Xác định hàm lượng axit amin trong một số loài nấm lớn thuộc chi ganoderma ở vùng bắc trung bộ bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ===  === đồ án tốt nghiệp Đề tài: XC NH HM LNG AXIT AMIN TRONG MỘT SỐ LOẠI NẤM LỚN THUỘC CHI GANODERMA Ở VÙNG BẮC TRUNG BỘ BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO GV híng dÉn : ThS HỒNG VĂN TRUNG SV thùc hiƯn : ĐẶNG THỊ KHÁNH HỊA M· sè SV 08520452778 : : PHAN THỊ HÒA M· sè SV : 0852040453 Líp : 49K - Hóa thùc phÈm VINH - 12/2012 ii LỜI CẢM ƠN Khóa luận thực phịng thí nghiệm Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm Mơi trường, Trường Đại học Vinh Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc,chúng xin chân thành cảm ơn đến thầy giáo Th.s Hồng Văn Trung - Khoa Hóa, Trường Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi suốt trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Chúng tơi xin chân thành cảm ơn Ths Chu Thị Thanh Lâm - Khoa Hóa, Trường Đại học Vinh tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ chúng tơi q trình làm thí nghiệm, hướng dẫn cách sử dụng máy HPLC đo mẫu Đề tài hoàn thành nhờ hỗ trợ kinh phí từ đề tài Nghị định thư hợp tác Việt Nam - Đài Loan PGS.TS Trần Đình Thắng - khoa Hóa học, trường Đại Học Vinh Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn đến thầy cơ, cán khoa Hố, trường Đại học Vinh tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu môi trường học tập khoa học, giúp cho chúng tơi có kiến thức vững vàng trước bước vào đời Cuối chúng tơi xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè động viên giúp đỡ chúng tơi hồn thành khóa luận Vinh, ngày tháng năm 2013 Sinh viên thực Đặng Thị Khánh Hoà Phan Thị Hòa MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC BẢNG, HÌNH vi DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ CÁI VIẾT TẮT vii LỜI MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Nhiệm vụ đồ án Đối tượng nghiên cứu CHƢƠNG TỔNG QUAN Tổng quan Nấm 1.1 Giới thiệu giới nấm 1.3 Các đặc điểm sinh học nấm .5 1.4 Thành phần dinh dưỡng nấm .7 1.5 Công dụng nấm Tổng quan Protein axitamin 2.1 Định nghĩa phân loại protein .9 2.2 Cấu tạo phân tử protein 2.2.1 Thành phần nguyên tố protein 2.2.2 Đơn vị cấu tạo sở protein – axit amin 2.2.2.1 Phân loại axitamin 10 2.2.2.2 Peptid 11 2.3 Cấu trúc phân tử protein 11 2.3.1 Cấu trúc bậc protein .11 2.3.2 Cấu trúc bậc hai protein 12 2.3.3 Cấu trúc bậc ba protein 12 2.3.4 Cấu trúc bậc bốn protein .12 2.4 Một số tính chất hóa lý protein axit amin 12 2.4.1 Tính chất biến tính 12 2.4.2 Tính chất lưỡng tính 13 2.4.3 Tính kị nước 13 2.5 Tính chất hóa học protein axit amin 13 2.6 Chức năng, vai trò protein axit amin 15 iii 2.7 Nguồn protein axitamin .17 2.7.1 Trong thực phẩm 17 2.7.2 Protein axit amin trong nấm 17 2.8 Lượng nhu cầu axit amin cần thiết người .18 Tổng quan phương pháp định lượng protein axit amin 19 3.1 Định lượng protein phương pháp Kjeldahl 19 3.1.1 Xác định nitơ tổng số theo phương pháp Kjeldahl 20 3.1.2 Xác định nitơ phi protein .20 3.1.3 Định lượng protein nguyên liệu 21 3.2 Định lượng protein hòa tan .21 3.2.1 Định lượng protein hòa tan phương pháp thông thường 21 3.2.2 Định lượng protein hòa tan phương pháp so màu 22 3.3 Định lượng protein tiêu