Nghiên cứu thành phần hóa học, độc tính và tác dụng sinh học hỗ trợ điều trị viêm loét dạ dày, tá tràng của lá xăng xê (sanchezia nobilis hook f )

Vịtríphânloại,đặcđiểmthựcvậtvàphân bố chiSanchezia

VịtríphânloạichiSanchezia

Theo “Hệ thống phân loại về ngành Ngọc lan (Magnoliophyta)” của tác giảA.Takhtajan,Sanchezia nobilisHook.f có vị trí phân loại như sau [68]: GiớiThựcvật (Plantae), ngành Ngọc lan (Magnolipphyta), phân lớp Mộc lan(MagnoliidaeNovák ex Takht), bộ Hoa môi (Lamiales), họ Ô rô (Acanthaceae), chi(Sanchezia),loàiSanchezianobilisHook.f.

ThànhphầnloàivàphânbốcủachiSanchezia

ChiSancheziachủ yếu phân bố ở phía Tây Nam Mỹ Trung tâm của sự đadạng loài thuộc chi nằm ở Peru và Ecuador Một số ít loài phân bố ở phía bắc vàđôngcủaBắcMỹ,TrungMỹvàCaribe.N h ư n g ngàynaychiđượcdithựctrồ ngở nhiều nơi và được coi như cây bản địa ở một số nơi nhưViệt Nam, Cuba,Bangladesh… [220].C h iS a n c h e z i a đ ư ợ cm ô t ả l ầ n đ ầ u t i ê n b ở i R u i z v à P a v ó n vào năm

1794 với hai loài Đến năm 1964, chi nàyđược sửa đổi bởi Emery C.Leonard và Lyman B Smith, với 59 loài trong đó 26 loài được mô tả lần đầu tiên,đồngt h ờ i cô ng bốk h ó a phânl o ạ i cho5 9 l o à i nà y [ 215].Năm2015,E A T ri p p và D M Koenemann đã thống kê lại lịch sử phát triển của chiSancheziavà lậpdanh lục 55 loài [91]. Trên trang “Plants of the world online” [220] đến ngày 15tháng 10 năm 2022 thì chiSancheziađược liệt kê có 70 kết quả bao gồm có 1 tênchivà69t ê n l o à i , t ro n g đóc ó 4 4 l o à i đượcchấp nhận.T r o n g mộtcôngb ố m ới đây của Igor và Pedro [103] đã xác định thêm 11 tên đồng nghĩa, cho rằng chiSancheziacó 44 loài.Kết quả khóa phân loạitheo Igor và Pedrov à t r a n g “ P l a n t s of the world online” là hoàn toàn trùng nhau Trên trang “Plants of the worldonline”chothấySancheziaoblongacó11tênđồngnghĩa:S.hirsutaPers,Ancylogyne peruvianaNees,S bicolorLeonard & L.B.Sm,S. flavaLeonard,S.helophilaLeonard&L.B.Sm,S.macbrideiLeonard,S.megaliaLeonard

&L.B.Sm.,S nobilisHook.f.,S nobilisvar glaucophylla Lem,S. peruviana(Nees)Rusby,S.speciosaLeonard.Nhưvậy3tênloàiđượcnghiêncứuvàcôngbố củachilàS.nobilis,S.speciosavàS.oblongathìđượcxácđịnhlàđồng danh.

Ecuador,Vi ệt Nam,Bangl adesh Brazil,… a,b,c

Colombia, Bolivia,Ecua dor, Peru a,b,c

Peru,razil North,Col ombia, Ecuador a,b,c

(a: phân loại theo trang“Plants of the world online”, b: phân loại theo E.A Tripp và D M.Koenemann;c: phânloại theo “IgorvàPedro”)

Trong khi đó tại Việt Nam, chi này mới được phát hiện một loài là Xăng xê(SanchezianobilisHook.f.),loàinàycònđượcgọivớicáctênkhoahọclàSancheziaspeciosa,đượ c Phạm Hoàng Hộ mô tả và được liệt kê trong Danh lục các loài thựcvậtởViệtNam[5].TheoTrungtâmdữliệuthựcvậtViệtNam[221]cáctênkhoa học này do các nhà khoa học khác nhau mô tả cây và đặt tên khác nhau, nhưng đếnnayđãđượcxácđịnhđềulàcủa mộtloài.

CâyđượctrồngởnhiềutỉnhthànhtrongcảnướcnhưTuyênQuang,NamĐịnh,Thừa Thiên Huế Cây chủ yếu là được trồng làm cảnh Cây có nguồn gốc từ Peru,Ecuador nhưng trồng lâu năm đã gần như cây bản địa đã có tên trên bản đồ phân bốcủacâyởtrang“Plantsoftheworldonline”[220].

Đặcđiểmthựcvật

Sanchezialà một chi nhỏ của họ thực vật Acanthaceae (họ Ô rô) Ước tính cókhoảng20đến50loài[215].Cácthànhviêncủachinàylàcâybụi,hiếmkhicâynhỏhoặc cây thân thảo phân bố ở vùng đất thấp nhiệt đới Nam và Trung Mỹ ChiSancheziathường là cây bụi hay cây cỏ, rễ không có lông, hoa mọc đơn độc hoặchợp lại thành chùm, thường lớn, có màu vàng, cam, đỏ hoặc tím, mọc ở ngọn, có lábắc thường có màu, đài 5 thùy, tràng 5, dính nhau thành hình ống, nhị 4, nhị 2 lépnhị 2 thò ra, bao phấn 2 ô Quả nang, 6-8 hạt, hạt hình cầu [215] Chúng có nhữngcánh hoa lớn và nhiều màu sắc, và đôi khi thậm chí là những chiếc lá đầy màu sắc,mộtsốloàiđượctrồnglàmcâycảnhởkhắpvùngnhiệtđớivàtrongnhữngkhuvườnthựcvậtcủa nhữngvùngônđới.Vídụvềcácloàiđượcbiếtđếntrồnglàmcảnhnhư

S nobilis, S parvibracteatavàS speciosanhưng một số loài thì gần như đã tuyệtchủng nhưS lampratừ Ecuador.Sancheziađược đặt tên theo José Sanchez, mộtgiáosưthựcvậtthếkỷ19tạiCadiz,Tây BanNha[39].

Nguồn:www.nparks.gov.sg/florafaunaweb/flora/2/4/2418

1,5m,thânvàgânchínhcủalácómàulục,đỏhoặcvàng,gânbênmàutrắng.Láđơnmọcđốihìnhch ữthập,cuốnglángắn,hìnhtrụ,phiếnláhìnhmũimác,dài10-25cm,rộng3-

7cm,nhẵn,mépláhơilượnsóng,mặttrêncómàuxanh đậm, mặt dưới xanh nhạt, hệ gân lông chim, có 9 - 12 đôi gân bên Hoa mọcthành cụm, hoa bông gồm 3 bông nhỏ trở lên, hoa ở ngọn, cuống hoa ngắn Lá bắcmàu lục hay đỏ, hình trứng, đỉnh tù, nhẵn, ôm lấy cụm hoa Hoa lưỡng tính, màuxanh lục mờ, mùi nhạt đặc trưng Đài nhiều, hình vảy, dài 1,5 - 1,8 cm, rộng 3 - 5mm, tròn ở đỉnh Tràng hình ống tròn, màu vàng có sáp, cao 4 - 5 cm, rộng 7 - 8 cmởphíatrên,thuhẹpdầnxuốngdướiđến3mm,nhẵn,cácthùydài3- 4mm,tròn,cókhía, chỉ nhị dài, nhị 4 trong đó có 2 nhị phát triển dài 4 - 4,5 cm, có lông và 2 nhịtiêugiảm.Quảnangcó8hạt [2],[27].

Cả 3 loài đã có nghiên cứu được công bố về thành phân hóa học và tác dụngsinhhọc,nhưngchỉcóloàiSanchezianobilislàđượcmôtảtươngđốichitiếtvàđầyđủ.

 Lá:Vi phẫu gân lá lồi lên ở 2 mặt trên và dưới Biểu bì trên và biểu bì dướicấutạobởi1hàngtếbàođagiácxếpđềuđặnnhau.Môdàytrênvàmôdàydướicấutạo bởi nhiều lớp tế bào thành dày lên ở các góc Mô mềm cấu tạo bởi các tế bàothànhmỏng,gầntrònbêntrongcóchứacáctinhthểcanxioxalatvàcáchạttinhbột,rảiráccóc ácbómạchphụ.Libegỗxếpthànhhìnhvòngcunggồmlibeởphíangoàivàgỗởphíatrong.Mộts ốtếbàobiểubìthànhlôngchechở,lôngtiết[27].

Viphẫuphiếnlá:Gồmbiểubìtrênvàbiểubìdướicấutạobởi1hàngtếbàođagiácsắpxếpđều đặnnhau.Môgiậungaydướibiểubìtrêncấutạobởi2hàngtếbàohìnhchữnhậtsắpxếpđềuđặnnh au.Môkhuyếtcấutạobởicáctếbàohìnhgầntrònxếp lộnxộn[27].

Vi phẫu cuống lá hình chén, có các đặc điểm tương tự gân lá, tuy nhiên cóthêmlớpmôdàysátlớpbiểubì[27].

Biểu bì Mô dày Lông Hạt tinh bột Tinh thể Calci

Mô mềm Hạt tinh bột Libe

Tinh thể calci oxalat Gỗ

Thân non: Vi phẫu hình tròn Cấu tạo từ ngoài vào trong gồm: ngoài cùng làlớpbiểubìcấutạobởimộthàngtếbào,cólôngchechởđơnbào;tiếptheolàmôdàygồm 6-8 hàng tế bào xếp thành hình tròn khép kín; mô mềm gồm 5 - 7 lớp tế bào,bên trong có chứacó tinh thể calcioxalat hình kim và các hạt tinh bột đơn; libe gầnnhư hình tròn khép kín, libe ở ngoài, gỗ ở trong, thỉnh thoảng bị gián đoạn bởi mộtsốtếbàomômềm;mômềmruộtcấutạobởinhiềulớptếbào,cáctếbàothànhmỏng,to,hìnhđagiá cxếplộnvớinhau[27].

Thângià:Viphẫuhìnhvuông,cấutạotươngtựthânnon,ngoạitrừcóthêmlớpbần bênngoàicùng[27].

- Nghiêncứuvềhìnhtháihọccủahoa:Hoađượcsắpxếptheochùm,tạothànhmộtcụmho acóđầu nhọn,sựpháttriểnbắtđầu từdưới lêntrên.Nhữngbônghoalàlưỡngtính,khôngcuống,nhỏ,khôngđềuvàđốixứnghaibên.Hoacóm ùiđặctrưngthoang thoảng,vịđắngnhẹ,dàikhoảng2,5- 3,5cm[27].

- Lá bắc: có màu xanh lục, hình thuôn hoặc hình thuôn dài với đỉnh nhọn cóchiềudài1,2 -1,3cmvà chiềurộng0,25-0,5 cm[27].

- Đài hoa: có màu xanh lục, bao gồm năm đài xen kẽ (đa giác), có chiều dài1,3- 1,5cmvàđườngkính0,2- 0,4 cm,xếplớplênnhau[27].

- Trànghoa:cómàuvàngcamđượctạothànhtừnămcánhhoathốngnhất(giaotử), hình ống, có lông bên ngoài, hình thành năm thùy mỗi hai môi, một bên ngoàivà một bên trong Các cánh hoa có hình thuôn dài, với các đầu tròn và mép nguyên.Trànghoacó chiềudài2,5-3cm[27].

- Bộ nhị: bao gồm 4 nhị hoa trong chia 2 bên, có hình thuôn dài, bao phấn vàhai nhị lép Chỉ nhị được đặt bên ngoài ống tràng hoa và có chiều dài 1,3 - 1,5 cm,những sợi này có chiều dài rất ngắn 0,5 - 0,7 cm Bao phấn được gắn vào chỉ nhịgiống nhưlàhợp sinh.Bao phấn nởhướngtrong[27].

Thànhphần hóahọcchiSanchezia

CácnghiêncứuvềthànhphầnhóahọccủacácloàithuộcchiSancheziacònrấtkhiêmtốn,c hỉcómộtsốloàiđượcnghiêncứuvềthànhphầnhóahọc.Kếtquảnghiên cứusơbộcủaAbuS.R.vàcộngsựnăm2015chothấydịchchiếtethylacetattừláS.speciosathu hái ở Bangladesh có chứa các hợp chất thuộc nhóm alcaloid, glycosid,flavonoid,triterpenoid,carbohydrat,steroid,phenolic,saponinvàtannin[218].T rongmộtnghiêncứukháccủaNusratShaheenvàcộngsựchothấy,trongdịchchiếtvỏthânvà vỏ rễ củaS speciosathu hái ở Parkistan có alcaloid, glycosid, steroid, terpenoidvàtanninkhôngthấycóanthraquinon,flavonoid,saponin[155].Kếtquảđịnhtính củaOmondiSeline(2015),chothấyláS.speciosat r ồ n gởKenyacóchứacácnhómchấtanthraquinon vàsaponin[57].VàcôngbốgầnđâynhấtcủaProggavàcộngsự[161]cho thấy trong câyS. nobilistrồng ở Bangladesh có chứa phenolic, tanin, alcaloid,flavonoid,steroid,glycosid,gum,triterpenoid;khôngcósaponinvàxanthoprotein. ỞViệt Nam, theo nghiên cứu sơ bộ của Nguyễn Tiến Vững và cộng sự năm 2017 vớidịchchiếtláS.speciosatrồngởTuyênQuang[4],chothấycóglycosidtim,flavonoid,tannin, acid hữu cơ, sterol và caroten; không thấy có saponin, alcaloid, anthranoid,coumarin, acid amin và chất béo. Thành phầnhóa học của cây ở các công bố khácnhauchothấycósựkhácnhaucóthểdothờivụthuhái,thổnhưỡngvàkhíhậugiữacácvùngk hácnhau.

Năm 2017, Nusrat Shaheen và cộng sự [155] đã tách được một hợp chấtflavonoidtừdịchchiếtdichloromethanrễS.speciosalàquercetin3-O--D- glucopyranosid(1).Ngoàira,AhmedEvàcộngsựđãphânbahợpchấtflavonoidtừcao chiết methanol của hoaS nobilisgồm: apigenin-7-O-β-glucopyranosid(2),apigenin-7-O- gentiobiosid(3),apigenin-7-O-β-glucuronopyranosid(4)[213].

Hình1.5.Cáchợpchất flavonoidđượcphânlậptừ chi Sanchezia

Một nghiên cứu khác của Juliana Mourao Ravasi và cộng sự [107] bằng cáchsử dụng phương pháp sắc ký khối phổ và sắc ký lỏng hiệu hiệu năng cao từ các bộphậnkhácnhaucủaloàiS.oblongatrồngởBrazilthuđược36hợpchất,trongđócócácflavon oidsnhư:quercetin-7-O-arabinopyranosyl-3-O-glucopyranosid(5),kaempferol-7-O- arabinopyranosyl-3-O-glucopyranosid(6),kaempferol-7-O- glucopyranosid(7)vàquercetin-3-glucuronopyranosid(8).

Tại Việt Nam cũng, một số tác giả đã nghiên cứu về thành phần hóa học củaloài này, theo nghiên cứu của Bùi Thanh Tùng và cộng sự năm 2016 [29] từ dịchchiếtethanolcủaláS.speciosađãtáchđượchaihợpchấtlàquercitrin(9),hyperosid

(10),đâylàhaihợpchấtlầnlầnđầutiênphânlậptừS.speciosa.Ngoàira,năm2019,tácgiảVũĐứcLợi vàcộngsự[183]đãnghiêncứuthànhphầnhóahọctừphânđoạnchiếtethylacetatcủaláS.spec iosathuđượccácflavonoidnhưlàquercetin(11),quercetin-3-O-α-L- rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosid (12), kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D- glucopyranosid(13),epicatechin-3-O-arabinopyranosyl(14).

Ngoàira,từcácnghiêncứucủacáctácgiảtrênthếgiớichỉrachiSacheziachứanhiều các hợp chất phenolic, cụ thể là từ dịch chiết methanol của lá và rễS nobilis,Ahmed E và cộng sự đã phân lập được các hợp chất như syringin(15), 4-O-β-glucopyranosyl dehydrodiconiferyl alcohol(16)và hai hợp chất benzyl alcoholglycosid:7-O-β- glucopyranosylbenzylalcohol(17)và7-O-β-apiofuranosyl-(1→6)-O-β- glucopyranosylbenzylalcohol(18)[213].

Theo đó năm 2017, Nusrat Shaheen [155] đã tách được 2 hợp chất phenolic từdịch chiết dichloromethan rễS speciosalàp-hydroxyphenethyl-trans-ferulat(19),4-hydroxy benzoic Acid (20) Các hợp chất này lần đầu tiên được phân lập từ rễS.speciosa.

