Thực hành di truyền phân tử

THỰC TẬP DI TRUYỀN ĐẠI CƯƠNG Số đơn vị học trình : Người biên soạn: PHAN ĐẶNG THÁI PHƯƠNG Đơn vị: BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC I Mục đích • Sinh viên thực cơng việc làm tiêu để quan sát hoạt động tế bào qua trình phân bào nguyên nhiễm giảm nhiễm • Sinh viên hiểu, giải thích ứng dụng di truyền nguyên phân giảm phân thí nghiệm nhân giống lai tạo giống trồng II Phương pháp - Phần thực hành gồm buổi, buổi thực hành kéo dài tiết - Thực hành theo nhóm nhỏ 5-8 sinh viên/ nhóm - Mỗi sinh viên bắt buộc phải làm tiêu nộp sau buổi học thực hành - Đánh giá kiến thức hình thức vấn đáp trực tiếp cách làm tiêu trình học thực hành III Nội dung - Bài 1: Một số kiến thức thực hành di truyền phân tử - Bài 2: An tồn phịng thí nghiệm ngun tắc sử dụng kính hiển vi - Bài 3: Quan sát nhiễm sắc chất giới tính - Bài 4: Phân bào nguyên nhiễm (Mitosis) sở tế bào sinh sản vô tính - Bài 5: Phân bào giảm nhiễm (Meiosis) sở tế bào sinh sản hữu tính - Bài 6: Hiện tượng ức chế phân bào • Chú ý: Sinh viên phải hiểu rõ thực nghiêm túc nội quy phịng thí nghiệm Giờ thực tập : Sáng từ 7h30-11h30; Chiều từ 13h00-17h00 Sinh viên thực tập nhóm đăng ký, nghỉ phải xin phép phải thực tập bù Mang theo đầy đủ vật dụng thí nghiệm: mang bảng tên, áo blouse, viết chì, giấy, giảng lý thuyết thực hành, vật dụng cá nhân phải để nơi quy định Giữ trật tự, không làm ồn, hạn chế lại phịng thí nghiệm Có tinh thần trách nhiệm bảo quản trang thiết bị phòng Không di dời thiết bị, dụng cụ chưa đồng ý cán phụ trách Dọn dẹp gọn gàng rắc bẩn sau buổi thực hành bàn thí nghiệm khu vực nhóm phân công Xử lý chất thải, rác nơi quy định Mỗi sinh viên làm tiêu theo mẫu quy định nộp sau buổi thực hành Bài & 2: KÍNH HIỂN VI Mục đích Giúp sinh viên biết cách sử dụng kính hiển vi quan sát mẫu vật, tiêu Yêu cầu Sinh viên biết cách sử dụng thành thạo kính hiển vi, Thực tiêu Quan sát tiêu vẽ hình tiêu quan sát Nội dung 3.1 Kính hiển vi cấu tạo hai thấu kính hội tụ Mỗi hệ thống hoạt động kính lúp Kính lúp quay vật quan sát vật kính Kính lúp để nhìn thị kính Các phận kính hiển vi: Đế làm kim loại Một ống kính chuyển động mang vật kính Một trụ quay gắn vật kính Một đinh ốc lớn vặn cho trục kính chuyển động nhanh Một đinh ốc cấp vặn trục kính chuyển động chậm Một bàn kính mang mẫu vật quan sát Bộ phận ngưng tụ ánh sáng dùng điều chỉnh quy tụ ánh sáng vào vật quan sát nằm bàn kính Bộ phận chắn sáng miếng kim loại trịn có nhiều lổ với đường kính khác Một gương hai mặt : lõm dùng quan sát vật kính10 – 40 – 60 mặt phẳng dùng quan sát