào nghiên cứu trị bệnh Alzheimer nhờ khả năng bảo vệ các tế bào thần kinh khỏi tác động của β – amyloid Một số báo cáo được xuất bản từ 1967 đến 1999 mô tả việc sử dụng thuốc mỡ chứa đựng những liều cao từ 0,1 – 0,2% dịch chiết của rau má để tăng cường phục hồi vết thương bị bỏng

Asiaticoside kích thích hệ reticuloendothelial nên sức miễn nhiễm của cơ thể được mạnh hơn Asiaticoside giúp tế bào da chống oxy hóa, phát triển mô liên kết, nên làm mạnh tế bào da, mô da căng trẻ và giúp cho vết mổ, vết loét mau lành

Trong kết quả nghiên cứu của Boiteau và cộng sự (2001), tác dụng của Asiaticoside được tìm thấy đó là tiềm năng làm giảm trầm cảm ở chuột Những thử nghiệm được tiến hành trên chuột và những kết quả cho thấy rằng Asiaticoside có thể có hoạt động giống như chất chống trầm cảm, giúp chuột hoạt động, nhận và xử lý thông tin nhanh hơn

Nghiên cứu của Mahato (2000) và cộng sự đã thí nghiệm tác dụng của Asiaticoside trên chứng bệnh sưng phù và viêm khớp Asiaticoside có trong dịch chiết đã làm giảm bớt bàn chân phình của chuột thử nghiệm Kiểm tra hoạt dịch tại điểm viêm khớp trên chân chuột cho thấy sự thoái hóa sụn khớp do sự tăng sản sinh những tế bào viêm ở chuột được ức chế bởi Asiaticoside Cơ chế tích cực của Asiaticoside cố thể liên quan đến việc ngăn chặn sự tăng nhanh của bạch cầu

Một thành phần khác không kém phần quan trọng trong tác dụng sinh học của rau

má chính là Madecassoside Hoạt chất này cũng là một loại triterpene glycoside chiếm phần lớn trong rau má, có tác dụng chữa lành vết thương và ngăn ngừa hình thành sẹo lồi Một nghiên cứu khoa học ở Trung Quốc cho thấy cơ chế tác dụng của Madecassoside

liên quan chặt chẽ đến việc ức chế sự gia tăng quá mức của các nguyên bào sợi da và làm chết các tế bào nguyên sợi sẹo lồi

Trong các nghiên cứu lâm sàng, Madecassoside đã chứng minh cho da cũng như các đặc tính chống lão hóa trên da Nó nghĩ rằng nó làm việc theo nhiều cách bao gồm:

 Kiểm soát tình trạng viêm

Một số nghiên cứu cũng đề nghị mà Madecassoside có thể có ích trong điều trị bệnh vẩy nến, có lẽ hầu hết thông qua khả năng chống viêm của nó Madecassoside có thể được coi là một bổ sung hữu ích cho chế độ chăm sóc làn da của bạn hoặc là để thúc đẩy làm lành vết thương sau phẫu thuật hoặc để tăng tổng hợp Collagen trong da lão hóa

Bảng 1.1 Một số thành phần hóa học của rau má

1.2.6 Tác dụng dƣợc lý và công dụng của rau má

Trong dân gian, rau má được sử dụng tương đối phổ biến: dùng cả lá và dây tươi giã nát, xay lấy nước cốt để uống hoặc nấu chín làm rau trong bữa ăn hằng ngày… Ngoài

ra nó còn thường được dùng như một bài thuốc trị bệnh cảm cúm, nhức đầu, viêm họng

Theo y học cổ truyền, rau má là vị thuốc có tính hàn, vị ngọt, hơi đắng, tính bình, không độc, có tác dụng dưỡng âm, thanh nhiệt, nhuận gan, giải độc, lợi tiểu Rau má còn được dùng để làm thuốc sát trùng, bổ dưỡng, chữa thổ huyết, tả lỵ, khí hư, bạch đới, mụn nhọt, rôm sảy

Từ những năm 60 của thế kỷ 20, y học hiện đại đã có những nghiên cứu lâm sàng

về tác dụng chữa bệnh của dịch chiết rau má và các hợp chất trong rau má Rất nhiều công trình nghiên cứu đã được thực hiện và công bố