Hình1.6.Cáchợpchất phenolicđượcphân lậptừ chi Sanchezia

Bằng phương pháp sắc ký khối phổ và sắc ký lỏng hiệu hiệu năng caoJulianaMouraoRavasivàcộngsự[107]đãphânlậpcáchợpchấttừcácbộphậnkhácnhaucủa loàiS oblongatrồng ở Brazil trong đó có nhiều hợp chất polyphenol như là 1-O- coumaroyl-2-hydroxy propanal (21), 1-O-coumaroyl-2-O-arabinopyranosyl (22),1-

O-coumaroyl-2-O-rhamnopyranosylp ro p an a l (23),e th yl ro s m a ri n a t e (24),4 -

O- arabinopyranosyl butyl sinapate (25), rosmarinic acid-3′-O-glucopyranosid (26), 4- hydroxy-3-methoxybenzyl (27), caffeic acid glucopyranosid (28), benzyl alcohol- 7-O-arabinopyranosyl (29), dihydrosinapic acid-O-glucopyranosid (30),4-O-galloyl- sinapylalcoholdiacetate(31),sinapicacid-O-glucopyranosid(32)và4-O- glucopyranosyl-ethyl-dihydrosinapat(33).

Ngoài ra, một số công bố trên thế giới và ở Việt Nam đã chỉ ra rằng, từ phầntrênmặtđấtcủachiSancheziachothấycóchứanhiềucácacidvàcácglycosid.Theođónăm20 13,AhmedE.AbdEllahvàcộngsựđãphânlập5hợpchấtalcoholtừdịchchiết methanol của phần trên mặt đất củaS speciosagồm [22]: (1-octen-3-ol)(34),3-O-β-glucopyranosyl-1-octen-3- ol( 3 5 ),3 -O-β-glucopyranosyl-(1→6)-β- glucopyranosyl-1-octen-3-ol (36), 3-O-β-arabinopyranosyl-(1→6)-β- glucopyranosyl-1-octen-3-ol (37), 3-O-β-arabinopyranosyl-(1→6)-β- glucopyranosyl-(1→6)-β-glucopyranosyl-1-octen-3-ol(38).Cũngtừcaochiếtmethnol của lá và rễS speciosa, Ahmed E và cộng sự đã phân lập được 2 hợp chấtlà 9-O-β- glucopyranosyl-trans-cinnamyl alcohol(39), 9-O-β-xylopyranosyl-(1→6)-O-β- glucopyranosyl-(1→6)-O-β-glucopyranosyl-trans-cinnamylalcohol(40).

Theo nghiên cứu của Juliana Mourao Ravasi và cộng sự [107] bằng phươngpháp sắc ký khối phổ và sắc ký lỏng hiệu hiệu năng cao gắn khối phổ đã xác địnhđược một số acid béo từ các bộ phận khác nhau của loàiS oblongatrồng ở Braziltrong đó có các acid hữu cơ: ethyl octadecanoate (41), stearic acid (42), oleic acid(43),ethyllinoleate(44),9,12-octadecadienal(45),linoleicacid(46),ethylpalmitate

Tại Việt Nam theo nghiên cứu của tác giả Lê Thị Hồng Nhung năm 2018 [1],từphânđoạnn-hexancủaláS.speciosabằngcáchsửdụngphươngphápsắckíkhốiphổ (GC- MS), đã xác định được 14 acid béo bao gồmstearic acid (42), oleic acid(43),palmiticacid(48),nonadecylicacid(49),acidlauric(50),acidmyristic(51 ), acidpentadecylic(52),acid margaric(53),acidarachidic(54),acid eicosenoic(55), acidvaccenic(56),acidpalmitoleic(57),acidlinoleic(58),acidα-linolenic(59).

Hình1.7.Cáchợp chất acid hữu cơvàglycosidphânlập từ chi Sanchezia

Ngoài các nhóm hợp chất ở trên, theo một số công bố chiSancheziacũng cóchứa một số các hợp chất terpen khác Theo đó năm 2017, Nusrat Shaheen và cộngsự [155] xác định từ cao chiết dichloromethan từ phần rễ của chiS Speciosalà (+)-3,13-clerodadien-16,15-olid-18-oicacid(60),stigmasterol3-O--D- glucopyranosid(61).

Hình1.8.Các hợp chấtterpen đượcphânlập từchi Sanchezia

CũngtheonghiêncứucủaJulianaMouraoRavasivàcộngsự[107]đãchỉratừcácbộphậnk hácnhaucủaloàiS.oblongatrồngởBraziltrongđócóstigmasta-4,22-dien-3- one(62),sitosterol(63),stigmast-4-en-3-one(64),campesterol(65).

Ngoàira,mộtsốcôngbốkhácchỉrarằngchiSancheziacònchứamộtsốnhómhợp chất khác. Năm 2017, Nusrat Shaheen [155] đã tách được hợp chất alcaloid từcao chiết dichloromethan của rễ loàiS speciosalà 3-methyl-1H-benzoindole-4,9-dion (66) Tương tự, năm

2019 tác giả Vũ Đức Lợi và cộng sự [183] đã phân lậpđượcmộtsốhợpchấthóahọctừphânđoạnchiếtethylacetatcủaláS.speciosalà3-methyl-1H- benzoindole-4,9-dion(66),scopoletin(67),3′-O-methyl-3,4-methylenedioxy ellagic acid

(68) Từ dịch chiết methanol của lá và rễS nobilis,Ahmed E và cộng sự đã phân lập được một hợp chất neolignan glucosid: 6,7,8-trimethoxy-cumarin(69).

Hình1.9.Các hợp chấtkhác đượcphân lậptừ chi Sanchezia

STT Nămc ôngbố Tácgiả Loài/

Khaled M.Mohamed ,Enaam Y.Backheet, MahmoudH.

SelineOmondi J.C.Onyango, Sanchezia speciosaV ườn thựcvậtĐH

Nusratshah een,Muham madUzair, BashirAhmad, Alamgeer,

Negri,Antonio Salatino,Maria Luiza

Sanchezi aoblonga(B razil)Toà ncây

Bui ThanhTung,V uDucLoi, NguyenThanh Hai,NguyenT ienVung,

Vũ Đức Lợi,Nguyễn ThịMai

Loi Vu Duc,Tung BuiThanh,Ha VuHoang,

STT Nămc ôngbố Tácgiả Loài/

Vu Duc Loi,Tran MinhNgoc,Bu iThiXuan,

Sanchezian obilis(Nam Định)Lá

Như vậy, các loài được nghiên cứu thành phân hóa học của chiSanchezialàS.speciosa, S nobilis và S oblonga,tuy nhiên 3 tên loài này được xác định là đồngdanh [220] do đó luận án chỉ tổng hợp thành phần học theo chi mà không tổng hợptheoloài.Cácnhómhợpchấtphổbiếnnhấttrongchilàflavonoid,terpenvàalcaloid.Nhưngsốlư ợngcácchấtphânlậpvàxácđịnhđượccấutrúccònhạnchế,dođóviệctiếp tục phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất sẽ cung cấp thêm thông tin vềthànhphầnhóahọccủacây,cũngnhưgópphầnbiệngiảitácdụngsinhhọccủacây.

TácdụngsinhhọcchiSanchezia

Độctínhcấp

Các nghiên cứu trước đây về độc tính cấp của chiSancheziatập trung chủ yếuvào cao chiếtn-hexan và ethyl acetat của lá và rễ, dịch chiết methanol của vỏ, gỗ, lávàrễS.speciosabằngphươngphápthửtrênấutrùngtômnướcmặn [51],[218].Kếtquả phân tích cho thấy trêncác cao chiếtn-hexan và ethyl acetat từ láS speciosachotỷ lệ tử vong tăng lên cùng với sự gia tăng nồng độ Giá trị LC50của các caochiếtn-hexan và ethyl acetat được tỡm thấy là 19,95 àg/mL và 12,88 àg/mL so vớivincristinesulphatchứngdươngcúgiỏtrịLC50đỏngkểlà10,96àg/mL.Vỡvậy,caophõnđoạn ethylacetatđộch ơ n sovớicaophânđoạnn-hexantrênấutrùngtômnướcmặnnhưngđều antoànhơn vincristinesulphat[218].

NusratShaheenvàcộngsự(2017)đãtiếnhànhthửnghiệmđộctínhcấptừcaochiết dichloromethan và methanol của vỏ, gỗ, lá và rễS speciosatrồng ởMultantrênấutrùngtômvớicácmứcliềukhácnhau.Kếtquảchothấy,mứcđộgâyc hết khác nhau đã được quan sát khi tiếp xúc với các liều thử nghiệm khác nhau và tỷ lệtử vong được tìm thấy tỷ lệ thuận với nồng độ cao chiết thử nghiệm Trong đú,caochiếtdichloromethancủarễcõycútỏcdụnggõyđộcđỏngkểvớiIC50là2,52àg/ mLsovớichấtđốichứngetoposidcúIC50l à7,46 àg/mL [51].

Tácdụngchốngviêm

TừcaochiếtmethanolcủavỏvàrễS.speciosađượcNurathaseen[155]thửtácdụngchốngvi êmtrên2môhình,gâyphùbànchânchuộtbằngcarrageenanvàbằngcotton-pellet Ở mức liều 50 mg/kg chưa cho kết quả chống viêm trên mô hình gâyphùbànchânchuộtbằngcarrageenan,nhưngthểhiệntácdụngchốngviêmnhẹtrênmô hình cotton-pellet Ở mức liều100 mg/kg (giảm độ phù 52,79%) và 200 mg/kg(giảm độ phù 68,75%) sau 3 giờ đều cho tác dụng chống viêm có ý nghĩa thống kêso với lô chứng bệnh và gần bằng tác dụng của indomethacin ở mức liều 5 mg/kg(giảmđộphù76,34%)trênmôhìnhgâyphùbànchânchuộtbằngcarrageenan.Trênmôh ìnhcotton-pelletcũngchokếtquảtươngtự,lôdùngindomethacinởmứcliều5mg/ kglàmgiảmviêmlà65,35%trongkhiđócaochiếtmethanolvỏvàrễS.speciosamứcliều100 mg/kggiảm46,12%,mứcliều200 mg/kggiảm59,32%. Ở Việt Nam, theo nghiên cứu của Vũ Đức Lợi và cộng sự năm 2016 [63], từphânđoạnethylacetatcaochiếtethanolláS.speciosatrồngđãphânlậpđược4hợpchất,cáchợ pchấtđượcđánhgiátácdụngchốngviêmcấptrênmôhìnhgâyphùbànchân chuột bằng carragenan Mức độ tác dụng: Hợp chất 3-methyl-1H-benzoindole-4,9-dion (66) > daucosterol (61) > hyperosid (10) > quercitrin (9) Hợp chất 3-methyl-1H-benzoindole-4,9-dion (66) ức chế mạnh nhất, với giá trị IC50là 193,70 ±5,24μgg/mL 4 hợp chất này cũng được đánh giá trên mô hình kháng viêmin vitrobằngthửnghiệmbiếntínhalbumincủaBùiThanhTùngvàcộngsự[29],kếtquảchothấybốnh ợpchấtđềuứcchếhiệuquảsựbiếntínhalbuminnhiệtởcácnồngđộkhácnhautheothứtựnhưtrên.Ho ạtđộngchốngviêmcủatấtcảcáchợpchấtlàphụthuộcnồngđộ.

Lê Thị Hồng Nhung năm 2018 cũng thử hoạt tính kháng viêm của cao chiếtn- hexan, ethyl acetat và butanol từS speciosabằng phương pháp xác định hoạt tínhứcchếsảnsinh nitricoxit(NO) trêntếbào RAW264.7kếtquảcho thấy trong3cặn chiếtthửnghiệm,cặnn-hexanvàethylacetatcóhoạttínhứcchếsựsảnsinhNOtốt.Đáng chú ý cặnn- hexan cú hoạt tớnh mạnh hơn ở nồng độ thấp (IC5010,82 ±1,80àg/mL)[1].

Nurat haseen [155] sử dụng cao chiết methanol từ vỏ và rễS speciosađể đánhgiá tác dụng giảm đau trên 3 mô hình là acid acetic, tấm nóng và formalin Trên môhình gây đau quặn bụng do acid acetic gây ra, cao chiết methanol thể hiện tác dụngức chế đau tối đa 79,21% khi sử dụng liều 200 mg/kg thể trọng so với thuốc aspirincóbiểuhiệnứcchế88,01%.Caochiếtvớiliềulượngsửdụng100và200mg/kgchothấy hiệu quả đáng kể sau 1 giờ trên mô hình tấm nóng Các kết quả được thể hiệnrõở liều 200 mg/kg là 20,28 ± 4,6 (giây) có thể so sánh được với thuốc tham chiếutramadol (22,60 ± 4,3 giây) Tác dụng giảm đau trong thí nghiệm liếm chân doformalingâyra,bằngcáchđothờigian(29,6±3,1giây)vớiliều200mg/kg,kếtquảnàygầnvớik ếtquảthuốcđốichiếuindomethacin(39,3±2,9giây).Nhưvậykếtquảchothấycaochiếtmethanolt ừvỏvàrễS.speciosacótácdụnggiảmđautrungươngkhátốt.

MộtnghiêncứukháccủaProggavàcộngsự[161]đãsửdụngcaochiếtethanolcâyS. nobilisđể đánh giá tác dụng giảm đau trên mô hình acid acetic Mẫu nghiêncứu được sử dụng với mức liều 250 và 500 mg/kg, chứng dương là natri diclofenacvớimứcliều25mg/kg.KếtquảchothấycaochiếtethanolcủacâyS.nobilisthểhiệnsự ức chế đau bằng 32,7% (p daucosterol (61) với giá trị IC50của hợp chất hyperosid (10) là 20,83 ± 1,29 àg/mL,hợp chấtquercitrin(9)là25,9±2,57àg/mL[29].

Nghiên cứu của S Parvin và M Paydar cho thấy từ cao chiết methanol láS.speciosathểhiệntácdụngứcchếtốtsựtăngtrưởngcủadòngtếbàoMCF-

7vớiIC50là23,20±1,18àg/mL,cútỏcdụngứcchếtrungbỡnhtrờndũngtếbàoSK-MEL-5 vớiIC50l à62,56±5,32àg/ mL,vàcútỏcdụngứcchếyếutrờndũngtếbàoHUVECvớiIC50là91,15±2,8àg/ mL.Nhưvậy,caochiếtmethanolcótácdụnggâyđộctrêntếbàoungthưvúkhámạnh[218],[49]. ĐểđánhgiáhiệuquảcủaS.speciosađốivớixétnghiệmtăngsinhtếbào,khảnăngtăngt rưởngcủatếbàoungthưđãđượcnghiêncứutrongxétnghiệmMTT,vớicáccaochiếtdichloro methanvàmethanoltừvỏcâyvàvỏrễcủaS.speciosa.Hiệuquảchốngungthưtrongống nghiệmđượcđánhgiátrêncáctếbàoHelatrongcácđĩa96giếngvàsauđóđượcủở37℃tr ongcáckhoảngthờigiankhácnhau(n=3)cókhả năngchốnglại sự hấpthụcủaformazanởbước sóng540nm Sử dụngdoxorubicinl à m chứng d ư ơ n g Tron g k h i đó,c ao c h i ế t dichlo rom ethan c ủ a rễS speciosađượctỡmthấycútỏcdụnghúatrịliệuvớigiỏtrịIC504 6 , 7±1,7àg/ mL.TươngtựthửnghiệmđápứngliềuMTTcủacaochiếtdichloromethanrễS.speciosađượcthự chiệnởcỏcnồngđộkhỏcnhauchothấyhiệuquảhúatrịtốiđaở100àg/ mL[51].Cáccaochiếtmethanolvàdichloromethancủar ễ v à v ỏ r ễ S s p e c i o s a đ ư ợ cđánhgiákhảnăngứcchếtrênbaenzymlàα- glucosidase,acetylcholinesterasevàlipoxygenase.Kếtquả chothấytác dụngứcchếenzymα-glucosidaselàrõnhất vớiIC50=15,3±0,5μgg/mL(caochiếtmethanolcủavỏ)vàIC50=15,9±0,2μgg/mL(caochiếtmethan olcủarễ)sovớiacarbosecóIC50=37,2±0,2μgg/mL.Tácdụngtrên enzymacetylcholinesteraseyếuvàtrên lipoxygenasegầnnhưkhôngcó[155].

Các cao chiết này được đánh giá khả năng điều hòa miễn dịch đối với các loạioxyphảnứng(ROS)sảnxuấtbằngcáchxácđịnhluminolthămdòvàsửdụngcáctếbào máu Cao chiết methanol từ rễ (IC50= 28,7 μgg/mL) và vỏ (IC50= 33,1 μgg/mL)đều cho thấy tác dụng mạnh hơn cao chiết DCM cũng như so sánh với doxorubicintiêuchuẩn(giátrịIC50l à9 2 , 6 μgg/mL) [155].