hóa pepsin .22 3.4 Định lượng nitơ axit amin phương pháp chuẩn độ 22 3.4.1 Định lượng nitơ formol (hóa sinh học) 22 3.4.2 Định lượng nitơ axit amin Iốt .22 3.4.3 Định lượng axit amin theo phương pháp Van Slyke 23 3.5 Các phương pháp tách xác định đồng thời axit amin 23 3.5.1 Các phương pháp sắc ký cổ điển 23 3.5.1.1 Phương pháp sắc ký mỏng .23 3.5.1.2 Phương pháp sắc ký cột 24 3.5.1.3 Phương pháp chuẩn độ điện 24 3.5.2 Phương pháp sắc ký khí .24 3.5.3 P hương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 25 3.5.3.1 Cơ sở lý thuyết .25 3.5.3.2 Nguyên tắc trình sắc ký cột 25 3.5.3.3 Phân loại 26 3.5.3.4 Cấu tạo hệ thống HPLC 27 3.5.3.5 Các đại lượng đặc trưng HPLC 29 3.5.3.5 Cách đo HPLC 29 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM 30 Thiết bị .30 Dụng cụ 30 Hoá chất .31 iv C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Kỹ thuật thực nghiệm 31 4.1 Chất tạo dẫn xuất 31 4.2.Khảo sát thời gian thủy phân tối ưu 32 4.3 Chuẩn bị hóa chất phân tích 32 4.4 Chuẩn bị xử lí mẫu 33 4.5 Tiến hành phân tích máy 35 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 3.1.1 Xây dựng đường chuẩn biểu diễn phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ .36 3.1.2 Xử lí kết 42 3.1.3 Khảo sát thời gian thủy phân tối ưu (Khảo sát mẫu nấm 650) .43 3.1.4 Hàm lượng axitamin sau thủy phân mẫu .45 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 4.1.Kết luận 59 4.2 Kiến nghị 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 DANH MỤC BẢNG, HÌNH BẢNG: Bảng 1.1: Trị số ước lượng đòi hỏi axit amin cần thiết (mg/kg cân nặng/ngày) .18 v Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng 1.2: Đối chiếu loại axit amin thiết yếu 19 Bảng 3.1: Sự phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ 38 Bảng 3.2: Ảnh hưởng thời gian đến hiệu suất thu hồi 44 Bảng 3.4 Hàm lượng axit amin mẫu nấm 650 49 Bảng 3.5 Hàm lượng axit amin mẫu nấm 662 49 Bảng 3.6 Hàm lượng axit amin mẫu nấm 661 49 Bảng 3.7 Hàm lượng axit amin mẫu nấm 660 49 HÌNH: Hình1 Mẫu nấm 662 .3 Hình2 Mẫu nấm 660 .3 Hình3 Mẫu nấm 661 Hình4 Mẫu nấm 650 .4 Hình1.1 Cấu trúc tế bào nấm Hình 3.1: Sắc đồ hỗn hợp chuẩn 16 axit amin nồng độ 25 ppm .36 Hình 3.2 : Sắc đồ hỗn hợp chuẩn 16 axit amin nồng độ 100 ppm 37 Hình 3.3 : Sắc đồ hỗn hợp chuẩn 16 axit amin nồng độ 250 ppm 37 Hình 3.4 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin mẫu 650 sau thủy phân 22h 46 Hình 3.5 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin mẫu 662 sau thủy phân 22h .48 Hình 3.6 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 22h nấm 661 54 Hình 3.7: Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 22h nấm 660 54 Hình 3.8 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 10h nấm 650 55 Hình 3.9 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 24h nấm 662 55 Hình 3.10 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 20h nấm 662 56 Hình 3.11: Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 14h nấm 650 56 Hình 3.12 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 24h nấm 650 57 Hình 3.13 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 22h nấm 650 57 Hình 3.14 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 18h nấm 662 57 Hình 3.15 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 18h nấm 660 57 Hình 3.16 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 10h nấm 661 57 Hình 3.17 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 14h nấm 661 57 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ CÁI VIẾT TẮT HPLC: Sắc ký lỏng hiệu cao UV : ultraviolet vi Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an IU: Đơn vị quốc tế Detector : Đầu dò GC: Sắc kí khí SKPB: Sắc kí phân bố Pump : Bơm Degasse: Bộ phận khử khí OPA : Ortho – phthalaldehyd TEA: Triethylamine THF: triethylamine LỜI MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ngày sản phẩm chế xuất từ thực vật, thảo dược đánh giá cao nhà khoa học nghiên cứu nhiều Ngồi cơng dụng tốt cho sức khỏe người, giúp phịng chống bệnh tật ….thì sản phẩm khơng có tác dụng phụ ảnh hưởng sau Một đề tài nhà khoa học quan tâm nghiên cứu đưa vào ứng dụng thực tế sản phẩm loài nấm Hiện nấm trở thành phần bữa ăn người dân, bên cạnh mùi vị thơm ngon, dễ chế biến giàu dinh dưỡng, nấm xem loài “rau vii Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an sạch” có giá trị dược liệu Trong số có số lồi biết rõ thành phần dinh dưỡng Tuy nhiên số lồi cịn lại thành phần chưa cơng bố thức, đặc biệt thành phần amino axit Vì thế, việc xác định thành phần amino axit nấm Việt Nam điều cần thiết, góp phần phục vụ cho việc khảo sát nguồn thực phẩm giàu axit amin Việt Nam Việc xác định amino axit thực nhiều công cụ khác như: sắc kí giấy, sắc kí lớp mỏng, sắc kí trao đổi ion… Phân tích amino axit cơng cụ truyền thống địi hỏi nhiều thời gian phức tạp Ngày với phát triển kĩ thuật phân tích, việc xác định thành phần amino axit mẫu sinh hóa đơn giản nhiều hầu hết công cụ tự động hóa nối trực tiếp phận xử lí số liệu Sắc kí lỏng hiệu năg cao phương pháp sắc ký cột với hệ thống detector có độ nhạy cao, phát chất tách trình chạy sắc ký Với tiến kỷ thuật cột đầu dị, HPLC phương pháp phân tích có tốc độ nhanh cho hiệu suất cao Xuất phát từ thực tế đó, chúng tơi lựa chọn đề tài nghiên cứu: “Xác định hàm lượng axit amin số loài nấm lớn vùng Bắc Trung Bộ phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao” Nhiệm vụ đồ án Trong khóa luận này, tơi có nhiệm vụ sau: - Nghiên cứu tổng quan Nấm, giá trị thành phần dinh dưỡng Nấm - Nghiên cứu tính chất vật lý, hóa học phương pháp xác định loại protein axitamin - Tách xác định đồng thời loại axitamin phương pháp HPLC - Kiểm tra, đánh giá phương pháp điều kiện phân tích với q trình thực xử lí kết Tơi hy vọng luận văn góp phần bổ sung, hồn thiện số liệu bảng thành phần thực phẩm Việt Nam cung cấp số liệu cho nghiên cứu dinh dưỡng Nấm Đối tƣợng nghiên cứu Mẫu nấm thu thập từ rừng vùng Bắc Trung Bộ Mỗi mẫu lấy 50g, đựng vào túi nilông Bao gồm họ nấm: Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an - Coriolaceae - Ganodermataceae - Lentinaceae Hình1 Mẫu nấm 662 Hình2 Mẫu nấm 660 Hình3 Mẫu nấm 661 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình4 Mẫu nấm 650 CHƢƠNG TỔNG QUAN Tổng quan Nấm 1.1 Giới thiệu giới nấm Nấm giới riêng biệt lớn với khoảng 1,5 triệu loài, mơ tả 69.000 lồi (theo Hawksworth,1991), sống khắp nơi Trái đất từ hốc tường đến thực vật, động vật, người; bao gồm nấm men, nấm mốc loài nấm lớn Ban đầu nấm xếp vào giới thực vật Tuy nhiên, quan điểm ngày khơng cịn thuyết phục nhiều nhà phân loại học đề nghị xếp nấm vào giới riêng, gọi giới nấm Sở dĩ nấm xếp vào giới riêng mà không xếp vào giới thực vật hay động vật nấm có nhiều điểm khác thực vật như: - Khơng có lục lạp, khơng có sắc tố quang hợp nên khơng thể tự tổng hợp chất hữu cho thể từ thể khác thực vật, động vật - Không có phân hố quan thành thân, rễ, lá, hoa - Phần lớn khơng có chứa cenllulose vách tế bào, mà chủ yếu chitin glucan Chitin chất gặp nhiều động vật thực vật, chủ yếu nhóm giáp xác trùng, tạo thành lớp vỏ cánh cứng cho loài Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.1.4 Hàm lƣợng axitamin sau thủy phân mẫu  Loại nấm 650 Hình 3.4 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin mẫu nấm 650 sau thủy phân 22h 46 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng 3.4 : Hàm lƣợng axit amin mẫu nấm 650 TT Axit amin Diện tích Hàm lượng(ppm) A(μg/g) Asp 218,52722 240,15241 16,01 x 10-6 Glu 144,54781 188,98192 12,6 x 10-6 Ser 160,67078 187,55894 12,5 x 10-6 His 44,48045 89,03065 5,93 x 10-6 Gly 26,92914 34,01510 2,27 x 10-6 Thr 214,73170 253,99917 16,93 x 10-6 Ala 62,88517 70,62044 4,70 x 10-6 Arg 1497,27393 1578,65978 105,24 x 10-6 Try 67,32000 65,12175 4,34 x 10-6 10 Cys-ss-Cys 165,36705 141,08810 9,40 x 10-6 11 Val 128,23581 153,77047 10,25 x 10-6 12 Met 323,39188 311,29660 20,75 x 10-6 13 Phe 351,21167 359,68043 23,97 x 10-6 14 Ile 149,97093 198,67169 13,25 x 10-6 15 Leu 142,90935 152,43966 10,16 x 10-6 16 Lys 208,53539 135,74548 9,05 x 10-6 4160,83259 277,35 x 10-6 Tổng 47 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an  Loại nấm 662 Hình 3.5 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin mẫu nấm 662 sau thủy phân 22h 48 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng 3.5 Hàm lƣợng axit amin mẫu nấm 662 TT Axit amin Diện tích Hàm lượng(ppm) A(μg/g) Asp 438,70694 487,27241 3,25 x 10-6 Glu - - - Ser 406,53012 475,34388 31,69 x 10-6 His 267,05029 518,7396 34,58 x 10-6 Gly 182,75934 237,00805 15,80 x 10-6 Thr 495,90692 591,34857 39,42 x 10-6 Ala 349,68698 394,78989 26,32 x 10-6 Arg 1043,92969 1100,83576 73,39 x 10-6 Try 137,86070 134,22128 8,95 x 10-6 10 Cys-ss-Cys 466,01538 383,12680 25,54 x 10-6 11 Val 374,56281 448,07027 29,87 x 10-6 12 Met 749,10376 719,02698 47,94 x 10-6 13 Phe 482,90030 493,01892 32,87 x 10-6 14 Ile 267,50595 356,00481 23,74 x 10-6 15 Leu 222,79173 235,80642 15,72 x 10-6 16 Lys 130,88943 87,01120 5,80 x 10-6 6661,62484 414,88 x 10-6 Tổng 49 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.6: Sắc đồ hỗn hợp axit amin mẫu nấm 661 22h 50 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng 3.6: Hàm lƣợng axit amin mẫu nấm 661: TT Axit amin Hàm lƣợng Diện tích A (μg) ppm Asp 303.32764 335.32866 22.36 x 10-6 Glu 203.30325 266.19841 17.75 x 10-6 Ser 233.17638 272.42869 18.16 x 10-6 His 80.05996 5.34 x 10-6 Gly 27.99981 35.40981 2.36 x 10-6 Thr 262.67361 1.18596 0.08 x 10-6 Ala 12.44383 1.05438 0.07 x 10-6 Arg 1397.09033 1473.06645 98.20 x 10-6 Try 52.43052 50.53647 3.37 x 10-6 10 Cys-SS-Cys 165.76929 141.41193 9.43 x 10-6 11 Val 68.06734 81.88404 5.46 x 10-6 12 Met 179.36996 173.35799 11.56 x 10-6 13 Phe 152.43214 158.41050 10.56 x 10-6 14 Ile 116.83372 154.31401 10.29 x 10-6 15 Leu 99.05105 106.66831 7.11 x 10-6 16 Lys 148.31871 97.95064 6.53 x 10-6 3429.26621 228.63 x 10-6 39.83404 Tổng 51 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.7: Sắc đồ hỗn hợp axit amin mẫu nấm 660 22h 52 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng 3.7: Hàm lƣợng axit amin mẫu nấm 660 TT Axit amin Hàm lƣợng Diện tích A (μg/g) ppm Asp 161.17790 175.78607 11.72 x 10-6 Glu 108.95992 142.21228 9.48 x 10-6 Ser 116.66348 136.04722 9.07x 10-6 His - - - Gly 103.14841 133.30250 8.89 x 10-6 Thr 116.72576 136.41326 9.09 x 10-6 Ala - - - Arg 331.44318 349.87624 23.33 x 10-6 Try 77.34223 74.93922 4.99 x 10-6 10 Cys-SS-Cys 90.62297 80.92494 5.39 x 10-6 11 Val 71.41953 85.88907 5.73 x 10-6 12 Met 118.33728 114.90324 7.66 x 10-6 13 Phe 48.34042 53.01466 3.53 x 10-6 14 Ile 56.29899 73.28184 4.88 x 10-6 15 Leu 24.34138 28.69989 1.91 x 10-6 16 Lys 15.12702 14.35321 0.957 x 10-6 1599.64364 106.627x 10-6 Tổng 53 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an  Một số sắc đồ khảo sát mẫu nấm Hình 3.8 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 10h nấm 650 Hình 3.9: Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 24h nấm 662 54 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.10 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 20h nấm 662 Hình 3.11 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 14h nấm 650 55 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.12 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 24h nấm 650 Hình 3.13: Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 22h nấm 650 56 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.14 : Sắc đồ hỗn hợp axit amin thủy phân thời gian 18h nấm 662 Hình 3.15: Sắc đồ hỗn hợp axit amin mẫu nấm 660 18h 57 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.16: Sắc đồ hỗn hợp axit amin mẫu nấm 661 10h Hình 3.17: Sắc đồ hỗn hợp axit amin mẫu nấm 661 14h 58 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1.Kết luận Từ kết phân tích mẫu nấm ta thấy: - Trong mẫu nấm xuất 16 loại axit amin có 7/8 loại axit amin thiết yếu cần thiết cho người lớn - Hàm lượng axit amin tương đối lớn Nhìn chung, hàm lượng axit amin mẫu nấm 662 lớn nhiều so với mẫu nấm 650 mẫu nấm 661 lớn nhiều so với mẫu nấm 660  Mẫu nấm 662: 6661,62484 ppm Trong loại axit amin có hàm lượng cao loại Arginine cịn axit amin có hàm lượng bé loại lysin  Mẫu nấm 650: 4160,83259 ppm Trong loại axit amin có hàm lượng cao Arginine cịn axit amin có hàm lượng bé loại glycin  Mẫu nấm 661: 3429.26621 ppm  Mẫu nấm 660: 1599.64364 ppm - Với loại axit amin thiết yếu Tryptophan ( mẫu nấm 660 ) Methionine ( mẫu nấm 661 ) có hàm lượng lớn Một số axit amin thiết yếu khác có hàm lượng cao phenylalanin, valanine, isolucin,… 4.2 Kiến nghị Do điều kiện hạn hẹp nên q trình phân tích sử dụng loại dẫn xuất khác, đề nghị cho máy chạy thử dẫn xuất AQC hay PITC để xác định đầy đủ 17 loại axit amin có nấm Linh Chi xác định xác nồng độ có mặt axit amin xuất Píc sắc ký Muốn khảo sát thêm điều kiện nhằm tối ưu hóa phương pháp như: nồng độ axit thủy phân, nhiệt độ thủy phân ,thời gian thủy phân… 59 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn