MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU 1 PHẦN I: TỔNG QUAN 3 I.1. Axít SorbíC 7. 3 I.1.1. Đặc điểm của axít SorbíC 7. 3 I.1.2. Độc tính của axit sorbic 6 4 I.2. Một số vấn đề về chất phụ da.6 4 I.2.1. Phân loại chất phụ da.6 5 I.2.2. Một số vấn đề về chất bảo quản thực phẩm 6,7 5 I.2.3. Hàm lượng sử dụng của một chất bảo quản trong thực phẩm6 9 I.3. Các phương pháp phân tích hàm lượng axit sorbic trong thực phẩm4,5 11 I.3.1. Phương pháp đo phổ UV. 4,5 11 I.3.2. Phương pháp sắc ký lớp mỏng. 4,5 11 I.4. Một số vấn đề về phân tích quang phổ uv vis. 4,5 12 I.4.1. Phương pháp đường chuẩn 4 14 I.4.2. Phương pháp cặp đôi hay phương pháp chuẩn độ4 15 I.4.3. Phương pháp thêm 4 15 I.5. Đặc điểm thuốc thử axit Thio Barbituric. 7 16 PHẦN II. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 II.1. Dụng cụ thiết bị. 17 II.2. Hoá chất. 17 II.3. Chuẩn bị các dung dịch. 18 III. Tiến hành thí nghiệm 19 III.1 Xác định các điều kiện tối ưu. 19 III.1.1. Xác định bước sóng tối ưu. 19 III.1.2. Xác định thời gian oxi hóa tối ưu. 21 III.1.3 Xác định thời gian tác dụng của thuốc thử với chất cần phân tích. 22 III.1.4. Xác định lượng chất oxi hóa K2Cr2O7 tối ưu. 23 III.1.5. Xác định pH tối ưu. 24 III.1.6. Xác định thuốc thử TBA tối ưu. 25 III.1.7. Khảo sát thời gian ổn định màu. 26 III.1.8. Xây dựng đường chuẩn. 27 IV. Xác định hiệu suất chưng cất. 29 IV.1. Khảo sát sự phụ thuộc hiệu suất cất vào lượng MgSO4. 29 IV.2. Khảo sát sự phụ thuộc hiệu suất cất vào lượng H2SO4.1N. 31 IV.3. Xác định thời gian cất tối ưu. 32 IV.4. Kiểm tra quy trình phân tích qua mẫu tự tạo. 33 IV.5. Kiểm tra hiệu suất cất vào mẫu nước mắm không có axit Sorbic. 33 V. Kiểm tra mẫu. 34 V.1. Xác định hàm lượng axit sorbic có trong hạt trân châu. 34 V.2. Xác định hàm lượng axit sorbic trong nước mắm Nam Ngư. 36 PHẦN III. KẾT LUẬN 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39
Khúa lun tt nghip -Trờng đại học vinh Khoa Hãa häc Khãa luËn tèt nghiệp Xác định hàm lợng axit Sorbic số thực phẩm phơng pháp trắc quang Khóa luận tốt nghiệp dùng thuốc thử axit thiobarbituric Xác định hàm lợng axit Sorbic số thực phẩm phơng pháp trắc quang dùng thuốc thử axit thiobarbituric Nghành hóa phân tích Nghành hóa phân tích Vinh 2010 Sinh viờn thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU .1 PHẦN I: TỔNG QUAN I.1 Axít SorbíC [7] I.1.1 Đặc điểm axít SorbíC [7] Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp I.1.2 Độc tính axit sorbic [6] I.2 Một số vấn đề chất phụ da.[6] I.2.1 Phân loại chất phụ da.[6] .5 I.2.2 Một số vấn đề chất bảo quản thực phẩm [6,7] I.2.3 Hàm lượng sử dụng chất bảo quản thực phẩm[6] I.3 Các phương pháp phân tích hàm lượng axit sorbic thực phẩm[4,5] 11 I.3.1 Phương pháp đo phổ UV [4,5] .11 I.3.2 Phương pháp sắc ký lớp mỏng [4,5] 11 [4,5] I.4 Một số vấn đề phân tích quang phổ uv- vis 12 I.4.1 Phương pháp đường [4] chuẩn 14 I.4.2 Phương pháp cặp đôi hay phương pháp chuẩn độ[4] 15 I.4.3 Phương pháp thêm [4] 15 I.5 Đặc điểm thuốc thử axit Thio Barbituric [7] 16 PHẦN II THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .17 II.1 Dụng cụ thiết bị .17 II.2 Hoá chất .17 II.3 Chuẩn bị dung dịch .18 III Tiến hành thí nghiệm .19 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp III.1 Xác định điều kiện tối ưu 19 III.1.1 Xác định bước sóng tối ưu .19 III.1.2 Xác định thời gian oxi hóa tối ưu 21 III.1.3 Xác định thời gian tác dụng thuốc thử với chất cần phân tích 22 III.1.4 Xác định lượng chất oxi hóa K2Cr2O7 tối ưu .23 III.1.5 Xác định pH tối ưu 24 III.1.6 Xác định thuốc thử TBA tối ưu 25 III.1.7 Khảo sát thời gian ổn định màu 26 III.1.8 Xây dựng đường chuẩn 27 IV Xác định hiệu suất chưng cất 29 IV.1 Khảo sát phụ thuộc hiệu suất cất vào lượng MgSO4 29 IV.2 Khảo sát phụ thuộc hiệu suất cất vào lượng H2SO4.1N 31 IV.3 Xác định thời gian cất tối ưu 32 IV.4 Kiểm tra quy trình phân tích qua mẫu tự tạo 33 IV.5 Kiểm tra hiệu suất cất vào mẫu nước mắm khơng có axit Sorbic 33 V Kiểm tra mẫu 34 V.1 Xác định hàm lượng axit sorbic có hạt trân châu 34 V.2 Xác định hàm lượng axit sorbic nước mắm Nam Ngư 36 PHẦN III KẾT LUẬN 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 LỜI CẢM ƠN Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp Trước hết tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn sâu sắc đến giáo : Võ Thị Hồ thạc sỹ hố học tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi q trình hồn thành đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn thầy ,các khoa Hố học trường Đại Học Vinh, bạn bè giúp đỡ q trình nghiên cứu hồn thành khố luận Do thời gian nghiên cứu hạn chế khó khăn trang thiết bị thí nghiệm nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót, mong thông cảm thầy cô bạn bè Tôi xin chân thành cảm ơn Vinh tháng /2010 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp MỞ ĐẦU Cùng với phát triển dân số , kinh tế xã hội, khoa học công nghệ đòi hỏi mặt hàng thực phẩm phải ngày dồi phong phú số lượng chất lượng Các thực phẩm phải có cấu trúc, trạng thái, màu sắc đẹp, mùi thơm hấp dẫn, dễ vận chuyển, đồng thời phải giữ lâu dài Để đáp ứng nhu cầu q trình chế tác thực phẩm bổ sung thêm chất phụ da, chất bảo quản vào Tuy nhiên bổ sung phải theo tiêu chuẩn Việt Nam hàm lượng chất bảo quản thực phẩm, thực phẩm đảm bảo an toàn Thực phẩm an toàn thực phẩm mà hàm lượng chất bảo quản khơng có có thấp tiêu chuẩn cho phép chất bảo quản Và nguồn thực phẩm cung cấp đủ chất dinh dưỡng cho thể Tuy nhiên nhiều sở sản xuất kinh doanh không tuân theo quy định tiêu chuẩn an toàn mà sử dụng chất bảo quản với hàm lượng vượt mức cho phép Khi gây ảnh hưởng lớn đến sức khoẻ người tiêu dùng, ban đầu gây cảm giác đầy bụng chướng khó chịu, tích tụ gây nên ung thư ung thư gan, ung thư dày v.v Trong chất bảo quản thường dùng axit sorbic muối kaly sorbat chất sử dụng nhiều Axit sorbic muối sorbat có vai trị to lớn q trình bảo quản Nhưng dùng tiêu chuẩn cho phép gây hại cho sức khoẻ Việc sử dụng axit làm chất bảo quản hàm lượng phải giới hạn cho phép Vì lý mà chúng tơi chọn đề tài : xác định hàm lượng axit sorbic thuốc thử axit thiobarbiturric chất oxi hoá K2Cr2O7 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp Tuy nhiên axit sorbic hợp chất hữu việc phân tích khó khăn, mẫu phân tích cịn chứa nhiều chất cản trở khác Do phải lựa chọn biện pháp phân tích hữu hiệu Có thể phân tích axit nhiều phương pháp khắc quang phổ uv-vis, sắc ký lỏng cao áp, trắc quang Trong phương pháp trắc quang dùng nhiều thuốc thử khác sắt peoxit