CaochiếtethanolcâyS.nobiliscũngđượcthửnghiệmđánhgiátrênhoạtđộngthầnkinhbằ ngcáchsửdụngmôhìnhtrườngmởởchuột.Chuộtđượcchouốngmẫuthửliều250và500mg/ kgthểtrọng,chứngdươngsửdụnglàdiazepamliều1mg/kgthể trọng Sau khi cho uống mẫu nghiên cứu, các chuột được đặt riêng lẻ vào mộtgóc trong các góc của hình vuông và số lượng ô vuông được các con vật đến đượcđếmtrong3phútvàocácthờiđiểm0,30,60,90và120phúttrongsuốtthờigian nghiêncứu.Kếtquảchothấyởliều250mg/kgthểtrọngchuộtsốôvuôngđếmđượcở các thời điểm tương ứng là 142,5; 103,7; 77,2; 64,5 và 35,8 Ở liều 500 mg/kg thểtrọng là 117,7; 93,0; 68,8; 36,6 và 12,4 Trong khi đó ở nhóm chứng ghi nhận kếtquả:79;58,2;46,4;29,6 và8,0[161].

Trên thực tế người dân đã sử dụng lá Xăng xê và các sản phần từ lá Xăng xêtrong bệnh lý đau dạ dày, viêm loét dạ dày, tá tràng nhưng các nghiên cứu trên hệtiêuhóacủaXăngxêcònrấtítvàchưathểhiệnrõtácdụngtrênbệnhlýdạdày.Đâylà tiền đề cho định hướng nghiên cứu của luận án về tác dụng trên viêm loét dạ dàytátràngcủalácâyXăngxê.

Côngdụng

Hiện nay, một số loài thuộc chiSancheziađược sử dụng trong y học dân giancác nước trong điều trị chống co giật, an thần, ho có đờm, chống lao và chống ungthư [22].S speciosađược sử dụng rộng rãi ở Ấn Độ và Bangladesh khi bị rắn cắn,sốt rét, kiết lỵ, tiêu chảy, rối loạn chức năng gan, và trong việc ngăn ngừa khả năngsinh sản ở nam giới [146], rễ và vỏ cây cũng được dùng trong bệnh dạ dày [166].Ngoàira,ởTháiLan,câyS.speciosađượcsửdụngnhưmộtloạithứcăncótácdụngan thai, bổ máu, điều trị đau bụng kinh [123], rễ câyS speciosađược dùng để điềutrịliệtdươngvàlàmtăngcườnghammuốntìnhdục[155],láS.oblongagiãđắplênngười để chữa đau lưng, đau thắt lưng, đau gân, đau cơ và bầm tím [185] Ở TrungQuốc,S speciosađược dùng trong gẫy xương [194].S oblongaở Peru thì dùng láđểxôngtrongbệnhđauđầu[182].

Thêmvàođó,mộttrongnhữngtácdụngcủalácâyXăngxêđượcdùngởViệtNamlàsửdụn gtrongbệnhviêmloétdạdày,tátràng.Cáchdùng:lấyvàilátươirửasạch và nhai sống với một ít muối là giảm cơn đau, dùng một thời gian thì khỏi.Ngoài việc ăn sống còn có thể sắc lá khô thay nước chè uống hằng ngày Trên thịtrườnghiệnnaycũngđãcómộtsốsảnphẩmthựcphẩmchức năngcóláXăngxêsửdụnghỗtrợ cácvấnđềcủa dạdàynhư:

+ Thành phần: Xăng xê, Hoàn ngọc, Chè dây và một số thành phần khác như:Caocàgaileo, Dạcẩm,Cỏngọt,Camthảobắc,Gừng,Quế…

+Tácdụng:Làthựcphẩmchứcnănghỗtrợcácvấnđềvềdạdàynhư:đauthắtdạdàylâunăm,viêmloé tdạdày,tràongượcdạdàythựcquản,nhiễmvikhuẩnH.Pdạdày.

+Thànhphần:BộtcâyKhôiđốm(Xăngxê)và bộtlátràxanh.

+ Công dụng:giúp hỗ trợ điều trị đau dạ dày, viêm loét dạ dày, hành tá tràng,đaubụng, kém ăn, ăn không tiêu Hỗ trợ trung hòa, làm giảm tiết acid dịch vị, giảm ợhơi,ợ chua,làmsevếtloét.

Bệnhlýviêmloét dạdày,tátràng

Địnhnghĩa

Viêmloétdạdày-tátràng(DD-TT)lànhữngtổnthươngcủalớpniêmmạc,cóthể xâm lấn sâu xuống lớp dưới niêm mạc Vị trí hay gặp nhất là bờ cong nhỏ, hangvị,mônvịvàhànhtátràng.

Viêm loét dạ dày, tá tràng là bệnh mạn tính thường tái phát, có thể gây biếnchứngnhưchảymáu,thủngdạdày,hẹpmônvị,hoặchiếmhơncóthểtiếntriểnthànhung thư [17].

Nguyênn h â n gâyviêmloétdạdàytátràng

Theo Schwartz (1910), ngoài tác dụng tiêu hóa thức ăn, bản thân dịch vị có tácdụng phá hủy niêm mạc DD-TT nhưng tác dụng này bị các yếu tố bảo vệ chống lại,làm mất hiệu lực, do vậy viêm loét DD-TT không xuất hiện ở những người bìnhthường Viêm loét DD-TT là hậu quả của sự mất cân bằng giữa yếu tố tấn công vàyếu tốbảovệ,trongđóyếu tốtấn công chiếmưu thếhơn[17]. Yếutốbảovệ[15]:Lớpnhày,sựtáitạoniêmmạc…

- Lớpnhầy:phủtrênbềmặtniêmmạc.Dotồntạiởdạnggelvàmangtínhkiềm,nó không thích hợp cho sự tiêu hủy của pepsin, đồng thời không cho phép acid từdịchvịtựdokhuếchtánsâuvàotrong.

- Tế bào biểu mô niêm mạc: tái sinh rất nhanh mỗi khi tổn thương, đồng thờisảnxuấtmộtsốionbicarbonat(trunghòaion H + nếunóđiquađược lớpgel).

- Sự tưới máu phong phú: mang đi các ion H + và cung cấp các vật liệu hàn gắntổn thương.

- Prostaglandin: Được sản xuất tại chỗ, prostaglandin có tác dụng khuếch đạivàđiềuphốicácyếutố bảovệnóitrêngiúpquátrìnhtáitạoxảyrangay lập tức.

- Sự tái tạo và hàn gắn: Những tổn thương do yếu tố tấn công gây ra cho niêmmạcdạdàyđượchàngắntứckhắckểcảkhinồngđộionH + trongdịchvịtănggấp5 lần. Khi các yếu tố bảo vệ tỏ ra bất cập, khiến thương tổn vượt quá lớp đáy củabiểu mô đến lớp dưới niêm mạc thì sự tái tạo tức thì của biểm mô không thể thựchiệnđược.Quátrìnhsửachữadiếnbiếnchậmlại,vìphảicócáctếbàotừngoàixâmnhập và tăng sinh ở vùng tổn thương để lấp chỗ Vai trò phối hợp của prostaglandinlúcnàycàngquantrọng.Ngoàira,yếutốtăngtrưởngEGF(Epidermalgrowthfactor)đư ợcbàitiếttrongnướcbọtvàtátràng,cótácdụnggiảmtiếtacid,kíchthíchsựxâmnhậpvàtăngsinhtế bào vùngtổnthương[15].

- Pepsinogen: Trên thực nghiệm, động vật không bị viêm loét nếu chỉ gây tăngtiết acid riêng nhưng sẽ tăng tỷ lệ viêm loét nếu phối hợp với pepsinogen Hơn nữa,dù có phối hợp nhưng nếu gây ức chế hoạt tính của pepsinogen thì vẫn giảm tỷ lệxuất hiện viêm loét Như vậy, pepsin tạo điều kiện cho ion

H + của acid khuếch tánvào sâu lớp gel để tiếp cận lớp biểu mô niêm mạc dạ dày.

Một khi lớp nhày bị phávỡvàniêmmạcbịionH + làmtổnthươngthìpepsincóđiềukiệnphốihợplàmnặnghơn cáctổnthươngtạiổ loét [15].

- Acid hydrochloric: Sự khuếch tán ngược của ion H + từ lòng dạ dày qua lớpgelvàotậncấutrúcniêmm ạ c , mặcdùlớpgelcảnđược3/4hay9/10sốionnày.IonH + cógây tổn thươnghaykhôngcòn tùy thuộcvàonồngđộionH + thấmvàovàkhảnăng bảo vệ Các cấu trúc bị tổn thương do ion H + gây ra gồm biểm mô niêm mạc,cácnotron,mạchmáu,kếthợpvớisựxâmnhiễmcủacáctếbàoviêmđểgâyramộtchuỗihậ uquảnhư:

+ Xâm nhập các thành phần máu vào nơi tổn thương, tạo ra hỗn hợp peptid vàcácacidamingâykích thíchtiếtthêmacidhydrochloric.

Cuốicùnghìnhthànhmộtvòngbệnh lý tự duy trì[15].

Nhữngtácnhângâytăngtiếtvàgiảmkhảnăngbảovệdạdàytátràng

 Thuốc kháng viêm không steroid (và cortisol)Cơchếgây tổnthươngcủaNSAID,gồm:

- Trựctiếpgâytổnthươngniêmmạcdạdày:dotínhchấtacidyếucủaNSAID,nhất là của aspirin, khiến chúng không bị ion hóa mà còn phát huy ái tính với lipid,nhờvậycácNSAIDdễdàngthấmqualớpnhầyđểtiếpcậnvớibiểumônhưngởđâydopHtươn gđốicaonêntồntạinhiềudướidạngionhóadẫnđếnpháhủyniêmmạc.NSAIDcòncókhảnănglàm giảmtínhkỵnướccủalớpnhầy,giúpchoacidkhuyếchtán tiếp cận biểu mô niêm mạc Một cơ chế khác khi vào máu, NSAID bị phân hủytại gan và hệ võng nội mô để tạo ra các sản phẩm chuyển hóa, sẽ được bài tiết theomật Các sản phẩm này đã được chứng minh là có thể gây tổn thương cho niêm mạcruộtvànếubệnhnhâncóhộichứng“tràomật”lêndạdàythìchúngcóđiềukiệngâytổn thươngdạdàyvànhiềukhicảthựcquản[17].

- Ngoàira,NSAIDcótácdụnggiántiếp:làmsuygiảmhàngràophòngngự,ứcchếtổnghợp prostaglandinvàNO,gâygiảmvituầnhoànởniêmmạc,ngăncảnquátrình táitạo vàchữalành[15].

- CácyếutốnguycơcủaNSAID:sửdụngNSAIDgâyrabiếnchứngnhiềuhayít phụ thuộc vào: Tuổi của bệnh nhân, lịch sử loét cũ, dùng đồng thời với corticoid;khicóđồngthờicóvikhuẩnHelicobacterpylori(H.P)trongdạdày,cóhútthuốclá,cóuống rượutrongđợtđiều trị…[15].

 Thuốclá;rượu,càphê,acid mật,stress…

Thực nghiệm cho thấyH.Pgây viêm cấp ở dạ dày nếu nhiễm một lượng lớn.NógâyviêmloétDD-TTnếunhiễmkéodàihoặclàmviêmchuyểnsangloétvìlàmtăng tiết acid đồng thời làm giảm khả năng bảo vệ Hậu quả muộn là làm teo niêmmạcđưađếngiảmtoan,vôtoan.H.Plàbệnhnguyênphổbiếngâyloét,đồngthờilàtácnhânq uantrọngcủarốiloạntiếtdịchvịvớibằngchứngnhữngngườilànhmangbệnhvẫncónhữngthay đổitrongtiếtdịchvịnhưngsẽdầntrởvềbìnhthườngkhivikhuẩn bị loại trừ.H.Pđược tìm thầy ở 90-96% những người viêm loét tá tràng và ítnhất70%ngườiviêmloétdạdày[14],[142].

Triệuchứngvàchẩnđoánviêmloétdạdàytátràng

- Đaubụng:Đâylàtriệuchứngsớmnhất.Thườngđauvùngbụngtrênrốn;cơnđauxuấthiệ nkhiđóihoặcsaukhiăn2-3giờ,cơnđaucóthểnửađêmvềsáng.Cơnđau cóthểâmỉhoặcquặn từngcơn,bỏngrátđôikhicảmgiáctứcngực.

- Nôn hoặc buồn nôn, đầy bụng, chậm tiêu: Cảm giác buồn nôn, nôn xuất hiệnkhi dạ dày đang tiêu hóa thức ăn Nôn cũng có thể gặp khi bị hẹp môn vị Nếu nônrađược,ngườibệnhsẽcảmthấy dễchịu,cơn đaucũnggiảmđi.

- Ợ chua,ợhơi,nóng rátvùng thượngvị

- Rối loạn tiêu hóa: do quá trình tiêu hóa không bình thường, bệnh nhân có thểđi ngoài phân sống, tiêu chảy hoặc táo bón Có trường hợp bệnh nhân đi ngoài phânđen nhưngkhông có triệuchứng đaubụng,đâygọilàhiện tượng loétcâm.

- Chẩn đoán lâmsàng:cáctriệuchứng mangtínhchấtgợiý

- Chẩnđoáncậnlâmsàng:Nộisoichokếtquảchínhxáccóthểkếthợpvớisinhthiếtđể chẩnđoánviêmloétDD-TT,ungthưdạdàyvàtìmvikhuẩn (H.P)[15].

Cácmô hìnhgâyloét dạdày,tátràngtrên thựcnghiệm

Môhìnhgâyviêmloétbằngphươngphápvậtlí

Shay và cộng sự (1945) đã đề xuất phương pháp thắt môn vị trên chuột cống.Đâylàphươngphápmôphỏngtìnhtrạngtăngtiếtacidcũngnhưlàmchậmtháorỗngdạdàytư ơngtựbệnhhẹpmồnvị,từđógâyviêmloétdạdàytátràng[64][25].

Sử dụng chuột cống trắng cân nặng từ 150 - 170 g, chia ngẫu nhiên thành cáclô khác nhau Trước ngày uống liều thuốc cuối cùng, chuột để nhịn đói 24 - 48 giờnhưngvẫnchouốngnướctrướckhilàmthựcnghiệm.Gâymêchuột,mởổbụngbộclộ môn vị dạ dày chuột Dùng chỉ phẫu thuật thắt môn vị (tránh thắt vào động mạchtạng),rồikhâuđóngthànhbụng.Sauđó,cáclôchuộtđượcuốngnướcmuốisinhlý,thuốcđốichi ếuvàthuốcnghiêncứu.Sau19giờ,giếtchuột,mởổbụng,cắtphầndạdàyrakhỏiổbụng.Dịchvịt rongdạdàyđượcđothểtíchvàquaylitâmđểxácđịnhđộ acid bằng NaOH 0,1N Dạ dày được mở dọc theo bờ cong lớn, rửa bằng nướcmuốisinhlý,thấmkhôvàcốđịnhtrênđĩa.Niêmmạcdạdàyđượcsoidướikínhhiểnvi để kiểm tra mức độ tổn thương Các vết loét thường xuất hiện nhiều ở dạ dày vàhangvị.Đánhgiámứcđộtổnthương:Đếmsốvếtloétvàđánhgiámứcđộtổnthươngtheophương pháptínhđiểm[52].

Nhiều nghiên cứu chỉ ra rằng stress có thể gây viêm loét dạ dày Theo nghiêncứu của Selye, khi gây một stress thì ngay sau đó cơ thể phản ứng lại bằng cách comạchmáu,giảmtrươnglựccơ,giảmglucose,giảmbạchcầu,sauđósẽgâytăngtiếtACTH (tuyến yên) và corticosteroid (hormon vỏ thượng thận) Như vậy, sau mộtstress thì cơ thể xuất hiện một loạt các phản ứng để chống stress và kết quả là tạo racác hormon có tác dụng gây viêm loét, giảm yếu tố bảo vệ dạ dày (giảm dòng máutuầnhoàntạidạdày,giảmtiếtchấtnhày,giảmtiếtprostaglandin).Trênthựcnghiệm,cáctác giảđãdùngnhiềuphươngphápgâystresskhácnhauđểgâyviêmloétdạdày[20].

(1936) là người đầu tiên giới thiệu mô hình này, sau đó được cải tiến bởinhómtácgiảHansonvàBrodie(1960),Bofitlsvàcộngsự(1966).Gâystressbằng cáchgòbó,convậtcótìnhtrạng tươngtựnhưbịmộtstresskéodài[38].