vật kính 100 3.2 Sử dụng bảo quản - Dùng giấy chuyên dùng lau nhẹ thị kính vật kính, tránh làm xây xát mặt kính - Tuyệt đối khơng tháo lắp thị kính vật kính - Để trục kính nghiêng 10 – 150 để quan sát mẫu, tránh nghiêng nhiều làm chảy dung dịch nhuộm mẫu, vật kính mẫu bị khơ khó quan sát Sử dụng: • Quay vật kính nhỏ (X10, X4) cho trục vật kính nằm với trục thị kính Mở hết chắn sáng hướng mặt lõm gương phản chiếu quay phía nguồn sáng • Để kính phía tay trái, mắt trái nhìn vào thị kính, mắt phải mở lớn, dùng tay di chuyển gương chiếu lúc đạt độ sáng tối đa ống kính • Đặt mẫu vật lên bàn kính, vặn đinh ốc lớn hạ vật kính xuống cách mẫu vật 1cm Tiếp theo vặn đinh ốc lớn nâng từ từ ống kính lên nhìn thấy ảnh, dùng đinh ốc vi cấp điều chỉnh cho ảnh rõ Tuyệt đối không vặn đinh ốc vi cấp kẹt Di chuyển phận chắn sáng để nhìn mẫu cách rõ ràng • Muốn quan sát chi tiết phần mẫu vật dùng vật kính lớn (X40) để quan sát Trước hết để vật kính X10, đưa phần muốn quan sát vào trung tâm thị trường, dùng tay xoay từ từ thay vật kính lớn Chú ý khơng để vật kính chạm vào mặt kính mang mẫu (thường khoảng cách 1mm) • Chỉ đặt lamelle lên mẫu quan sát, mặt lamelle đậy phải ln khơ • Khi quan sát mẫu vật vật kính 100X, phải nhỏ giọt dầu Cede lên mặt lamelle Xoay nhẹ nhàng để vật kính ngập giọt dầu cede • Lau vật kính giấy chun dùng sau sử dụng xong Bài 3: XÁC ĐỊNH NHIỄM SẮC CHẤT GIỚI TÍNH Mục đích Giúp sinh viên quan sát nhiễm sắc chất giới tính tế bào niêm mạc miệng nữ Yêu cầu • Sinh viên làm tiêu tạm thời để quan sát nhiễm sắc chất giới tính Nội dung 3.1 Cơ sở khoa học Nhiễm sắc chất giới tính mơ tả Barr Bertram năm 1949 Thể Barr diện cá thể động vật có vú vào giai đoạn interphase Đó thể đậm đặc thường có vị trí kết hợp mặt màng nhân tế bào sinh dưỡng Kích thước trung bình 0,7 µm -1,2 µm nhân tế bào niêm mạc miệng Cơ thể người có 23 cặp nhiễm sắc thể, có 22 cặp nhiễm sắc thể thường giống giới cặp nhiễm sắc thể giới tính XX nữ XY nam So với nhiễm sắc thể X nhiễm sắc thể Y nhỏ chứa vật liệu di truyền, làm cho vật liệu di truyền nhiễm sắc thể giới tính nữ gấp đơi nam Hình Các nhiễm sắc thể giới tính : nữ giới XX, nam giới XY Thể Barr tế bào niêm mạc miệng người nữ Để khắc phục tượng cân này, nhiễm sắc thể X thể nữ giới bị bất hoạt, nghĩa tế bào thể nữ giới có 1nhiễm sắc thể X hoạt hố, nhiễm sắc thể X cịn lại biến thành thể Barr nằm sát màng nhân mà quan sát kính hiển vi quang học Hiện tượng bất hoạt Lyon mô tả lần năm 1961 nên goi tượng lyonisation Bảng Sự liên hệ giới tính, số nhiễm sắc thể giới tính số thể Barr diện Nam Nữ Số