clorua khơng khí khơ, axit thiobarbituric chất oxi hố sắt III Tuy nhiên phương pháp thường khó khăn trình phun nên phải điều chỉnh tốc độ, thời gian hợp lý, khả mát lớn Để hạn chế nhược điểm đề tài sử dụng phương pháp trắc quang với thuốc thử axit thiobarbituric chất oxi hóa K2Cr2O7 Trong phạm vi đề tài đặt nhiệm vụ sau: - Tìm điều kiện tối ưu cho phép phân tích định lượng axit sorbic phương pháp trắc quang dùng thuốc thử axit thiobarbituric chất oxi hóa K2Cr2O7 - Tìm hiệu suất cất tối ưu để cất axit sorbic khỏi thực phẩm -Kiểm tra điều kiện tối ưu qua mẫu tự tạo - Áp dụng quy trình để xác định hàm lượng axit sorbic số mẫu nước mắn số mẫu hạt trân châu bán thị trường thành phố Vinh Hy vọng nhận nhiều ý kiến đóng góp bổ sung thầy để có phương pháp tốt áp dụng vào thực tế phân tích chất bảo quản thực phẩm thị trường PHẦN I: TỔNG QUAN Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp I.1 Axít SorbíC [7] I.1.1 Đặc điểm axít SorbíC [7] Cơng thức phân tử: C6H8O2 Công thức cấu tạo CH3- CH= CH – CH = CH –COOH Tên quốc tế : Axít hexa-2,4 dienoic Tên thường: Axit Sorbíc Khối lượng phân tử 112,12 (g/mol) Nhiệt độ sơi 228oc Nhiệt độ nóng chảy : 135oc Tính axit có pka = 4,76 250c Axít Sorbic chất rắn kết tinh, màu trắng, có vị chua, khó tan nước Độ tan nước lạnh 0,16% Tan tốt dung môi hữu rượu ête số dung môi khác Axit sorbic tìm thấy tro núi tìm thấy lần từ việc tách cịn xanh lương trà roman Axít sorbic sử dụng axit thực phẩm tác nhân chống lại phát triển sinh vật, chống lại nấm mốc nấm men có tác dụng yếu vi khuẩn khác nhau, khơng có tác dụng với vi khuẩn lactic, acetic Thông thường muối axit natri sorbat, kali sorbat, canxi sorbat ứng dụng rộng rãi dễ tan nước Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp so với trạng thái axít Các muối chất bột kết tinh màu trắng, dễ tan nước Axít sorbic muối sorbat có tác dụng hạn chế hư hỏng tăng thời gian sử dụng thực phẩm Đây chất bảo quản hiệu rẻ tiền Khi cho axit sorbic muối sorbat vào thực phẩm giúp thực phẩm nâng cao,ổn định pH pH ổn định ức chế hoạt động vi sinh vật nên thực phẩm có thời gian sử dụng lâu I.1.2 Độc tính axit sorbic [6] Khi hấp thụ lượng lớn axit sorbic gây nở to gan thận, số trường hợp cịn có biến đổi mô học quan Đặc biệt sản phẩm chuyển hoá axit sorbic thực phẩm điều đáng quan tâm Axit sorbic khơng phân ly phản ứng cộng, đặc biệt với HNO2 Sản phẩm độc hại gây to nở gan thận gây khả đột biến gen Axit sorbic muối kaly sorbat gây sai lệch nhiễm sắc thể khí nhịêt độ cao, cịn natri sorbat khả gây ung thư cao Khả gây đột biến gen phân huỷ nhanh tế bào I.2 Một số vấn đề chất phụ da.[6] Chất phụ da thực phẩm chất mà bình thường khơng tiêu thụ thực phẩm thực thụ không sử dụng thành phần đặc trưng thực phẩm ,có thể có hay khơng có giá trị dinh dưỡng, chủ yếu cho vào thực phẩm nhằm mục đích cơng nghệ I.2.1 Phân loại chất phụ da.