Nghiên cứu thành phần hóa học, độc tính và tác dụng sinh học hỗ trợ điều trị viêm loét dạ dày, tá tràng của lá xăng xê (sanchezia nobilis hook f )

BỘGIÁODỤCVÀĐÀOTẠO BỘYTẾ VIỆNDƯỢCLIỆU BÙITHỊ XN NGHIÊNCỨUTHÀNHPHẦNHĨA HỌC, ĐỘC TÍNH VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC HỖ TRỢĐIỀUTRỊVIÊMLOÉT DẠDÀYTÁTRÀNGCỦA LÁCÂY XĂNGXÊ(SanchezianobilisHook.f.) LUẬNÁNTIẾNSĨDƯỢCHỌC HÀNỘI,NĂM2022 BỘGIÁODỤCVÀĐÀOTẠO BỘYTẾ VIỆNDƯỢCLIỆU BÙITHỊ XUÂN NGHIÊNCỨUTHÀNHPHẦNHÓA HỌC, ĐỘC TÍNH VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC HỖ TRỢĐIỀUTRỊVIÊMLOÉT DẠDÀYTÁTRÀNGCỦA LÁCÂY XĂNGXÊ(SanchezianobilisHook.f.) CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU – DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀNMÃSỐ:9720206 LUẬNÁNTIẾNSĨDƯỢCHỌC Ngườihướng dẫnkhoahọc: 1.TS TrầnMinh Ngọc 2.TS TrầnThanhHà HÀNỘI,NĂM2022 LỜICAMĐOAN Tơixincamđoanđâylàcơngtrìnhnghiêncứucủariêngtơidướisựhướngdẫnkhoa họccủaTS.TrầnMinhNgọcvàTS.TrầnThanh Hà Cácsốliệu,kếtquảnêutrongluậnánlàtrungthựcvàchưatừngđượcaicơn gbốtrongbấtkỳcơngtrìnhnàokhác NCS.Bùi Thị Xn LỜICẢMƠN Trong q trình nghiên cứu hồn thiện luận án, nhận giúp đỡvôcùngquýbáucủacácthầycôgiáo,cácnhàkhoahọcthuộcnhiềulĩnhvựccùngđồng nghiệp,bạnbèvà giađình Trướchết,tơixinbàytỏlịngkínhtrọngvàbiếtơnsâusắctớiTSTrầnMinhNgọc TS Trần ThanhHà, người Thầy, Cơ trực tiếphướng dẫn,hếtlịng bảo tận tình động viên tơi q trình học tập nghiên cứu khoahọc.TơicũngxinbàytỏlịngbiếtơntớiPGS.TSNguyễn Tiến Vững, PGS.TS.VũĐứcLợilànhưngngườithầyđãgiúptơikhimớibắtđầuthựchiệnnghiêncứu Trong q trình thực luận án, nhận giúp đỡ cáccơquan,đơnvịvàcánhân.TơixinchânthànhcảmơnBanlãnhđạo,cácKhoa,Phịng đồng nghiệp phịng thí nghiệm trung tâm - Viện Dược liệu, Bộmôn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội, Phịng thí nghiệm trung tâm –ĐHQGHN giúp đỡ, tạo điều kiện để giúp suốt q trình thực hiệnnghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn Bộ môn Y Dược cộng đồng Y Dự phịng,trường ĐH Y Dược - ĐHQGHN, nơi tơi cơng tác, động viên tinh thần tạođiềukiệnthuậnlợi đểtơihồnthànhluậnánnày Cuối xin cảm ơn sâu sắc tới người thân u gia đình;cảmơnnhữngbạnbèthânthiếtđãdànhchotơinhữngtìnhcảm,sựđộngviên,sựgiúp đỡtrongsuốtthờigianqua Xin trântrọngcảmơntấtcảnhữnggiúp đỡqbáunày! NCS Bùi Thị Xuân MỤCLỤC LỜICAMĐOAN i LỜI CẢMƠN ii MỤCLỤC iii DANH MỤCCHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤCBẢNG vii DANH MỤCHÌNH ix ĐẶTVẤNĐỀ CHƯƠNG1.TỔNGQUAN 1.1 Vịtríphânloại,đặcđiểmthựcvậtvàphân bố chiSanchezia 1.1.1.VịtríphânloạichiSanchezia .3 1.1.2 ThànhphầnloàivàphânbốcủachiSanchezia 1.1.3 Đặcđiểmthựcvật 1.2 Thànhphần hóahọcchiSanchezia .9 1.3 TácdụngsinhhọcchiSanchezia 18 1.3.1 Độctínhcấp 18 1.3.2 Tácdụngchốngviêm 19 1.3 3.Tácdụnggiảmđau .20 1.3.4 Tácdụngkhángvisinhvật .20 1.3.5 Tácdụngtrênhệtiêuhóa 22 1.3.6 Cáctácdụngkhác 22 1.4 Côngdụng 24 1.5 Bệnhlýviêmloét dạdày,tátràng 25 1.5.1 Địnhnghĩa 25 1.5.2 Nguyênn h â n gâyviêmloétdạdàytátràng .25 1.5.3 Nhữngtácnhângâytăngtiếtvàgiảmkhảnăngbảovệdạdàytátràng 27 1.5.4 Triệuchứngvàchẩnđoánviêmloétdạdàytátràng 28 1.6 Cácmơ hìnhgâylt dạdày,tátràngtrên thựcnghiệm .28 1.6.1 Mơhìnhgâyviêmltbằngphươngphápvậtlí 28 1.6.2 Mơhìnhgâyviêmltbằngphươngpháphóahọc .30 CHƯƠNG2.ĐỐI TƯỢNG VÀPHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU 35 2.1 Nguyênvật liệunghiên cứu 35 2.1.1 Nguyênliệu .35 2.1.2 Hóachất–dụngcụ 35 2.1.3 Độngvậtthínghiệm .37 2.2 Phươngphápnghiên cứu .38 2.2.1 Phươngphápgiámđịnhtênkhoahọc38 2.2.2 Phươngphápnghiêncứuthànhphầnhóahọc 38 2.2.3 Đánhgiáđộctínhvàtácdụngsinhhọc 39 2.3 Phươngphápxửlýsốliệu 46 CHƯƠNG3.KẾTQUẢNGHIÊNCỨU 47 3.1 Đặcđiểmthựcvật Xăngxê 47 3.1.1 ĐặcđiểmhìnhtháicâyXăngxê .47 3.1.2 Kếtquảgiámđịnhtênkhoahọc .48 3.2 Kếtquả nghiên cứuvềthành phần hóahọc 49 3.2.1 Kếtquảchiếtxuấtvàphânlậpcáchợpchất 49 3.2.2 Xácđịnh cấutrúccáchợp chấtphân lậpđược 56 3.3 Kếtquảnghiên cứuvềđộctính tácdụngsinh học 88 3.3.1 Kếtquảthửđộctínhcấp 88 3.3.2 Kếtquảthửđộctínhbántrườngdiễn 89 3.3.3 Kếtquảnghiêncứutácdụng chốngviêmloét dạdày 97 3.3.4 Kếtquảđánhgiátácdụnggiảmđau 107 CHƯƠNGIV.BÀNLUẬN 111 4.1 Vềđặcđiểmthựcvật 111 4.2 VềthànhphầnhóahọclồiSanchezianobilisHook.F 112 4.3 VềđộctínhvàtácdụngsinhhọccủalồiSanchezianobilisHook.F .126 4.3.1 Vềđộctính 126 4.3.2 Vềtácdụngsinhhọc 128 KẾTLUẬNVÀKIẾNNGHỊ 137 KẾTLUẬN 137 VềthànhphầnhóahọclồiSanchezianobilisHook.F 137 VềđộctínhvàtácdụngsinhhọclồiSanchezianobilisHook.F.(Xăngxê) .137 KIẾNNGHỊ 138 DANHMỤCCHỮ VIẾTTẮT Chữviếttắt δ H-NMR 13 C-NMR AChE ALT AST CHCl3 cs CTPT COSY d DCM Dd DD-TT DĐVNV DEPT DMSO DPPH DL ED50 EDTA ESI-MS EtOAc FT-IR H.P HMBC Nộidung viếttắt Độdịch chuyểnhóahọc Protonnuclearmagnetic resonance Carbon(13)nuclear magneticresonance Acetylcholinesterase AlanineTransaminase Aspartatetransaminase Chloroform CorrelationSpectroscopy Doublet Dichloromethan Dungdịch Dạdày tátràng DượcđiểnViệtNamV