-Gây stress bằng cách nhúng đột ngột trong nước lạnh (cold restraintstress) [38].

Phương pháp này được Takagi và cộng sự (1964), West (1982) giới thiệu.Nhúngconvậttrongnướclạnhtrongsuốtquátrìnhlàmthínghiệm,kếthợpvớiviệcgiữ cố định con vật trong một thời gian ngắn để gây nên tình trạng bị kích thích nhưmộtstress kéodài.

Vai trò bảo vệ dạ dày của mạch máu nuôi dạ dày là lấy đi ion H + và cung cấpcácyếutốlàmliềnloét.Trênthựctế,nhữngbệnhnhânthiếumáu,bệnhnhânxơgancổtrướngt hìtỷlệviêmloétdạ dàylàkhácao.

Chochuộtuốngthuốctrongmộtkhoảngthờigiantừ5-10ngàytrướckhilàmthực nghiệm Sau khi uống liều gần cuối, để chuột nhịn đói trong 24 giờ nhưng vẫnđược uống nước Trước khi gây loét khoảng

30 - 60 phút, chuột được cho uống liềucuối cùng Gây mê chuột, sau đó phẫu thuật mở ổ bụng chuột, truyền vào dạ dàydungdịchHCl0,15Mliều1ml/100gchuột.Kẹpđộngmạchtráidạdàytrong5phútđểgâythiếu máucụcbộvàđể30phúttáitướimáusaukhibỏkẹpra.Giếtchuột,mởdạ dày dọc theo bờ cong lớn rồi ngâm trong dung dịch formalin Kiểm tra mức độtổn thương bằngkínhhiểnvivà so sánhvớilôchứng[41] [53].

Ngoài ra, Takashi Kyoi và cộng sự đã cải tiến mô hình kẹp động mạch gâythiếumáucụcbộbằngcáchkếthợpmôhìnhnàyvớimôhìnhthắtmônvịdùngkèmthêmacid đểgâyviêmloét.

Môhìnhgâyviêmloétbằngphươngpháphóahọc

Cácacidthườngdùnglàacidhydrochloric,acidacetic(dùngđểtạomôhìnhviêm loétmạn tính)

Vai trò gây viêm loét dạ dày tá tràng của acid hydrochloric (HCl) đã được cácnhàkhoahọctìmra.Môphỏngnhữngbệnhnhântăngtiếtacid(hộichứngZollinger

- Ellison,bệnhtăngacidnguyênphát ),môhìnhgâyloétbằngacidhydrochloricsẽgây nên tình trạng thừa acid trong dạ dày dẫn đến viêm loét dạ dày cấp ở động vậtthínghiệm[58][26].

Chuộtđượcuốngthuốctừ5-10ngàytrướckhilàmthựcnghiệm.Saukhichochuột uống liều gần cuối, chuột để nhịn đói nhưng vẫn cho uống nước trong 18 giờ.Sau30phútuốngthuốclầncuốicùng,chuộtbịgâyloétbằngdungdịchacidHCl0,6M với liều 5 ml/kg chuột Sau 1 giờ, giết chuột, tách lấy dạ dày Mở dạ dày theo bờconglớn,rửadạdàybằngnướcấm,ngâmtrongdungdịchformalinrồiđemsoidướikínhhiểnviđ ểkiểmtramứcđộtổn thươngvàhiệuquảđiều trịcủathuốc[58].

Mô hình sử dụng acid acetic để gây viêm loét dạ dày mô phỏng trên nhữngbệnhnhânbịviêmloétdạ dàymạn tính[42].

Chuột bị bỏ đói trong 24 giờ trước khi làm thực nghiệm nhưng vẫn cho uốngnước Gây mê chuột, mở ổ bụng bộc lộ dạ dày, tiêm vào thành dạ dày 0,05 ml dungdịch acid acetic 30% (v/v) cho mỗi con vật Sau đó, đóng thành bụng lại, chuột tiếptụcđượcnuôidưỡngbìnhthường.Nhữngngàytiếptheochuộtđượcchouốngthuốctrong 7 đến

14 ngày Sau đợt uống thuốc, để chuột nhịn đói một ngày, giết chuột,tách lấy dạ dày, mở dạ dày dọc bờ cong lớn Cắt dạ dày thành những miếng nhỏ đểđánhgiávếtloétdướikínhhiểnvi[42].

Các nghiên cứu đã cho thấy ethanol là một trong những yếu tố nguy cơ gâyviêm loét Trên thử nghiệm với động vật, ethanol cũng có tác dụng gây viêm loét.Phương pháp này dựa trên đặc điểm gây viêm loét của ethanol là phá hủy lớp màngnhàybảo vệ,tăngtínhthấmcủaniêmmạc,ứcchếtổng hợp prostaglandin[72].

Chuột để đói 18 giờ trước khi làm thực nghiệm nhưng vẫn cho chuột uốngnước Cho chuột uống thuốc chống viêm loét dạ dày, sau 30 phút cho chuột uống

1mlethanoltuyệtđối[72].Sau1giờ,mởổbụngchuộttáchlấydạdày,mởdạdày dọctheobờconglớn,rửabằngnướcmuốisinhlý.Kiểmtramứcđộtổnthươngdạdày dướikínhhiểnvi.

Năm 1979, Robert dùng phối hợp ethanol với acid hydrochloric, NaOH, mộtsốNSAIDsđểgâyviêmloétdạdày(sửdụngnồngđộethanolthấphơn50%-70%).Mô hình này mô phỏng tình trạng trên những bệnh nhân nghiện rượu có kèm tăngtiếtacid [35]. Để chuột nhịn đói 18 - 24 giờ trước lần uống thuốc cuối cùng Sau khi chochuộtuốngthuốc25phút,chochuộtuống1mlhỗnhợpethanolvàacid,hoặcethanolvà NSAIDs.

1 giờ sau giết chuột, tách lấy dạ dày, mở dọc theo bờ cong lớn, rửa dạdày bằng nước muối sinh lý, rồi kiểm tra dưới kính hiển vi [35] Mô hình này cũngcó thể thực hiện trên chuột nhắt trắng

(Mizui và Douteuchi - 1993) Để chuột nhịnđói24giờtrướcthờiđiểmgâyloétnhưngvẫnchouốngnước.Saukhiuốngliềucuốicùng 50 phút, cho chuột uống 0,2 ml dung dịch hỗn hợp (HCl 0,3M/ethanol 60%).Sau1giờ,giếtchuột,táchlấydạdày,mởdọctheobờconglớn.Kiểmtramứcđộtổnthương dạdàydướikínhhiểnvi[42].

CácthốngkêdịchtễdượchọcđãchothấyNSAIDsgâynhiềutácdụngkhôngmongmuốnl ênhệtiêuhóa,đặcbiệtlàgâyviêmloétdạdàytátràng.Tácdụngkhôngmong muốn này của NSAIDs đã được các nhà nghiên cứu tìm ra cơ chế gây bệnh:tác dụng trực tiếp làm tổn thương niêm mạc do tính acid yếu của NSAIDs, tác dụnggiántiếplàứcchếtổnghợpprostaglandinvàNO.Kếtquảlàlàmsuygiảmhàngràobảo vệ bằng cách giảm sản xuất chất nhày, bicarbonat, giảm lưu lượng tuần hoàn,ngăn cản quá trình tái tạo niêm mạc Dựa trên cơ chế này, các nhà nghiên cứu đã sửdụngNSAIDsnhưlàmộttácnhângâyviêmloéttrongmôhìnhthửtrênđộngvậtđểnghiên cứu tácdụngchốngviêmloétdạ dàycủathuốc[35],[48][24].

Các NSAIDs hay được sử dụng trong thực nghiệm gây viêm loét là aspirin,indomethacin Sửdụng chuộtcống trắng trọnglượngtừ150–200g.

Chochuộtuốngthuốcnghiêncứutrong6đến10ngày.Trướcngàyuốngthuốccuốicùng,đểch uộtnhịnđóitrongvòng18giờ.Sau10-

6giờ,giếtchuột,mổlấydạdàycủa chuột Tiêm dung dịch formalin vào dạ dày để qua đêm Ngày hôm sau, mở dạdàydọctheobờcong lớn,rửadạdàybằngnướcấm,kiểmtramứcđộtổn thươngdạdày bằngkínhlúphoặckínhhiểnvi.

Các thuốc nhóm corticoid có tác dụng không mong muốn trên hệ tiêu hóa làtăng tiết dịch vị (acid và pepsin), giảm sản xuất chất nhày, giảm prostaglandin (doứcchếphospholipaseA2).Dựatrênđặcđiểmtácdụngnàymộtsốtácgiảđãsửdụngnhómthuốc corticoidđểgâyviêmloétdạdày.

Sử dụng chuột cống trắng cân nặng 150 – 200 g Chuột được uống cortisonliều cao (1 mg – 3 mg/150 mg chuột) trong 12 ngày liền, hay uống prednisolon liềucao (5 mg - l0 mg/150 mg chuột) trong 4 ngày liền Thực nghiệm cho thấy,prednisolon cókhảnănggây loétcaohơn cortison.

Cysteamin(2-aminoethanthiol,mercaptamine)làchấtcónhómsulfhydrylhoạtđộng dùng để cấp cứu khi ngộ độc paracetamol Cysteamin là một chất có khả nănggây viêm loét tá tràng cấp tính và mãn tính, được Szabo (1978) sử dụng đầu tiêntrongmôhìnhgâyviêmloéttátràngcấp.Cysteaminkíchthíchtiếtendothelin-1,mộtchất gây co mạch, làm giảm lượng máu đến tá tràng gây thiếu máu, thiếu O2ở mô.Dođó,niêmmạctátràngbịgiảmcácyếutốbảovệ,ionkhôngđượckhuếchtándẫnđến tátràngbịviêmloét [36],[28],[33].

Chuộtđượcănvàuốngnướcbìnhthườngtrongkhitiếnhànhthínghiệm.Mộtgiờ trước khi gây loét bằng cysteamin, chuột được uống thuốc thử và thuốc chuẩn.Sauđó,chochuộtuốngcysteaminvớiliều400mg/kg,phavào1mlnướcx2-

3lần,mỗilầncáchnhau4giờ.Saukhichouốngliềucysteaminđầutiênkhoảng12giờthìgiếtchuột,mởbụnglấytátràng.Rửatátràngbằngnướcmuốisinhlí,cắtthànhtừng miếngnhỏcóchiềudài2,5cmvàngâmtrongnướclạnh.Kiểmtratátràngdướikínhhiểnvi,đếmsốv ếtloét,đođộdàivếtloét.

Dựa vào tính chất của histamin là một chất có tác dụng gây tăng tiết acid ở dạdày,ParmarvàDesai(1993)đềxuấtphươngphápsửdụnghistaminđểgâyviêmloéttátràng[53]. Sau khi uống thuốc 45 phút, chuột được tiêm dung dịch histamin phosphoricvới liều 0,25 mg/kg Thí nghiêm được lặp lại sau mỗi 4 giờ và thí nghiệm kéo dàitrong 3 ngày Trước khi tiêm histamin 15 phút, tiêm promethazine hydroclorid vớiliều2,5mg/kgđểchốngđộchistamin,30phútsaukhiuốngliềuhistamincuốicùng,giếtchuột, lấy tátràng,kiểmtramứcđộtổnthươngdướikínhhiểnvi.

Như vậy, phần tổng quan đã tổng hợp được các tài liệu nghiên cứu công bố vềđặc điểm thực vật, thành phần hóa học và các tác dụng sinh học của chiSancheziacũng như cung cấp các thông tin cơ bản về bệnh viêm loét dạ dày tá tràng, các môhình đánh giá tác dụng chống viêm loét dạ dày tá tràng.Cho đến nay, chiSanchiziachưa có nhiều nghiên cứu được công bố cả về thành phần hóa học và tác dụng sinhhọc Đặc biệt chưa có công bố về tác dụng sinh học trên viêm loét dạ dày tá tràngmột cách hệ thống và đầy đủ, trong khi đó người dân nước ta đã đang sử dụng câytrongbệnhviêmloétdạdày,tátràngvàtrênthịtrườngđãcómộtsốthựcphẩmchứcnăngtrongt hànhphầncóláXăngxêhoặccaoXăngxê.Luậnánnghiêncứuvềthànhphầnhóahọc,độctínhvàtácd ụngsinhhọctheohướngviêmloétdạdàytátràngcủalá Xăng xê góp phần cung cấp thêm thông tin khoa học về thành phần hóa học củacâycũngnhưchoviệcsửdụngcủangườidân, vàmởrakhảnăngnângcaohiệuquảsửdụngkhi chọnlọcđượccáccaophânđoạn cótácdụng tốthơn.

Nguyênvật liệunghiên cứu

Nguyênliệu

Lá câySanchezia nobilisHook.f (Xăng xê) họ Ô Rô (Acanthaceae) được thuháivàotháng1/2018tạiCổLễ,TrựcNinh,NamĐịnh,đượcphơisấy,bảoquảntrongtúi nilon kín, để tiến hành các nghiên cứu về thành phần hóa học, độc tính và tácdụng sinh học Mẫu nghiên cứu được giám định tên khoa học bởi Thạc sĩ NguyễnQuỳnh Nga, Viện Dược Liệu, Bộ Y tế(Phiếu giám định ngày 28/03/2018 của ViệnDượcliệu-Phụlục1).Mẫudượcliệuđượclưutạiphòngtiêubản,KhoaTàiNguyênCây Thuốc, Viện Dược liệu (số hiệuDL-150118) và được lưu tại Trường ĐH YDược,ĐạiHọcQuốcGiaHàNộivớisốhiệu190DV18SMP-VNU.

Hóachất–dụngcụ

*Hóachất,dụngcụ sửdụng trongnghiêncứu thựcvật,hóahọc

- Dungmôiđượcsửdụngchoquátrìnhchiếtlàcácdungmôicôngnghiệpđượcsửdụngmàkh ôngcầntinhchế,dungmôisửdụngchophươngphápsắckícộtlàcácdung môicôngnghiệpđược cấtlạitrướckhisửdụng.

- Dung môi sử dụng cho quá trình tinh chế bằng phương pháp HPLC là cácdung môi của hãng Merck đạt tiêu chuẩn HPLC Các hóa chất và thuốc thử đạt tiêuchuẩnphântích theoquyđịnh củaDượcđiểnViệtNamV.

Alufolien60F254(Merck1.05715)vàsilicagel60RP-18F s20x20cmcủaMerck.₂₅₄s20x20cmcủaMerck.

- SắckýcộtđượctiếnhànhvớichấthấpphụlàsilicagelphathườngcủaMerckkíchthướcsilic agel60 (40-63 àm),SephadexLH-20 (Sigma–Aldrich,HoaKỳ).

- Sắckílỏngđiềuchế(PreparativeHigh- performanceliquidchromatography)đượctriểnkhaitrênhệthốngShimadzuPrepara tiveHigh-performanceliquid chromatography (LC-20AP pump, đầu dò SPD-M20A PDA, cột HS C18column (cỡhạt 10 μgm, 25 cm x 21,2 mm), tại Phòng Thí Nghiệm Trung Tâm Viện Dược Liệu,BộY Tế.

- Điểm nóng chảy được đo trên máy Buchi B-545 (Thụy sĩ), tại Phòng ThíNghiệmTrungTâmViện Dược Liệu, BộYTế.

- Góc quay cực ([α]]D) được đo trên máy JASCO DIP-1000 KUY polarimeter.tạiViện Hóasinhbiển,ViệnHàn lâmKhoahọcvàCôngnghệViệtNam.

- Phổkhốiphângiảicao(HR-ESI-MS)đượcđotrênmáyAgilent1290LC(Q-TOF) 6530 (Agilent Ted của Mỹ) tại Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa họcvàCôngnghệViệtNam.

- PhổkhốiphunmùđiệntửESI-MSđượcđotrênmáyLC/MS-8045Shimadzu(Nhậtbản) tạiViệnHóaHọc,ViệnHànLâmKhoa HọcViệtNam.

- Phổcộnghưởngtừhạtnhân1D( 1 H-NMR, 13 C-NMR,DEPT)và2D(HSQC,HMBC, COSY, NOESY) được đo trên máy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometervà máy Bruker Avance NEO 600 NMR spectrometers (Thụy sĩ) tại Viện Hoá học,Viện Hàn Lâm Khoa học và Khoa Hóa Học Đại Học Khoa Học Tự Nhiên Đại HọcQuốcGiaHàNội.

- DungmôiđượcsửdụngđểdoNMRlàDMSO-d 6 ,MeOH-d 4,CDCl3vàaceton- d 6,sửdụngTMS làmchấtnộichuẩn.

*Hóa chất, thuốc và dụng cụ dùng trong đánh giá tác dụng chống viêm loét dạdàytátràngtạiTrườngĐHYHàNội

- Nướcmuốisinh lý NaCl0,9%(HD Pharma–ViệtNam).

