Xác định hàm lượng axít amin trong sữa tươi bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao hplc

Tr-ờng đại học vinh Khoa hoá ======== Đồ án tốt nghiệp Đề tài: Xác định hàm l-ợng axít amin sữa t-ơi sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Giảng viên h-ớng dẫn: TS Trần Đình thắng Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Định Lớp: 48K - Công nghệ thùc phÈm Vinh, th¸ng 12/2011 i LỜI CẢM ƠN Luận văn thực phịng thí nghiệm chun đề Hố hữu - khoa Hóa, Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm Mơi trường, Trường Đại học Vinh Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc đến TS Trần Đình Thắng Khoa Hóa, Trường Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện suốt q trình thực luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn ThS Chu Thị Thanh Lâm - Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm Mơi trường- Trường Đại học Vinh tạo điều kiện thuận lợi, động viên tơi q trình làm luận văn Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, cán Bộ môn Công nghệ thực phẩm, Khoa Hóa, bạn sinh viên, gia đình người thân động viên giúp đỡ tơi hồn thành luận văn SINH VIÊN Nguyễn Thị Định ii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC HÌNH v DANH MỤC BẢNG BIỂU vi DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề Nhiệm vụ nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Sữa 1.1.1 Sữa vinamilk 1.1.2 Sữa Mộc châu 1.2 Cấu tạo phân loại axít amin 12 1.2.1 Cấu tạo 12 1.2.2 Phân loại 13 1.3 Tính chất axit amin 17 1.3.1 Tính chất vật lý 17 1.3.2 Tính chất hoá học 18 1.3.3 Tính chất cảm quan 25 1.4 Vai trị axít amin 26 1.5 Sự hình thành liên kết peptit 29 1.6 Tổng quan phương pháp định lượng prtein axít amin 32 1.6.1 Định lượng nitơ toàn phần phương pháp Kjeldahl 32 1.6.2 Định lượng protein hòa tan [5] 32 1.6.3 Định lương protein tiêu hóa pepsin [5] 33 1.6.4 Định lượng nitơ axit amin phương pháp chuẩn độ 33 1.6.5 Các phương pháp tách xác định đồng thời axit amin 35 iii Chương 2: PHƯƠNG PHÁP VÀ THỰC NGHIỆM 40 2.1 Phương pháp nghiên cứu 40 2.2 Thực nghiệm 42 2.2.1 Thiết bị, dụng cụ, hoá chất 42 2.2.2 Cách tiến hành 43 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 46 3.1 Xây dựng đường chuẩn 46 3.2 Phương pháp xử lý kết 50 3.3 Hiệu suất thu hồi 54 3.4 Các yếu tố ảnh hưởng tới hiệu suất thu hồi axít amin 55 3.4.1 Nồng độ axít 55 3.4.2 Nhiệt độ thủy phân 57 3.4.3 Thời gian thủy phân 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 65 iv DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1: Các loại sữa tươi Hình 1.2: Cơng thức cấu tạo axít amin nhóm I 14 Hình 1.3: Cơng thức cấu tạo axít amin nhóm II 14 Hình 1.4: Cơng thức cấu tạo axít amin nhóm III 15 Hình 1.5: Cơng thức cấu tạo axít amin nhóm IV 15 Hình 1.6: Cơng thức cấu tạo amino acid nhóm V 15 Hình 3.1: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa thêm chuẩn, nồng độ HCl 6M 55 Hình 3.2: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa khơng thêm chuẩn, nồng độ HCl 6M 56 Hình 3.3: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa thêm chuẩn nhiệt độ 110oC 58 Hình 3.4: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa khơng chuẩn nhiệt độ 110oC 58 Hình 3.5: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa khơng chuẩn thời gian 20h 61 Hình 3.6: Sắc đồ tách axit amin mẫu sữa có chuẩn thời gian 20h 62 Hình 3.7: Sắc đồ tách axit amin