[6] Hiện có từ 2000 đến 20.000 chất phụ da, bao gồm chất bảo quản, chất làm bền , chất tạo màu v.v Chúng phân loại sau: Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp Phân loại theo tính chất cơng nghệ có: - Chất bảo quản - Chất chống oxi hoá - Chất tạo nhũ, chất ổn định chất tạo cấu trúc - Chất tạo màu Phân loại theo cấu trúc có: -Nhóm A nhóm có tính độc yếu - Nhóm B nhóm có chứa nhóm chức gây độc mang độc tính cao -Nhóm C nhóm có độc tính trung gian I.2.2 Một số vấn đề chất bảo quản thực phẩm [6,7] Chất bảo quản hóa chất tự nhiên hay tổng hợp thêm vào sản phẩm thực phẩm, dược phẩm, sơn, mẫu phẩm sinh học để ngăn ngừa làm chậm lại thối rửa, hư hỏng ngây phát triển vi sinh vật hay thay đổi không mong muốn mặt hóa học Các chất bảo quản thơng thường sử dụng gắn liền với phương pháp bảo quản khác Đơi người ta cịn phối hợp biện pháp bảo quản kháng khuẩn với bảo quản chống ơxi hóa Trong bảo quản kháng khuẩn hoạt động nguyên tắc ngăn chặn phát triển loại vi khuẩn, nấm mốc côn trùng, cịn bảo quản chống ơxi hóa hoạt động ngun tắc ngăn chặn q trình ơxi hóa thành phần thực phẩm Các chất kháng khuẩn thông dụng chế biến thực phẩm Natrinitrat, Natrinitrit, muối sunfit EDTA (axtit etylendiamin tetraaxetic) Các chất oxi hóa thường dùng là: BHA (2 - tert - butyl - hidroxyanosal tert - butyl - hydro xyanisol) BHT (2,6 - di - tert - butyl - metyl phenol) Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp tăng dần bảng sau: Rồi cho ống nghịêm đem đặt vào nồi cách thuỷ đun nóng thời gian tối ưu phút xác định cho vào bồn nước lạnh để làm nguội, sau cho 2.0 ml thuốc thử Thio barbituric axit (TBA) vào ống nghiệm trên, tiếp tục cho ống nghiệm vào nồi cách thuỷ đun nóng thời gian tối ưu 10 phút thấy dung dịch ống nghiệm từ không màu chuyển sang màu hồng Rồi lấy ống nghiệm cho vào bồn nước lạnh để làm nguội Sau nguội cho vào bình định mức 50ml cho nước cất vào đến vạch định mức Để yên 25 phút Đo mật độ quang dung dịch bước sóng tối ưu opt =530nm Ta có kết sau bảng 4sau: Bảng4 phụ thuộc mật độ quang vào lương K2Cr2O7 0.05% ống nghiệm Lượng K2Cr207 ( ml) Mật độ quang ATB 0.05 0.5 0.504 0.791 1.5 0.880 1.001 2.5 0.908 0.860 Vậy lượng chất oxi hoá tối ưu 2.0ml III.1.5 Xác định pH tối ưu Cách làm sau: Dùng pipet lấy 2.0ml (dung dịch I dung dịch axit Sorbic nồng độ 50µg/mol) cho 2ml dung dịch K2Cr2O7 0.05% vào Cho ống nghịêm đem đặt vào nồi cách thuỷ đun nóng phút đưa cho vào bồn nước lạnh để làm nguội, sau cho 2.0 ml thuốc thử Thio barbituric axit 22 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp (TBA) vào ống nghiệm trên, cho lượng axit hay bazo vào bảng tiếp tục cho ống nghiệm vào nồi cách thuỷ đun nóng 10 phút thấy dung dịch ống nghiệm từ không màu chuyển sang màu hồng Rồi lấy ống nghiệm cho vào bồn nước lạnh để làm nguội Sau nguội cho vào bình định mức 50ml, cho nước cất vào đến vạch định mức kiểm tra pH dung dịch Để yên 25 phút Đo mật độ quang dung dịch bước sóng tối ưu opt =530nm Ta có kết bảng sau Bảng 5: Sự phụ thuộc mật độ quang A vào H2SO4 0.O1N Ống nghiệm VH2SO4 0,01N (ml) pH Mật độ quang A 3.5 0.998 0.5 3.3 0.783 3.0 0.642 1.5 2.7 0.453 Tương tự thêm NaOH vào theo bảng sau: Bảng : Sự phụ thuộc mật độ quang A vào NaOH 0.O1N Ống nghiệm NaOH 0.01N (ml) pH Mật độ quang A 0.00 3.5 1.000 0.50 3.7 0.807 1.00 4.0 0.678 1.50 4.3 0.321 Vậy pH tối ưu 3.5 III.1.6 Xác định thuốc thử TBA tối ưu Cách làm sau: 23 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp Lấy 2.0ml dung dịch I (dung dịch axit Sorbic nồng độ( 50 µg/mol) cho 2,0 ml dung dịch K2Cr2O7 0,05% vào Cho ống nghịêm đem đặt vào nồi cách thuỷ đun nóng phút đưa cho vào bồn nước lạnh để làm