Đối với thần kinh

Người ta nhận thấy rằng một số hoạt chất trong rau má như Bracoside B có tác dụng lên hoạt động của hệ thần kinh trung ương, tăng cường các chất chuyển hóa, làm giảm căng thẳng tâm lý, tăng khả năng tập trung tư tưởng và giúp cải thiện trí nhớ của người già Wattanathor Jintanaporn và cộng sự (2009) đã chứng minh rằng với hàm lượng 250mg, 500mg và 750mg dịch chiết rau má mỗi ngày, trong 2 tháng, đã cải thiệt rõ rệt khả năng nhớ và trạng thái tinh thần của những người già được nghiên cứu

Người ta còn cho rằng dịch chiết rau má có hiệu quả tốt với bệnh Alzeheimer nhờ vào những dẫn xuất của chất Asiaticoside có khả năng bảo vệ các tế bào thần kinh khỏi tác động của độc tố β – amyloid

Triterpenoids trong rau má cũng có thể làm giảm sự lo lắng và tăng cường chức năng tâm thần ở một số cá nhân Theo một nghiên cứu, xuất bản trong tạp chí Journal of Clinical Psychopharmacology năm 2000, những người tiêu thụ rau má có thể giảm sự giật mình đi rất nhiều Trong khi những phát hiện này cho thấy rau má có thể có hoạt động chống lo âu ở người, các nhà nghiên cứu nhận thấy rằng hiệu quả điều trị các triệu chứng lo âu vẫn còn chưa rõ ràng

Đối với tim mạch

Hoạt chất Bracoside A kích thích sự bài tiết Nitric oxide của mô để làm dãn nở vi động mạch cùng mao quản, nên lượng máu di chuyển qua mô được nhiều hơn nên có khả năng chấm dứt được các cơn đau tim, đồng thời các chất độc dễ được đào thải giúp tế bào sống được thoải mái trong một môi trường lành mạnh Khám phá quan trọng này mang lại giải thưởng Nobel về Y năm 1998 cho 3 giáo sư Hoa Kỳ R Furchgott, L Ignarro và

F Murad

Trong tuần hoàn huyết, những hoạt chất của rau má có tác dụng cải thiện vi tuần hoàn ở các tĩnh mạch, mao mạch, bảo vệ lớp áo trong của thành mạch và làm gia tăng tính đàn hồi của mạch máu Do đó rau má cũng thường được dùng trong các chứng tăng

áp lực tĩnh mạch ở các chi dưới Trong thực tế người ta thường uống dịch rau má để trị các bệnh về tĩnh mạch như sa tĩnh mạch hoặc sưng phù ở chân

Nhiều nghiên cứu cho thấy các hoạt chất nằm ở trong chất xơ (Cellulose) của rau

má, nếu chúng ta chỉ giã vắt lấy nước, bỏ phần bã thì sẽ mất đi các hoạt chất này Một số công trình khác còn cho thấy các chất xơ có thể “kéo” Cholesterol ra khỏi cơ thể nên cũng có tác dụng rất tốt với tim mạch, vì vậy nếu ăn các loại rau có nhiều chất xơ sẽ giúp

cơ thể đào thải dần lượng Cholesterol ra khỏi cơ thể

Đối với da

Cơ chế và bằng chứng lâm sàng về việc kích thích sự tổng hợp collagen, thúc đẩy

sự hình thành tế bào da, giúp nhanh liền vết thương đã được nhiều tác giả đề cập

Do tác dụng vào tuần hoàn và làm tế bào da vững mạnh nên rau má cũng được ứng dụng làm kem bôi mặt ở Pháp để làm bớt những vết nhăn cho nét mặt được trẻ trung Theo nhiều công trình nghiên cứu và kết quả lâm sàng đều cho thấy dịch chiết rau má có khả năng kích hoạt các tiến trình sinh học trong việc phân chia tế bào và tái tạo mô liên kết giúp vết thương chóng lành và mau lên da non

Hiện nay các chế phẩm từ rau má đã được sử dụng rất đa dạng dưới nhiều hình thức thuốc tiêm, thuốc bột, thuốc mỡ để điều trị tất cả các chứng bệnh về da như vết bỏng, vết thương do chấn thương, do giải phẫu, cấy ghép da, những vết lở loét lâu lành, vết lở do ung thư, bệnh phong, vẩy nến

Đối với bệnh ung thư

Phần dịch chiết chứa các Triterpenoids của rau má được cho là có khả năng tiêu diệt được các tế bào ung thư loại lymphoma Dalton và Ehrlich, nhưng vẫn chưa xác định chính xác loại Triterpenoid nào Và các nghiên cứu về cấu trúc hóa học của các triterpenoid trong Centella cũng được đánh giá có thể chống được ung thư nhờ vào hoạt tính đối kháng hoạt động Collagen…

