Ngô thị quyên góp phần xây dựng một số chỉ tiêu chất lượng lá bàng khóa luận tốt nghiệp dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGÔ THỊ QUYÊN GÓP PHẦN XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG LÁ BÀNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGÔ THỊ QUYÊN Mã sinh viên: 1801586 GÓP PHẦN XÂY DỰNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG LÁ BÀNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Hà Vân Oanh Nơi thực hiện: Khoa Dược liệu - Dược học cổ truyền HÀ NỘI - 2023 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian nghiên cứu thực khóa luận tốt nghiệp Khoa Dược liệu - Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội, nhận nhiều quan tâm, ủng hộ, hướng dẫn thầy cơ, gia đình bạn bè Với lịng biết ơn kính trọng sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Hà Vân Oanh – giảng viên môn Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội hướng dẫn, cho lời khuyên quý báu suốt q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi xin cảm ơn tồn thể thầy cơ, bạn khóa K73 làm khóa luận Bộ môn Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tơi xun suốt q trình nghiên cứu Tơi xin cảm ơn Ban giám hiệu toàn thể thầy cô giáo giảng viên Trường Đại học Dược Hà Nội truyền cho kiến thức nhiệt huyết thầy cô suốt năm học tập trường Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới gia đình, bạn bè ln bên động viên, khích lệ tơi q trình học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày 05 tháng năm 2023 Sinh viên Ngô Thị Quyên MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan loài Terminalia catappa 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Đặc điểm phân bố 1.1.4 Bộ phận dùng 1.2 Tổng quan bàng 1.2.1 Thành phần hóa học bàng 1.2.2 Tác dụng sinh học công dụng bàng 1.3 Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu 11 1.3.1 Khái niệm 11 1.3.2 Các tiêu phương pháp xây dựng tiêu chuẩn sở dược liệu 11 1.4 Tổng quan axit galic 13 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.2 Hóa chất, dụng cụ, trang thiết bị 17 2.2.1 Hóa chất 17 2.2.2 Dụng cụ trang thiết bị 17 2.3 Nội dung nghiên cứu 18 2.4 Phương pháp nghiên cứu 18 2.4.1 Mô tả 18 2.4.2 Vi phẫu bột 18 2.4.3 Định tính phản ứng hóa học 18 2.4.4 Độ ẩm 22 2.4.5 Tro toàn phần 22 2.4.6 Định lượng thẩm định phương pháp định lượng axit galic toàn phần HPLC 22 2.4.7 Phương pháp xử lý kết 25 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 27 3.1 Mô tả 27 3.2 Vi phẫu 27 3.3 Bột 28 3.4 Độ ẩm 30 3.5 Tro toàn phần 30 3.6 Định tính hóa học 30 3.7 Định lượng axit galic toàn phần bàng HPLC 32 3.7.1 Khảo sát quy trình xử lý mẫu 32 3.7.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 33 3.7.3 Thẩm định phương pháp định lượng axit galic toàn phần bàng 36 3.7.4 Kết định lượng 41 3.8 Dự thảo tiêu chuẩn sở bàng 42 CHƯƠNG BÀN LUẬN 45 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 47 5.1 Kết luận 47 5.2 Đề xuất 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DĐVN Dược điển Việt Nam DL Dược liệu HPLC Sắc kí lỏng hiệu cao MeOH Methanol RSD Độ lệch chuẩn tương đối SKĐ Sắc ký đồ TT Thuốc thử TR Thời gian lưu TB Trung bình DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các quy trình định lượng axit galic HPLC tham khảo 14 Bảng 3.1 Kết đo độ ẩm mẫu bàng 30 Bảng 3.2 Kết tro toàn phần bàng 30 Bảng 3.3 Kết định tính sơ bàng phản ứng hóa học 31 Bảng 3.4 Kết tính phù hợp hệ thống phương pháp định lượng 36 Bảng 3.5 Kết khảo sát khoảng tuyến tính định lượng axit galic 38 Bảng 3.6 Kết tính LOD, LOQ 39 Bảng 3.7 Bảng kết đo độ lặp lại LOQ 39 Bảng 3.8 Kết thẩm định độ lặp lại phương pháp định lượng 40 Bảng 3.9 Kết thẩm định độ phương pháp định lượng 41 Bảng 3.10 Kết định lượng axit galic toàn phần mẫu bàng 42 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1 Cây bàng Hình 1.2 Cơng thức hợp chất tanin bàng Hình 1.3 Cơng thức phenolic bàng Hình 1.4 Cơng thức cấu tạo số flavonoid bàng Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo triterpenoid bàng Hình 1.6 Công thức cấu tạo sterol bàng Hình 1.7 Axit galic 13 Hình 3.1 Lá bàng 27 Hình 3.2 Vi phẫu bàng 28 Hình 3.3 Ảnh số đặc điểm bột bàng 29 Hình 3.4 Bột bàng 29 Hình 3.5 SKĐ khảo sát điều kiện xử lý mẫu - thời gian thủy phân 32 Hình 3.6 SKĐ khảo sát nồng độ HCl thủy phân 33 Hình 3.7 SKĐ khảo sát tỷ lệ dung môi pha động MeOH : H3PO4 0,1% 34 Hình 3.8 Hình ảnh phổ axit galic khoảng 190 - 400 nm 34 Hình 3.9 SKĐ khảo sát tốc độ dòng 35 Hình 3.10 SKĐ mẫu chuẩn axit galic mẫu thử 35 Hình 3.11 Chồng SKĐ lần tiêm axit galic 10 µg/ml 36 Hình 3.12 SKĐ thẩm định độ đặc hiệu 37 Hình 3.13 Chồng phổ axit galic mẫu thử mẫu chuẩn 37 Hình 3.14 Kết khảo sát khoảng tuyến tính định lượng axit galic 38 ĐẶT VẤN ĐỀ Với điều kiện thiên nhiên nhiều ưu đãi, Việt Nam có hệ sinh thái phong phú đa dạng, có tiềm to lớn tài nguyên thuốc Đây điều kiện thuận lợi để phát triển nguồn dược liệu, cung cấp nguyên liệu cho sản xuất thuốc nước Tuy nhiên, nay, nguồn dược liệu nước ta phải phụ thuộc nhiều vào nguồn nguyên liệu nhập mà chưa phát huy hết tiềm thảo dược tự nhiên Cây bàng có tên khoa học Terminalia catappa L., loài trồng phổ biến nước ta để làm bóng mát Theo y học cổ truyền nước ta, bàng có tính mát Búp, bàng non chữa cảm sốt, làm mồ hôi, chữa tê thấp, đau nhức, chữa sâu quảng, sâu Tại Đài Loan, bàng dùng để chữa bệnh gan [9] Ở Ấn Độ, Philippines Malaysia, cao bàng dùng để điều trị điều trị tiêu chảy sốt [25], [41], điều trị ghẻ, vết thương phong bệnh da khác [31] Hiện nay, giới có nhiều nghiên cứu chứng minh tác dụng dược lý bàng chống oxy hóa [18], [9], [12], [24], trị bệnh đái tháo đường [6], chống ung thư [32], [8], kháng virus [15], chống viêm [17], kháng khuẩn [25], [31], [41] tác dụng bảo vệ gan [24] Từ cho thấy tiềm khai thác sử dụng bàng Tuy vậy, bàng chưa có chuyên luận Dược điển Việt Nam, có số nghiên cứu đặc tính hóa lý bàng Để đảm bảo sử dụng dược liệu an toàn có hiệu quả, nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn dược liệu cần thiết Cùng với đó, kết xây dựng tiêu góp phần giúp đánh giá bàng – điều có ý nghĩa quan trọng việc tận dụng nguồn nguyên liệu bàng, tránh lãng phí khai thác Do đó, đề tài thực với mục tiêu xây dựng số tiêu chất lượng bàng Để thực mục tiêu đề tài tiến hành với nội dung sau: Xây dựng số tiêu chất lượng bàng gồm tiêu mơ tả, vi phẫu, bột, định tính phản ứng hóa học, độ ẩm, tro tồn phần định lượng axit galic toàn phần HPLC Đề xuất dự thảo Tiêu chuẩn sở bàng CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan loài Terminalia catappa 1.1.1 Vị trí phân loại Cây bàng có tên khoa học Terminalia catappa L., theo hệ thống phân loại Takhtajan “Flowering Plants” (2009), bàng xếp theo thứ tự phân loại sau [5], [42]: Giới: Plantae Ngành ngọc lan: Magnoliophyta Lớp ngọc lan: Magnoliopsida Phân lớp hoa hồng: Rosidae Bộ Sim: Myrtales Họ Bàng: Combretaceae Chi bàng: Terminalia Loài: Terminalia catappa L Tên tiếng việt: Bàng, Quang lang Tên nước ngoài: Chambok barang parcang prang (campuchia), Indian almond – tree, tropical almond (Anh); badamier (Pháp), deshi badam (Ấn Độ) 1.1.2 Đặc điểm thực vật Cây to, cao - 10 m, có Thân phân cành nằm ngang gần mọc vòng làm thành nhiều tầng Lá to, mọc so le, cuống ngắn, hình trứng ngược, gốc thn, đầu trịn có mũi nhọn, dài 20 - 30 cm, rộng 10 - 13 cm, mặt nhẵn bóng, mặt nhạt, có lơng màu nhạt, gân phụ chằng chịt men theo phiến đến tận đầu lá; cuống có lơng màu Cụm hoa mọc thành chùm kẽ gần ngọn, dài 15 - 20 cm; hoa nhỏ nhiều, màu trắng lục; đài có - 20 rụng sớm, gốc có tuyến màu nâu; khơng có tràng; nhị 10, cao đài; bầu hạ ơ, chứa hai nỗn đảo Quả hạch, hình trứng dẹp, đầu múp nhọn, hai mép mỏng, chín màu vàng Mùa hoa tháng - 5, mùa tháng - [5] 37 Poongulali S., Sundararaman Muthuraman (2016), Antimycobacterial, anticandial and antioxidant properties of terminalia catappa and analysis of their bioactive chemicals,pp.1-20 38 Ratnasooriya Wanigasekara, Dharmasiri M G., et al (2008), "Tender Leaf Extract of Terminalia catappa Antinociceptive Activity in Rats", Pharmaceutical Biology, 40, pp 60-66 39 Segaran Gayathri, Dhevi Vs Ranjitha, et al (2019), "Phytochemical Profiles, In Vitro Antioxidant, Anti Inflammatory and Antibacterial Activities of Terminalia catappa", pp.1-36 40 Shanehbandi Dariush, Zarredar Habib, et al (2021), "Anticancer Impacts of Terminalia catappa Extract on SW480 Colorectal Neoplasm Cell Line", Journal of gastrointestinal cancer, 52(1), pp 99-105 41 Shinde S L., Junne S B., et al (2009), "The diversity of antibacterial compounds of Terminalia species (Combretaceae)", Pak J Biol Sci, 12(22), pp 1483-6 42 Takhtajan A (2009), Flowering Plants, Springer, pp 339 43 Tanaka Takashi, Nonaka Gen-Ichiro, et al (1986), "Tannins and Related Compounds XLII : Isolation and Characterization of Four New Hydrolyzable Tannins, Terflavins A and B, Tergallagin and Tercatain from the Leaves of Terminalia catappa L", CHEMICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN, 34(3), pp 1039-1049 44 Tanaka Takashi, Nonaka Gen-ichiro, et al (1986), "Tannins and Related Compounds XLII : Isolation and Characterization of Four New Hydrolyzable Tannins, Terflavins A and B, Tergallagin and Tercatain from the Leaves of Terminalia catappa L", 34, pp 1039-1049 45 Tang X., Gao J., et al (2006), "Effective protection of Terminalia catappa L leaves from damage induced by carbon tetrachloride in liver mitochondria", J Nutr Biochem, 17(3), pp 177-82 46 Tasneem M I Farzana, Narsegowda P N (2018), Antimicrobial activity of diferent varieties of terminalia catappa leaves,pp.1-10 47 Wen K C., Shih I C., et al (2011), "Inhibitory Effects of Terminalia catappa on UVB-Induced Photodamage in Fibroblast Cell Line", Evid Based Complement Alternat Med, 2011, pp 904532 48 Yeh Chao-Bin, Hsieh Ming-Ju, et al (2012), "Terminalia catappa Exerts Antimetastatic Effects on Hepatocellular Carcinoma through Transcriptional Inhibition of Matrix Metalloproteinase-9 by Modulating NF-κB and AP-1 Activity", Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2012, pp 595292 PHỤ LỤC PHỤ LỤC MẪU TIÊU BẢN PHỤ LỤC PHIẾU GIÁM ĐỊNH TÊN DƯỢC LIỆU PHỤ LỤC GIẤY CHỨNG NHẬN MÃ SỐ TIÊU BẢN PHỤ LỤC HÌNH ẢNH ĐỊNH TÍNH LÁ BÀNG BẰNG PHẢN ỨNG HĨA HỌC STT Nhóm chất Phản ứng định tính Kết Kết luận - Phản ứng với TT Mayer Alcaloid Phản ứng với TT Dragendorff Phản ứng với TT Bouchardat - - + Hiện tượng tạo bọt Saponin + Phản ứng LiebermannBouchardat + Flavonoid Phản ứng Cyanidin ++ Phản ứng với dung dịch kiềm ++ Phản ứng với FeCl3 5% Phản ứng mở, đóng vịng + lacton Coumarin + Phản ứng Diazo hóa Phản ứng xác định khung steroid Glycosid tim - Phản ứng Keller - Kiliani Anthranoid Định tính Anthranoid toàn phần + + - Phản ứng với Axit hữu Na2CO3 + - Đường khử - Phản ứng với TT Fehling A Fehling B ++ Axit amin Phản ứng với TT Ninhydrin +++ Phản ứng với FeCl3 5% + 10 Tanin Phản ứng với chì acetat 10% +++ Phản ứng với gelatin 1% +++ - 11 Polysaccharid - Phản ứng với TT Lugol + 12 Chất béo + 13 Carotenoid + 14 Phytosterol PHỤ LỤC COA AXIT GALIC PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ ĐỊNH LƯỢNG AXIT GALIC TOÀN PHẦN BẰNG HPLC Khảo sát điều kiện Xử lý mẫu Siêu âm MeOH 50% 20phút Datafile Name:LBTT chiet MeOH khong TP 1.1 M 15-85 v1.lcd Sample Name:Bang Thuong Tin KTP Sample ID:Bang Thuong Tin KTP.2 50 mAU mAU 3.961/ 1.00 0.8783 acid gallic chuan.jcm/ 0.17 272nm,4nm 45 125 /3.963 40 35 100 337 377 259 25 15 241 50 20 207 25 216 75 30 10 -25 /1.945 -50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 nm Chiết nước Datafile Name:LBTT nuoc 1.1.H 15-85 v1 chieu.lcd Sample Name:Bang Thuong Ti 1.1 Nuoc KTP chieu Sample ID:Bang Thuong Ti 1.1 Nuoc KTP ch 259 205 70 272nm,4nm 216 mAU 4.010/ 1.00 0.8783 chuan GA.jcm/ 0.56 mAU 100 241 90 60 80 50 GA/3.990 70 60 40 50 30 40 30 378 20 337 20 10 10 0 0.0 2.5 5.0 Thủy phân 10.0 12.5 200.0 Datafile Name:LBTT TP 1.1.TP 15-85 v1 sang.lcd Sample Name:LA BANG THUONG TIN SO Sample ID:LA BANG THUONG TIN SO 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 nm mAU 4.130/ 1.00 0.9995 72.5 acid gallic 0.04.2 chuan.jcm / 0.20 mAU 70.0 272nm,4nm 216 100 7.5 67.5 65.0 90 62.5 60.0 57.5 80 55.0 52.5 70 50.0 60 42.5 47.5 45.0 37.5 196 40.0 50 35.0 32.5 GA/4.105 30 30.0 272 40 27.5 25.0 22.5 20.0 17.5 20 15.0 12.5 241 10.0 10 7.5 5.0 339 2.5 0.0 -2.5 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 -5.0 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 Thẩm định phương pháp định lượng: Độ Độ Mẫu 80% Datafile Name:Do dung_5232023_001.lcd Sample Name:Do dung001 Sample ID:DD001 mAU 100 272nm,4nm 90 80 70 60 50 GA/7.155 40 30 20 10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 370 380 390 nm Mẫu độ 100% Datafile Name:Do dung_5232023_004.lcd Sample Name:Do dung004 Sample ID:DD004 mAU 100 272nm,4nm 90 80 70 60 50 GA/7.153 40 30 20 10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 Datafile Name:Do dung_5232023_007.lcd Sample Name:Do dung007 Sample ID:DD007 Độ 120% mAU 100 272nm,4nm 90 80 70 60 GA/7.070 50 40 30 20 10 0.0 2.5 Độ mẫu thử 50% 5.0 7.5 10.0 12.5 Datafile Name:Do dung_5232023_011.lcd Sample Name:Do dung011 Sample ID:DD011 mAU 100 272nm,4nm 90 80 70 60 50 40 GA/7.110 30 20 10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 Datafile Name:Do lap lai_4.lcd Sample Name:Do lap lai004 Sample ID:do lap lai003 Độ xác: mAU 100 272nm,4nm 90 80 70 60 50 GA/7.364 40 30 20 10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 Đường chuẩn uV Data1:GA 0.0025.lcd PDA Ch1 272nm,4nm 250000 Data2:Trang.lcd PDA Ch1 272nm,4nm Data3:GA 0.005.lcd PDA Ch1 272nm,4nm Data4:GA 0.01.lcd PDA Ch1 272nm,4nm Data5:GA 0.02.lcd PDA Ch1 272nm,4nm Data6:GA 0.04.lcd PDA Ch1 272nm,4nm 225000 Data7:GA 0.08.lcd PDA Ch1 272nm,4nm 200000 175000 150000 125000 100000 75000 50000 25000 -25000 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 LOD 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 Datafile Name:LOQ_612023_001.lcd Sample Name:LOQ001 Sample ID:LOQ001 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 mAU 2.5 272nm,4nm 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 Datafile Name:loq.lcd Sample Name:loq Sample ID:loq LOQ mAU 272nm,4nm 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 Độ lặp lại LOQ uV 14000 Data1:loq.lcd Data2:loq.lcd Data3:loq.lcd Data4:loq.lcd 13000 Data5:loq.lcd Data6:loq.lcd PDA Ch1 PDA Ch1 PDA Ch1 PDA Ch1 PDA Ch1 PDA Ch1 272nm ,4nm 272nm ,4nm 272nm ,4nm 272nm ,4nm 272nm ,4nm 272nm ,4nm 12000 11000 10000 9000 8000 7000 6000 5000 4000 3000 2000 1000 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 Định lượng Datafile Name:TN.lcd Sample Name:TN Sample ID:do lap lai013 Bàng Thái Nguyên mAU 100 272nm,4nm 75 GA/7.329 50 25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Bàng Hoàn Kiếm 6.0 Name:HK.1.lcd 7.0 8.0 Datafile Sample Name:HK Sample ID:do lap lai012 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 mAU 100 272nm,4nm 90 80 70 60 50 GA/7.322 40 30 20 10 0.0 2.5 Bàng Thường Tín 5.0 7.5 10.0 12.5 Datafile Name:DL_5222023_007.lcd Sample Name:TT1 Sample ID:DL007 mAU 100 272nm,4nm 90 80 70 60 50 40 /7.224 30 20 10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 Bàng Mỹ Đức Datafile Name:DL_5222023_010.lcd Sample Name:MD1 Sample ID:DL010 mAU 100 272nm,4nm 90 80 70 60 50 GA/7.195 40 30 20 10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 Datafile Name:DTL.1.lcd Sample Name:DTL.1 Sample ID:DTL.1 Phú Thọ.1 mAU 100 272nm,4nm 90 80 70 60 GA/7.299 50 40 30 20 10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5