nguội, sau cho thuốc thử Thio barbituric axit (TBA) vào ống nghiệm theo lượng tăng dần Rồi cho ống nghiệm vào nồi cách thuỷ đun nóng 10 phút lấy ống nghiệm cho vào bồn nước lạnh để làm nguội Sau nguội cho vào bình định mức 50ml cho nước cất vào đến vạch định mức Để yên 25 phút Đo mật độ quang A bước sóng opt= 530nm Ta có kết bảng sau Bảng7: Sự phụ thuộc A vào TBA ống nghiệm Thuốc thử TBA (ml) Mật độ quang A 0.007 0.5 0.284 1.0 0.559 1.5 0.739 2.0 0.999 2.5 0.765 3.0 0.630 Vậy thuốc thử tối ưu 2,0 ml Vậy điều kiện tối ưu 2.0ml axit sorbic cần 2.0ml dung dịch K2Cr2O7 0,05% đun phút cho 2.0ml axit thiobarbituric vào đun 24 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp 10 phút đo mật độ quang bước sóng opt=530nm III.1.7 Khảo sát thời gian ổn định màu Cách làm sau: Lấy 2.0ml dung dịch I (dung dịch axit Sorbic nồng độ 50 µg/mol) cho 2,0ml dung dịch K2Cr2O7 0.05% vào Cho ống nghịêm đem đặt vào nồi cách thuỷ đun nóng phút đưa cho vào bồn nước lạnh để làm nguội, sau cho 2.0 mlThio barbituric axit (TBA) vào ống nghiệm Rồi cho ống nghiệm vào nồi cách thuỷ đun nóng 10 phút lấy ống nghiệm cho vào bồn nước lạnh để làm nguội Sau nguội cho vào bình định mức 50ml cho nước cất vào đến vạch định mức Cho mẫu ổn định thời gian sau Đo mật độ quang A bước sóng opt = 530nm Ta có kết bảng sau: Bảng sụ phụ thuộc A vào thời gian ổn định màu STT Thời gian ổn định (phút) Mật độ quang A 0.565 0.683 10 0.889 15 0.917 20 0.990 25 0.999 30 0.999 35 0.998 40 0.997 10 60 0.997 Vậy thời gian đo mẫu tối ưu từ 25đến 30 phút từ cho vào bình định mức để đo A 25 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp III.1.8 Xây dựng đường chuẩn Cách làm sau Lấy 0.00 ; 10.00; 20.00; 40.00; 60.00; 80.00 100 ml dung dịch I (dung dịch có nồng độ 50µg/ml) cho vào bình định mức 100 ml cho nước cất vào định mức đến vạch Sau lấy 2.0ml dung dịch cho vào ống nghiệm cho tiếp 2.0ml dung dịch K2Cr2O7 0,005% vào Cho ống nghịêm đem đặt vào nồi cách thuỷ đun nóng phút,rồi lấy cho vào bồn nước lạnh để làm nguội, sau cho 2.0 ml thuốc thử Thio barbituric axit (TBA) vào ống nghiệm trên, tiếp tục cho ống nghiệm vào nồi cách thuỷ đun nóng 10 phút,lấy ống nghiệm cho vào bồn nước lạnh để làm nguội Sau nguội cho vào bình định mức 50ml cho nước cất vào đến vạch định mức.khi nồng độ dung dịch 0; 0.2; 0.4 ; 0.8; 1.2; 1.6; 2.0 (µg/ml )Tiến hành đo mật độ quang bước sóng tối ưu opt=530nm xây dựng đường chuẩn Ta có kết sau: Bảng ST Nồng độ axit(µg/ml) Mật độ quang ATB 0.0 0.001 0.2 0.082 0.4 0.210 0.8 0.412 1.2 0.606 1.6 0.772 2,0 1.001 T Đồ thị có dạng: y=0.4968x+0.0007 26 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp R2=0.9985 Hình 1:Đồ thị phụ thuộc nồng độ chất phân tích mật độ quang IV Xác định hiệu suất chưng cất IV.1 Khảo sát phụ thuộc hiệu suất cất vào lượng MgSO4 Cách làm: Lấy 25,0 ml dung dịch II (dung dịch axit sorbic nồng độ 25 µg/ml) cho vào cốc 100ml, cho tiếp 25,0 ml dung dịch H2SO4 1N, cho 10,00 g MgSO4 Định mức nước cất đến mức Cho tất vào bình cất Lấy 10,00 ml NaOH 1N cho vào bình chứa sản phẩm cất, cất khoảng 25 phút Lấy sản phẩm cất cho vào bình định mức 100 thêm 15,0 ml H 2SO41N vào để trung hòa, cho nước vào định mức đến vạch Lấy 2,0 ml sản phẩm cất cho vào ống nghiệm tiếp tục tiến hành xây dựng đường chuẩn đo mật độ quang dung dịch bước sóng opt=530nm Ta có: nồng độ dung dịch axit sorbic bình chiết 27 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp CTT = 6,25 (µg/ml ) Đo mật độ quang dung dịch axit sorbic ta có : A= 0,097 Thay vào đường chuẩn A = 0,4968.C + 0,0007 Vậy nồng độ C = 0,194(µg/ml ) Do lấy ml cho vào bình 50 ml để đo A nên nồng độ giảm 25 lần C0 = 0,194.25 = 4,85 Vậy H = C0 /CTT 100% = 77,61 % Tiến hành tương tự thay hàm lượng MgSO4 tăng dần bảng sau: Bảng 10: Sự phụ thuộc hiệu suất vào MgSO4 Mật độ quang Nồng độ C Nồng độ C0 Hiệu suất A (µg/ml ) (µg/ml) H% 15 0.097 0.194 4.850 77.61 20 0.111 0.222 5.550 88.81 25 0.124 0.248 6.210 99.20 30 0.121 0.243 6.070 97.14 35 0.119 0.238 5.958 95.25 STT mMgSO4 (g) Nhận xét: Từ bảng ta thấy hiệu suất tối ưu 99.20% lượng MgSO4 25g IV.2 Khảo sát phụ thuộc hiệu suất cất vào lượng H2SO4.1N Cách làm: Lấy 25,00 ml dung dịch II ( dung dịch axit sorbic nồng độ 25 28 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp µg/ml ) cho vào cốc 100ml, cho 25g MgSO Cho lượng H2SO41N vào cốc với thể tích tăng dần bảng sau, cho nước cất vào định mức đến vạch Cho tất vào bình cất Lấy 10,0 ml dung dich NaOH 1N cho vào bình chứa sản phẩm cất, cất khoảng 25 phút Lấy sản phẩm cất cho vào bình định mức 100 ml Thêm 15,0 ml H2SO41N vào để trung hòa Cho nước cất vào định mức đến vạch Lấy 2,0 ml sản phẩm cất cho vào ống nghiệm tiếp tục tiến hành xây dựng đường chuẩn đo mật độ quang dung dịch bước sóng opt=530nm Bảng 11: Sự phụ thuộc hiệu suất vào thể tích H2SO4: VH2SO4 T (ml) 15 6.25 0.106 0.215 5.375 86.15 20 6.25 0.113 0.225 5.625 90.02 25 6.25 0.124 0.248 6.20 99.20 30 6.25 0.120 0.240 6.00 96.00 35 6.25 0.115 0.230 5.75 92.00 CTT A Nồng độ C Nồng độ ST (µg/ml ) C0 (µg/ml) Hiệu suất H% Với CTT nồng độ chất phân tích bình cất C0 = C.25 Nhận xét:Từ bảng ta thấy hiệu suất tối ưu 99.20% lượng H2SO4 1N 25,0ml IV.3 Xác định thời gian cất tối ưu Cách làm: Lấy 25,00 ml dung dịch axit sorbic nồng độ (25 µg/ml) cho vào cốc 100 ml Cho 25 g MgSO4 25.0ml dung dịch H2SO41N cho vào cốc định mức đến vạch nước cất, cho vào bình cất đem cất theo thời gian sau: 29 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp Lấy 10,0 ml dung dịch NaOH 1N cho vào bình chứa sản phẩm cất, lấy sản phẩm cất cho vào bình định mức 100ml thêm 15,0 ml dung dịch H2SO4 1N để trung hòa, cho nước cất vào định mức đến vạch Lấy 2.0 ml sản phẩm cất cho vào ống nghiệm tiếp tục tiến hành xây dựng đường chuẩn để đo mật độ quang bước sóng opt =530nm Ta có kết bảng sau: Bảng 12: Sự phụ thuộc hiệu suất cất vào thời gian: STT Thời gian cất(phút) A Nồng độ C Nồng độ C0 Hiệu suất H (µg/ml ) (µg/ml) % 10 0.080 0.160 4.00 64.00 15 0.100 0.199 4.99 79.99 20 0.108 0.216 5.40 86.42 25 0.124 0.248 6.20 99.20 30 0.124 0.248 6.20 99.20 Nhận xét: Thời gian cất tối ưu 25 phút IV.4 Kiểm tra quy trình phân tích qua mẫu tự tạo Mẫu tự tạo: Lấy 30,0 ml dung dịch axit sorbic nồng độ 25µg/ml cho vào cốc 100 ml, cho tiếp 25,0 ml dung dịch H2SO41N 25g MgSO4 vào cốc bình cất, cho nước cất vào định mức đến vạch Cho vào bình cất Lấy 10,0ml NaOH1N cho vào bình chứa sản phẩm cất, cất 25 phút Cho sản phẩm cất vào bình định mức 100 ml, cho 15,0 ml H2SO4 vào để trung hòa Cho nước cất vào định mức đến vạch Lấy 2.0 ml sản phẩm cất tiếp tục làm cách xây dựng đường chuẩn đo mật độ quang Thu kết bảng 12 sau: Bảng 13: Kiểm tra mẩu tự tạo 30 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp Lần đo A C(µg/ml C0(µg/ml) 0.148 0.2965 7.4125 0.149 0.2985 7.4625 0.147 0.2945 7.3625 C0tb(µg/ml) 7.4125 Ta có Sx = 5.10-3 Vậy Ttn = 3.3 < T(95.3) = 4.3 Với độ tin cậy sai số ngẫu nhiên nên áp dụng phương pháp IV.5 Kiểm tra hiệu suất cất vào mẫu nước mắm axit Sorbic Lấy 100,0 ml nước mắm khơng có chất bảo quản axit sorbic , hút 5,0 ml nước mắm cho vào cốc 100 ml, cho tiếp 25,0 ml dung dịch H2SO41N 25g MgSO4 vào cốc Cho nước vào định mức đến vạch Cho vào bình cất Lấy 10,0ml NaOH1N cho vào bình chứa sản phẩm cất, cất 25 phút Cho sản phẩm cất vào bình định mức 100 ml, cho 15,0 ml H2SO4 vào để trung hòa Cho nước cất vào định mức đến vạch Vậy nồng độ C= 25 (µg/ml ) Lấy 2.0 ml sản phẩm cất tiếp tục làm cách xây dựng đường chuẩn Đo mật độ quang ta có kết bảng sau 14: Bảng 14: mật độ quang mẫu thử Nồng độ Nồng độ C0 C(µg/ml) (C0 = C.25)(µg/ml ) Lần đo Mật độ quang A 0.485 0.9747 24.373 0.480 0.9648 24.120 0.482 0.9689 24.237 Vậy nồng độ COTB = 24.388 (µg/ml) Do hiệu suất cất 99,20% nên nồng độ C0TT = 24.443 (µg/ml) 31 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp Vậy q 24, 443 25,000 2,36% 25,000 V Kiểm tra mẫu V.1 Xác định hàm lượng axit sorbic có hạt trân châu MẪU Hạt trân châu sa na (Đồng Nai) Cách làm: Cân 10,00g hạt trân châu cho vào cốc 100 ml cho 25g MgSO 25,0ml H2SO41N vào cốc, cho nước cất vào định mức đến vạch Cho tồn vào bình cất Lấy 10,0ml NaOH 1N cho vào bình chứa sản phẩm cất,đem cất 25 phút Lấy sản phẩm cất cho vào bình định mức 50 ml thêm 15,0 ml H2SO4 1N vào, định mức đến vạch nước cất Lấy 2,0 ml dung dịch cho vào ống nghiệm, tiến hành cho chất oxi hóa, thuốc thử làm xây dựng đường chuẩn đo mật độ quang Ta thu kết bảng sau: Bảng14: Kết nồng độ axit sorbic hạt trân châu sa na Lần đo A C C0 0.114 0.2281 5.7025 0.116 0.2321 5.8025 C0TB 5.7692 0.116 0.2321 5.8025 Đo hiệu suất cất 99.20 nên nồng độ thực tế là: CTT = 5.816 Với E = 0.039 Vậy CTT= 5.816 ± 0.039 µg/ml Nghĩa 1ml sản phẩm cất có 5.816± 0.039 µg Vậy 250 ml sản phẩm cất ( ứng với 50,00g mẫu) có (5,816± 0,039).250 (µg) 32 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp Vậy 1000g mẫu thì: m = (5.816± 0.039).250.20 (µg) = 29.080 ± 0.19mg Hay hàm lượng axit sorbic trân châu sana là: 29,080 ± 0.19mg/ kg Theo tiêu chuẩn VN: m = 1g/1kg Mẫu hạt trân châu Hoa Trân (BD) Làm tương tự ta có mât độ quang sau Bảng 15 STT A C C0 0.120 0.2402 6.0030 0.123 0.2462 6.1514 0.125 0.2502 6.2250 Vậy C0TB = 6.1375 Đo hiệu suất cất 99.20 nên nồng độ thực tế là: CTT = 6.1869 Với E = 0.04 Vậy CTT= 6.1869± 0.04 µg/ml Nghĩa 1ml sản phẩm cất có = 6.1869± 0.04 µg Vậy 250 ml sản phẩm cất ( ứng với 50,00g mẫu) có (5,816± 0,039).250 (µg) Vậy 1000g mẫu thì: m =( 6,1869± 0,04 ).250.20 (µg) = 30.934 ± 0.2 mg/1kg Theo tiêu chuẩn VN: m = 1mg/1kg V.2 Xác định hàm lượng axit sorbic nước mắm Nam Ngư Cách làm: Lấy 10,0 ml nước mắm, cho tiếp 25g MgSO4 25ml H2SO4 cho cốc 100ml cho nước cất vào đến vạch Sau cho vào bình cất Lấy 33 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp 10,0ml NaOH1N cho vào bình chứa sản phẩm cất đem cất 25 phút Lấy sản phẩm cất cho vào bình 100 ml thêm 15,0 ml H 2SO4 1N vào định mức đến vạch nước cất Lấy 2,0 ml dung dịch sản phẩm cất cho vào ống nghiệm đem tiến hành cho chất oxi hóa, thuốc thử điều kiện xây dựng đường chuẩn đo mật độ quang ta thu kết sau: Bảng 14 Lần đo A C C0 0.799 1.608 40.1725 0.798 1.605 40.1221 0.800 1.609 40.2224 C0TB 40.1722 Với E = 1.02 Do hiệu suất cất 99.20 nên nồng độ thực tế là: CTT = 40.496 Vậy C = 40.496 ± 1.02 (µg/ml) Nghĩa ml sản phẩm cất có 40,496 ± 1,02(µg) Nên 100ml sản phẩm cất(ứng với 10ml nước mắm) có: (40,496 ± 1,02) 100 (µg) Với 1000 ml nước mắm có:m = (40,496 ± 1,02).100.100 (µg) = 0.404± 0.0102g Hay hàm lượng axit sorbic nươc mắm m= 0.404± 0.0102g/l Theo TCVN cho phép 0.5g/l 34 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp PHẦN III KẾT LUẬN Đã tổng quan số vấn đề về: đặc điểm axit sorbic, đặc điểm chất phụ gia, chất bảo quản thực phẩm Đã chọn điều kiện tối ưu để định lượng axit sorbic thực phẩm phương pháp trắc quang bước sóng tối ưu, chất oxi hóa K2Cr2O7 tối ưu, thuốc thử axit thiobarbituric tối ưu, thời gian tối ưu.v.v Đã tìm số điều kiện tối ưu để chưng cất axit sorbic khỏi thực phẩm: lượng MgSO4, H2SO4 1N tối ưu, thời gian cất tối ưu Đã tiến hành xác định hàm lượng sorbic số mẫu nước mắm Nam Ngư hạt trân châu bán thị trường thu kết sau: Mẫu nước mắm Nam Ngư có m = 404,96± 10,m2g/l Trong hạt trân châu có m = 29.080± 0,19mg/kg.(của cơng ty sana – Đồng Nai) m = 30,934± 0,2mg/kg.(của công ty Hoa Trân- BD) Các mẫu phân tích có hàm lượng axit sorbic nằm giới hạn cho phép Do thời gian không cho phép nên thực 35 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa Khóa luận tốt nghiệp phân tích số hàm lượng axit sorbic số mẫu thực phẩm khác Chúng tơi hi vọng quy trình áp dụng để phân tích chất bảo quản axit sorbic thực phẩm có thị trường Vì điều kiện có hạn nên đề tài khơng thể tránh khỏi thiếu sót mong góp ý đạo thầy cô bạn TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Tình Dung – Hóa phân tích đại, NXB Giáo dục, 2006 Hoàng Minh Châu, Từ Văn Mạc, Từ Vọng Nghi – Cơ sở hóa phân tích – NXB Khoa học kỷ thuật, năm 2000 Nguyễn Khắc Nghĩa – Áp dụng thống kê xử lý số liệu hóa phân tích Hồ Viết Q – Cơ sở hóa phân tích đại – NXB Sư phạm Hồ Viết Quý – Phân tích lý hóa – NXB Giáo dục, năm 2006 Lê Ngọc Tú - Độc học an toàn thực phẩm - Nhà xuất khoa học kỷ thuật 2006 www/ google.com.vn Lê Thị Sen- khóa luận tốt nghiệp năm 2004: xác định hàm lượng vitamin thuốc thử 2,6 điclophenolindophenol www/oi wah lan.com.vn 10 Manual of method of analysis of food Lab Manual New Delhi 2005 36 Sinh viên thực : Nguyễn Hồng Kỳ - Lớp 47 B Hóa ... chất bảo quản thực phẩm [6,7] I.2.3 Hàm lượng sử dụng chất bảo quản thực phẩm[ 6] I.3 Các phương pháp phân tích hàm lượng axit sorbic thực phẩm[ 4,5] 11 I.3.1 Phương pháp đo phổ UV... Basi đưa quy trình xác định đồng thời số chất bảo quản axit sorbic axit benzoic? ?trong thực phẩm phương pháp HPLC I.4 Một số vấn đề phân tích quang phổ uv- vis [4,5] Là phương pháp dựa quan sát... phun chất thử axit thiobarbituric làm nóng 100 0C phút axit sorbit ( có) cho đốm màu hồng phía Ngồi cịn có số phương pháp xác định khác như: + Xác định hàm lượng axit sorbic phương pháp chuẩn độ