Trong rau má, các Triterpenoids loại ursane như Ursolic và Oleanolic acid có tính diệt bào mạnh Các nghiên cứu “in vitro” về Ursolic và Oleanolic acid ghi nhận khả năng ngăn chặn sự phát triển của một số dòng tế bào ung thư có liên quan tới hoạt tính diệt bào của các acid này Cả Oleanolic acid và Ursolic acid đều làm giảm sự sinh sản của tế bào nội mạc nên có thể sẽ hữu dụng để trị ung thư bằng cách ngăn chặn tiến trình angiogenesis (tiến trình tăng trưởng của các mạch máu tân tạo để nuôi dưỡng tế bào tân sinh) cần đến sự sinh sản của các tế bào nội mạc để tạo ra các mạch máu mới

Các acid Oleanolic và Ursolic cũng có các tác động chống ung bướu (in vivo) Vì vậy ở Nhật một đặc chế của các chất này được dùng để trị ung thư máu loại leukemia nonlymphatic

Asiaticoside (hoạt chất chiếm hàm lượng tương đối lớn trong rau má) cũng đã góp phần không nhỏ ngăn chặn sự phát triển của các tế bào ung thư Người ta cho rằng khi hấp thụ vào cơ thể Asiaticoside sẽ phân cắt tạo thành khoảng 62% Asiatic acid và các gốc đường Asiatic acid này cũng có thể có các hoạt tính tốt như Oleanolic và Ursolic acid Nhiều bằng chứng lâm sàng trên chuột còn cho thấy rằng, dịch chiết rau má có khả năng chữa lành khối u dạ dày chuột, có khả năng kháng khối u, giảm tác dụng xấu của thuốc hóa trị liệu ung thư và trên tế bào ung thư ruột kết của người

Ngoài những tác dụng trên thì rau má còn có tác dụng chống suy nhược, chống stress do sự oxi hóa trên chuột và trị bệnh khớp Trong những năm gần đây, nhiều phương tiện thông tin đã phổ biến cách chữa bệnh thấp khớp bằng cách ăn hai lá rau má tươi mỗi ngày Ở Việt Nam hiện nay các công ty dược phẩm đã nghiên cứu và sản xuất nhiều loại thuốc có nguồn gốc từ rau má để chữa trị nhiều loại bệnh

1.3 Một số nghiên cứu trong nước và trên thế giới về rau má

Từ những năm 1940 y học hiện đại đã bắt đầu nghiên cứu tác dụng của rau má Người ta cho rằng dịch chiết rau má có hiệu quả tốt với bệnh Alzheimer nhờ vào những dẫn xuất của chất Asiaticoside có khả năng bảo vệ các tế bào thần kinh khỏi tác động của các độc tố beta-amyloid

Theo tập san Société des amis du parc bonatique de Tananarive, năm 1941 và

1942 tại Mangas, người ta đã nghiên cứu dùng rau má chữa hủi tốt hơn chế phẩm của đại phong thử Năm 1949, Lythgoe và Trippet cũng đã nghiên cứu tác dụng chữa bệnh phong của Centelloside, một loại Glycoside có tính chất giống Asiaticoside có trong rau má

Nghiên cứu của Trung tâm Y tế Đại học Maryland chỉ ra rằng cây rau má có chứa nhiều Triterpenoid (Asiaticoside, Madecassoside….) giúp tăng cường da và tăng lưu thông vào vùng da

Một chương trình phóng sự của đài truyền hình số 9 ở Sydney vào tháng 12/2003 cũng cho biết một số người ở Úc đã chữa khỏi bệnh thấp khớp bằng cách ăn 2 lá rau má tươi mỗi ngày Phương pháp này phát xuất từ quyển sách “Arthritis and Paradoxycal Pennywort” (Bệnh thấp khớp và lá rau má) của ông Russell Maslen

Nghiên cứu về tác dụng của rau má với bệnh ung thư ghi nhận bột trích tinh rau

má ức chế được sự tăng trưởng của tế bào ung thư nơi thú vật nhờ tác dụng của các

triterpenenoids liên hệ đến acid Asiatic Cũng nhờ khả năng chống ung bướu này mà một loại kem đặc chế ở Nhật Bản đã được dùng để trị ung thư máu (nonlymphatic leukemia)

1.3.2 Trong nước

Rau má là một loại rau rất "lành", có thể ăn hằng ngày, nhưng rau má không chỉ là một loại rau mà còn là vị thuốc quý, chữa được nhiều chứng bệnh, như: mụn nhọt, rôm sảy, sốt nóng, thiếu sữa sau sinh, táo bón, hư lao, nhuận gan mật, bí tiểu tiện Ngoài ra, rau má cũng là loại dược thảo có tính bổ dưỡng rất cao, có nhiều sinh tố, khoáng chất, những chất chống oxy hóa, có thể dùng để dưỡng âm, cải thiện trí nhớ, làm chậm sự lão hóa, cải thiện vi tuần hoàn và chữa nhiều chứng bệnh về da

Theo y học cổ truyền, rau má có tác dụng dưỡng âm, thanh nhiệt, nhuận gan, giải độc, lợi tiểu Trong nhận thức dân gian, người Việt Nam từ xưa dùng rau má như một loại thức ăn bổ dưỡng, dùng nước ép rau má, vò nát rau má đắp lên vết thương… như là những cách sử dụng rau má đơn giản nhất Ngày nay, trên thị trường đã xuất hiện rất nhiều loại sản phẩm chiết xuất từ rau má với công dụng rất tốt như trà rau má Gotu Kola, bột rau má trong viên nang mềm Cendital, kem trị mụn rau má,… Đặc biệt tinh rau má tươi đã được Viện Công nghiệp thực phẩm sản xuất thành công với các chế phẩm rau má tan, rau má FOS… trên thị trường

Hiện nay ở Việt Nam, các nghiên cứu về rau má phần nhiều đi theo vào phân tích khả năng kích hoạt các tiến trình sinh học trong việc phân chia tế bào và tái tạo mô liên kết của rau má Nhiều công trình nghiên cứu và kết quả lâm sàng cho thấy dịch tiết rau

má có khả năng kích hoạt các tiến trình sinh học trong việc phân chia tế bào và tái tạo mô liên kết giúp vết thương chóng lành và mau lên da non Các nghiên cứu này là tiền đề cho việc sản xuất các loại thuốc tiêm, thuốc bột, thuốc mỡ để điều trị tất cả các chứng bệnh về

da như vết bỏng, vết thương do chấn thương, do giải phẩu, cấy ghép da, những vết lở lâu lành , vết lở do ung thư, bệnh phong, vẩy nến…

Một số công trình khác đi vào nghiên cứu tác dụng của rau má trong tuần hoàn huyết Các hoạt chất của rau má có tác dụng cải thiện vi tuần hoàn ở các tĩnh mạch, mao mạch, bảo vệ lớp áo trong của thành mạch và làm gia tăng tính đàn hồi của mạch máu

Gần đây trường Đại học Đà Lạt cũng đã có công trình nghiên cứu khả năng giải độc lá ngón bằng rau má nhưng vẫn chưa có kết quả thuyết phục

Liên quan đến chất Asiaticoside, Giáo sư Bửu Hội có công trình nghiên cứu tác dụng trị bệnh phong với rau má vào năm 1960 Ngày nay, nhiều nhà khoa học cho là chất Asiaticoside của rau má có tác dụng tương đương với dược phẩm trị phong chính là Dapsone Ở nước ta TS Phan Quốc Kinh và cộng sự đã chiết xuất được Asiaticoside và acid Asiatic từ rau má Việt Nam

Hoạt chất Asiaticoside đã được ứng dụng trong điều trị bệnh phong và bệnh lao Tuy nhiên hiện nay ở Việt Nam, dù có nhiều nghiên cứu về các tác dụng của rau má, vẫn chưa có nhiều công trình đi sâu nghiên cứu việc chiết xuất các hợp chất có hoạt tính sinh học từ cây rau má nói chung và chất Asiaticoside nói riêng

1.4 Một số bài thuốc từ rau má

Chữa trúng thử, say nắng, say nóng: Lấy khoảng 100g rau má tươi, rửa sạch, giã

nát, vắt lấy nước, thêm chút muối ăn, quấy đều cho uống Có thể kết hợp rau má với lá sen tươi, cỏ nhọ nồi tươi, mỗi thứ 100g, rửa sạch, thái nhỏ, giã nát, vắt lấy dịch, thêm chút muối ăn, quấy đều cho uống Ngoài ra có thể dùng rau má dưới dạng chè để giải nhiệt hàng ngày: rau má, vỏ đậu xanh, đậu ván trắng, mạch môn, mỗi vị 12g, sinh địa 10

g, sa sâm, lá tre (tươi) mỗi vị 8 g, cam thảo 4 g, ngày 1 thang, dưới dạng hãm

Chữa rôm sẩy, mẩn ngứa: Hàng ngày ăn rau má tươi, hoặc giã nát vắt lấy nước

uống (khoảng 50g rau má tươi với 200ml nước sôi để nguội), nếu trẻ nhỏ, có thể thêm chút đường hoặc mật ong cho dễ uống

Chữa mụn nhọt: Rau má và lá gấc mỗi thứ 50g rửa sạch, giã nhỏ, cho ít muối vào

trộn đều, đắp lên chỗ đau rồi băng lại, ngày thay 2 lần và đắp cho đến khi khỏi

Hạ sốt: Khi bị sốt, nhức đầu, dùng 30g rau má tươi, rửa sạch, giã nát, thêm nước

sôi để nguội, vắt lấy nước cốt rồi hòa với 10g bột sắn dây, thêm đường uống

Chữa ho khan, ho lâu ngày, ho thể nhiệt: Rau má tươi 100g, rửa sạch vắt lấy dịch cho

uống; có thể dùng 40g rau má (khô) phối hợp với bạc hà, cóc mẳn, mỗi vị 16g, bách bộ, mạch môn, mỗi vị 12g, cam thảo 8g Sắc uống, ngày một thang Uống liền 1-2 tuần

Sốt xuất huyết: Rau má, cỏ nầm trầu, lá huyết dụ, lá cối xay mỗi thứ 20g, cỏ nhọ

nồi sao cháy, sắc đặc, uống ngày 2 lần , mỗi lần một thang

Hạ huyết áp: Rễ nhàu 16g, rễ kiến cò 12g, lá tre 12g, rễ tranh 12g, rễ cỏ xước 12g,

rau má 16 g Sắc uống thay nước hằng ngày

Chữa đau bụng tiêu chảy, rau má khô: (sao vàng) 10g, bạch biển đậu 12g, hoắc hương,

hương phụ, hạt mã đề, mỗi vị 8g, sa nhân 3g, gừng tươi 2g Sắc uống, ngày 1 thang

Chữa viêm loét dạ day, tá tràng: rau má (khô) 12g, đảng sâm 16g, hoài sơn, ý dĩ, kê

huyết đằng, cam thảo dây, hà thủ ô đỏ, đỗ đen (sao), mỗi vị 12g Sắc uống, ngày 1 thang

Chữa viêm bàng quang cấp: rau má 10g, bồ công anh 20g, mã đề 16g, thài lài tía,

chi tử, râu ngô, mộc thông, cam thảo dây, mỗi vị 12g Sắc uống, ngày 1 thang

Chữa viêm gan vàng da: rau má (tươi) 100g, nhân trần 30g, chi tử 12g, vàng

đắng 6g Sắc uống, ngày 1 thang

Chữa mệt mỏi do thay đổi thời tiết: Rau má 40g, ngải cứu, tía tô, kinh giới mỗi

thứ 20g, sắc đặc, này uống 2 lần

Trị khí hư, phụ nữ đau bụng lúc hành kinh: Dùng rau má, bông mã đề, rễ cỏ

tranh, râu ngô, củ dứa, rau dừa, sài đất mỗi thứ 20g Nếu là rau má tươi có thể giã nhuyễn lấy nước uống, nếu khô sắc uống ngày 2 lần

Chữa chảy máu chân răng, chảy máu cam: Rau má 30g, cỏ nhọ nồi, trắc bá diệp

mỗi vị 15g sao rồi sắc lấy nước uống

Thống kinh, đau lưng, đau bụng, ăn kém, uể oải: Rau má 30g, ích mẫu 8g,

hương nhu 12g, hậu phác 16g Đổ 600ml nước, sắc còn 200ml, chia 2 lần uống trong ngày

Thuốc lợi sữa: Rau má tươi hay luộc ăn cả cái và nước

Ngộ độc lá ngón, say sắn: Rau má 50 -100g giã nát, hòa với nước chè đặc, thêm

đường thật ngọt, uống một lần (kinh nghiệm người Thái ở Tây Bắc) Hoặc lấy cả cây rau

má tươi rửa sạch, giã nát, hòa với nước ấm để uống

Ngộ độc nấm: Lấy 400 g rau má rửa sạch, giã nát, vắt lấy nước cốt, hòa với 200g

đường phèn để uống

Đơn thuốc có rau má phổ biến vào năm 1950 ở miền Đông Nam Bộ gồm: Rau

má, rễ cỏ tranh, cỏ mần trầu, cỏ nhọ nồi, cam thảo nam, ké đầu ngựa mỗi thứ 8g, lá muồng trâu, củ sả, vỏ quýt mỗi thứ 4g, gừng tươi 2g Tất cả thái nhỏ, phơi khô, sắc uống hai lần trong ngày Thuốc điều hòa cơ thể với tác dụng chính là nhuận gan, nhuận tiểu, nhuận tràng, nhuận huyết, giải độc và kích thích tiêu hóa