- MáyđopH,Burette(SIAnalytics(Schott) -Đức).

* Hóa chất, dụng cụ dùng trong đánh giá tác dụng giảm đau tại Trường ĐH YHàNội

* Hóa chất, dụng cụ dùng trong đánh giá độc tính cấp và độc tính bán trườngdiễntạiTrườngĐHYDược- ĐHQGHNvàTrườngĐHYHàNội

- Kít định lượng các enzym và chất chuyển hoá trong máu: ALT (alaninaminotransferase), AST (aspartat aminotransferase), bilirubin toàn phần, albumin,cholesteroltoànphần,vàcreatinin củahãngErba(Đức).

Độngvậtthínghiệm

Chuột nhắt trắng chủngSwiss,cả 2 giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 20 ± 2 gdoviệnVệ sinhdịch tễtrungươngcung cấp.

Chuột cống trắng chủngWistar, cả hai giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 180 – 250gdotrung tâmcung cấpđộngvậtthínghiệmĐanPhượng–HàNộicung cấp. Độngvậtthínghiệmđượcnuôi7ngàytrướckhinghiêncứuvàtrongsuốtthờigian nghiên cứu trong điều kiện phòng thí nghiệm với đầy đủ thức ăn và nước uốngtạiBộmônDượclý-TrườngĐạihọcYHàNội.

Mẫu Xăng xê Giám định tên khoa học

Chiết xuất cao tổng và các cao phân đoạn Đánh giá độc tính cấp Đánh giá TD trên viêm loét dạ dày của cao tổng và các cao phân đoạn Đánh giá TD giảm đau trung ương

Phươngphápnghiên cứu

Đánhgiáđộctínhvàtácdụngsinhhọc

2.2.3.1 Chuẩn bị mẫu thử để đánh giá độc tính cấp, độc tính bán trườngdiễnvàcáctácdụng sinh họckhác

Lá của cây Xăng xê được rửa sạch, thái nhỏ, sấy khô ở điều kiện thường (6,8kg độ ẩm 10%) sau đó tán thành bột thô, chiếtn g â m b ằ n g E t O H 8 0 %

( 3 l ầ n m ỗ i lần3 ngày)ở nhiệt độ phòng Gộpdịchchiết vàtiếnhànhcất thu hồi dungm ô i dướiápsuấtgiảmthuđượccaotoànphần( 5 6 7 g).Mộtphầncaotoànph ần(316g) được tiến hành chiết phân đoạnlỏngl ỏ n g v ớ i c á c d u n g m ô i c ó đ ộ p h â n c ự c tăngd ầ n t ừn- hexan,e t h y l a c e t a t C á c c a o n à y đ ư ợ c s ử d ụ n g c h o v i ệ c p h â n l ậ p cáchợpchất. Bằng phương pháp chiết lỏng lỏng tương tự như trên với 150 g cao toàn phầnthu được các caot ư ơ n g ứ n g C á c c a o đ ư ợ c c ô t ớ i k h ố i l ư ợ n g k h ô n g đ ổ i v à đ e m đo độ ẩm lần lượt là caon-hexan (28,6 g độ ẩm2,3%), ethyl acetat (56,8 g độ ẩm23,0%) và còn lại là cao nước (55,6 g độ ẩm22,8%) Các cao này được dùng đểđánhgiátácdụngsinhhọc.

Từ liều dược liệu thường dùng trên người là 12 g dược liệu khô/ngày/ngườikếthợpvớiđộẩmdượcliệu,hiệusuấtchiết,độẩmcáccaovàhệsốq uiđổitrên chuộtcốnglà5-7,chuộtnhắtlà10-

Bảng 2 1 Các mức liều thử tác dụng sinh học của cao tổng và các cao phânđoạnláXăngxê

DLk hô /n gà y/ ng ười Liềucao Chốngviêmloétdạdàycao toànphầntrênchuộtcống trắng

Từmứcliềucaotổng150mg/kgthểhiệntácdụngtrênviêmloétdạdày,nghiên cứuxâydựngcácmứcliềucaophânđoạnnhưsau:

Chống viêm loétdạdàycaocác phânđ o ạ n t r ê n chuộtcốngtrắng n-hexan 50 ethylacetat 50 nước 100

Tác dụng giảmđau trung ương(cả 2 mô hình)trênchuộtn hắt trắng n-hexan 100 300 ethylacetat 100 300 nước 200 600 Độct í n h b á n t r ư ờ n g d i ễ n c a o ethyla c e t a t t r ê n c h u ộ t c ố n g trắng

2.2.3.2 Phươngphápnghiêncứuđộctínhcấp ĐộctínhcấpcủacácphânđoạndịchchiếtláXăngxêđượcxácđịnhtrênchuộtnhắttrắngtheo đườnguốngbằngphươngphápLitchfield-Wilcoxon[115],[12],theoquyđịnhcủaBộYtế[18].

- Mẫunghiêncứu:Caotoànphầnvàcáccaophânđoạnthuđượcởmục2.2.3.1.Cáccaođược phaởcácmứcnồngđộtăngdần,xácđịnhhàmlượngcaotốiđacóthểpha trong mức thể tích có thể cho chuột uống 1 lần mà chuột vẫn dung nạp được làliều 12 g cao/kg thể trọng chuột Nghiên cứu thử nghiệm với mức liều 12 g/kg thểtrọng chuột Từ kết quả độc tính cấp thu được sẽ tính toán đưa ra các mức liều thửnghiệmtiếp theo.

+ Chuột được chia thành các lô khác nhau (mỗi lô 10 chuột) Cho chuột uốngmẫunghiêncứuvớiliềutốiđatrongthểtíchcóthểchochuộtuốngxácđịnhsốchuộtchếtsauuốn gmẫunghiên cứu.

+ Theo dõi tình trạng chung của chuột, quá trình diễn biến bắt đầu có dấu hiệunhiễmđộc(nhưnôn,cogiật,kíchđộng…)vàsốlượngchuộtchếttrongvòng72giờsau khi uống thuốc Tiến hành xây dựng đồ thị tuyến tính để xác định LD50của mẫunghiêncứu.Sốchuộtsốngtrongcáclôtiếptụctheodõitìnhtrạngcủachuộtđếnhếtngàythứ7s aukhiuốngmẫunghiên cứu.

DựavàonhữngcôngbốcủacáctácgiảtrênthếgiớivàởViệtNamvềtácdụngcủa Xăng xê Hầu hết các công bố đều cho thấy phân đoạn ethyl acetat là phân đoạncó tác dụng mạnh, và có chứa alcaloid, nhóm hợp chất thường có độc tính và phânđoạnethylacetatcũngchothấycótácdụngtrênviêmloétdạdày.Dođó,phânđoạnethylaceta tđược lựachọnđểđánhgiáđộctínhbán trườngdiễn.

Nghiên cứu độc tính bán trường diễn của cao phân đoạn ethyl acetat được tiếnhành trên chuộtcốngtrắng theođườnguống[90],[158],[12]:

- Lôchứng (n):Uốngnướccất10ml/kg/ngày

- Lôtrị1(n):Uốngmẫucaoethylacetatliều50 mg/kg/ngày

- Lôtrị2(n):Uốngmẫucaoethylacetatliều250mg/kg/ngày

- Đánh giá chức năng tạo máu thông qua số lượng hồng cầu, thể tích trung bìnhhồng cầu, hàm lượng hemoglobin, hematocrit, số lượng bạch cầu, công thức bạchcầu vàsốlượng tiểu cầu.

- Đánh giá chức năng gan thông qua định lượng một số chất chuyển hoá trongmáu:Bilirubintoàn phần, albumin vàcholesteroltoànphần.

- Đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan thông qua định lượng hoạt độ enzymtrong máu: ALT,AST.

Các thông số theo dõi được kiểm tra vào trước lúc uống, sau 14 ngày, sau 28ngàyuốngnướccấthoặcthuốcthử.

Mô bệnh học: sau 28 ngày uống mẫu nghiên cứu, chuột được mổ để quan sátđạithểtoànbộcáccơquan.

Kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan, thận của 30% số chuột ở mỗi lô. Cácxét nghiệm vi thể được thực hiện tại Trung tâm Nghiên cứu và Phát hiện sớm Ungthư(doPGS.TS.LêĐìnhRoanhđọckếtquảvithể).

2.2.3.4 Phương pháp nghiên cứu tác dụng chống viêm loét dạ dày bằng môhìnhthắtmôn vịtrênchuộtcốngtrắng(Shay)

Nguyêntắcphépthử:Nghiên cứutheophươngphápgâymôhìnhloétdạdàycủa Shay và cộng sự (1945) bằng cách thắt môn vị trên chuột cống trắng Đây làphương pháp mô phỏng tình trạng tăng tiết acid cũng như làm chậm tháo rỗng dạdàytươngtựbệnhhẹpmônvị,từđógâyloétdạdàytátràng[133].Chuộtcốngtrắngđượcchiangẫ unhiênthành cáclô,mỗilô 10con:

- Lô1 (chứng sinh lý):uốngdung môiphamẫunghiêncứu.

- Lô2 (Lô chứngbệnh):uống dung môipha mẫunghiêncứu.

- Lô3(Chứngdương):Ranitidin50 mg/kg/ngày,uống 1ml/100g.

- Lô4(Mẫucaotoànphần):uốngmẫucaotoànphầnliều50mg/kg,uống1ml/100g.

- Lô5(Mẫucaotoànphần):uốngmẫucaotoànphầnliều150mg/kg,uống1ml/100g.

- Lô6(Mẫucaotoànphần):uốngmẫucaotoànphầnliều450mg/kg,uống1ml/100g.

Chuộtởcáclôđượcuốngnướccất/ranitidin/mẫunghiêncứuliêntụctrongthờigian 7 ngày Chuột để nhịn đói 18-24 giờ nhưng vẫn cho uống nước trước khi gâymôhình.Ngàythứ7củanghiêncứu,sauuốngmẫunghiêncứu2giờcáclôchuộttừlô2đếnlô6đ ượctiếnhànhgâyloétdạdàybằngphươngphápthắtmônvị.Gâymêchuộtbằngcloralhydrat(liề utiêmmàngbụng1ml/100gthểtrọng),mởổbụngbộclộ môn vịdạdày chuột Dùng chỉphẫuthuậtthắtmôn vị(tránhthắtvàođộngmạch tạng), khâu đóng thành bụng Chuột được nhốt vào các chuồng sạch, không có thứcănđượcuốngnước tựdo,6giờsau thắtmônvị,gây mêchuột,mởổbụng,cắtphầndạ dày ra khỏi ổ bụng Dịch dạ dày đem li tâm ở tốc độ 3000 vòng/phút trong 20phút sau đó đo thể tích, lấy phần dịch trong tiến hành xác định độ acid bằng NaOH0,1N Dạ dày được mở dọc theo bờ cong lớn, rửa bằng nước muối sinh lý, thấm bềmặt dạ dày bằng formaldehyd 5%, cố định dạ dày Niêm mạc dạ dày được soi dướikính lúp có độ phóng đại gấp 10 lần để đánh giá mức độ tổn thương Chuột ở các lônghiên cứuđược tiếnhànhđánhgiácácchỉsố sau:

- Tỉ lệ chuột có loét dạ dày ở mỗi lô

- Mức độ tổn thương: Đếm số vết loét và đánh giá mức độ tổn thương theophương pháptínhđiểm [117],[133]:

- Chỉ số loét Uj (UlcerIndex)đượctínhtheocôngthức[69],[133]:

+Us:điểmsố loéttrungbìnhcủa1 lôchuột +Upphầntrămchuộtbịloétcủa1lô chuột

Thôngsốđánhgiálàsốmldịchvịtoànphầntínhtrên100gđộngvậtthínghi ệm(ml/100g) V=Vtp/mx100

+Độacidtựdo:SốmldungdịchNaOH0,1Ntrunghòalượngacidtựdocótrong10ml dịch vị(ml/10ml).

+ Độacidtoànphần:SốmldungdịchNaOH0,1 Ntrung hòalượngacidHCltoànphầncótrong 10mldịchvị(ml/10ml).

 n1:thểtích dungdịch NaOH0,1Ntrung hoàHCltựdo

Xét nghiệm giải phẫu bệnh được đánh giá tại Trung tâm Nghiên cứu và phát hiệnsớm ung thư thuộc Liên hiệp các hội khoa học và kỹ thuật Việt Nam, kết quả doPGS.TS.LêĐìnhRoanhđọc.

Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành các lô, tương tự nghiên cứu ở trên,mỗi lô 10 con Từ mức liều cao toàn phần có tác dụng, tính liều cao phân đoạn đểđánhgiátácdụngcủacáccaophânđoạnnhưsau.

- Lô1 (chứng sinh lý):uốngdung môiphamẫunghiêncứu.

- Lô2 (chứngbệnh):uốngdung môiphamẫunghiên cứu.

- Lô3(chứngdương):Uốngranitidin50mg/kg/ngày,uống1mL/100g

- Lô4(caon-hexan):uống mẫucaon-hexanliều50 mg/kg,uống1mL/100g

- Lô5(caoethylacetat):uốngmẫucaoethylacetatliều50mg/kg,uống1mL/100g

- Lô 6 (caonước): uống mẫu cao nước liều 100 mg/kg, uống 1 mL/100gNghiên cứuvàcáchtínhkếtquảtươngtựnhưtrên.

Nguyên tắc phép thử:Phương pháp đánh giá giảm đau trung ương bằng tấmnóng dựa trên nguyên lý kích thích nhiệt Động vật được sử dụng trong nghiên cứunày được đánh giá đau bằng cách nhốt trong lồng có sàn lồng được làm nóng.Điềunàysẽgâyrađauđớnvàchuộtsẽbắtđầuliếmchânsaucủanórồicốgắngđứng bằngmộtchântronggiâylát.Thửnghiệmđánhgiásựgiatăngkhoảngthờigian chuộtliếm chânsaukhitiêmhoặcchochuộtuốngmẫunghiên cứusovớitrước khidùng mẫu nghiên cứu Nhiệt độ tấm nóng phảiđược duy trì liên tục ở 56 [℃ 159],

[13].Chuộtnhắttrắngđượcchiangẫu nhiênthành10 lô,mỗilô10 con:

- Lô1(chứngsinh lý):uống dungmôiphamẫunghiêncứu20ml/kg/ngày

- Lô2(thuốcchứngdương):uốngcodeinphosphat liều20mg/kg/ngày

- Lô3:uốngcaotoànphầnliều300mg/kg/ngày

- Lô4:uốngcaotoànphầnliều900mg/kg/ngày

- Lô5:uốngcaon-hexanliều100mg/kg/ngày

- Lô6:uốngcaon-hexanliều300mg/kg/ngày

- Lô7:uốngcaoethylacetatliều100mg/kg/ngày

- Lô8:uốngcaoethylacetatliều300mg/kg/ngày

- Lô9:uốngcaonướcliều200mg/kg/ngày

- Lô10:uốngcaonướcliều600mg/kg/ngày

Chuộtcáclôđượcuốngnướccất/chứngdương/mẫunghiêncứumỗingày1lầnvào buổi sáng, với thể tích 20 ml/kg/ngày trong 5 ngày liên tục Đo thời gian phảnứng với nhiệt độ của chuột trước khi uống mẫu nghiên cứu và sau khi uống mẫunghiên cứu lần cuối cùng 1 giờ Đặt chuột lên tấm nóng (Hot plate model-DS37,Ugo-Basile, Ý) luôn duy trì ở nhiệt độ 56℃ bằng hệ thống ổn nhiệt Tính thời giantừlúcđặtchuộtlêntấmnóngđếnkhichuộtliếmchânsau.Loạibỏnhữngchuộtphảnứng quá nhanh (trước 8 giây) hoặc quá chậm (sau 30 giây) So sánh thời gian phảnứngvớikíchthíchnhiệttrướcvàsaukhiuốngmẫunghiêncứu[73],[159].

Nguyên tắc phép thử:Phương pháp đánh giá giảm đau bằng máy đo ngưỡngđausửdụngcáckíchthíchphotonđiện.Khichodòngđiệnchạyquasànmáy,chuộtsẽ cố gắng trốn thoát hoặc nhảy khỏi đó Sau đó tiêm hoặc cho chuột uống mẫunghiên cứu để đánh giá sự gia tăng khoảng thời gian chuột cố nhảy khỏi máy hoặctìmcáchtrốn[159].

