Nghiên cứu chưng tách và xác định hoạt tính sinh học của tinh dầu

TÁC GIẢ: Phạm Thị Quỳnh Dao TÓM TẮT LUÂN VĂN Từ xưa, nghệ sử dụng thuốc trị bệnh Các tính hoạt chất có nghệ tạo nên Một hoạt chất tinh dầu Đe hiểu rõ thêm tính tinh dầu nghệ, chủng xác định hoạt tính sinh học số chủng vi nấm vi khuẩn gây bệnh (nấm men Candỉda albỉcans ATCC 2310; vi khuẩn Staphylococcus aureus, Streptococcus ýeacalis, Escherìchỉa coli, Pseudomonas aerugỉonsa; vỉ nấm da Mỉcrosporum gypseum, Trỉchophyton mentagrophytes ) Tinh dầu nghệ thu lấy từ hai qui trình chưng tách : tách từ bột nghệ (qui trìnhl) oleoresin (qui trình 2) Sau đó, hai tinh dầu đem xác định thành phàn hóa học thông số hóa lý Kết cho thấy, tinh dầu nghệ kháng yếu vi nấm men (Candida albỉcans ) hai vi khuẩn gram dương Staphylococcus aureus, Streptococcusỷeacalis ); kháng mạnh hai vi nấm da Nồng độ MIC hai tinh dầu hai vi nấm da là: qui trinh (^1IC Ịmcỉl] agro p h ỵ s ^11^ M gỵ p se um 1.25pl/ml); qui trinh (^4ICy mentagrophys iM^K^M.gypseum — 0.30 Ịll/ml) Bên cạnh đó, tiến hành khảo sát điều kiện ảnh hưởng tới qui trình chưng tách: thời gian thu hái nguyên liệu, áp suất hơi, thời gian ngâm bột trước chưng, nồng độ cồn EtOH Kết thu là: bột nghệ nên thu hoạch vào cuối mùa cho hàm lượng tinh dầu cao Bột nên ngâm trước 3h chưng atm cho thời gian chưng tách ngắn hàm lượng tinh dầu cao Nồng độ cồn EtOH tốt cho qui trình 98% ABSTRACT The components of turmeric (Curcuma longa L.) is so useful for health One of them is turmeric oil, this component have been used like a traditioinal medicine.We studied the antifungi and antibacteria of turmeric oil and the others in one yeast ( C albicans ), two dermatophytes, and four bacteria The result showed that all isolates of dermatophytes could be inhibited by turmeric oil at serm 1.25 pi - 0.3 pi The others component can’t inhibit these fungi and bacteria Besides, we studied the elements effect to process that produce turmeric oil Turmeric oil was produced from two processes Steam distillation from turmeric powder and steam distillation from oleoresin.Those element were: time of harvesting, pressure of distillation vessel, time of soaking turmeric powder and concentration of EtOH in extracting oleoresin.lbe result was: turmeric should be harvested at the last of crop; turmeric should be soaked before 3h and pressure that produced turmeric best was 4atm Concentration of EtOH was 98% to extract oleoresin best MỤC LỤC MUCLUC i DANH MUCHÌNHVẼ iii DANH MUC BẢNG BIỂU iv DANH MUC CÁC TỪ VIẾT TÂT V PHẢN I: TỒNG QUAN I1 Giới thiêu chung nghê vi nấra vi khuẩn khảo sát: 1.1.1 Nghê Curcuma longa L : 1.1.2 Mỏt số hoat tính sinh hoc hoat chất: 1.1.3 Vi nấm, vỉ khuẩn khảo sát: .2 I.2.Các công trình nước hoat tinh sinh hoc nghê Cưrcuma longaL.: PHẢN n : GIẢI OUYÉT VẮN ĐẺ .5 lĩ Nghiên cứu trình chưng tách xác đinh hoat tính sinh hoc tinh dầu nghê Curcuma ton ga L n.1.1 Mục đích : n.1.2 Các bước tiến hành : n.2.Phương pháp nghiên cửu : n.2.1 Qui ừình thu lấv tinh dầu hoat chất khác : H2.2.Phưcmg pháp xác đinh hoạt tính sinh học : n.3.Két bàn luân : .11 n.3.1.Kháo sát chọn nguyên liệu: .11 n.3.2.Kết khảo sát thông số ảnh hưởng lên trình tách tinh dầu nghê: 13 n.3.2.1.2 Két kháo sát ảnh hưởng thài gian ngậm bột trước chưng: 15 n.3.2.2 Chưng tách tinh dầu nghê từ oleoresin: 16 n.3.3 Kẻt khảo sát hai qui trình : 18 n.3.4 Kẻt khảo sát hoat tính sinh hoc: 21 n.3.4.1 Kết khảo sát đinh tính 22 PHẢN ni: KẾT LUÂN VẢ ĐẼ NGHI 28 m.l.Két luân : 28 m.2.