thể Barr diện XY Không XO Khộng XYY Không XXY XX XXYY XXXY XXX XXXYY XXXXY XXXX XXXXX Mở rộng quy luật người ta thấy bệnh nhân nữ có nhiễm sắc thể X (XO: hội chứng Turner) nhiễm sắc thể không bị bất hoạt Đối với kiểu gen XXY (nam giới mắc hội chứng Klinefelter), XXXX, XXXY có nhiễm sắc thể X hoạt hố, cịn nhiễm sắc thể X cịn lại bị bất hoạt Như vậy, thể nữ giới mang cặp nhiễm sắc thể giới tính XX gồm lại tế bào có kiểu gen khác nhau: loại tế bào bộc lộ gen nhiễm sắc thể X bố, loại tế bào bộc lộ gen nhiễm sắc thể X mẹ Có thể nói thể nữ giới thể khảm tự nhiên Nếu gen gây bệnh nằm nhiễm sắc thể X (nghĩa dị hợp tử) bệnh biểu tế bào mà nhiễm sắc thể X hoạt hố, cịn tế bào cịn lại bình thường chứa nhiễm sắc thể X hoạt hố khơng mang gen gây bệnh Điển hình nhóm bệnh nhiễm sắc tố dầm dề (Incontinentia Pigmenti) 3.2 Vật liệu – Hóa chất – Dụng cụ • Kính hiển vi quang học vật kính X10, X40 X100 • Lame lamelle, kim mũi giáo, giấy thấm… • Hóa chất: Fuschin, cồn tuyệt đối, cồn 70o, thuốc cố định, nước cất… 3.3 Phương pháp * Chuẩn bị mẫu : - Lấy que tăm nạo nhẹ lớp tế bào bên má - Phết trải nhẹ lên lame - Cố định vết tế bào với -3 giọt methanol 96% từ 15 đến 20 phút - Hút methanol thừa để khơ mẫu nhiệt độ phịng - Nhuộm với giọt Fuschin từ – phút - Rửa alcohol 70, alcohol 90, alcohol tuyệt đối, ( phút loại) - Quan sát 10X, 40X 100X 3.4 Câu hỏi chuẩn bị - Khác biệt NST nam NST nữ? - Hình thái NST quan sát rõ giai đoạn chu trình phân bào? Tại sao? Nêu số ứng dụng việc xác định hình thái NST? - Thể Barr gì? Quan sát thể Barr giai đoạn chu trình phân bào? Tại sao? Ở giai đoạn khác chu trình tế bào, thể Barr có diện hay khơng? Tại thể Barr diện cá thể mà không xuất cá thể đực? - Cơ sở phân tử việc hình thành thể Barr? - Số lượng thể Barr quan sát tế bào người nam bình thường, nữ bình thường, XYY, XO, XX, XXYY? Báo cáo - Vẽ hình 10X, 40X 100X (nhân tế bào hình cầu có màng nhân rõ) - Tìm quan sát nhân có chứa nhiễm sắc chất giới tính nằm sát mặt màng nhân có hình dạng thay đổi Hình Thể Barr quan sát kính hiển vi 100X Bài 4: PHÂN BÀO NGUYÊN NHIỄM (MITOSIS) Mục đích Giúp sinh viên • Biết cách chuẩn bị tiêu tạm thời để quan sát trình nguyên phân tế bào thực vật • Quan sát giai đoạn trình nguyên phân qua biến đổi hình dáng nhiễm sắc thể • Hiểu ý nghĩa di truyền trình Yêu cầu • Sinh viên làm vài tiêu tạm thời để quan sát trình phân bào đẳng nhiễm tế bào chóp rễ hành • Quan sát kính hiển vi hình thái đặc điểm nhiễm sắc thể giai đoạn • So sánh thời gian phân chia giai đoạn với • Xác định số Mitosis (MI) xác định hoạt tính phân chia tế bào mô, tức số lượng tế bào trạng thái phân chia Nội dung 3.1 Nguyên tắc Phân bào nguyên nhiễm trình phân chia phức tạp xảy tế bào sinh dưỡng vùng mô phân sinh, giúp cho tăng trưởng mơ tế bào sinh vật Nhờ sinh vật hồn tất sinh trưởng đồng thời sở sinh sản vơ tính Cơ chế Mitosis nhiễm sắc thể ổn định từ hệ sang hệ khác Một chu kì tế bào cuối lần phân bào trước đến cuối lần phân bào Nó bao gồm giai đoạn chính: Gian kỳ (Interphase) giai đoạn phân chia (Mitotic phase) Ở gian kỳ tế bào tăng trưởng chuẩn bị cho giai đoạn phân bào, đặc biệt tổng hợp DNA Hình Chu kỳ tế bào Phân bào nguyên nhiễm trải qua thời kỳ a Tiền kỳ (Prophase): Trong nhân xuất rãi rác nhiễm sắc thể dạng sợi mảnh bắt đầu xoắn lại, màng nhân giữ nguyên Ở tế bào động vật trung thể phân chia di chuyển hai cực tế bào Thoi vô sắc hình thành nối hai cực tế bào Cuối giai đoạn nhìn thấy nhiễm sắc thể rõ gồm hai nhiễm sắc tử dính tâm động Màng nhân hạch nhân biến b Biến kỳ (Metaphase): Nhiễm sắc thể tập trung tế bào mặt phẳng xích đạo vng góc với thoi vơ sắc Tâm động nhiễm sắc thể gắn vào tơ vô sắc Nhiễm sắc tử hướng cực tế bào c Tiến kỳ (Anaphase): Tâm động nhiễm sắc thể bắt đầu phân chia Nhiễm sắc thể kép bắt đầu phân chia Nhiễm sắc tử trượt tơ vô sắc cực tế bào d Chung kỳ (Telophase): Sự phân chia nhiễm sắc thể kết thúc Nhiễm sắc thể tháo xoắn trở lại dạng mảnh Thoi vô sắc biến Màng nhân hạch nhân hình thành Màng ngăn tế bào hình thành với thành phần khác tế bào Ở 10 thực vật màng tế bào hình thành mặt phẳng xích đạo sau kéo dài hai bên, cịn động vật xuất eo thắt từ hai phía tế bào vào Hình Các giai đoạn trình Mitosis tế bào thực vật 3.2.Vật liệu – Hóa chất – Dụng cụ • Rễ hành (Allium sp) (2n = 16) • Kính hiển vi quang học vật kính X10, X40 X100 11 • Lame lamelle, đĩa pétri, kim mũi giáo, kim mũi nhọn, lưỡi lam, giấy thấm… • Hóa chất: Thuốc nhuộm Aceto carmin, thuốc nhuộm Schiff, cồn tuyệt đối, cồn 70o, thuốc cố định Carnoy, HCl N, nước cất… 3.3.Phương pháp * Phương pháp cố định mẫu: • Củ hành rửa cắt hết rễ, giâm vào cát ẩm hay tro trấu tưới ẩm 36-48 đến có rễ dài khoảng 0,5-1cm • Cắt rễ ngâm dung dịch Carnoy (3 cồn tuyệt đối: acetic acid) khoảng 24 Sau rửa rễ cồn 90o lần, 10 phút/lần giữ mẫu cồn 70o * Làm tiêu tạm thời − Rửa rễ nước - Cắt 1-3 chóp rễ dài khoảng 2mm đặt lên đĩa pétri - Nhỏ 1-2 giọt HCl 1N vào mẫu 10 phút Sau rửa lại nhiều lần nước cất - Nhỏ giọt aceto carmin nhuộm 2- phút Có thể hơ nhẹ đèn cồn Cẩn thận không làm khô mẫu Khi mẫu chuyển màu đỏ sậm đặt lamelle, ép nhẹ mẫu cho phân tán cách dùng đầu que diêm ấn nhẹ nhàng từ 40 – 50 