DistortionlessEnhancement byPolarizationTransfer Dimethylsulfoside 2,2-diphenyl-1picrylhydrazyl Dượcliệu EffectiveDose50% EthlyleneDiamineTetracetic Acid ElectronSprayIonization MassSpectrometry Ethylacetate Fourier-transforminfrared spectroscopy Helicobacterpylori HeteronuclearMultipleBond Correlation NghĩatiếngViệt Phổcộnghưởngtừproton1HNMR Phổcộnghưởng từhạtnhân13CNMR Acetylcholinesterat Cộng Côngthứcphân tử PhổCOSY tươngtácH-Hcạnh Đỉnhđơitrongphổ1H-NMR PhổDEPT Liềucó hiệu quả50% Phổkhốiphun mùđiện tử Ethylacetat Phổhồng ngoại VikhuẩnHelicobacterpylori Phổtương tácdihạtnhân qua nhiều liênkết HPLC HSQC HR-ESIMS IC50 LC50 LD50 MeOH M.I.C MS MTT Nxb NMR NOESY ORAC P-HPLC s SKC SKLM t δH,δC J High-performanceliquid chromatography HeteronuclearSingle QuantumCoherence HighResolutionelectrospray ionsationmassSpectrometry Halfmaximalinhibitory concentration HalfmaximalLethal Concentration HalfmaximalLethalDose Methanol MinimumInhibitory Concentration MassSpectroscopy 3-[4,5-dimetylthiazol-2-yl]2,5-điphenyltetrazolbrom NuclearMagnetic Resonance NuclearOverhauserEffect Spectroscopy Oxygenradicalabsorbance capacity PreparativeHigh Performance LiquidChromatography Singlet Triplet Sắcký lỏng hiệunăngcao Phổtương tácdịhạtnhân qua mộtliên kết Phổkhốiphângiảicaophun mù điện tử Nồngđộứcchế50% Nồngđộgây chết50% Liềulượnggây chết50% Nồngđộ ứcchếtốithiểu Phổkhốilượng Nhàxuấtbản Phổcộnghưởng từhạtnhân PhổtươngtáckhônggianH-H Khảnăng hấp thụgốcoxyhóa Sắc ký lỏng hiệu cao điềuchế Picđơn trongphổ1HNMR Sắcký cột Sắcký lớp mỏng Picbađỉnh trongphổ1H-NMR Độ chuyểndịchhóahọccủa protonvàcacbon Hằngsố tương tác(đơn vịHz) DANHMỤCBẢNG Bảng 1.1.Thànhphầnloàivàphânbố củachiSanchezia .4 Bảng1.2.CáccơngbốvềthànhphầnhóahọccủachiSancheziatrênThếgiớivàViệtNam16 Bảng 2.1.Cácmứcliều thửtácdụngsinhhọccủacaotổngvàcáccao phânđoạn láXăngxê 40 Bảng3.1.Dữliệuphổ1Hvà13CNMRcủahợpchấtSXH1vàchấtthamkhảo5 Bảng3.2.Dữliệuphổ1Hvà13CNMRcủahợpchấtSXH2vàchấtthamkhảo5 Bảng3.3.Dữliệuphổ1Hvà13CNMRcủahợpchấtSXH3vàchấtthamkhảo6 Bảng 3.4.Dữliệuphổ1Hvà13CNMRcủahợpchấtSXH4 .61 Bảng3.5.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXH6vàchấtthamkhảo63 Bảng3.6.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXH7vàchấtthamkhảo65 Bảng 3.7.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXE8và chấtthamkhảo6 Bảng 3.8.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXE9 69 Bảng 3.9.