Báo cáo môn học thực hành di truyền học và sinh học phân tử bài 2 hình thái nhiễm sắc thể khổng lồ ở ruồi giấm – phân tích kết quả lai ruồi giấm

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - BÁO CÁO MÔN HỌC THỰC HÀNH DI TRUYỀN HỌC VÀ SINH HỌC PHÂN TỬ Giảng viên hướng dẫn: Cô Ngơ Thị Kim Anh Lớp học phần: 11DHSH2 Nhóm thực hiện: Sinh viên thực hiện: Nguyễn Phú Quý - 2008206828 Nguyễn Lê Thành Đạt - 2008200212 Nguyễn Nhất Minh - 2008200216 Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 4, năm 2021 BUỔI 2_BÀI 2: HÌNH THÁI NHIỄM SẮC THỂ KHỔNG LỒ Ở RUỒI GIẤM – PHÂN TÍCH KẾT QUẢ LAI RUỒI GIẤM PHẦN A: QUAN SÁT NHIỄM SẮC THỂ KHỔNG LỒ CƠ SỞ LÝ THUYẾT - Côn trùng cánh có loại nhiễm sắc thể đặc biệt xem đối tượng tốt cho nghiên cứu di truyền tế bào, điển hình nhiễm sắc thể khổng lồ tế bào tuyến nước bọt ấu trùng ruồi giấm - Đây kết trình nguyên phân Trong suốt tiến trình này, tế bào phát triển lớn mà khơng có phân chia Sợi nhiễm sắc thể nhân đôi nhiều lần suốt chu kì đời sống cá thể khơng tách Các vùng dị nhiễm sắc chất (heterochromatin) nhiễm sắc thể khổng lồ thường liên kết thành khối chung gọi tâm sắc (chromocenter) xem tâm động - Trên tiêu nhiễm sắc thể tuyến nước bọt ruồi giấm, cấu trúc nhiễm sắc thể có dạng sợi to nguyên dạng Bộ nhiễm sắc thể ruồi giấm bao gồm bốn cặp: cặp số cặp nhiễm sắc thể giới tính cặp số 2, 3, cặp nhiễm sắc thể thường Để nhận biết nhiễm sắc thể người ta ghi số + Số cho nhiễm sắc thể X + Số cho nhiễm sắc thẻ thứ hai (có 2L 2R vai trái phải) + Số cho nhiễm sắc thể thứ ba ( có 3L 3R vai trái phải) + Số cho nhiễm sắc thể thứ tư - Nhiễm sắc thể thứ thứ hai nhiễm sắc thể dài nhất, số ngắn Nhiễm sắc thể Y dính vào tâm sắc (chromocenter) nên không quan sát rõ NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, DỤNG CỤ, THIẾT BỊ - Ấu trùng ruồi giấm - Ruồi giấm - Chai nhựa thể tích 500 mL TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM 3.1 - Chuẩn bị mẫu vật: Lọ môi trường nuôi ruồi giấm có ấu trùng giai đoạn trưởng thành (giai đoạn 3) 3.2 - Các bước tiến hành Bước 1: Chọn ấu trùng từ lọ mơi trường, sau dùng que nhọn di chuyển ấu trùng sang lame có sẵn nước cất - Bước 2: Lấy hai que kim nhọn giải phẫu ấu trùng để lộ cặp tuyến nước bọt phần đầu Sau tách bỏ phần khơng cần thiết, để lại lame cặp tuyến nước bọt - Bước 3: Dùng giấy thấm hút nước cất mẫu vật, nhỏ vào vài giọt thuốc nhuộm Carmin acetic 45% - Bước 4: Đậy lamelle lame Ấn nhẹ ngón tay lamelle Quan sát mẫu vật kính hiển vi (vật kính x40) 3.3 - Kết Ảnh quan sát: Nhiễm sắc thể khổng lồ tuyến nước bọt ấu trùng ruồi giấm PHẦN B: PHÂN TÍCH KẾT QUẢ LAI RUỒI GIẤM CƠ SỞ LÝ THUYẾT Để thực phân tích di truyền cá thể lại với mục đích kiểm tra tính dị hợp tử chúng theo tính trạng nghiên cứu, ta dùng phép lai phân tích phép lai cá thể cần kiểm tra (tính đồng hợp hay dị hợp) với dạng bố mẹ đồng hợp tử lặn Phép lai cá thể F1 với dạng cha mẹ có tính trạng chủng gọi lại ngược (backcross) Thế hệ phát sinh từ lai kí hiệu Fb Kết tùy thuộc dạng cha mẹ trội hay lặn dùng để lại Khi lai lai với dạng cha mẹ đồng hợp trội đồng kiểu hình NGUYÊN LIỆU - Lọ có chứa ruồi giấm hoang dại TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM 3.1 - Phân biệt giới tính Để quan sát ruồi giấm ta cần gây mê chúng nằm yên Dùng ether cồn 98 để gây mê ruồi giấm Quá trình tiến hành sau: + Nhỏ ether với lượng vừa đủ lên gòn thấm lọ gây mê + Chuyển ruồi giấm sang lọ gây mê + Quan sát thấy ruồi giấm nằm yên, tức chúng dã bị gây mê chuyển chúng sang đĩa petri + Dùng kính hiển vi quan sát giới tính ruồi đực - Đặc điểm phân biệt giới tính ruồi giấm: + Ruồi đực: Lưng có sọc đen, kích thước nhỏ, đít trịn + Ruồi cái: Lưng có sọc đen, kích thước lớn, bụng to, đít nhọn - Sau quan sát 10 cá thể ruồi giấm, nhóm thu kết quả: + ruồi đực mắt đỏ, cánh thường, thân xám + ruồi đực mắt đen, cánh nhỏ, thân đen + ruồi mắt đỏ, cánh thường, thân xám - Ảnh quan sát: Ruồi đực mắt đỏ, cánh dài, thân xám Ruồi đực mắt đen, cánh ngắn, thân đen Ruồi mắt đỏ, cánh dài, thân xám 3.2 - Thực hành lai ruồi giấm Cho ruồi giấm xác định giới tính vào lọ mơi trường nấu gồm: 5g Agar, 50mL nước cất, 1/3 chuối Sau tuần thu kết hệ F1: 10 thân xám, cánh dài - Phép lai đơn tính Pt/c: ♀ Thân xám, cánh dài x ♂ Thân đen, cánh ngắn F1: 100% Thân xám, cánh thường - Giải thích kết quả: Đời F1 cho kết 100% ruồi thân xám, cánh dài → thân xám trội với thân đen, cánh dài trội với cánh ngắn TRẢ LỜI CÂU HỎI Câu 1: Trình bày bước thực gây mê ruồi giấm theo cách hiểu anh/chị? - Bước 1: Chuẩn bị lọ mơi trường có chứa ruồi giấm - Bước 2: Nhỏ vài giọt ether lên gòn thấm, cho vào túi nilong nhỏ - Bước 3: Lấy túi nilong bịt lọ môi trường, dùng tay mở nắp lọ môi trường cho ruồi giấm tự bay sang túi nilong, sau nhanh chóng cột túi lại đóng lọ mơi trường Recommandé pour toi Suite du document ci-dessous Vothuyduy - nônnonono Cơng nghệ thực phẩm 100% (1) Ơn tập mơn kế tốn quốc tế Cơng nghệ thực phẩm 100% (1) - Bước 4: Để yên phút, ruồi giấm ngừng di chuyển tức chúng bị gây mê Câu 2: Trình bày cách thực thí nghiệm lai đơn tính ruồi giấm - Chuẩn bị lọ mơi trường: Nấu hỗn hợp 5g Agar, 50mL nước cất, 1/3 trái chuối cho vào lọ, thả ruồi giấm xác định giới tính vào lọ - Sau ngày ruồi bắt đầu đẻ trứng - Sau 3-4 ngày trứng nở ấu trùng ruồi - Sau 5-6 xuất kén bám thành lọ, thả ruồi cha mẹ - Sau 7-10 ngày, kén phát triển thành ruồi giấm, thu kết hệ F1 Câu 3: Trình bày bước pháp lai thuận phép lai nghịch Lai thuận: - B1: Chọn ruồi giấm đực mắt trắng mắt đỏ, cho chúng vào lọ môi trường để tạo F1 - B2: Sau ngày, kén xuất hiện, thả ruồi cha mẹ ra, thu hệ F1 B3: Khi ruồi giấm trưởng thành, tiến hành gây mê đếm số lượng ruồi đực mắt đỏ, đực mắt trắng, mắt đỏ, mắt trắng - B4: Chọn cặp ruồi giấm đực số cá thể F1 cho vào lọ môi trường để tạo F2 - B5: Sau ngày, kén xuất hiện, thả ruồi cha mẹ F1 ra, thu hệ F2 B6: Khi ruồi giấm trưởng thành, tiến hành gây mê đếm số lượng ruồi đực mắt đỏ, đực mắt trắng, mắt đỏ, mắt trắng - B7: So sánh kết thu với tỉ lệ theo lý thuyết Lai nghịch: - Chọn ruồi giấm đực mắt đỏ ruồi mắt trắng làm cha mẹ - Các bước tiến hành phép lai thuận Câu 4: Sự khác chất phép lai đơn tính lai thuận nghịch gì? Giải thích? - Phép lai đơn tính thí nghiệm lai tạo sinh vật hệ P (thế hệ bố mẹ) khác tính trạng định Các sinh vật hệ P đồng hợp tử tính trạng cho Tuy nhiên, bố mẹ lại sở hữu alen khác cho đặc điểm cụ thể - Lai thuận nghịch phép lai thay đổi vị trí bố mẹ (khi dùng dạng làm bố, lại dùng dạng làm mẹ) để xác định vị trí gen quy định tính trạng tế bào Câu 5: Tại phải chọn lựa cá thể đột biến để tiến hành thí nghiệm phép lai di truyền? Nêu dạng đột biến ruồi giấm - Lựa chọn thể đột biến làm xuất alen khác cung cấp nguyên liệu cho trình tiến hóa sinh vật tạo nên nguồn biến dị di truyền - Các dạng đột biến ruồi giấm: + Lặp đoạn NST giới tính Y + Lặp đoạn NST giới tính X + Đảo đoạn NST thường + Lặp đoạn NST thường ………………………………………………………… BUỔI 3_BÀI 3: XÁC ĐỊNH CÁC KỲ PHÂN BÀO CỦA QUÁ TRÌNH NGUYÊN PHÂN, GIẢM PHÂN - ỨC CHẾ PHÂN BÀO BẰNG COLCHICINE PHẦN A: XÁC ĐỊNH CÁC KỲ PHÂN BÀO CỦA QUÁ TRÌNH NGUYÊN PHÂN CƠ SỞ LÝ THUYẾT - Quá trình phân chia nguyên nhiễm (mitosis) q trình nhân đơi tất tế bào sinh dưỡng Kết trình phân chia nguyên nhiễm nhiễm sắc ổn định từ hệ sang hệ khác, hình thành hai tế bào giống số luợng chất lượng phân tử DNA nhân NGUYÊN LIỆU - Rễ củ hành tím TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM 3.1 Xử lý mẫu - Bước 1: Cắt chóp rễ khoảng 2mm - Bước 2: Rửa mẫu vật ethanol 980 phút - Bước 3: Rửa mẫu vật ethanol 700 - Bước 4: Để khô tự nhiên 3.2 Thực tiêu tạm thời - Bước 1: Rửa rễ củ hành nước cất, sau cho mẫu vào đĩa đồng hồ Bước 2: Cho HCl 1N vào đĩa đồng hồ với lượng đủ để ngập mẫu vật phút để làm mềm mẫu vật - Bước 3: Rửa mẫu vật nước cất sau dùng giấy thấm hút khỏi mẫu vật - Bước 4: Nhuộm mẫu vật hematoxyline - Bước 5: Nhỏ giọt nước cất lên lame, chuyển mẫu vật sang lame 3.3 Kết - Kì trung gian (interphase) - Kì đầu (prophase) - Kì (ảnh tham khảo nhóm – 11DHSH2) - Kì sau (anaphase)