Hiện nay người ta chế rau má dưới dạng:

Viên nén 0,01g rau má chữa chứng giãn tĩnh mạch, chứng nặng chân do máu tĩnh mạch chảy chậm về tim Ngày uống 3 – 6 viên vào bữa cơm

Thuốc tiêm 1ml chứa 0,02g cao rau má Cách 1 ngày tiêm bắp một ống phối hợp bôi thuốc mỡ (1% cao rau má) hoặc dạng bột chứa 2% rau má để chữa các vết bỏng, vết thương do chấn thương hoặc vết phẫu thuật, các tổn thương da và niêm mạc (mũi, họng)

Tại Việt Nam, tinh rau má tươi đã được Viện Công nghiệp Thực phẩm sản xuất thành công

Tác dụng phụ có thể có khi dùng rau má

Trong một số trường hợp, rau má làm tăng lượng Cholesterol và lượng đường trong máu, vì vậy những người có Cholesterol cao và bệnh tiểu đường nên tránh lạm dụng sử dụng rau má quá nhiều

Loại rau này cũng có thể dẫn đến sẩy thai nếu sử dụng trong thời kỳ mang thai Do vậy, phụ nữ mang thai và đang cho con bú cũng nên tránh dùng loại rau này

Rau má có thể tương tác với các thuốc gây buồn ngủ và thuốc chống co giật, Barbiturat, Benzodiazepin, thuốc mất ngủ, và các thuốc chống trầm cảm Nó cũng có thể làm giảm hiệu quả của Insulin và thuốc tiểu đường uống khác, cũng như các thuốc hạ Cholesterol

Rau má cũng có thể có một tác dụng làm giảm tác dụng an thần khi dùng với các loại thuốc cảm lạnh và ho, hoặc khi uống rượu

1.5 Một số sản phẩm rau má trên thị trường

CHƯƠNG II: CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Bộ chiết soxhlet, máy đo quang UV-VIS, thiết bị cô quay chân không

Tủ sấy, lò nung, cân phân tích

Cốc thuỷ tinh, bình tam giác, bếp điện, bếp cách thuỷ, cốc sứ, các loại pipet, bình định mức, bình hút ẩm, giấy lọc…

2.1.3 Hóa chất

Ethanol, methanol, nước cất, ethylacetat, HNO3 loãng…

2.2 Quy trình nghiên cứu

Thuyết minh quy trình

Rau má sau khi được xử lý thì lấy 1 phần để xác định độ ẩm, hàm lượng hữu cơ,

vô cơ

Sấy rau má tươi trong tủ sấy ở 500C trong ít nhất 12h rồi cắt nhỏ

Chọn dung môi chiết bằng phương pháp ngâm chiết trong 5 ngày, các điều kiện như nhau với các mẫu ngâm dung môi khác nhau Lọc lấy dịch chiết, pha loãng rồi đo

UV – VIS để lựa chọn dung môi chiết

Khảo sát thời gian chiết tối ưu bằng phương pháp chiết soxlet với dung môi đã chọn thu dịch chiết rồi đo UV – VIS

Tiến hành quy trình chiết rau má với các điều kiện đã khảo sát được, thu dịch chiết Sau đó dịch chiết được cô quay chân không và để bay hơi tự nhiên rồi định danh bằng phương pháp đo GC – MS

má

Chiết soxhlet Thời gian:

2h 4h 6h 8h

Dịch chiết

Đo UV - VIS Kết quả UV – VIS

chọn thời gian chiết

Ngâm chiết Dung môi:

ethanol 700ethanol 800Ethanol 900ethanol tuyệt đối

Dịch chiết

Đo UV - VIS Kết quả UV – VIS

chọn nồng độ cồn

Ngâm chiết Dung môi:

ethylacetate methanol ethanol

Dịch chiết

Đo UV - VIS Kết quả UV – VIS

chọn dung môi

Chiết soxhlet Dịch

Dung môi:

ethanol tuyệt đối Thời gian: 6h

chân không