lần - Lấy giấy thấm thuốc nhuộm thừa quanh lamelle - Quan sát mẫu vật kính 10X 40X - Vẽ hình giai đoạn * Interphase: + Hình thái, kích thước tổng quát nhân + Màng nhân + Số lượng, kích thước vị trí hạch nhân * Prophase: + Nhiễm sắc thể chấm sậm + Nhiễm sắc thể co ngắn tạo thành sợi rõ rệt + Màng nhân, hạch nhân, thoi vô nhiễm 12 * Metaphase: + Trục thoi vơ nhiễm + Vị trí nhiễm sắc thể thoi vơ nhiễm + Hình thái nhiễm sắc thể * Anaphase: + Sợi vơ nhiễm cịn nhiễm sắc thể + Thoi vô nhiễm biến dần * Telophase: + Các nhiễm sắc thể tập hợp cực + Thành lập màng nhân, hạch nhân * Quan sát tiến trình phân bào - Đặt tiêu lên kính hiển vi quan sát vật kính 10X - Xác định vùng mơ phân sinh nơi có phân bào mạnh nhất, quan sát rõ tế bào, tìm đủ giai đoạn - Chuyển sang quan sát vật kính 40X - Đếm tất tế bào có thị trường, ghi nhận số tế bào giai đoạn - Thực hành tiêu Ghi nhận kết Các giai đoạn Tiêu Tổng số trung bình % tổng số tế bào 1- Interphase 2-Prophase 3-Metaphase 4-Telophase Tổng số Kết luận: so sánh thời gian phân chia giai đoạn với dựa vào tỷ lệ phần trăm tổng số tế bào giai đoạn * Xác định số Mitosis MI - Ghi số tế bào trạng thái phân chia - Ghi số tế bào thị trường quan sát - Lặp lại lần 13 - Quy phần nghìn tỷ số trung bình lần tế bào phân chia tổng số tế bào quan sát 3.4 Câu hỏi chuẩn bị - Chu trình tế bào gồm có giai đoạn nào? - Nguyên phân gì? Vai trị ngun phân q trình sống? - Nguyên phân có giai đoạn? Nêu đặc điểm giai đoạn? - Thoi vơ sắc có vai trị q trình phân bào? - Chỉ số Mitosis gì? Cơng thức tính số Mitosis Kết đạt - Tiêu hình vẽ giai đoạn trình nguyên phân - Kết số tế bào phân chia giai đoạn, Chỉ số MI 14 Hình Các giai đoạn trình Mitosis 15 BÀI 5: PHÂN BÀO GIẢM NHIỄM (MEIOSIS) Mục đích Giúp sinh viên • Biết cách chuẩn bị tiêu tạm thời để quan sát trình giảm phân tế bào thực vật • Quan sát giai đoạn trình giảm phân qua biến đổi hình dáng nhiễm sắc thể • Hiểu ý nghĩa di truyền học q trình • Phân biệt khác phân bào nguyên nhiễm phân bào giảm nhiễm Yêu cầu • Sinh viên làm vài tiêu tạm thời để quan sát trình phân bào giảm nhiễm tế bào hạt phấn bơng hẹ • Quan sát kính hiển vi hình thái đặc điểm nhiễm sắc thể giai đoạn 3.1.Nguyên tắc: Phần lớn sinh vật bậc cao sinh sản đường hữu tính Ở thực vật có hoa, giao tử tạo qua tiến trình meiosis gồm lần phân chia liên tiếp, kết số nhiễm sắc thể giao tử giảm nửa so với tế bào tạo Q trình phân bào giảm nhiễm gồm hai lần phân chia liên tiếp gồm Giảm nhiễm Giảm nhiễm Mỗi giai đoạn meiosis xác định dựa vào xuất định hướng nhiễm sắc thể GIẢM NHIỄM 1: • Tiền kì 1: chia kì nhỏ - Mành ty (Leptotene): nhiễm sắc thể xuất dạng mảnh bắt đầu xoắn Màng nhân hạch nhân chưa tiêu biến 16 - Hiệp ty (Zygotene): Nhiễm sắc thể tiếp tục xoắn Các nhiễm sắc thể tương đồng bắt cặp tiếp hợp (synapsis) từ đầu nhiễm sắc thể tạo thành thể lưỡng trị (bivalent) - Hậu ty (Pachytene) : Nhiễm sắc thể tiếp tục xoắn dày lên Thể lưỡng trị gồm nhiễm sắc tử Có tượng trao đổi chéo (crossing over) nhiễm sắc tử tương đồng - Song ty (Diplotene): Nhiễm sắc thể cặp tương đồng bắt đầu tách từ vùng tâm động - Xuyên động (Diakinesis): Nhiễm sắc thể xoắn cực đại Màng nhân hạch nhân biến Thoi vơ sắc hình thành • Biến kỳ 1: Các nhiễm sắc thể xếp mặt phẳng xích đạo thoi vơ sắc • Tiến kỳ 1: Các nhiễm sắc thể tách tiến cực tế bào Do tế bào số nhiễm sắc thể giảm nửa so với tế bào mẹ • Chung kỳ : Các nhiễm sắc thể tập trung cực tế bào thoi vô nhiễm biến Có hình thành nhân màng tế bào tạo tế bào không rõ GIẢM NHIỄM 2: • Tiền kỳ 2: Mành nhân hạch nhân biến Thoi vơ sắc xuất • Biến kỳ 2: Các nhiễm sắc thể kép tập trung mặt phẳng xích đạo vng góc với mặt phẳng xích đạo lần phân chia trước • Tiến kỳ 2: Tâm động phân chia, nhiễm sắc tử tách trượt hai cực tế bào • Chung kỳ 2: Nhiễm sắc thể tháo xoắn, màng nhân hạch nhân xuất Màng tế bào hình thành, tế bào giảm nhiễm tách thành tế bào Kết phân bào giảm nhiễm từ tế bào mẹ (2n) tạo tế bào (n) Có ý nghĩa quan trọng sinh sản hữu tính, chọn lọc tiến hóa 17 Hình Các giai đoạn q trình giảm phân 3.2.Vật liệu – Hóa chất – Dụng cụ - Túi phấn hoa giai đoạn khảo sát - Kính hiển vi quang học vật kính X10 X40 - Lame lamelle 18 - Đĩa pétri, kim mũi giáo, kim mũi nhọn, lưỡi lam, giấy thấm… • Hóa chất: Thuốc nhuộm Aceto carmin, thuốc nhuộm Schiff, cồn tuyệt đối, cồn 70o, thuốc cố định Carnoy, HCl 5N, dầu Cede, nước cất… 3.3 Phương pháp - Chọn số bao phấn hoa non Ở hòa thảo lấy nụ trước nở hoa 57 ngày, bắp khoảng 4-8 ngày, hành hẹ lúc vừa có nụ - Tách rời bao hoa, đài, cánh hoa - Rửa ngâm dung dịch Carnoy từ 2-12h - Rửa cồn 900 lần, lần 10 phút - Giữ cồn 70o * Làm tiêu tạm thời: - Khi quan sát lấy số bao phấn thấm cồn đặt lên lame - Rửa mẫu nước cất nhiều lần - Ngâm HCl 1N 15 phút - Rửa nước cất - Nhỏ giọt Schiff hòa lẫn Aceto carmin 15 phút Có thể hơ nhẹ đèn cồn khơng để sơi, không để khô mẫu - Dùng mũi kim mũi giáo làm vỡ bao phấn - Đậy lamelle, dùng đầu que diêm ấn nhẹ nhàng khoảng 40 -50 lần quan sát vật kính 10X 40X 3.4 Câu hỏi chuẩn bị - Giảm phân gì? Các giai đoạn giảm phân? - Đặc điểm NST giai đoạn giảm phân ? - Sự khác biệt giảm phân song tử diệp đơn tử diệp? - Các bước làm tiêu để quan sát trình phân bào? Kết đạt Tiêu hình vẽ thích giai đoạn tiến trình phân chia 19 Hình Các giai đoạn q trình giảm phân bơng hẹ 20 Bài 6: HIỆN TƯỢNG ỨC CHẾ SỰ PHÂN BÀO Mục đích Quan sát cấu trúc nhiễm sắc thể đa bội tế bào sinh dưỡng Yêu cầu - Xử lý rễ phát triển tốt với colchicine có nồng độ 0,03% thời gian 90 phút để quan sát tượng Mitosis –C - Xử lý rễ phát triển tốt với colchicine có nồng độ 0,03% thời gian 24h để quan sát mức độ đa bội thể tế bào Nội dung 3.1 Nguyên tắc Colchicine (C22H25NO6) alcaloid độc, đính kết chuyên biệt với liên kết disulfit protein phân tử ribose nicleic acid Mỗi phân tử colchicine kết nối phân tử protein làm mạng vi sợi hệ thoi vơ sắc khơng hình thành Colchicine ảnh hưởng mô sinh dưỡng (mitosis) mô hoạt động tạo giao tử (meiosis) * Pseudometaphase: tác dụng Colchicine nồng độ từ 0,02% 0,05% với thời gian thích hợp, nhiễm sắc thể tiến trình mitosis tái hình thành nhiễm sắc tử Thoi vô sắc vào giai đoạn metaphase không xuất nên nhiễm sắc thể dù có tâm động nằm rải rác khắp tế bào * Pseudoanaphase: Các nhiễm sắc thể có tâm động tách rời thành cặp nhiễm sắc tử Do khơng có thoi vơ sắc nên nhiễm sắc tử nằm kế cận có dạng song song đơi * Pseudotelephase: vào giai đoạn cuối, hồn tất tiến trình mitosis, nhân xuất màng nhân hình thành, bao quanh nhiễm sắc thể nhân đơi nên nhân có kích thước to chiếm gần hết tế bào * Hiện tượng đa bội: 21 - Tự đa bội (autopolyploid), gọi thể đa bội tạo tăng gấp bội nhiễm sắc thể loài - Dị đa bội (allopolyploid): tạo nên tăng gấp bội số lượng nhiễm sắc thể thể lai khác lồi Colchicine ức chế việc hình thành thoi vơ sắc ngăn trở nhiễm sắc thể phân ly anaphase, dẫn đến việc hình thành nhân tứ tử hoạt động bình thường Trong lần mitosis kế tiếp, nhân tứ tử tạo nên mô tứ tử 3.2 Phương pháp thực • Vật liệu - Rễ dài từ 0,5 – 1cm - Đĩa petri, giấy thấm, phẩm nhuộm, colchicine 0,03% - Carnoy , alcohol 700, alcohol 900 • Tiến hành: - Cho colchicine 0,03% tác động vào rễ phát triển - Cố định rễ Carnoy (sau 1h30 phút 24h) - Rửa alcohol 900 lần, lần 10 phút - Giữ mẫu alcohol 700 Thực tiêu tạm thời - Rửa alcohol 700 - Thủy giải HCl N 15 phút - Rửa nước - Nhuộm acetocarmin phút - Đậy lamell ép mẫu - Quan sát vật kính 10X vật kính 40X 3.3 Câu hỏi chuẩn bị - Cơ chế tác động Colchicine trình phân bào? - Khi xử lý conchicine, NST quan sát nào? Có thể phân biệt giai đọan chu trình phân bào? Đặc điểm giai đoạn nào? Giải thích lại có tượng trên? 22 Báo cáo thực hành Quan sát, vẽ thích giai đoạn Mitosis – C rễ có tác động colchicine 0,03% 1h30 phút tế bào đa bội thể 24h 23