Đẻ nghi: 28 PHẢN IV: TẢI LIÊU THAM KHẢO 30 PHULUC DANH MUC HINH VE Hình 2.1 : Mô hình kết thử nghiệm tính kháng nấm kháng khuẩn Hình 2.2: Đồ thị biểu diễn thời gian chưng cất Hình2.3: Đồ thị biểu diễn thời gian chưng cất tinh dầu hàm lượng tinh dầu theo thời gian ngâm Hình 2.4.Đồ thị biểu diễn hàm lượng hoạt chất thu theo nồng độ EtOH Hình 2.5 Đồ thị kết khảo sát định lượng hai vi nấm da DANH MUC BẢNG BIÈU • Bảng 2.1: Kết đo độ ẩm Bảng 2.2: Két hàm lượng curcuminoid bột nghệ theo phưomg pháp Soxhlet Bảng 2.3: Két hàm lượng tinh dầu Bảng 2.4: Két hàm lượng tinh dầu thời gian chưng tách khảo sát áp hoi Bảng 2.5: Két hàm lượng tinh dầu thời gian chưng tách Bảng 2.6: Kết hàm lượng hoạt chất từ nghệ Bảng 2.7: Kết hàm lượng hoạt chất thu từ hai qui trình Bảng 2.8: Kết khảo sát sơ hai mẫu tinh dầu Bảng 2.9: Két thảnh phần hóa họccủa tinh dầu nghệ Bảng 2.10: Kết khảosát định tính vi nấmc albỉcans Bảng 2.11: Kết khảosát định tính vi nấmM.gypseum Bảng 2.12: Kết khảosát định tính vi nấmT.mentagrophỵtes Bảng 2.13: Kết khảo sát định tính vi khuẩn S.aureus Bảng 2.14: Kết khảo sát định tính vi khuẩn S.ýeacalis Bảng 2.15: Kết khảo sát định tính vi khuẩn E.coli Bảng 2.16: Kết khảo sát định tính vi khuẩn p.aerugỉonsa Bảng 2.17: Kết khảosát địnhlượng hai vi nấm da BN1 Bảng 2.18: Kết khảosát địnhlượng hai vi nấm da BN2 Bảng 2.19: Kết khảosát địnhlượng hai vi nấm da nghệtươi Bảng 2.20: Kết khảosát địnhlượng hai vi nấm da ketoconazol DANH MUC CÁC TỪ VIẾT TẮT c albicans : Candida albicans M.gypseum T.mentagrophytes : Mỉcrosporum gypseum : Trichophyton mentagrophytes s.aureus : Staphylococcus aureus S.feacalis E.coli : Streptococcusfeacalis : Escherichia coli p.aerugionsa SDA : Pseudomonas aerugionsa : Sabouraud dextrose agar TSB : Tryptic Soy Broth CFU : Colony forming units IC % : Inhibitory concentration MIC : Minimum inhibitory concentration NT BN1 : nghệ tươi : bột nghệ thu hoạch vào thảng BN2 : bột nghệ thu hoạch vào cuối năm PHẦN I: TỎNG QUAN I.1 GỈỚÌ thiệu chung nghệ vi nấm, vi khuẩn khảo sát: LI Nghệ Curcuma longa L : TÍNH CHẤT CÁC THÁNH PHẢN TRONG NGHỆịC.LONGA L) TÌNH DẦU OLEORESIN CURCUMIN CÁC CHẤT KHÁC 1-5% màu vàng nhạt ,thơm Thành phẩn gồm có : a-phellandrene l%,cineole l%,zingiberene 25%,sabinene 0.6%,sesquiterpines 53%.Trong hợp chất thường : artumeron(6.4%),tumeron (49%),ar- curcume (15%) Oleoresine bao gồm chất tạo màu hương thơm , không chứa thành phần cellulose thân rễ Oleoreisine chứa curcumin (30%-40%), lượng dầu dễ bay (15%20%)và lượng dầu cố định (20%-30%) Các chất màu vàng gọi chung curcumin ■ Năm 1953-Srinivasan K.R (J.Pharm.Pharmacol.l953,5,448-457) chứng minh sắc kí cột silic hỗn hợp : -Curcumin thức ( gọi curcumin I) chiếm 60% dixeton -Curcumin n (Demethoxy curcumin) -Curcumin m (Bis-demethoxy curcumin) chiếm 14% Nếu dùng sắc kí giáy thấy chất curcumin khác với lượng nhỏ Ngoài tinh bột, canxi oxalat, chất béo Theo RR.Paris H.Moyse (1967,11,78) củ nghệ chứa 8-10% H20 ,6-8% chất vô cơ,4050% tinh bột I.1.2 Một số hoạt tính sinh học hoạt chất : CÁC HOẠT CHÃT Bột nghệ Dịch chiêt ethanol HOẠT TĨNH SINH HỌC Hàn gắn vết thương Chỏng viêm nhiễm , chông u bướu,tiêu diệt động vật đơn bào Chống lại viêm nhiễm Chống lại vi nấm Chống lại vi nấm Chống lại vi khuẩn Chống lại nọc độc Chống viêm nhiễm, chống vi khuẩn Chông lại oxi hóa Chống lại oxi hóa Tiêu diệt động vật đơn bào Chống lại vi khuân, chống lại vi nấm , động vật đơn bào Chống lại viêm nhiễm,tiêu diệt Dịch chiết ether petroleum Dịch chiểt alcol Dịch chiết chcloroform Dịch chiết ether thô Ar-tumerone Sodium curcuminate Demethoxylcurcumin Bisdemethoxylcurcumin Methylcurcumin Dâu dễ bay Curcumin 1.1.3.Vi nấm, vi khuẩn khảo sát: [3] CÁC LỌAI VI NẢM,VI KHUÂN KHẢO Chống u bướu ,chống lại vi khuẩn,chống lại đông tụ Chống lại hình thành ung thư,chống virut, chống lại oxi hóa TÍNH CHẤT SÁT Nấm men Candida albicans Vi nấm Microsporum gypseum Candida albicans sống cách bình thường ruột người nhiều loài thú (nội hoại sinh) gây bệnh ;Viêm âm đạo, âm hộ,viêm ruột,viêm thực quản,viêm hậu môn quanh hậu môn,bệnh da quan phụ cận Thường sồng đât,và lây bệnh sang người.Các bệnh thường M.gypseum gây :nấm đầu mảng xám ,bệnh da nhẵn Nấm da Trichophyton mentagrop hytes Thường sống da,tóc ,móng người Các bệnh thường T.mentagrophytes gây :Nấm đầu mưng mủ,nấm móng ,nấm bẹn,nấm má ,chân Staphylococcus albus Gram dưong Streptococcus feacalis vận động viên S.aureus cầu khuẩn gram dương,thuộc loài hiếu-yếm khí tùy ý S.aureus thường ký sinh mũi,họng khoảng 40-50% người có mang.Một số bệnh gây ra: nhiễm khuẩn ngòai da,nhi em khuẩn huyết,viêm da,viêm tai, eacalỉs thuộc nhóm Streptococcỉ(liên cầu khuẩn ) cầu khuẩn xếp thành chuỗi,uốn khúc dài ngắn khác Streptococcus vi khuẩn hiếu khí hay kỵ khí tùy nhiệm,ngoài có số kỵ khí tuyệt đối.5 feacalis thuộc loại vi khuẩn thường trú ruột gây nhiễm khuẩn đường tiểu,tim mạch viêm màng não Escherichia coli Vi khuẩn Pseudomonas aerugionsa Gram âm E.coli thuộc nhóm vi khuấn đường ruột Enterobacteraceae,chúng có nhiều tự nhiên,trong đường ruột người gia súc E.coli có dạng trực hay cầu trực gram âm.E.coli gây dung huyết lên men đường,gluc s e ,lac to s e ,galac to s e ,lên men không sacharose,không lên men dextrin,glycogen p.aerugionsa aerugionsa thuộc giống Pseudomonas trực khuẩn gram âm,hiếu khí tuyệt đối,có thể tiết sắc tố p.aerugỉonsas vi khuẩn gây bệnh cho người.Vi khuẩn thường sống thiên nhiên khắp giới,kể bệnh viện.Môi trường ẩm ướt quan trọng vi khuẩn Các loại bệnh gây :nhiễm khuẩn ngòai da,viêm tai ngoài,viêm xoang,viêm mắt,viêm đường ruột,viêm màng não,viêm nội tâm mạc,viêm phổi,viêm đường tiểu,nhiễm khuẩn huyết 1.2.Các công trình nước hoạt tinh sinh học nghệ Curcuma longa L.: 17 Từ kết thu được, nhận thấy thời gian ngâm lâu lượng tinh dầu nhiều thời gian chưng giảm dần Điều ngâm bột nghệ, tế bào chứa tinh dầu cằng phồng lên chứa đầy nước giúp cho tượng hòa tan thẩm thấu tinh dầu diễn dễ bột khô Và hàm lượng nước té bào định nên khảo sát tỉ lệ BN/H20 tỉ lệ tối đa 1/4 *Kết luận : Chọn thời gian ngâm 3h cho trình khảo sát II.3.2.2 Chưng tách tinh dầu nghệ từ oleoresỉn: *Điều kiện khảo s t : Điều kiện chiết: Tỉ lệ EtOH/Bột : 1/7 (cho lần chiết) (°C) : 40-60 t chiết T A chiềt : 3h*2 lần (h) Khuấy liên tục trình chiết Điều kiện chưng tách: Phương pháp : Chưng lôi nước có hồi lưu VoleoresinAVdich cỊjj|t 1/5 Thời gian chưng tách (phút) : thời gian tách hết tinh dầu ^đun nước (V) Áp : 180 V (atm) : Bảng 2.6 Ket hàm lượng hoạt chất từ nghệ [phụ lục 6] V/lOOgNLK CKOH (%V) Curcuminoỉd/100 Nhựa/100 (ml) gNLK gNLK 70 3.47 1.33 5.56 83 3.89 7.46 98 4.17 2.20 2.38 11.53 18 Hình 2.4.ĐỒ thị biểu diễn hàm lượng hoạt chất thu theo nồng độ EtOH Kết từ đồ thị 2.4 bảng 2.5 cho thấy: nồng độ ethanol hệ dung môi giảm dần từ 98% đến 70% hàm lượng tinh dầu giảm dần từ 4.17 ml/100 gNLK đến 3.47 ml/100 g NLK Trong tinh dầu nghệ ,các thành phần monoterpen hidrocacbon ( p- cymene, ) thường tan ethanol loãng sesquiterpen hidrocacbon (curcumene, ß-bisabolene ) không tan, hợp chất chứa oxigen lại tan dễ dàng Do vậy, nồng độ ethanol loãng số cấu phần hirocacbon không tan vào dung môi nhiều Và làm cho hàm lượng tinh dầu giảm theo Khi nồng độ ethanol hệ dung môi thấp (hàm lượng nước hệ cao) độ phân cực dung môi tăng làm cho khả hòa tan curcuminoid giảm curcuminoid hợp chất phân cực yếu, thành phần có độ phân cực cao bị hòa tan theo Vì thế, hàm lượng curcuminoid giảm dần Qua số liệu trên, nhận thấy nồng độ cồn 98% nồng độ tốt để chiết tách tinh dầu *Kết luận : Với nguyên liệu bột nghệ khô, điều kiện chưng tách tốt là: Thời gian ngâm bột (h) Tỉ lệ bột/nước (g/ml) : 1/4 : 3h 19 Thế đun nước (V) Áp (atm) : atm : 180 V Với điều kiện chiết tách: Nồng độ cồn chiết tách (%) Tỉ lệ bột/EtOH (g/ml) : 1/7 t°chiết (°C) : 40-60 :98% Khuấy liên tục trình chiết II.3.3 Kết khảo sát hai quỉ trình : II.3.3.1 Kết khảo sát hàm lượng hoạt chất thu từ quỉ trình 2: Bảng 2.7.Kết hàm lượng hoạt chất thu từ hai quỉ trình Ivà [phụ lục 7] Thống sổ Từ bột nghệ Từ Oleoresin TOl(ml) OLEl(g) CƯRl(g) T02(ml) OLE2(g) OLE3(g ) TR(g CUR2(g) ) Lưọug (g,ml)/100 5.10 12.79 2.38 4.17 11.40 8.25 11.53 2.38 Cam đỏ Nâu Vàng sậm đen cam gNLK Vàng Độ cảm quan nhạt^nùi TO đặc Vàng Cam đỏ sậm Vàng cam trưng nhạt^nùi TO đặc Cam đỏ sậm trưng TO : tinh dầu nghệ, TR: nhựa OIE : oleoresin , CUR: curcuminoid Từ bảng kết 2.7, hàm lượng curcuminoid oleoresin không khác nhiều Còn lượng tinh dầu thu theo qui trình llà 5.1ml/100 gNLK, qui trình hai 4.17 ml/100 gNLK Như vậy, qui trình cho hàm lượng tinh dầu nhiều Điều thời gian chiết tách 3h chưa đủ để tất thành phần tinh dầu nghệ hòa tan vào dung môi Do thời gian nghiên cứu có hạn, đề tài chứng không khảo sát thời gian chiết tách tối ưu Vì vậy, đề nghị nghiên cứu sau nên khảo sát thời gian chiết tách 20 n.3.3.2 Kết thành phần, hàm lượng tính chất hóa lý tinh dầu Bảng 2.8.Ket khảo sát sơ hai mẫu tỉnh dầu Mẩu TOI Tài liệu [10],[5] Cảm quan Mùi Vị Thơm cay Khét hắc Thơm cay Khét hắc Màu Vàng cam đậm Vàng cam Chỉ số khúc xạ nD25 0.9418 1.5135 Tính tan 1.7 ml cồn 90° 0,9211- 0,9430 ( 20°C25°C) 1,4650- 1,5130 ( 20°c30°c ) Thông sổ hỏa lý Tỷ trọng d2525 Góc quay cực a (-)13°75 (-) 14 - (-) 24,76° ( 20°c 30°c ) Mẩu T02 Tài liệu [10],[5] Cảm quan Mùi Vị Thơm cay Khét hắc Thơm cay Khét hắc Màu Vàng cam đậm Vàng cam 0.9308 1.5105 0,9211- 0,9430 (20°C25°C) 1,4650- 1,5130 (20°c- 30°c ) Thông số hóa lý Tỷ trọng d2525 Chỉ số khúc xạ nD25 Tính tan 1.3 ml cồn 90° Góc quay cực a25 (-)14°11 (-) 14 - (-) 24,76° ( 20°c 30°c) Qua trình khảo sát sơ bộ, chửng đến kết luận bột nghệ mua vào cuối năm (BN2) bột nghệ tốt Do đó, khảo sát thành phần, hàm lượng tính chất hóa lý tinh dầu từ loại bột TOI : mẫu tinh dầu thu theo qui trình T02 : mẫu tinh dầu thu theo qui trình 21 Theo số liệu bảng 2.6, số hóa lý hai mẫu tinh dầu không khác nhiều nằm vùng giá trị mà tài liệu đưa Tinh dầu nghệ Curcuma longa L Bình Dương tách có màu vàng nhạt, có mùi thơm hăng, cay đặc trưng, dễ tan cồn 90% Vậy qui trình không làm thay đổi tính chất tinh dầu nghệ so với qui trình Đe biết rõ hơn, chứng tiến hành xác định thành phàn hóa học hai mẫu tinh dầu Bảng 2.9 Ket thành phần tinh dầu nghệ (xem phụ lục 8) Hàm lượng (%) Phưong Hop chất Mầu TOI Mẫu T02 pháp Ar-tumerone 43.68 44.67 Tumerone 15.18 14.46 Curlone 20.9 21.7 Curcumne 2.45 2.7 Zingiberene 1.39 Beta-Sequiphellandrene 1.18 2.47 Cấu phần không định danh 14.14 12.88 GC-MS 2.8 Nhìn vào kết trên, ta thấy cấu phần quan trọng tinh dầu ar- tumerone , tumerone, curlone TOI 43.68%, 15.18%, 20.9% TO2 44.67%, 14.46% 21.7% Trong đó, thành phần khác curcumen, zingiberene chiếm từ 1-2% Điều chứng tỏ, thành phần tinh dầu nghệ Bình Dương ar-tumerone, tumerone, curlone Đe nghiên cứu rõ ảnh hưởng thành phần lên hoạt tính sinh học tinh dầu nghệ Chứng định khảo sát hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn hai tinh dầu TOI, T02 Đồng thời, để nắm cách tổng quát hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn củ nghệ, chủng khảo sát hoạt tính với hoạt chất lại có nghệ n.3.4 Kết khảo sát hoạt tính sinh học: 22 n.3.4.1 Kết khảo sát định tính: * Điều kiện khảo sát : Mẩu thử hoạt tính : theo bảng 2.7 Phương pháp sử dụng : phương pháp khuyếch tán đĩa giấy Mối đĩa giấy chứa lượt 2.5 pl, 5pl, lOpl tinh dầu, hoạt chất khác lOpl Két định tính sơ vòng kháng nấm hoạt chất trình bày bảng (+): chất thử kháng vi nấm, vi khuẩn (-) : chất thử tính kháng nấm, kháng khuẩn * Vi nẩm Candida albỉcans ATCC 10231: Môi trường: SAD, nhiệt độ thời gian ủ : 37°c 48 * Khảo sát vi khuẩn : Môi trường: TSB Nhiệt độ thời gian ủ: 37°c 12 23 Bảng 2.10.Ket khảo sát định tỉnh vỉ nẩm c albicans [phụ lục 9,10] Tên vỉ sinh Nồng độ vật c albicans S.aureus S.feacalis E.COÜ Từ bột nghệ (nD TOI OLE1 Từ Oleoresin CUR1 T02 2.5 - - - - - 10 2.5 + - - + + 10 2.5 + + - - + + 10 2.5 + - - - - 10 p.aerugionsa 2.5 - - + - - + - - - - - - OLE2 OLE3 TR CUR2 - - - - - - - - - - - - - - - - 10 Từ kết trên, ta thấy nồng độ 2.5 |il tinh dầu nghệ kháng vi nấm c albicans vi khuẩn Còn nồng độ Ịjl tinh dầu có kháng c albicans vi khuẩn S.aureus, S.ýeacalis mức độ yếu Tới nồng độ 10 |il tinh dầu nghệ kháng vi nấm c albỉcans Các hoạt chất khác không kháng Kết có sai biệt với số công trình nghiên cứu giới [10] Tuy vậy, đem so với số công trình nghiên cứu tinh dầu nghệ vi nấm Candỉda albỉcans Việt Nam [8], chứng nhận thấy kết lại trùng khớp Điều do, nguồn nghệ sử 24 dụng nghiên cứu khác làm cho hàm lượng cấu phàn khác dẫn đến mức độ kháng khác Bên cạnh đó, điều kiện phương pháp nghiên cứu không giống nên có sai biệt kết Thường nghiên cứu, curcumin làm tinh trước đem khảo sát Nhưng đề tài này, curcuminoid đem khảo sát curcuminoid thô lẫn tạp chất khác Điều góp phần dẫn đến sai biệt kết khảo sát Đối với hai vi khuẩn gram âm E.colỉ p.aerugỉonsa, mẫu tinh dầu hoạt chất tính kháng tất nồng độ Điều phù hợp với tài liệu [9], người ta nhận thấy vi khuẩn gram dương nhạy với tinh dầu so với vi khuẩn gram âm Do đó, với hai vi khuẩn gram dương s.aureus S.feacalis tinh dầu tính kháng yếu nồng độ 10|il với hai vi khuẩn gram âm tính kháng *Khảo sát hai vi nấm da Mỉcrosporum gypseum Trichophyton mentagrophytes Mau thử hoạt tính : theo bảng 2.7 Phương pháp sử dụng : phương pháp khuyếch tán đĩa giấy Môi trường: SAD, nhiệt độ thời gian ủ: nhiệt độ phòng, ngày Hai vi nấm da đánh giá thông qua nồng độ ức ché IC% Nồng độ ức chế IC % phần trăm vi nấm bị ức chế hoạt chất Bảng 2.11.Kết khảo sát định tỉnh vỉ nấm [phụ lục 11,12] Tên vi sinh vật Nồng độ (pl) M.gypseum T.mentagrophytes Từ bột nghệ TOI OLE1 CUR1 Từ Oleoresin T02 2.5 50.90% 50.90% 68.00% 68.00% 10 2.5 72.72% 31.11% 40.00% 47.70% 50.77% 10 62.22% - - - - 74.55% 63.33% OLE2 OLE3 TR CUR2 - - - - - - - - 25 Theo bảng 2.11,tinh dầu nghệ kháng vi nấm M.gypseum, T.mentagrophytes mạnh.Các hoạt chất khác không kháng vi nấm da, điều phù hợp với tài liệu [18] Trong tài liệu này, curcuminoid khảo sát vi nấm da đồng thời với tinh dầu kết cho thấy curcuminoid không tác dụng vi nấm da Nhựa oleoresin tác dụng kháng nấm Tuy nhiên, mẫu oleoresin phát triển vi nấm không mạnh, mẫu chứa tinh dầu * Nhận xét chung: Dựa vào kết khảo sát ta thấy, nghệ kháng vi nấm sau: Microsporum gypseum, Trichophyton mentagrophytes Còn với vi nấm Candida albicans loại vi khuẩn lại, nghệ tác dụng kháng kháng yếu Chỉ có mẫu tinh dầu kháng được, mẫu lại tác dụng kháng Ở nồng độ 2.5 Ịil nhận thấy hầu hết mấu thử tinh dầu tác dụng vi nấm vi khuẩn, điều hàm lượng tinh dầu Với nồng độ 5pl, mấu thử tinh dầu kiềm hãm hai vi nấm da mạnh vi nấm vi khuẩn lại Với hàm lượng 10 pl, có khả kháng vi nấm Candida albicans vi khuẩn Staphylococcus aerus Streptococcus feacalis yếu Với hai vi nấm da nồng độ ức chế tăng lên với độ tăng hàm lượng tinh dầu Từ đây, rút kết luận, nghệ có khả kháng vi nấm da, khả kháng tinh dầu nghệ gây II.3.4.2 Ket qủa khảo sát định lượng: Từ phàn kết định tính, nhận thấy tinh dầu nghệ kháng vi khuẩn vi nấm c albicans yếu hàm lượng pl,10 Ịil Trong đó, mấu tinh dầu lại kháng hai vi nấm da mạnh hàm lượng pl Do đó, định tiến hành định lượng mấu tinh dầu lên hai vi nấm da với nồng độ |il Chất pha loãng pha loãng thành dãy nồng độ khảo sát từ - 0.08pl/ml (theo phương pháp pha loãng Vi) Đồng thời, đối chứng với ketoconazol - dược phẩm dùng để trị nấm Phương pháp : phương pháp pha loãng 26 Môi trường : SDB (0.2% Agar) Nguyên liệu khảo sát: T01,T02, Ketoconazol Vi nấm thử nghiệm : Mỉcrosporum gypseum, Trỉchophyton mentagrophytes Nhiệt độ thời gian ủ: nhiệt độ phòng ngày Đọc két quả: nhìn mắt thường nồng độ ức ché vi nấm phát triển môi trường MIC càn tìm Bảng 2.12.Kết khảo sát định lượng hai vỉ nấm da [phụ lục 13,14] Tên vi sinh vật Nồng độ MIC TOI T02 Ketoconazol (pl/ml) (pl/ml) (pg/ml) M.gypseum 1.25 0.30 0.50 7Ymentagrophytes 1.25 0.30 1.00 Hình 2.5.ĐỒ thị kết khảo sát định lượng hai vi nấm da 27 *Nhận xét : MIC tinh dầu TOI lên hai vi nấm M.gypseum T.mentagrophytes giống 1.25 (jl Tương tự vậy, MIC tinh dầu T02 lên hai vi nấm M.gypseum T.mentagrophytes 0.30 |jl MIC Ketoconazol lên M.gypseum T.mentagrophytes 0.5 |ag/ml, |ag/ml Theo mục 3.3.2, thành phần hóa học chủ yếu hai tinh dầu thu từ hai qui trình chủ yếu ar-tumerone, turmerone curlone Như vậy, hoạt tính kháng nấm da tinh dầu nghệ thành phàn gây Bên cạnh đó, tổng hàm lượng cấu phần hai tinh dầu chênh khoảng 1%, nên việc gây khác nồng độ MIC qui trình hiệp lực thành phàn với cấu phàn khác chứa tinh dầu Theo nghiên cứu Amphawan Apisariyakul cộng [9], hàm lượng MIC tinh dầu nghệ Thái Lan hai vi nấm M.gypseum T.mentagrophytes 456.9 pg/ml 919.2 pg/ml, tỷ trọng tinh dầu nghệ gần nên khối lượng riêng tinh dầu nghệ gần khối lượng riêng nước Từ đó, ta thấy hàm lượng MIC nghiên cứu cao Cũng theo tiến sĩ Nguyễn Đinh Nga cộng [8], nồng độ MIC tinh dầu nghệ Việt Nam M.gypseum T.mentagrophytes 3.17 pl/ml 6.34 pl/ml Trong đó, MIC tinh dầu nghệ Bình Dương lên hai vi nấm da cao 1.25 pl/ml Như tinh dầu nghệ từ củ nghệ vàng Bình Dương đáp ứng tốt hoạt tính sinh học MIC Ketoconazol lên vi nấm M.gypseum T.mentagrophytes 0.5pg/ml lpg/ml Dựa vào két MIC này, ta đối chứng với MIC tinh dầu nghệ từ tìm hàm lượng tinh dầu thích hợp để phối vào sản phẩm mỹ phẩm dược phẩm 28 PHẦN III: KÉT LUÂN VÀ ĐÊ NGHI ••• III 1.Kết luận : Từ kết thí nghiệm, ta thấy tinh dầu nghệ Curcuma longa L.Bình Duơng có hoạt tính kháng vi nấm da mạnh Thời gian thu hoạch nguyên liệu ảnh hưởng lớn tới hoạt tính sinh học tinh dầu Thời gian thu hoạch củ nghệ tốt vào cuối mùa Trong khoảng áp suất cho phép, chưng tách tinh dầu áp cao thời gian chưng tách nhanh Áp tối ưu cho trình chưng tách tinh dầu nghệ atm Đối với nguyên liệu dạng bột, việc ngâm bột trước lúc chưng giúp cho thời gian chưng tách ngắn hàm lượng tinh dầu nhiêu Bột nghệ nên ngâm trước 3h với tỉ lệ bột/nước (1/4) Nồng độ cồn tốt cho trình chiết bột nghệ 98% Qui trình thu lấy curcuminoid trước tận thu lượng tinh dầu dịch chiết mà thành phần tính chất không thay đối so với tinh dầu lấy trực tiếp từ nguyên liệu MIC tinh dầu T01,T02 lên hai vi nấm M.gypseum T.mentagrophytes :1.25 pl/ml 0.3 pl/ml Ketoconazol dược chất phối vào dược phẩm để trị bệnh nấm Dựa vào kết MIC Ketoconazol (MICMgypseum = 0.5 pg/ml ;MICT mentagrophytes = pg/ml), ta đối chứng với MIC tinh dầu nghệ từ tìm nồng độ tinh dầu thích hợp để phối vào sản phẩm mỹ phẩm dược phẩm m.2.Đề nghị : Qua kết định tính, nồng độ 10 pl tinh dầu nghệ Curcuma longa L.Bình Dương có tác dụng lên vi nấm Candida albicans hai vi khuẩn Staphylococcus aureus Streptococcus ýeacalis Điều chứng tỏ tinh dầu nghệ Curcuma longa L Bình Dương có khả kháng vi nấm vi khuẩn Tuy nhiên, thời gian nghiên cứu hạn chế, nên sâu nghiên cứu nồng độ MIC tinh dầu nghệ lên chủng vi nấm vi khuẩn Do vậy, chứng đề nghị tiếp tục khảo sát hoạt 29 tính sinh học tinh dầu nghệ Curcuma longa L Bình Dương lên vi nấm vi khuẩn Khi chưng tách tinh dầu nghệ từ dịch chiết sau kết tinh ,chúng nhận thấy hàm lượng tinh dầu có giảm so với lượng tinh dầu lấy trực tiếp từ nguyên liệu Điều chứng tỏ điều kiện chiết tách chưa tối ưu.Vì vậy, chứng đề nghị tiếp tục khảo sát điêu kiện ảnh hưởng tới trình chiết tách để thu hàm lượng tinh dầu tốt Dựa vào kết khảo sát định lượng,bước đầu đưa tinh dầu nghệ Curcuma longa L (Bình Dương) vào sản phẩm mỹ phẩm, dược phẩm thông qua việc nghiên cứu công thức phối chế để phối tinh dầu nghệ thí nghiệm lâm sàng để kiểm tra két 30 PHẦN IV: TÀI LIÊU THAM KHẢO Đỗ Tất Lợi (2002),Những thuốc vị thuốc Việt Nam,NXB Khoa học Kỹ thuật Trần Xuân Mai cộng ( 2005),Ký sinh trùng học,NXB Đà Nang Bộ môn Vi sinh ( 2004) ,Vi khuẩn học,khoa Dược,Đại học Y -Dược thành phố Hồ Chí Minh Viện dược liệu-trung tâm thông tin thư viện (2006),Bản tin dược liệu-số P.N.Ravindran,K.Mrmal (2006),Turmeric BaBu,K.Sivarama - the genus Curcuma,CRC Press Lê Ngọc Thạch (2003),Tinh dầu ,NXB Đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh G.K.Jayaprakasha,L.Jangan Mohan Rao and K.K.Sakariah (2005),Chemistry and biological activities of c.longa,Central Food Technological Research Institute Nguyễn Đinh Nga,Ngô Chí lầm;’ Sàng lọc dược liệu tinh dầu kháng nấm Y học IP.HỒ Chí Minh, tập 6, phụ số 1,2002 Apisariyakul A, Vanittanakom N, Buddhasukh D., Antifungal activity of turmeric oil extracted from Curcuma longa (Zingiberaceae), Journal of Ethnopharmacol 1995 Dec 15;49(3):163-9 10 p s Negi, G K Jayaprakasha, L Jagan Mohan Rao, and K K Sakariah* “Antibacterial Activity of Turmeric Oil: A Byproduct from Curcumin Manufacture”, J Agric Food Chem 1999, 47, 4297-4300 42 11 Neettiyath Kalathil Leela, *Aldo Tava, Pottachola Mohamad Shafi, “Chemical composition of essential oils of turmeric (Curcuma longa L.)”, Acta Pharm 52 (2002) 137141 12 Phan Tống Sơn, Văn Ngọc Hướng, Nguyễn Xuân Dũng, Lương Sĩ Bỉnh, thành phần hóa học tinh dầu nghệ Curcuma longa L Việt Nam, Tạp chí hóa học, 25, 18-21, 1987 ... nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu nghệ vàng số chủng vi nấm vi khuẩn.[10] G.K Jayaprakasha, L Jagan Mohan Rao* and K.K Sakariah nghiên cứu thành phàn hóa học hoạt tính sinh học nghệ vàng... tách xác định hoạt tính sinh học tỉnh dầu nghệ Curcuma longa L 11.1.1 Mục đích : Khảo sát trình chưng tách tinh dầu, tiến hành thu lấy hoạt chất từ nghệ xác định hoạt tính sinh học chúng lên số... hoạt tính sinh học số tinh dầu thiên nhiên có củ nghệ vàng số chủng vi nấm vi khuẩn gây bệnh nay[8] Các nghiên cứu đuợc công bố truớc tập trung nghiên cứu riêng lẻ tách curcumin, tách tinh dầu