Nghiên cứu về thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây hế mọ (psychotria prainii h lév )

BỘGIÁODỤC VÀĐÀOTẠO BỘY TẾ VIỆNDƢỢCLIỆU TRẦNPHIHÙNG NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT, THÀNH PHẦNHÓAHỌCVÀMỘTSỐ TÁCDỤNGSINHHỌC CỦACÂYHẾMỌ(PsychotriaprainiiH.Lév.) LUẬNÁNTIẾNSĨDƢỢCHỌC HàNội- 2018 BỘGIÁODỤCVÀĐÀOTẠO BỘYTẾ VIỆNDƢỢCLIỆU TRẦNPHIHÙNG NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT, THÀNH PHẦNHÓAHỌCVÀMỘTSỐ TÁCDỤNGSINHHỌC CỦACÂYHẾMỌ(PsychotriaprainiiH.Lév.) LUẬNÁNTIẾNSĨDƢỢCHỌC Chuyênngành:DƣợcliệuDƣợchọccổtruyềnMãsố:9720206 Ngƣờihƣớngdẫnkhoahọc:1 PGS.TS.NguyễnTrọngThông 2.PGS.TS.LêViệtDũng HàNội- 2018 LỜICAMĐOAN Tơi xin cam đoan luận án cơng trình nghiên cứu khoa họccủariêngtôidướisựhướngdẫncủaPGS.TS Nguyễn Trọng ThôngvàPGS.TS Lê ViệtDũng Các số liệu, kết trình bày luận án trung thực, kháchquan chưa công bố cơng trình nàokhác Tácgiảluậnán NCS.TrầnPhiHùng LỜICẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận án này, nhận đượcrất nhiều giúp đỡ q báu thầy giáo, nhà khoa học thuộc mọilĩnhlực cùngđồngnghiệp,bạnbèvà giađình Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tớiPGS.TS Nguyễn TrọngThơngvàPGS.TS Lê Việt Dũng, người thầy tận tình hướng dẫn, hếtlịng bảo tạomọi điều kiện giúp đỡ tơit r o n g s u ố t q u t r ì n h h ọ c t ậ p , nghiêncứuvàhồnthànhluậnán Tơix i n c h â n t h n h c ả m n B a n l ã n h đ o , P h ò n g Q u ả n l ý K h o a h ọ c v ĐàotạoViệnDượcliệu;Đảngủy,BanGiámđốcBệnhviệnYhọccổtruyềnđãtạođiềukiệ nthuận lợichotơi trongqtrìnhhọctậpvànghiêncứu Tơicũngxinbàytỏlịngbiết ơntới: - PGS.TS.Đỗ ThịHà-Viện Dượcliệu - PGS.TS.PhươngThiệnThương-ViệnDượcliệu - ThS.NguyễnQuỳnhNga-Viện Dượcliệu - ThS.ĐậuThùyDương-Đại học YHàNội Đãđónggópnhữngýkiến q báu chotơikhi thựchiện luận ánnày Cuối cùng, xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến người thân giađình, bạn bè ủng hộ tạo điều kiện tốt cho trình họctập,nghiêncứuvà hồnthànhluậnán Một lần nữa,tơixinchân thành cảmơnnhữngsựgiúp đỡqbáu đó! NCS.TrầnPhiHùng MỤCLỤC DANHMỤCBẢNG DANHMỤC HÌNHVẼ,SƠĐỒ ĐẶTVẤN ĐỀ Chƣơng1:TỔNGQUAN 1.1 THỰCVẬTHỌC 1.1.1 Vịtríphânloại,đặc điểmthựcvậtvàphânbốcủachiPsychotriaL .3 1.1.2 Vịtríphânloại,đặcđiểmthực vậtvàphânbốcủaHếmọ .7 1.2 THÀNHPHẦNHÓAHỌC 1.2.1 Thànhphầnhóahọc củamộtsốlồithuộcchiPsychotriaL .8 1.2.2 Thànhphầnhóahọc Hếmọ 28 1.3 CÔNGDỤNGVÀTÁCDỤNGSINHHỌC 28 1.3.1 CơngdụngcủamộtsốlồithuộcchiPsychotriaL.theoyhọccổ truyền .28 1.3.2 Tácdụngsinhhọc củamộtsốloàithuộcchiPsychotriaL 29 1.3.3 Côngdụngvàmộtsốtácdụngsinhhọccủa Hếmọ 40 1.4 VIÊM 40 1.5 HỘI CHỨNGRUỘTKÍCHTHÍCH 41 Chƣơng2:ĐỐITƢỢNGVÀPHƢƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU 43 2.1 NGUYÊNVẬTLIỆU,TRANGTHIẾT BỊNGHIÊNCỨU 43 2.1.1 Nguyênliệu .43 2.1.2 Độngvậtthínghiệm 43 2.1.3 Thuốcthử,hóachất,dungmơi 43 2.1.4 Máymóc,thiếtbị 44 2.2 ĐỊA ĐIỂMNGHIÊNCỨU 45 2.2.1 Nghiêncứuthựcđịa 45 2.2.2 Nghiêncứutrongphịngthínghiệm 45 2.3 PHƢƠNGPHÁP NGHIÊN CỨU .45 2.3.1 Nghiêncứuvề thực vậthọc 45 2.3.2 Nghiêncứuvề hóahọc 46 2.3.3 Nghiêncứutácdụngsinhhọc .47 2.3.4 Phươngphápxửlýsốliệuthốngkê 56 Chƣơng3:KẾTQUẢNGHIÊNCỨU 57 3.1 THỰCVẬT HỌC 57 3.1.1 Thẩmđịnhtênkhoahọc .57 3.1.2 Đặcđiểmhìnhtháithực vật 57 3.1.3 Đặcđiểmgiảiphẫu 60 3.1.4 Đặcđiểmbộtdượcliệulá,thân,rễ 62 3.2 THÀNHPHẦN HÓAHỌCPHẦNTRÊNMẶTĐẤTCÂYHẾMỌ 64 3.2.1 Địnhtínhcácnhómchấthữucơ .64 3.2.2 Chiếtxuấtvàphânlậpcáchợpchất 67 3.2.3 Xác địnhcấu trúchóahọccáchợpchất phânlập 70 3.3 TÁCDỤNG SINHHỌC .93 3.3.1 TácdụngcủacaonướcHếmọtrênnhu độngruột 93 3.3.2 TácdụngcủacaonướcHếmọtrênmơhìnhgâyhộichứngruộtkíchthíchtrênđộng vậtthực nghiệm 96 3.3.3 TácdụngchốngviêmcủacácchấtphânlậpđượctừphầntrênmặtđấtcâyHếmọ trênmơ hìnhgâyứcchếsự tạothànhNO .113 Chƣơng4:BÀNLUẬN 115 4.1 VỀTHỰCVẬT HỌC .115 4.2 VỀHÓAHỌC 117 4.2.1 Kết quảđịnh tính .117 4.2.2 Kếtquảphânlập vàxácđịnh cấutrúccáchợpchất 118 4.3 VỀTÁCDỤNG SINHHỌC 123 4.3.1 TácdụngchốngviêminvitrocủacácchấtphânlậptừphầntrênmặtđátHếmọtrênmơhì nhứcchếsảnsinhNO trongtếbàoRAW264.7 .123 4.3.2 TácdụngcủacaonướcHếmọtrênhội chứngruộtkíchthích 123 KẾTLUẬNVÀKIẾNNGHỊ 136 CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁNTÀILIỆUTHAMKHẢO DANHMỤC CÁCCHỮVIẾT TẮT ABTS 2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid)Ac Aceton AChE Acetylcholinesterase ADN Aciddeoxyribonucleic APG AngiospermPhylogenyGroup BChE Butyrylcholinesterase BuOH Butanol CC ColumnChromatography(sắc kýcột) CMC Carboxymethylcellulose COX Cyclooxygenase cs Cộngsự DCM Dichloromethan DEPT Distortionless Enhancement by Polarization TransferDMEM Dulbecco’sModified Eagle’sMedium DMSO Dimethylsulphoxide DOPAC 3,4-Dihydroxyphenylaceticacid DPPH 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl đnc Điểmnóngchảy ED50 EffectiveDose50%(liềucótácdụng50%) ESI-MS ElectronSprayIonizationMassSpectrometry(phổkhối lượngion hóaphun mùđiệntử) EtOAc Ethylacetat EtOH Ethanol FBS Fetalbovineserum(huyết thanhthaibị) Glc Glucose HCRKT Hộichứngruộtkíchthích HIV HMBC Humanimmunodeficiencyvirus(virutgâysuygiảmmiễndịchở người) HeteronuclearMultiple BondCorrelation(phổ tươngtácdịhạt HSQCHPLC nhânq uanhiề uliên kết) Heteronuclear Single Quantum Coherence (phổ tương tác dị hạtnhânquamộtliênkết) High-performance liquid chromatography (sắc kýlỏnghiệunăng cao) HSV Herpessimplexvirus(virutHerpes) IC50 Inhibitoryconcentration50%(nồngđộứcchế50%) IR Infrared(phổhồng ngoại) LPS Lipopolysaccharide MAO Monoamineoxidase mARN Messenger AcidRibonucleic(ARNthôngtin) MCF-7 MichiganCancerFoundation-7(humanbreastadenocarcinoma cellline/tếbàoung thưvú) Me Methyl(CH3) n-Hx n-hexan NMDAreceptor N-methyl-D-aspartatereceptor NMR Nuclear Magnetic Resonance (phổ cộng hưởng từ hạt nhân)NO Nitricoxyde P Psychotria POP Prolyloligopeptidase SD StandardDeviation(độlệchchuẩn) STT Sốthứtự TLC ThinLayerChromatography(sắckýlớpmỏng) TLTK Tàiliệuthamkhảo TNF-α Tumor necrosis factor-alpha (yếu tố hoại tử khối u- α)TT Thuốcthử UV Ultra-violet(phổtửngoại) DANHMỤCBẢNG STT Tênbảng Trang Bảng1.1 Cáchợpchất pyrrolidinoindolintrongchiPsychotria Bảng1.2 Cáchợpchất polypyrrolindinoindolintrongchiPsychotria 10 Bảng1.3 Cáchợpchấtβ-carbolincókhung B1trongchiPsychotria 10 Bảng1.4 Cáchợpchấtβ-carbolincókhung B2trongchiPsychotria 11 Bảng1.5 Cáchợpchấtβ-carbolincócấutạotheokhungB3trong chiPsychotria 13 Bảng1.6.Cáchợpchấtβ-carbolinkhác trongchiPsychotria 14 Bảng1.7.CácindolalcaloidkháctrongchiPsychotria 15 Bảng1.8 Cáchợpchất quinolinvàisoquinolincókhungemetin trongchiPsychotria Bảng1.9 Cáchợpchất quinolinvàisoquinolinkháctrongchi Psychotria 16 17 10 Bảng1.10.CáchợpchấtmonoterpentrongchiPsychotria 18 11 Bảng1.11.CácsesquiterpentrongchiPsychotria 19 12 Bảng1.12.CáctriterpenoidtrongchiPsychotria 21 13 Bảng1.13.CácsteroidtrongchiPsychotria 22 14 Bảng1.14.CácsaponintrongchiPsychotria 23 15 Bảng1.15.CácquinontrongchiPsychotria 24 16 Bảng1.16.CáccoumarintrongchiPsychotria 25 17 Bảng1.17.CácflavonoidtrongcácloàithuộcchiPsychotria 26 18 Bảng1.18 Cáchợpchấtphenolictừ lồiP.yunnanensis 27 19 Bảng1.19.Cơng dụngcủacác lồithuộcchiPsychotria 28 20 Bảng1.20.MộtsốtácdụngcủacáclồithuộcchiPsychotria 37 21 22 Bảng2.1.Bảngtómtắtmơhìnhnghiêncứutácdụngphục hồicủa caoHếmọtrênchuộtcóHCRKT bằngdầu mùtạt Bảng2.2 Bảngtómtắtmơhìnhnghiêncứutácdụngbảo vệcủacao HếmọtrênchuộtgâyHCRKTbằngdầumùtạt 51 53 23 Bảng2.3.Cácchỉsốđạithểđạitràng 54 24 Bảng2.4.Chỉ sốvithểđạitràng 54 25 Bảng3.1.Kếtquảđịnh tínhcácnhómchất bằngphảnứnghóahọc 65 26 Bảng3.2.Dữkiệnphổ1H-NMRvà13C-NMR hợpchất1 70 27 Bảng3.3.Dữkiệnphổ1H-NMRvà13C-NMR củahợpchất2 78 28 Bảng3.4.Dữkiệnphổ1H-NMRvà13C-NMR củahợpchất3 79 29 Bảng3.5.Dữkiệnphổ1H-NMRvà13C-NMR hợpchất4 81 30 Bảng3.6.Dữkiệnphổ1H-NMRvà13C-NMR củahợpchất5 82 31 Bảng3.7.Dữkiệnphổ1H-NMRvà13C-NMR hợpchất6 84 32 Bảng3.8.Dữkiệnphổ1H-NMRvà13C-NMR củahợpchất7 86 33 Bảng3.9.Dữkiệnphổ1H-NMRvà13C-NMR củahợpchất8 88 34 Bảng3.10.Dữ kiệnphổ1H-NMRvà13C-NMRcủa hợpchất9 90 35 Bảng3.11.Dữkiệnphổ1H-NMRvà13C-NMRcủahợpchất10 92 36 37 38 39 40 Bảng3.12 Ảnhhưởng củacaonướcHếmọtrênđộdiđộngcủathan hoạttronglòngruột Bảng3.13.Ảnhhưởng củathuốcđếnsự hấpthunướctừlòngruột vàomáu Bảng3.14.Ảnhhưởngcủathuốcđếnsự hấpthuđiệngiảitừlòng ruộtvào máu Bảng3.15.Ảnhhưởngcủathuốcnghiêncứulêncânnặng chuột Bảng3.16.Ảnhhưởng củathuốctrênđộdi độngcủathanhoạttrong lòngruộttạithờiđiểm20phútsaukhichuộtuốngthanhoạt 93 94 95 96 97 41 Bảng3.17.Ảnhhưởngcủathuốctrênchỉsốđạithể 98 42 Bảng1.18.Ảnhhưởngcủathuốctrênđiểm sốđạithể 99 43 Bảng3.19.Ảnhhưởngcủathuốctrênchỉsốvithể 100 44 Bảng3.20 Ảnhhưởng củathuốcnghiêncứulêncânnặngchuột 105 45 Bảng3.21 Ảnhhưởng củathuốctrênđộdi độngcủathanhoạttrong lòngruộttạithời điểm20phútsaukhichuộtuốngthanhoạt 106 46 Bảng3.22.Ảnhhưởngcủathuốctrênchỉsốđạithể 107 47 Bảng3.23.Ảnhhưởngcủathuốctrênđiểmchỉ sốđạithể 108