Chuột nhắt trắng được chia ngẫu nhiên thành 10 lô, tương tự nghiên cứu trên,mỗil ô 1 0 c o n C h u ộ t c á c l ô đ ư ợ c u ố n g d u n g m ô i p h a m ẫ u n g h i ê n c ứ u / c h ứ n g dương/mẫu nghiên cứu mỗi ngày 1 lần vào buổi sáng, với thể tích 20 ml/kg/ngàytrong 5 ngày liên tục Đo thời gian phản ứng với đau của chuột và lực gây đau đốivới chuột (máy đo phản ứng đau Dynamic Plantar Aesthesiometer

Basile,Ý)trướckhiuốngmẫunghiêncứuvàsaukhiuốngthuốcthửlầncuốicùng1giờ.So sánhlựcgâyđauvàthờigianphản ứngvớikíchthíchđautrướcvàsaukhiuốngmẫunghiêncứu[201],[163].

Phươngphápxửlýsốliệu

Cácsốliệutrongnghiêncứutácdụnggiảmđau,độctínhbántrườngdiễnđượctrình bày dưới dạng trung bình ± S.D Các số liệu nghiên cứu trước và sau khi uốngdung môi pha mẫu nghiên cứu/chứng dương/mẫu nghiên cứu của cùng một lô đượcxửlýthốngkêtheot-testghépcặp(paired-samplet– test).Sosánhgiữalôchứngsinhlývàcáclô uống chứngdương/mẫunghiêncứu sửdụng t-test- Student.

Các số liệu trong nghiên cứu tác dụng chống viêm loét dạ dày: số liệu về tỷ lệchuột có loét và mức độ nặng của loét sử dụng test khi bình phương để so sánh cáctỷlệquansátgiữacácnhóm.Ảnhhưởngcủamẫunghiêncứuđếnđiểmsốloéttrungbình, chỉ số loét, thể tích dịch vị, độ acid tự do, độ acid toàn phần và pH được phântíchbằngphươngphápsosánhphươngsaimộtnhântố(One-wayANOVA,sửdụnghậu kiểmLSD testđểsosánhgiátrịtrungbìnhcủalô thửso vớilôchứng).

Đặcđiểmthựcvật cây Xăngxê

ĐặcđiểmhìnhtháicâyXăngxê

Cây bụi nhỏ, cao khoảng 1 m, thân màu vàng xanh, thân non tiết diện 4 cạnh.Lá đơn mọc đối chéo chữ thập; cuống lá dài khoảng 2-3 cm, hơi lõm, màu hơi đỏtím;phiếnláhìnhmác,dài15-25cm,rộng8-12cm,nhẵn,gốcvàngọnlánhọn,méplá hơi lượn sóng; hệ gân lông chim, với các gân nổi rõ ở mặt dưới lá và có màu, gângiữacógốcmàuđỏtím,gânbênmàutrắngvàng.Hoamọcthànhcụmhoabônggồm6-10 bông nhỏ ở ngọn Ở mỗi mấu của cụm hoa có 2 lá bắc mọc đối diện, ôm lấy 1cụm có nhiều hoa Hoa đều, lưỡng tính, màu vàng, Cuống gần như không có. Đàinhiều,rời,hìnhvảy.Trànghànliềnthànhống,phíatrênchialàm5thùy.Nhị4,màuvàng, trong đó có 2 nhị phát triển và 2 nhị tiêu giảm thành 2 sợi nhỏ ở gốc đế hoa;chỉnhịdài,baophấn2ô,nứtdọc,cảchỉnhịvàbaophấnđềucócáclôngmịnvàdàithành sợi,màu trắng.Bầu trên,2 lánoãnhànliềnthànhbầu1ô,đínhnoãntrungtâm.Câythườngrahoa,quảvàokhoảngtừtháng5đến7hàngnăm.

Hình3.2.Đặcđiểmcơ quansinhdưỡng cây Xăng xê

Kếtquảgiámđịnhtênkhoahọc

Phân tích đặc điểm hình thái của thân, lá, hoa; quan sát đặc điểm giải phẫu củacácbộphậntrên,cósựsosánhvàđốichiếuvớikhóaphânloạithựcvậtcủaSancheziatrong tài liệu [3],

[5], [61] xác định mẫu tiêu bản số DL-150118 (ngày 15/01/2018)thuháitạiTTCổLễ,huyệnTrựcNinh,tỉnhNamĐịnhlàloàiS a n c h e z i a nobilis

Hook.f (Xăng xê), họ Acanthaceae (họ Ô Rô) Mẫu nghiên cứu được giám định bởiThS.NguyễnQuỳnhNga,ViệnDượcliệu(PhiếuGiámđịnhngày28-03-2018-Phụlục1).

Kếtquả nghiên cứuvềthành phần hóahọc

Kếtquảchiếtxuấtvàphânlậpcáchợpchất

Lá của cây Xăng xê được rửa sạch, thái nhỏ, sấy khô ở điều kiện thường (6,8kg)sauđótánthànhbộtthô,chiếtngâmbằngEtOH80%(3lầnx3ngày,mỗilần30L, 25 L, 20 L) ở nhiệt độ phòng Gộp dịch chiết và tiến hành cất thu hồi dung môidướiápsuấtgiảmthuđược567gcaotoànphần.Lấy316gcaotoànphầnđượcphântán trong nước cất, và chiết lần lượt với dung môi có độ phân cực tăng dần từn-hexan,ethylacetat,thuđượclầnlượtcáccaon- hexan(60g),ethylacetat(121g)cònlại là cao nước (119 g) Một phần cao toàn phần 150 g được chiết phân đoạn tươngtựnhưtrênđểthửhoạttínhsinhhọc.Quakếtquảnghiêncứutácdụngdượclý,phânđoạnn- hexan và ethyl acetat có tác dụng trên viêm loét dạ dày Nghiên cứu đã thựchiệnphân lậpvàxácđịnhcấutrúctừ2phânđoạnnày.

63àm).Mẫuđượcđưalờncộttheophươngphỏptẩmmẫutrờnsilicagel Rửa giải sắc ký vớin-hexan và hệ dung môi gradientn-hexan/ethyl acetat vớicác tỷ lệ 100:1, 20:1, 10:1, 9:1, 4:1, 3:1 và 2:1 (v/v) được 300 phân đoạn, mỗi phânđoạn 15 ml Các phân đoạn có sắc ký đồ TLC giống nhau được gộp lại và cất loạidung môi dưới áp suất giảm cho 9 nhóm phân đoạnH1(1-29),H2(30-49),H3(50-79),H4(80-125),H5(126-150),H6(151-

(260-300) Nhóm phân đoạnH2(1,02 g) được tinh chế bằng silica gel pha thường(Merck,40-63àm)rửagiảibằngn-hexan,sauđúrửavớihệdungmụin-hexan/ aceton (20/1, v/v), kết tinh lại trong aceton cho các tinh thể hình kim màutrắngSXH1(30mg) vàSXH2(15mg).

NhúmphõnđoạnH4(1,11g)đượctinhchếbằngsilicagelphathường(Merck,40-63 àm), phõn tách bằng hệ dung môin-hexan/EtOAc (3/1, v/v) cho tinh thể hìnhkimmàu trắngSXH3(15mg).

63àm)vớihệdungmụiCH2Cl2/MeOH(10/1,v/v).QuaphõntớchTLCcỏcphõn đoạn được gộp thành 3 nhóm phân đoạn từH5.1đếnH5.3 Nhóm phân đoạnH5.2được tinh chế bằng silica gel pha thường (Merck, 40-63 àm) với hệ dung môi n-hexan/aceton (20/1-9/1, v/v), thu được hai phân đoạnH5.2.1vàH5.2.2.

Phân đoạnH5.2.1(0,25 g) được rửa với aceton, sau đó kết tinh lại với trong hỗn hợp dung môiCH2Cl2/MeOH (100/1,v/v)thu đượcchấtrắn màutrắngSXH4(15 mg).

Nhóm phân đoạnH8(2,11 g) được tinh chế trên silica gel pha thường (Merck,40-63 àm) với hệ dung mụi CH2Cl2/MeOH (6/1, v/v), sau khi loại màu và kết tinhlạithuđượcchấtrắnmàutrắngSXH6(27mg) vàSXH7(19mg).

Phầncaochiếtethylacetatđượchòatanbằngacidtartric2%(1,0L)đếnpH1-2, tiếp tục được lọc qua phễu lọc bucher, thu được dịch lọc (phân đoạn alcaloid) vàphần cao còn lạiE2(101 g) Dịch lọc acid lắc với ethyl acetat để loại tạp, sau đóđược điều chỉnh đến pH 10 với dung dịch bão hòa Na2CO3, tiếp tục lắc với CH2Cl2,gộp các dịch chiết với CH2Cl2, lắc với nước để loại bỏ kiềm dư, sau đó loại bỏ dungmôidướiápsuấtgiảmthuđượccắnalcaloidtoànphầnE1(20g).TinhchếphầncaoE1(20g) bằngphươngphỏpsắckớcộtphathườngsilicagel(Merck,40-63àm),vớihệdungmụiCH2Cl2/ MeOH(100/1-20/1,v/v)thuđượccácphânđoạnchínhtừE1.1-E1.4 Phân đoạnE1.1(1,5 g) được tiến hành tinh chế bằng phương pháp sắc kí cộtphathườngsilicagel(Merck,40- 63àm),vớihệdungmụiCH2Cl2/MeOH/NH3(4/6/1,v/v/ v)thuđượchợpchấtSXE8(15mg).SửdụngphươngpháptinhchếtươngtựvớiphânđoạnE1.2(1,0 g)thuđượchợpchấtSXE9(12mg).

Phần caoE2(101 g) thu được tiếp tục phân đoạn bằng phương pháp sắc kí cộtsilica gel pha thường (Merck, 40-63 àm) với hệ dung mụi tăng dần độ phõn cựcCH2Cl2/MeOH/H2O(4/1/0- 2/2/1,v/v/v)thuđượclầnlượt5phânđoạnchínhtừE2.1-

E2.5.PhõnđoạnE2.1(5,0g)đượctinhchếbằngcỏchsửdụngsilicagelphathường(Merck, 40-63 àm) hệ dung môi CH2Cl2/MeOH (9/1 đến 3/1, v/v) thu được phânđoạnE2.1.1(2,0 g), tiến hành tinh chế tiếp tục bằng sắc kí cột pha thường với hệdungmôiCH2Cl2/MeOH(9/1,v/v)thuđượchợpchấtSXE10(10mg)vàphânđoạnE2.1.1.2(0,2 g) Phân đoạnE2.2(2,0 g) được tinh chế bằng phương pháp sắc kí cộtnhanh sử dụng silica gel (Merck, 40-63 àm) với hệ dung mụi CH2Cl2/MeOH(9/1,v/v)thuđượcthêmlượnghợpchấtSXE10(30 mg).

Phân đoạnE2.3(4,0 g) tinh chế qua silica gel pha thường (Merck, 40-63 àm)vớihệdungmụigradientCH2Cl2/MeOHtừ100%CH2Cl2đến9/1(v/v)thuđượclầnlượtbah ợpchấtlần lượtlàSXE11(8mg),SXE12(10mg)vàSXE13(14mg).

Phân đoạnE2.4(2,0 g) được tinh chế bằng silica gel pha thường (Merck, 40- 63àm)vớihệdungmụigradientCH2Cl2/MeOH(4/1-1/1,v/v)thuđượccỏcđoạntừE2.4.1-

E2.4.8 Phân đoạnE2.4.1(0,5 g) được loại màu qua sephadex LH-20 vớidung môi

MeOH và tiếp tục tinh chế bằng sắc kí cột pha đảo YMC RP-18, với hệdung môi MeOH/H2O (9/1-4/1, v/v) thu được hợp chấtSXE14(8 mg) vàSXE15(9mg).PhânđoạnE2.4.6(0,3g)đượcloạimàubằngcáchquacộtsephadexLH-

18vớihệdungmôiMeOH/H2O(9/1-2/1,v/v)thuđượchợpchấtSXE16(9,1mg)vàSXE17(12 mg).

Phân đoạnE2.4.8(0,25 g) được loại màu qua sephadex LH-20 với dungmôiMeOH,tiếnhànhtinhchếbằngYMCRP-18,vớihệdungmôiMeOH/H2O(9/1-4/1,v/ v)thu đượchaihợpchấtSXE18(30mg)vàSXE19(7 mg).

Phân đoạnE2.5(3,0 g) được loại màu qua sephadex LH-20, sau đó sử dụngsắckícộtphađảoYMCRP-18vớihệdungmôiMeOH/H2O(3/1-1/1,v/v)thuđượchợpchấ tSXE20(16mg)vàhaiphânđoạnE2.5.2vàE2.5.3.PhânđoạnE2.5.3(0,18g) được tinh chế lần lượt qua sephadex LH-20 và HPLC điều chế (LC-20AP pump,đầu dò SPD-M20A PDA, cột HS C18column, cỡ hạt 10 μgm, 25 cm x 21,2 mm), vớihệdungmôiphađộngCH3CN/

H2Otăngdầnđộphâncựctừ10%đến40%CH3CN,tốc độ dòng 8 ml/phút thu được hợp chấtSXE22(30 mg) tương ứng với thời gianlưu20,3phúttrên sắckíđồ.

Dược liệu (Xăng xê) 6,8 kg

Chiết ngâm với EtOH 80%, 3 lần x 3 ngày, ở nhiệt độ phòng

Thu hồi dung môi dưới áp suất giảm

Lấy 316 g phân tán trong nước cất Chiết lỏng lỏng với n-hexan

Thu hồi n-hexan dưới áp suất giảm

Chiết lỏng lỏng với EtOAc Thu hồi EtOAc dưới áp suất giảm

Cô cạn nước Cao chiết EtOAc (121 g)

Cao nước (119 g)Hình3.4.Sơ đồ chiếtxuấtphânđoạn lácâyXăngxê

Silica gel 40-63 àm (CH 2 Cl 2 :MeOH , 6/1)

Silica gel 40-63 àm(n- hexan:aceton,20/1),

Silica gel 40-63 àm(n- hexan:EtOAc,3/1)

Silica gel 40-63 μgm(CHCl:MeOH, 10/1) kếttinhaceton 22

Rửa aceton, kết tinh lại(CH 2 Cl 2 :MeOH,100/1 )

Hình3.5.Sơđồphânlập cáchợp chấtphần cao n -hexan

Dịchlọc 1 Na 2 ChiếtvớiDCM 2 CO 3 pH10

Silicagel40-63 μgm( CH 2 Cl 2 :MeOH,100/1-20/1))

Silica gel 40-63 μgm(CH 2 Cl 2 :MeOH:NH 3, 4/6

Silica gel 40-63 μgm( CH 2 Cl 2 :MeOH:NH 3 (4/6 /1)

Silica gel 40-63 μgmCH 2 Cl 2 :MeOH(9/1-

Silica gel 40-63 μgmCH 2 Cl 2 :MeOH(9 /1)

Silica gel 40-63 μgm CH 2 Cl 2 :MeOH(100%-9/1)

Sephadex LH-20 (MeOH), YMCRP-18,CH 2 Cl 2 :MeOH( 3 / 1 -

Silica gel 40-63 μgmCH 2 Cl 2 :MeOH(9

Sephadex LH- 20,MeOH), P.HPLC(CH 3 CN/H 2

Sephadex LH-20 (MeOH), YMC RP- 18,MeOH:H 2 O(9/1-4/1)

SephadexLH- 20(MeOH),YMC RP-18, MeOH:H 2 O(9/1-4/1)

Sephadex LH-20 (MeOH), YMCRP- 18MeOH:H 2 O( 9 / 1 - 2 / 1 )

Hình3.7.Sơđồphânlập cáchợp chấtcủacaoethylacetat(E2)saukhiloạiphầnalcaloid(E1)

Xácđịnh cấutrúccáchợp chấtphân lậpđược

HợpchấtSXH1kếttinhdướidạngtinhthểmàutrắng,nhiệtđộnóngchảy231-233°C Phổ khối ESI-MS của hợp chất xuất hiện pic ion giả phân tửm/z413,3 [M +H] + ,k ế t hợpvớiphổ 13 C- NMRchothấyhợpchấtSXH1phùhợpvớicôngthứcphântửC29H48O(M= 412,4).

Trên phổ 1 H-NMR (Bảng 3.1) của hợp chấtSXH1cho thấy sự xuất hiện cấutrúc một steroid với các tín hiệu proton đặc trưng của 6 nhóm methyl ởδ H0,59 (3H,s);0,81(2x3H,s);0,82(3H,s);1,05(3H, d,J=6,5Hz);0,87(3H,d,J=6,0Hz).

Một nối đôi thế ba lần ởδ H5 , 1 7 ( 1 H , b r s ) , m ộ t n ố i đ ô i k h á c c h o h i ệ u ứ n g m á i n h àởδ H5, 2 2 (1H, dd,J=8,5; 15,0 Hz)vàδ H5, 0 9 (1H,dd,J= 8,5;15,0Hz).Trênphổ

13C-NMR (Bảng 3.1) của hợp chấtSXH1cho thấy sự xuất hiện của các tín hiệucarbon nối đôi tạiδ C118,2; 140,2; 139,2 và 130,3, từ các dữ kiện trên cho thấy sựxuất hiện của một khung stigmast-7(22)-dien, sự dịch chuyển về phía trường thấpcủatínhiệuprotonoxygenatedởvịtríC-3(δ H3,49vàδ C70,7)chothấysựxuấthiệncủa carbon có liên kết với nhóm chức hydroxyl Trên cơ sở của các phân tích phổNMR,kếthợpvớitàiliệuthamkhảo[16]cấu trúccủahợp chấtSXH1đượcxácđịnhlà(3β,5α,22E)-stigmasta-7,22-dien-3-olhayα- spinasterol(Hình3.8).

Bảng3.1.Dữliệuphổ 1 Hvà 13 C NMR của hợpchấtSXH1vàchấtthamkhảo

29 12,6 12,2 0,81(3H,t;5,5) 0,81(3H,t;6,0) a aceton-d 6 ,b125MHz,c500MHz,a*CDCl 3 ,125MHz,b*CDCl 3 500MHz

Hình3.8.Cấu trúc hóahọccủahợp chấtSXH1

HợpchấtSXH2thuđượcdướidạngchấtbộtmàutrắng,cónhiệtđộnóngchảyở 272-274 ℃Phổ 1 H-NMR (Bảng 3.2) của hợp chấtSXH2chỉ ra hợp chất này làmột steroid với các tín hiệu đặc trưng như là sự có mặt của 6 nhóm methyl trongphân tửbaogồm2nhómbậc3ởδ H0 , 7 2 ;1,16;3nhómmethyl bậc2 ởδ H0,93(d,J

=6,5Hz);0,83;0,81vàmộtmethylbậc1ởδ H0,84(d,J=7,6),thêmvàođósựxuấthiệncủatínhiệunối đôiởδ H6,02đặctrưngchonốiđôiliênkếtvớihainhómcarbonbậc 4 ởδ C202,0 và 199,1 Kết hợp với phổ13C-NMR (Bảng 3.2) và phổ DEPT tathấycó29tínhiệucarbon,trongđócó6nhómCH3,10nhómCH2,8nhómCHvà3carbon bậc 4 trong đó có 2 carbon không liên kết hydro thuộc nhóm carbonyl ởδ C202,0 và δ C199,1 Đặc biệt trên phổ13C- NMR còn thấy xuất hiện các tín hiệu ởδ C160,0; 202,0; 125,0 và 199,1 cho phép dự đoán về sự có mặt của khung stigmast-4-ene-3,6-dion Từ các kết quả nêu trên so sánh với dữ liệu phổ đã công bố [214] hợpchấtSXH2đượcxácđịnhlàstigmast-4-ene-3,6-dion(Hình3.9).

Bảng3.2.Dữliệuphổ 1 Hvà 13 C NMR của hợpchấtSXH2vàchấtthamkhảo

29 11,9 12,0 0,92(3H,d;8,0) 0,85(3H,d;7,6) a CDCl 3 ,b125MHz,c500MHz,a*125 MHz, CDCl 3 ,b*500MHz, CDCl 3

Hình3.9.Cấu trúc hóahọccủahợp chấtSXH2

Hợp chấtSXH3thu được là chất rắn màu vàng nhạt Phổ 1 H-NMR (Bảng

= 9,5 Hz) Hai tín hiệu proton singlet ởH6,79 (1H, s) vàδ H7,18 (1H, s) là của mộtvòngbenzenbốnlầnthế.Thêmvàođó,sựcómặtcủanhómmethoxytrênvòngthơmthểhiệnquatí nhiệuprotonsingletxuấthiệnởH3,90(3H,s,6-OCH3).Kếthợpvớiphổ 13 C-

NMR(Bảng3.3)vàDEPTchỉrasựxuấthiệncủa10tínhiệucarbon,trongđó có 4 nhóm CH, 1 nhóm

CH3, 1 nhóm C=O lacton, và 4 carbon bậc 4 (không cóliên kết với hydro) Từ các dữ kiện trên cho thấy xuất hiện các hiệu đặc trưng củamộtd ẫ n x u ấ t 6 ,7 -di ox y- b en z op y ro ne ( c o u m a ri n ) So s á n h v ớ i t à i l i ệ u t h a m k h ả o

[217] hợp chấtSXH3được khẳng định là (7-hydroxy-6-methoxy coumarin) hayscopoletin (Hình3.10).

Bảng3.3.Dữliệuphổ 1 Hvà 13 C NMR của hợpchấtSXH3vàchấtthamkhảo

6-OCH3 56,7 55,8 3,90(3H,s) 3,88(3H,s) a aceton-d 6 ,b125MHz,c500MHz,a*125MHz,CDCl 3 ,b*500MHz,CDCl 3

Hình3.10.Cấu trúchóa họccủahợp chấtSXH3

Hợp chấtSXH4thu được kết tinh dưới dạng tinh thể hình kim, không màu,nhiệt độ nóng chảy 151-152℃, kết tinh lại trong hệ dung môi CH2Cl2/aceton (10:1,v/v) Phổ ESI-MS cho pic ion giả phân tửm/z455,0 [M + H] + , cùng với 30 tín hiệucarbon trên phổ 13 C-NMR cho thấy hợp chấtSXH4phù hợp với công thức phân tửC30H46O3( M= 454,3).

Trên phổ 1 H-NMR (Bảng 3.4) của hợp chấtSXH4cho các tín hiệu cộng hưởngcủa 7 nhóm methyl trong đó 5 nhóm methyl bậc 4, một nhóm methyl bậc 2 và mộtnhóm methyl liên kết với nối đôi đầu mạch, hai nhóm methin ởδ H6,08 (1H, td,J=4,2; 7,8 Hz) và 5,29 (1H, d,J= 6,0 Hz) Phổ 13 C-NMR (Bảng 3.4) của hợp chấtSXH3chỉrasựcómặtcủahaitínhiệucarboncarbonylởδ C217,3và172,6.Cáctínhiệutrênc hophépdựđoánsựcómặtcủakhungcấutrúc3-oxo- tetracyclictriterpenoidcủahợpchấtSXH4.Ngoàira,mộttínhiệuprotonolefinicởδ H6,08(1H,td,J

=4,2;7,8Hz)vàprotonmethylởδ H0,91(3H,d,J=6,0Hz)chophépdựđoánvềsựcómặtcủacấut rúcnhánhCH(Me)CH2CH2CH=C(Me)COOH.Điềunàyđượckhẳngđịnhquatínhiệum/ z312,9[M-C8H13O2]₋trênphổESI-MS.Cácvịtrícarbonvà protoncònlạiđượcquykếtnhờvàosựphântíchtươngtácgiữacác phổHSQC,

COSY và HMBC Trên phổ HMBC chỉ ra các tương tác giữa H-2 (δ H2,66) với C- 3(δ C217,3),H-29(δ H1,23)vớiC-3(δ C217,3)chophéptakhẳngđịnhvịtrícủanhómcarbonyl và hai nhóm methyl, ngoài ra tương tác giữa H-12 (δ H5,12) với C-14 (δ C47,7),H-24(δ H6,08)vớiC-26(δ C172,6),H- 27(δ H1,92)vớiC-26(δ C172,6).Thêm vào đó, sự chuyển dich của proton olefinic ởδ H6,08 (1H, td, 1,2; 7,3 Hz) và sựchuyểndịchvềtrườngcaocủanhómmethylsingletởδ H1,93vàδ C20,6chodựđoánvề cấu hìnhEcủa liên kết đôi và nhóm carbonyl còn lại giữa C-24 và C-25 dựa vàocácdữliệuthamkhảo[186],[206].PhổCOSYcủahợpchất3chỉratươngtácchínhgiữaH- 23(δ H1,90)vớiH-24(δ H6 , 0 8 ) ,H-12(δ H5 , 2 9 )vớiH-11(δ H2,1).Từcác phân tích trên cùng với tham khảo tài liệu [206] cho phép kết luận về cấu trúc củahợp chấtSXH4là 3-oxolanosta-11,24-dien-26-oic acid (heilaohuacid F) hay acidcoccinic(Hình 3.11).

Bảng3.4.Dữliệuphổ 1 Hvà 13 C NMR của hợpchấtSXH4

30 18,4 18,4 0,74(3H,s) a CDCl 3 ,b150MHz,c600 MHz,a*CDCl 3 ,150MHz

Hình3.11.Cấu trúchóa họccủahợp chấtSXH4

Hợp chấtSXH6thu được kết tinh lại trong hệ dung môi dichlomethan/aceton(20:1, v/v) dưới dạng tinh thể hình kim không màu, hiện màu vàng cam với thuốcthử H2SO410% Không xuất hiện UV ở bước sóng 254 nm Phổ ESI-MS cho thấyxuất hiện pic ion giả phân tửm/z457,0 [M + H] + , kết hợp với phổ 13 C-NMR ta thấyxuất hiện 30 tín hiệu carbon, cho thấySXH6phù hợp với công thức phân tử làC30H48O3(ME6,4).

Phổ 1 H-NMR(Bảng3.5)củahợpchấtSXH6chotínhiệucộnghưởngcủamộtcarbinolic proton vị trí axial định hướngαởδ H3,19 (1H, dd,J= 4,8; 12,0 Hz), haitínhiệuprotonnốiđôiđầumạchởδ H4,74(1H,d,J=1,8Hz)và4,60(1H,d,J=1,8Hz),sáutínhiệu protonmethylởδ H0,98(3H,s);0,97(3H,s);0,82(3H,s)0,75(3H,s); 1,03 (3H, s) và 1,69 (3H, s) cho chúng ta một giả thiết về một hợp chất lupan-triterpenoidcủahợpchấtSXH6.Kếthợpvớiphổ 13 C- NMR(Bảng3.5)vàDEPTchỉrasựcómặtcủa30Cvớihaitínhiệuđặctrưngcủacarboncarbonyl ởδ C179,3,mộtnhóm olefinic ởδ C109,7, một carbon methin tại δ C79,0 cùng với 6 tín hiệu củacarbonmethyltạiδ C2 8 , 0 ;16,1;16,2;15,4;14,7và19,4.Ngoàiratrênphổcònchỉ ra sự có mặt của 10 nhóm methylen, 5 nhóm methin và 5 carbon không liên kết vớihydro Hai carbon lai hóa sp2ởδ C150,4; 109,7 đặc trưng cho sự có mặt của mộttriterpen khung lupan Từ những phân tích ở trên cùng với việc so sánh với các tàiliệuđãđượccôngbố [151]chophépkhẳngđịnhhợpchấtSXH6làacid3β-hydroxy-lup- 20(29)-en-28-oichayacidbetulinic(Hình3.12).

Bảng3.5.Dữliệuphổ 1 Hvà 13 C-NMR của hợpchấtSXH6vàchấtthamkhảo

30 19,4 19,5 1,69(3H,s) a CDCl 3 ,b125 MHz,c600MHz,a*CDCl 3 , 125MHz

Hình3.12.Cấu trúchóa họccủahợp chấtSXH6

HợpchấtSXH7làchấtrắn,màutrắng,nhiệtđộnóngchảy284-286 o C.Phổ 1 H-NMR (Bảng

3.6) có tín hiệu cộng hưởng của 6 nhóm methyl trong đó có 2 tín hiệusinglet tạiH0,70 (3H, s) và 1,08 ppm (3H, s), 3 tín hiệu doublet tạiH0,96 (3H, d,J= 6,5 Hz),δ H0,85 (3H, d,J= 7,5 Hz),δ H0,92 (3H, d,J= 7,5 Hz), và một tín hiệutriplettạiH0,84ppm(3H,t,J=7,5Hz).Vàmộttínhiệucộnghưởngđặctrưngcủamột proton anken tạiH5,4 (1H, brs) Sự xuất hiệu của proton anomeric ởδ H4,40(1H, d,J= 7,6 Hz) chỉ ra sự xuất hiện của đườngβ, ngoài ra sự xuất hiện của cácprotonoxymethinđặctrưng cho mộtphân tửđường xuấthiện từH3,23-3,65.

Phổ 13 C-NMR (Bảng 3.6) và DEPT củaSXH7cho thấy tín hiệu cộng hưởngcủa

7 nhóm carbon methin, 11 nhóm carbon methylen, 6 nhóm carbon methyl và2nhóm carbon bậc bốn, trong đó có một liên kết đôi tạiC122,1 và 141,7 Đặc biệtcáccarbonoxymetincủaphântửđườngtạiC75,8;79,4;73,6;77,3;61,9vàcarbonanomeric tạiC101,2 cho phép ta kết luận về sự có mặt của đườngβ-glucose trongphântử,ngoàiracònmộtnhómoxymetinkháctạiC77,5.Sựtươngđồngvềsốliệuphổcủaph ầnaglyconcủaSXH7vớisựtrùngkhớpvềR fvới chấtchuẩndaucosterol.Từcáckếtquảnêutrênsosá nhvớidữliệuphổđãcôngbố[216]phùhợpchấtSXH7đượcxácđịnh là:sitosterol-3-O-β- glucopyranosidhay daucosterol(Hình3.13).

Bảng3.6.Dữliệuphổ 1 Hvà 13 C-NMR của hợpchấtSXH7vàchấtthamkhảo

3,85(1H,dd;11,0;3,3) a CDCl 3 ,b 125MHz,c500M H z , a * CDCl 3 ,1 2 5 M H z , b * CDCl 3 ,5 0 0 M H z

Hình3.13.Cấu trúchóa họccủahợp chấtSXH7

Hợp chấtSXE8thu được dưới dạng bột màu trắng Hiện màu vàng cam trênthuốcthửDragendorff.Giátrịgócquaycực[α]]D 25 =+55,8(c= 0,50,MeOH).

Phổ 1 H-NMR(Bảng3.7)củahợpchấtSXE8chỉracáctínhiệuđặctrưngcủa1 proton olefinic ởδ H5,70 (1H, d,J= 5,2 Hz), một nhóm methyl bậc hai tạiδ H1,05(3H,d,J=7,0Hz),mộttínhiệumethinởδ H2,72(1H,d,J=7,5Hz).Cáctínhiệuởδ H3,13- 2,97(m,4H);2,32-2,23(m,2H);2,17-2,08(m,3H);1,80-1,33(m,3H);

Phân tích phổ 13 C-NMR (Bảng 3.7) và phổ DEPT của hợp chấtSXE8chothấy xuất hiện 16 tín hiệu carbon trong đó có 1 nhóm CH3ởδ C21,1; 8 nhóm CH2, 5nhóm

CH và hai nhóm carbon không liên kết với hydro Thêm vào đó sự xuất hiệncủa một nhóm carbonyl tạiδ C218,0

(C=O) và hai carbon olefinic tạiδ C145,0 và127,1.Cùngvớihainhómcarbongắnvớidịtốchuyểndịchvềtrườngthấpởδ C60,3vàδ C56, 2.

Từ các dữ kiện trên cùng với sự xuất hiện màu vàng cam trên thuốc thửDragendoffchophépdựđoánvềsựxuấthiệncủadẫnxuấtchứadịtốnitơtrongphântử Kết hợp với các tài liệu tham khảo [89], có thể khẳng định cấu trúc của hợp chấtSXE8là(+)- fawcettidin(Hình3.14).

Bảng3.7.Dữliệuphổ 1 Hvà 13 C-NMR củahợpchấtSXE8vàchấtthamkhảo

16 21,1 20,8 1,05(3H,d;7,0) 1,04(3H,d;7,0) a CDCl3,b125MHz,c500MHz,a * CDCl 3 , 125 MHz, b* CDCl 3 , 500 MHz

Hình3.14.Cấu trúchóa họccủahợp chấtSXE8

Hợp chấtSXE9thu được dưới dạng chất rắn vô định hình không màu Hiện màuvàng cam trên thuốc thử Dragendorff Giá trị góc quay cực [α]] 25 = + 71,3 (c 0,60,MeOH).

PhổHR-ESI-MSxuấthiệnpiciongiảphântửtạim/z306,2058[M+H] + ,vìthếkhối lượng phân tử củaSXE9là M = 305,1991, dựa vào khối lượng có thể dự đoántrong cấu trúc có chứa dị tố nitơ, từ các dữ kiện trên kết hợp với phổ 13 C-NMR chophép ta có thể dự đoán hợp chấtSXE9phù hợp với công thức phân tử C18H27NO3(M05,1991).Phổ 1 H- NMR(Bảng3.8)củahợpchấtSXE9chothấysựxuấthiệntín hiệu của nhóm methyl ởδ H0,99 (3H, d,J= 6,5) và một tín hiệu methyl singlet ởδ H1,97 (3H, s) Kết hợp giữa phổ13C- NMR (Bảng 3.8) và phổ HSQC cho thấy sựxuất hiện của 2 nhóm CH3, 3 nhóm CH,

9 nhóm CH2, 2 carbon không chứa hydro,trong đó một tín hiệu carbon chuyển dịch về trường thấp ởδ C94,7 và hai nhómcarbonyl ởδ C216,4 vàδ C180,0 Dựa vào số liên kết pi trong phân tử (n = 6), ngoạitrừ 2 liên kết đôi ở nhóm C=O, có thể giả thiết phân tửSXE9có chứa số vòng liênkết là 4 Từ các dữ kiện phổ trên có thể dự đoán hợp chấtSXE9là dẫn xuất củafawcettimin[212],[119],[97]cócấutrúcnhưsau(Hình3.15):

Hình3.15.Dự đoánsơ bộ cấutrúccủahợpchấtSXE9

Thêm vào đó, trên phổ HMBC chỉ ra tương tác giữa proton của nhóm methylở H-16 (δ H0,99) với C-15 (δ C23,6), chứng tỏ nhóm methyl được gắn vào vị trí C-15, nhóm methyl ở H-17 (δ H1,97) tương tác với với carbonyl ở C-17 (δ C180,0) vàsựchuyểndịchvềphíatrườngthấpcủaC-13(δ C94,7) chứngtỏnhómacetoxyđượcgắn ở vị trí C-

13 của khung fawcettimin Ngoài ra các tương tác HMBC giữa H-1(δ H3,44)/H-4 (δ H2,04)/H-14 (δ H1,86) với

C-13 (δ C 94,7) chứng tỏ được các vị tríliênkếtcủakhungfawcettimin.ThêmvàođótươngtácHMBCcủaH-4(δ H2,04)/H-

5.TươngtácHMBCgiữaH-11(δ H2,19;2,07)/H-6(δ H2,15)/H-14(δ H2,2)vớiC-12 (δ C47,2) xác định được vị trí của C-12 trong cấu trúc Phổ COSY chỉ ra tươngtác giữa H-9 (δ H3,89; 2,86)/H-11 (δ H2,19) với H-10 (δ H1,91), tương tác giữa H-1(δ H3 , 4 4 ) / H -

3(δ H2 , 2 2 ;1,57)vớiH-2(δ H2 , 2 2 ;1,86),tươngtácgiữaH-3(δ H2 , 2 2 ) với H-4 (δ H2,04), giữa H-6 (δ H2,63; 2,15)/H-8 (δ H1,7) với H-7 (δ H2,07) Ngoài racòncáctươngtácgiữaH-16(δ H0,99)/H-14(δ H2,2)/H-8(δ H1,7)vớiH-

Kếtquảnghiên cứuvềđộctính và tácdụngsinh học

Kếtquảthửđộctínhcấp

Mẫunghiêncứuđượcchuẩnbịvàtiếnhànhthửđộctínhcấptheophươngphápghi ở mục2.2.3.2 Liều 12 g mẫu nghiên cứu/kg thể trọng chuột là liều tối đa có thểpha cao dược liệu trong thể tích dung môi cho chuột uống 1 lần/ngày mà chuột vẫndung nạp được Thử nghiệm nghiên cứu vớimức liều 12 g/kg thể trọng chuột vớicao toànphầnvàcáccao phânđoạn.

Khi cho chuột nhắt trắng uống các mẫu nghiên cứu với liều 12 g mẫu/kg thểtrọngchuột,mộtlần/ngày,theodõitrong3ngày,chuộtvẫnkhỏemạnh,ănuống,bàitiết,vận độngbìnhthường, không cóchuộtnàochết.

Theo dõi chuột tiếp theo từ ngày thứ 4 đến ngày thứ 7 thấy chuột vẫn khỏemạnh,ăn uống,vận động,bàitiếtbìnhthường,khôngcó chuộtnàochết.

Liều 12 g mẫu nghiên cứu/kg thể trọng chuột là liều tối đa có thể cho mỗi conchuộtnhắtuốngtrongmộtngàymàchuộtvẫnkhôngcóbiểuhiệnbấtthường.Như vậy, ở mức liều của các mẫu thử là 12 g mẫu/kg thể trọng chuột chưa xác định đượcLD50, và không nhận thấy độc tính cấp trên chuột nhắt Với mức liều 12 g cao toànphần/kg/ngày tương đương với 144 g dược liệu khô/kg thể trọng chuột/ngày chuộtnhắt trắng sinh hoạt, vận động bình thường và không có chuột nào chết Mức liềunày tương đương khoảng 600g dược liệu khô/ngày/người, gấp khoảng 50 lần liềudùng trênngườichưaghinhậnđộctínhcấp.

Kếtquảthửđộctínhbántrườngdiễn

Theo những công bố trên thế giới và Việt Nam về tác dụng sinh học chiSanchezia,hầu hết các kết quả cho thấy hai phân đoạnn-hexan và ethyl acetat làphânđoạnthểhiệnhoạttínhmạnh.Vàtrongnghiêncứunày,haiphânđoạnn-hexanvà ethyl actetat đều cho thấy tác dụng chống viêm loét dạ dày và giảm đau trungương, đặc biệt phân đoạn ethyl acetat cho tác dụng tốt hơn trên viêm loét dạ dày.Hơn thế nữa, trong phân đoạn ethyl aceat đã phân lập và xác định cấu trúc có 2 hợpchấtalcaloid.Alcaloidlànhómhợpchấtthườngcókhảnănggâyđộctính.Dượcliệuvà thuốc có nguồn gốc dược liệu thường được người dân sử dụng lâu dài Đánh giáđộc tính bán trường diễn sẽ cho kết quả tính an toàn của dược liệu, thuốc từ dượcliệucóđộtincậycaohơnđộctínhcấpvàphùhợphơn.Dođóphânđoạnethylacetatđượcsửdụ ngđánhgiáđộctínhbán trườngdiễn.

Chuộtđượcchouốngcaoethylacetatvớimứcliềutươngđươngliềudùngtrênngười (Lô 1: 50 mg/kg/ngày) và liều gấp 5 lần liều dùng trên người (Lô 2: 250mg/kg/ngày)liên tụctrong 28ngày,kếtquảthuđượcnhưsau:

Trong thời gian thí nghiệm, chuột ở lô chứng sinh lý và 2 lô uống mẫu nghiêncứu (MNC) hoạt động bình thường, nhanh nhẹn, mắt sáng, phân khô.Không thấybiểuhiệngìđặcbiệtởcả3 lô chuộtcống trắng trong suốtthờigiannghiên cứu.

Bảng3.22.Ảnhhưởng củacao ethylacetatđếnthểtrọng chuột

Cácsốliệusosánhtrướcsaup(trước-sau)sử dụngt-testghépcặp

Kết quả ởBảng 3.22cho thấy: Sau 14 ngày và 28 ngày uống cao ethyl acetat,trọng lượng chuột tăng có ý nghĩa so với trước khi nghiên cứu (p0,05).

Bảng3.23.Ảnhhưởng của cao ethylacetatđếnkhảnăng tạomáu

Sốlượnghồngcầu(T/l) Hàmlượnghuyếtsắctố(g/ dl) Hematocrit(%) Thể tích trung bình hồngcầu(fl) p (t- teststud ent)

Cácsốliệusosánhtrướcsaup(trước-sau)sử dụng t-testghépcặp

KếtquảởBảng3.23chothấy:Sau14ngàyvà28ngàyuốngcaoethylacetat,sốlượnghồngcầu,hàmlượnghuyếtsắc tố, hematocrit và thể tích trung bình hồng cầu ở cả lô 1 (uống cao ethyl acetat liều 50 mg/kg/ngày) và lô 2 (uống caoethyl acetat 250 mg/kg/ngày) đều không có sự khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng và so sánh giữa các thời điểm trướcvàsaukhiuốngmẫu nghiêncứu(p >0,05).

Bảng 3.24.Ảnhhưởng của cao ethylacetatđếnsốlượng bạchcầuvà côngthứcbạchcầu

Cácsốliệusosánhtrướcsaup(trước-sau)sử dụng t-testghépcặp

KếtquảởBảng3.24chothấy:Sau14ngàyvà28ngàyuốngcaoethylacetat,sốlượngbạchcầuvàcôngthứcbạchcầu ở cả lô 1 (liều 50 mg/kg/ngày) và lô 2 (liều 250 mg/kg/ngày) đều không có sự khác biệt có ý nghĩa so với lô chứngvàsosánhgiữacácthờiđiểmtrướcvàsaukhiuốngmẫunghiên cứu(p>0,05).

Cácsốliệusosánhtrướcsaup(trước-sau)sử dụngt-testghépcặp

Kết quả ởBảng 3.25cho thấy: Sau 14 ngày và 28 ngày uống cao ethyl acetat,số lượng tiểu cầu ở cả lô 1 (liều 50 mg/kg/ngày) và lô 2 (liều 250 mg/kg/ngày) đềukhôngcósựkhácbiệtcóýnghĩasovớilôchứngvàsosánhgiữacácthờiđiểmtrướcvàsaukhi uốngmẫunghiêncứu(p>0,05).

HoạtđộAST(UI/l) Hoạtđộ ALT(UI/l) P(t-test student)

Cácsốliệusosánhtrướcsaup(trước-sau)sử dụngt-testghép cặp

Kết quả ởBảng 3.26cho thấy: Sau 14 ngày và 28 ngày uống cao ethyl acetat,xét nghiệm đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan hoạt độ AST và ALT trong máuchuột ở cả lô 1 (liều 50 mg/kg/ngày) và lô 2 (liều 250 mg/kg/ngày) đều không có sựkhác biệt có ý nghĩa so với lô chứng và so sánh giữa các thời điểm trước và sau khiuống mẫunghiêncứu(p>0,05).

Bảng 3.27 Ảnh hưởng của cao ethyl acetat đến chức năng gan (bilirubin, albumin, cholesterol toàn phần trongmáuchuột)

Cácsốliệusosánhtrướcsaup(trước-sau)sử dụng t-testghépcặp

KếtquảởBảng3.27chothấy:Sau14ngàyvà28ngàyuốngcaoethylacetat,nồngđộbilirubintoànphần,albumintoàn phần và cholesterol toàn phần trong máu chuột ở cả lô 1 (liều 50 mg/kg/ngày) và lô 2 (liều 250 mg/kg/ngày) đềukhông có sự khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng và so sánh giữa các thời điểm trước và sau khi uống mẫu nghiên cứu(p>0,05).

Bảng 3.28 Ảnh hưởng của cao ethyl acetat đến chức năng thận(nồng độ creatinin trongmáu chuột) Thờigian

Creatinin(mg/dl) p(t- teststud ent)

TrướcuốngMNC 0,81±0,17 0,82±0,15 0,85±0,13 >0,05 Sau 14 ngày uốngMNC 0,85±0,11 0,79±0,14 0,80±0,14 >0,05 p(trước-sau) >0,05 >0,05 >0,05

Sau 28 ngày uốngMNC 0,83±0,13 0,84±0,11 0,82±0,18 >0,05 p(trước-sau) >0,05 >0,05 >0,05

Cácsốliệusosánhtrướcsaup(trước-sau)sửdụngt-testghépcặp

Kết quả ởBảng 3.28cho thấy: Sau 14 ngày và 28 ngày uống cao ethyl acetat,ởcảlô1(liều50mg/kg/ngày)vàlô2(liều250mg/kg/ngày),nồngđộcreatinintrongmáuchuộ tkhôngkhácbiệtsovớilôchứngvàsosánhgiữa

Nghiên cứu ảnh hưởng của thuốc thử lên hình thái và cấu trúc vi thể gan,thậncủachuột

Trên tất cả các chuột thực nghiệm (cả lô chứng và 2 lô dùng cao ethyl acetat),không quan sát thấy thay đổi bệnh lý nào về đại thể của các cơ quan tim, phổi, ganlách,tụy,thậnvàhệthốngtiêuhóacủachuột.Cấutrúcvithểgan,thậncủa2lôchuộtuống mẫunghiên cứukhông có sựkhácbiệtrõrệtsovớilô chứngsinh lý.

Bảng3.29.Hình ảnhvi thểgan chuột

Lô chứng: TB gan btChuộtsố04(HEx400) Lôchứng:TBganbtChuộts ố05(HEx 400) Lôchứng:TBganbtChuộts ố08(HEx400)

Chuộtsố 12 (HEx400) Lô1:TBganthoáihóanhẹChuộ t số 14(HEx400)

Chuộtsố 23 (HEx400) Lô2:TBganthoáihóanhẹChuộ t số 27(HEx400) Lô2:TBganthoáihóanhẹChuộ tsố 28 (HEx400)

(HEx400:NhuộmHematoxylin -Eosin,độ phóng đại400 lần)

Chuộtsố 04 (HEx400) Lô chứng:TBthận bìnhthường

Chuột số05 (HEx400) Lô chứng:TBthận bìnhthường

Lô 1: TB thận bình thườngChuộtsố 12

Lô 1: TB thận bình thườngChuột số 14(HEx400) Lô 1: TB thận bình thườngChuộtsố 17 (HEx400)

Lô 2: TB thận bình thườngChuộtsố 23

Lô 2: TB thận bình thườngChuột số 27(HEx400) Lô 2: TB thận bình thườngChuộtsố 28 (HEx400)

(HEx400:NhuộmHematoxylin -Eosin,độ phóngđại400 lần)

Kếtquảnghiêncứutácdụng chốngviêmloét dạdày

Lô4:Mẫucao toànphầnliều50 mg/kg 10 10/10

Lô5:Mẫucao toànphầnliều150 mg/kg 10 9/10

Lô6:Mẫu cao toànphầnliều450 mg/kg 10 10/10 p>0,05sovới lôchứngbệnh(testkhibình phương)

- Lôchứng sinh lý:chuộtkhôngcó hình ảnhloétởdạdày.

- Lôchứngbệnhvàlôdùngmẫucaotoànphầnliều50mg/kgvàliều450mg/kgcó tỷ lệ chuột bị loét dạ dày sau thắt môn vị là 100%, lô dùng ranitidin và mẫu caotoànphầnliều150mg/kgtỷlệchuộtcóloétsauthắtmônvịlà90%.Khôngcósựkhácbiệtvề tỷlệchuộtbịloétgiữacáclôuống mẫu nghiên cứukhisovớilô chứngbệnh(p>0,05).

Lônghiên cứu Loétnông (%) Loétsâu (%) Loétthủng

Lô4:Mẫucao tổngliều50 mg/kg 87,50 12,50 0

Lô5:Mẫucaotổng liều150mg/kg 93,62 6,38 0

Lô6:Mẫucao tổngliều450mg/kg 90,91 9,09 0

Bảng 3.32cho thấy tỷ lệ % loét nông, loét sâu, loét thủng ở mỗi lô thông quađếmsốđiểmloétvà chođiểmcácđiểmloét,từđótínhtỷlệphầntrăm.

- Lô chứng bệnh: tỷ lệ tổn thương loét sâu (13,64%) cao nhất trong 5 lô có tiếnhành thắt môn vị dạ dày Tỷ lệ tổn thương loét nông, loét bề mặt ở lô chứng bệnh là86,36%.

- Lôuốngranitidin:mứcđộtổnthươngloétcósựcảithiệnhơnsovớilôchứngbệnh với giảm tỷ lệ tổn thương loét sâu (3,23%), tỷ lệ tổn thương loét nông, loét bềmặtlà96,77%.

- Lôuốngmẫucaotoànphầnởhaimứcliều(150và450mg/ kg)cósựcảithiệnmứcđộloéthơnsovớilôchứngbệnh:giảmtỷlệtổnthươngloétsâu(9,09%;6,38%) vàgiatăng tỷ lệtổn thươngloétnông,loétbềmặt(90,91%;93,62%)

- Lô uống mẫu cao toàn phần liều 50 mg/kg chưa có sự cải thiện mức độ tổnthương loétsovớilôchứngbệnh.

Lô nghiên cứu n Điểmsốloéttrung bình ChỉsốloétUI

Lô4:Mẫu caotoànphần liều50mg/kg 10 7,031,98* 13,243,67*

Lô5:Mẫu caotoànphần liều150mg/kg 10 5,001,89* 10,603,62*

Lô6:Mẫu caotoànphần liều450mg/kg 10 3,601,84*** 7,903,31***

- Lôuốngcaotoànphầnliều50mg/kg/ngàykhônglàmgiảmđiểmsốloétvàchỉsố loétcóýnghĩathốngkêsovớilôchứngbệnh.

- Lôuốngcaotoànphầnliều150mg/kg/ ngàylàmgiảmđángkểđiểmsốloéttrungbìnhvàchỉsốloétsovớilôchứngbệnhvớimứcýng hĩaquansátđượcp0,05

Lô4Caotoànphầnliều900 mg/kg/ngày 10 19,75 ±4,70 21,21 ±4,04 >0,05

Lô 5Caon-hexan liều100 mg/kg/ngày 10 18,26 ±3,06 22,86 ±2,73** 0,05

Khácbiệt sovớilô chứngsinhlý(lô 1):*p