mẫu sữa Mộc Châu 62 Hình 3.8: Sắc đồ tách axit amin mẫu sữa Vinamilk 63 Hình 3.9: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa TH Truemilk 63 v C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC BẢNG BIỂU Trang Bảng 1.1: Các amino acid thường gặp 16 Bảng 1.2: Sự xuất trimethyl acid amin (betaine) 20 Bảng 1.3: Vị số axít amin dung dịch nước pH 6-7 26 Bảng 3.1: Đổi đơn vị axit amin 51 Bảng 3.2: Các thơng số axít amin sữa mộc châu 51 Bảng 3.2: Các thơng số axít amin Sữa vinamilk 52 Bảng 3.3: Các thông số axit amin Sữa TH trumilk 53 Bảng 3.4: Hàm lượng axít amin loại sữa ( g /l) 54 Bảng 3.5: Ảnh hưởng nồng độ HCl đến hiệu suất thu hồi axít amin 56 Bảng 3.6: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất thu hồi axit amin 59 Bảng 3.7: Ảnh hưởng nồng độ HCl đến hiệu suất thu hồi axit amin 60 Biểu đồ 3.1: Sự phụ thuộc hiệu suất thu hồi axít amin vào nồng độ HCl thủy phân 57 Biểu đồ 3.2: Sự phụ thuộc hiệu suất thu hồi axít amin vào nhiệt độ thủy phân 59 Biểu đồ 3.3: Sự phụ thuộc hiệu suất thu hồi axít amin vào thời gian thủy phân 61 vi Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ VIẾT TẮT Asp: Asparatic acid Glu: Glutamic acid Ser: Serine His: Histidine Gly: Glycine Thr: Threonine Ala: Alanine Arg: Arginine Tyr: Tyrosine Cys – SS- cys: Cystine Val: Valine Met: Methionine Phe: Phenylalanine Ile: Isoleucine Leu: Leucine Pro: Proline Lys: Lysine HPLC: Sắc ký lỏng hiệu cao TEA: Tryetylamin THF: Tetrahydrofuran vii Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an MỞ ĐẦU Lý chọn đề Sữa thành phần quan trọng thiếu thể người Là thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao, chứa đầy đủ nhóm chất cần thiết cho thể protein, lipit, đường, vitamin khoáng chất hợp chất cần thiết cho phần ăn ngày người trẻ em, người già người bệnh Hàng ngày, thể người cần cung cấp chất đạm thông qua thực phẩm thịt cá, đậu, trứng, sữa…nhưng thể sử dụng nguồn đạm chúng dạng acid amin Chất đạm nói chung đa dạng tồn chúng lại xây dựng, cấu thành từ khoảng 20 axit amin Trong có axit amin bắt buộc phải có là: ioleucin, leucin, methinin, phenylalanin, threonin, tryptotpan, valin va lysin Cịn axít amin khác gọi khơng thiết yếu, thể sẻ chuyển hóa sinh tổng hợp Sữa thực phẩm chứa nhiều đạm có vai trị quan việc cung cấp đầy đủ dinh dững lượng cho người Nhanh hấp thụ vào thể bổ sung axit amin thiếu hụt cho thể Ở nước phát triển, sữa tươi xem thực phẩm dinh dưỡng, giàu vitamin khoáng chất từ thiên nhiên, tốt cho thể Sữa tươi sử dụng thường xuyên thức uống hàng ngày, mà dùng nhiều hình thức khác từ pha chế, trộn với trái cây, làm bánh thêm vào ăn Trong năm gần kinh tế nước ta ngày phát triển, nhu cầu dinh dưỡng người ngày cao, mức tiêu thụ sữa sản phẩm sữa người Việt Nam tăng nhanh đời sống thu nhập người dân ngày nâng cao Theo thống kê Agroinfo, mức tiêu thụ sản phẩm sữa tính theo đầu nguời Việt Nam tăng mạnh giai đoạn 1997–2010, sữa tươi có mức tăng 10%/năm Các nhà khoa học Trường Đại học Reading Đại học Cardiff Anh công bố kết 324 nghiên cứu tồn giới có liên quan tới mối liên hệ sức khỏe người việc tiêu thụ sữa hàng nghìn người dân Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Nghiên cứu phát rằng, người hàng ngày uống khoảng 0,5l (con số xác nghiên cứu 0,568261 lít) sữa giảm tới 15-20% nguy phát triển bệnh tim mạch.Các bác sĩ chuyên gia dinh dưỡng ln khuyến khích người tiêu dùng