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXE10 vàchấtthamkhảo7 Bảng3.10.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXE11vàchấtthamkhảo7 Bảng3.11.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXE12vàchấtthamkhảo7 Bảng3.12.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXE13vàchấtthamkhảo7 Bảng3.13.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXE14vàchấtthamkhảo7 Bảng3.14.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXE15vàchấtthamkhảo7 Bảng 3.15 Dữ liệu phổ1H và13C-NMR hợp chất SXE16 chất tham khảo 79Bảng3.16.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXE17vàchấtthamkhảo8 Bảng3.17.Dữliệuphổ1Hvà13C-NMRcủahợpchấtSXE18vàchấtthamkhảo8 Bảng 3.18 Dữ liệu phổ1H và13C-NMR hợp chất SXE19 chất tham khảo 84Bảng 3.19 Dữ liệu phổ1H và13C-NMR hợp chất SXE20 chất tham khảo 85Bảng 3.20 Dữ liệu phổ1H và13C-NMR hợp chất SXE22 chất tham khảo 87Bảng3.21.KếtquảthửđộctínhcấpcủacáccaophânđoạndịchchiếttừláXăngxê88 Bảng 3.22.Ảnhhưởng củacao ethylacetatđến thểtrọng chuột 90 Bảng 3.23.Ảnhhưởngcủacao ethylacetatđến khảnăng tạo máu .91 Bảng 3.24 Ảnh hưởng cao ethyl acetat đến số lượng bạch cầu công thứcbạch cầu 92 Bảng3.25.Ảnhhưởngcủacaoethylacetatđếnsốlượngtiểucầutrongmáuchuột .93 Bảng3.26.Ảnhhưởngcủacaoethylacetatđếnmứcđộhủyhoạitếbàogan(AST/ALT) 93 Bảng 3.27 Ảnh hưởng cao ethyl acetat đến chức gan (bilirubin, albumin,cholesteroltoànphần trongmáuchuột) .94 Bảng 3.28.Ảnhhưởng củacaoethylacetatđến chứcnăng thận 95 Bảng3.29.Hìnhảnh vithểgan chuột 95 Bảng3.30.Hìnhảnh vithểthận chuột 96 Bảng 3.31.Tỷ lệchuộtcóltsau thắtmơn vị 97 Bảng3.32.Ảnhhưởngcủamẫucaotoànphầnđếnmứcđộnặngcủatổnthươngloét 97 Bảng3.33.Ảnhhưởngcủamẫucaotồnphầnđếnđiểmsốlttrungbình,chỉsốlt 98 Bảng3.34.Ảnhhưởng củamẫu caotồn phần đến thểtíchdịchvị, 99 Bảng 3.35.Hìnhảnh đạithể,vithểdạdày chuộtở mỗilơ 100 Bảng 3.36.Tỷ lệchuộtcóltsau thắtmơn vị 102 Bảng3.37.Ảnh hưởngcủacácmẫucao phânđoạnđếnmứcđộ nặngcủatổnthươngloét 102 Bảng 3.38.Ảnhhưởngcủacácmẫu caophân đoạnđếnđiểmsốloét 103 Bảng 3.39 Ảnh hưởng mẫu cao phân đoạn đến thể tích dịch vị, độ acid tựdo,độ acidtoànphầnvà pHdịchvị .104 Bảng 3.40.Hìnhảnh đạithể,vithểdạdày chuộtở mỗilô 105 Bảng 3.41 Ảnh hưởng mẫu thử cao toàn phần cao phân đoạn lên thời gianphảnứng vớinhiệtđộcủachuộtnhắttrắng 107 Bảng 3.42 Ảnh hưởng mẫu thử cao toàn phần cao phân đoạn lên lực gâyđau máyđongưỡngđau .108 Bảng 3.43.Ảnhhưởng mẫu thửcao toànphầnvàcáccaophânđoạn lên 109