uống sữa tươi 100% thiên nhiên khơng dễ uống, mùi vị thơm ngon, sữa tươi cịn dễ hấp thu uống thường xuyên, liên tục dễ dàng với hình thức bao bì đóng gói tiện dụng Các nhà khoa học phát thêm là: nhờ uống sữa mức độ phát triển bệnh tiểu đường người thử nghiệm giảm 49% Chỉ số tìm thấy người mắc bệnh ung thư ruột Và có tín hiệu khả quan người mắc loại ung thư khác, ung thư tuyến tiền liệt bàng quang Việc tách xác định 17 axít amin sữa giúp có cách phối hợp hiệu thực phẩm với để nâng cao chất lượng protein phần, đáp ứng nhu cầu dinh dưỡng cho thể người.Vì đề tài thực với mục tiêu nghiên cứu tối ưu hoá điều kiện để tách xác định số axít amin thực phẩm máy sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Nhiệm vụ nghiên cứu - T chất hố học, tính chất vật lý, tính chất cảm quan axít amin - Nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện để tách xác định hàm lượng axít amin - Nghiên cứu phương pháp tách xác định axít amin sữa Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Chương TỔNG QUAN 1.1 Sữa Các loại sữa tươi nghiên cứu: - Sữa vinamilk - Sữa Mộc châu - Sữa TH truemilk Hình 1.1: Các loại sữa tươi Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Cmẫu : Nồng độ mẫu thực đo Cso : Nồng độ chuẩn biết trước 3.4 Các yếu tố ảnh hưởng tới hiệu suất thu hồi axít amin 3.4.1 Nồng độ axít Nồng độ axít yếu tố ảnh hưởng lớn đến hiệu suất thu hồi axít amin Khi nồng độ axit chưa đủ để thủy phân mẫu phân tích axít amin chưa tách khỏi dẫn đến hiệu suất thu hồi số axít amin lớn 100% (do lẫn tạp chất píc khác chưa tách, cịn axít amin mà tách hiệu suất thu hồi thấp bị lẫn tạp chất Từ nồng độ 5.5M đến 6.5M hiệu suất axít amin ổn định Hình 3.1: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa thêm chuẩn, nồng độ HCl 6M 55 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.2: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa khơng thêm chuẩn, nồng độ HCl 6M Bảng 3.5: Ảnh hưởng nồng độ HCl đến hiệu suất thu hồi axít amin Nồng 5.5 Ala(Cs+mẫu) 1395,28897 1714,97228 1954,47313 Ala(Cmẫu) 1301,73386 827,89552 1004,38651 Hiệu suất(%) 93,5 88,7 95,7 Gly(Cs+ mẫu) 2674,10112 1547,10676 3332,51550 Gly(Cmẫu) 1757,01113 657,10665 2362,45321 Hiệu suất (%) 89,5 89,2 97,2 Ser(Cs+mẫu) 3313,1268 6320,32847 1757,01113 Ser (Cmẫu) 2424,1575 5412,31546 794,02111 Hiệu suất(%) 68,4 90,8 96,9 56 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 120 100 80 Ala Gly Ser 60 40 20 5,5 Biểu đồ 3.1: Sự phụ thuộc hiệu suất thu hồi axít amin vào nồng độ HCl thủy phân Cs+ mẫu: Nồng độ mẫu chuẩn Cmẫu: Nồng độ mẫu Cso : Nồng độ chuẩn thêm vào, Với Cso =1000 pmol /µl 3.4.2 Nhiệt độ thủy phân Cũng với nồng độ HCl môi trường thủy phân mà chưa đủ hiệu suất thu hồi axít amin khơng cao, nhiệt độ thủy phân mẫu phân tích yếu tố quan trọng q trình thủy phân mẫu để tách axít amin Khi nhiệt độ chưa đủ để phá vỡ chuỗi peptid thu dung dịch mẫu khơng thể tách riêng biệt axít amin 57 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.3: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa thêm chuẩn nhiệt độ 110oC Hình 3.4: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa không chuẩn nhiệt độ 110oC Nhận xét: Khi thủy phân mẩu nhiệt độ 110oC nhiệt độ chưa đủ để phá vỡ peptit nên tách axit amin histadin riêng biệt 58 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng 3.6: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất thu hồi axit amin Nhiệt độ 110 125 140 Asp(Cs+mẫu) 2251,66347 2612,11463 2072,37179 Asp(Cmẫu) 1516,56532 1645,11435 1187,38276 Hiệu suất(%) 73,5 98,8 88,5 Ser(Cs+ mẫu) 2674,10112 3018,66251 878,18332 Ser(Cmẫu) 1757,01113 2020,66251 15,18387 Hiệu suất (%) 91,7 96,2 86,5 Gly(Cs+mẫu) 3413,1268 620,19403 2651,15089 Gly(Cmẫu) 2424,1575 526,49403 1861,15088 Hiệu suất(%) 98,9 93,7 79,9 Cs+ mẫu: Nồng độ mẫu chuẩn Cmẫu: Nồng độ mẫu Cso : Nồng độ chuẩn thêm vào, Với Cso =1000 pmol /µl Nhận xét: Thủy phân mẫu nhiệt độ 110oC 140oC hiệu suất thu hồi axit amin khơng cao so với thủy phân mẩu nhiệt độ 125oC 120 100 80 Asp 60 Ser Gly 40 20 110 125 140 Biểu đồ 3.2: Sự phụ thuộc hiệu suất thu hồi axít amin vào nhiệt độ thủy phân Nhận xét: Từ biểu đồ ta thấy nhiệt độ 110oC hiệu suất thu hồi axít amin tương đối thấp,cịn nhiệt độ 140oC hiệu suất thu hồi axít amin thấp không ổn 59 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an định Ở nhiệt độ 125oC hiệu suất thu hồi axít amin ổn định cao Đây nhiệt độ thích hợp để thủy phân mẫu sữa 3.4.3 Thời gian thủy phân Thời gian ảnh hưởng rỏ rệt đến hiệu suất thu hồi khả tách axít amin Nếu thời gian ngắn quá, mẫu chưa thủy phân hồn tồn, axít amin tạp chất chưa tách khỏi nhau, nên hiệu suất thu hồi axít amin thấp Nhận xét: Khi thủy phân mẩu thời gian 20h nhiệt độ chưa đủ để phá vỡ peptit nên tách axít amin histadin riêng biệt Bảng 3.7: Ảnh hưởng nồng độ HCl đến hiệu suất thu hồi axit amin Nhiệt độ 20 25 30 Asp(Cs+mẫu) 1223,82699 2632,2311 1503,91968 Asp(Cmẫu) 374,82654 1672,2110 699,91857 48,9 97,6 80,4 Ser(Cs+ mẫu) 1124,29089 1863,01122 3197,67344 Ser(Cmẫu) 249,283247 894,01143 2403,56823 87,5 96,9 79,5 Gly(Cs+mẫu) 3539,76631 2095,37852 1780,9112 Gly(Cmẫu) 2610,76631 1145,36585 917,8221 92,9 95,7 86,3 Hiệu suất(%) Hiệu suất (%) Hiệu suất(%) Cs+ mẫu: Nồng độ mẫu chuẩn Cmẫu: Nồng độ mẫu Cso : Nồng độ chuẩn thêm vào, Với Cso =1000 pmol/µl 60 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 120 100 80 Arg Glu Asp 60 40 20 20 25 30 Biểu đồ 3.3: Sự phụ thuộc hiệu suất thu hồi axít amin vào thời gian thủy phân Nhìn vào biểu đồ ta thấy thủy phân mẩu sữa thời gian 25h thìđạt hiệu suất cao tốt Hình 3.5: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa khơng chuẩn thời gian 20h 61 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.6: Sắc đồ tách axit amin mẫu sữa có chuẩn thời gian 20h Thuỷ phân thời gian 20h mẫu sửa không chuẩn không tách histadine riêng biệt Hình 3.7: Sắc đồ tách axit amin mẫu sữa Mộc Châu 62 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.8: Sắc đồ tách axit amin mẫu sữa Vinamilk Hình 3.9: Sắc đồ tách axít amin mẫu sữa TH Truemilk 63 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Căn vào nhiệm vụ đề tài luận văn hoàn thành nhiệm vụ sau: - Về lý thuyết: + Lý thuyết chung axít amin + Sự hình thành liên kết peptit + Các phương pháp định lượng protein axít amin - Về thực nghiệm + Đã nghiên cứu quy trình xác định hàm lượng axít amin sữa tươi + Đã xác định hàm lượng axít amin ba loại sữa tươi phổ biến + Đã nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi axít amin sữa Kiến nghị Trong điều kiện cho phép, đề nghị áp dụng phương pháp phân tích axít amin chuẩn hóa để mở rộng cho nhiều đối tượng thực phẩm khác nhằm cung cấp thêm số liệu vào bảng thành phần thực phẩm - Nếu có thể, tiếp tục nghiên cứu đánh giá thành phần axít amin loại thực phẩm sản phẩm chế biến để có số liệu cho nghiên cứu dinh dưỡng cho chế độ ăn người bệnh 64 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Hà Huy Khôi & CS (1996), Dinh dưỡng an toàn thực phẩm, Nhà xuất Y học TS.Trần Đình Thắng, Bài giảng mơn Hóa thực Phẩm – Trường Đại học Vinh Phạm văn Sổ, Luận văn Tách xác định môt số axit aminn thực phẩm sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Lê Thị Huyền Dương (2001), Nghiên cứu tách xác định retinoit phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, luận án tiến sỹ hóa học Phạm Văn Sổ, Bùi Thị Như Thuận(1978), Kiểm nghiệm Lương thực Thực phẩm, Nhà xuất Khoa Học Kỹ thuật- Hà nội Nguyễn Trung thuần, phạm Thị Thu, (2002), Bách khoa Dinh Dưỡng, nhà xuất phụ nữ - Hà Nội Viện Dinh dưỡng – Bộ Y Tế(2000), Bảng thành phần dinh dưỡng thực phẩm Việt Nam, Nhà xuất Y học Hà Nội Viện Dinh dưỡng(2000), Tổng điều tra dinh dưỡng, Nhà xuất y học Hà Nội Phạm Luận (1987), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu cao, khoa hóa học, Trường ĐHKHTN Hà Nội 10 Nguyễn văn Ri(2004), Những đường biên dinh dưỡng học, Nhà xuất Y học 11 Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Văn Trung(2003), Hóa học phân tích - Phần 2: Các phương pháp phân tích cơng cụ, Khoa hóa học, Trường ĐHKHTN Hà Nội Tiếng anh 12 Amin, A.S.,Zaky, M(2000), Colorimetric estimation of melatonin in pharmaceutical formulations Mikrochimica acta 135, 81 – 85 13 AOAC official Method (2000), Minosodium Glutamate in Food Potentiometric Titration Metho, C 970.37 14 Bailey, J L., (1962), Estimation of amino acid by ninhydrin In: Techniques in protein Chimistry Elsevier, Amsterdam, pp 73 - 81 65 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 15 Brewer,j M.,Roberts, C W., Stimson, W H., Alexander, J., (1995), Accurate Determination of adjuvant – Associated protein or peptide by Ninhydrin Assay, vol 13 Buttrerworth – Heinemann, Stoneham, MA (pp 1441 – 1444) 16 H Ali, R patzold, H Bruckner (2005) Dertermination of L – and – D – amino acid in smokeless tobacco Food Chemitry Department of food sciences, interdisciplinary Reseach center, Justus – Liebig – University of Giessen, Germany, p – 10 Các trang Web 17 http://www.ebooks.edu.vn 18 http://www.khoahoc.com.vn/doisong/ung-dung 19 http:// moon.vn 20 www.hoahocvietnam.com 21 www.tailieu.vn 22 http:// www.google.com.vn 66 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Định Số hiệu sinh viên: 0752040567 Khóa: 48 Ngành: Cơng nghệ hóa thực phẩm Tên đề tài: “Xác định hàm lượng axít amin sữa tươi sắc ký lỏng hiệu cao HPLC” Nội dung nghiên cứu, thiết kế tốt nghiệp: Họ tên cán hướng dẫn: TS Trần Đình Thắng Ngày giao nhiệm vụ đồ án: Ngày tháng năm 2011 Ngày hoàn thành đồ án: Ngày tháng năm 2011 Ngày… tháng năm 2011 Cán hướng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) Chủ nhiệm môn (Ký, ghi rõ họ, tên) Sinh viên hoàn thành nộp đồ án tốt nghiệp ngày 67 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn tháng năm 2011 Người duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Định Số hiệu sinh viên: 0752040567 Ngành: Cơng nghệ hóa thực phẩm Khóa: 48 Cán hướng dẫn: TS Trần Đình Thắng Nội dung nghiên cứu, thiết kế: Nhận xét cán hướng dẫn: Ngày… tháng… năm 2011 Cán hướng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) 68 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn