Xác định kiểu huyết thanh và gen độc lực của vi khuẩn streptococcus agalactiae

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM HOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI XÁC ĐỊNH KIỂU HUYẾT THANH VÀ GEN ĐỘC LỰC CỦA VI KHUẨN Streptococcus agalactiae HÀ NỘI – 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP XÁC ĐỊNH KIỂU HUYẾT THANH VÀ GEN ĐỘC LỰC CỦA VI KHUẨN Streptococcus agalactiae Sinh viên thực : Phạm Thu Uyên Mã sinh viên : 637089 Lớp : K63CNSHA GV hƣớng dẫn : TS Nguyễn Thị Nhiên Học viện Nông nghiệp Việt Nam : ThS Phạm Hồng Nhật Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản HÀ NỘI – 09/2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan khóa luận hồn tồn đƣợc thực tìm hiểu nghiên cứu khoa học thân dƣới hƣớng dẫn TS Nguyễn Thị Nhiên môn Công nghệ sinh học động vật – Khoa Công nghệ Sinh học – Học viện Nông nghiệp Việt Nam, ThS Phạm Hồng Nhật KS Vũ Thị Huyền – Viện nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản Tất số liệu, hình ảnh, kết đƣợc trình bày khóa luận hồn tồn trung thực, không chép tài liệu, công tình nghiên cứu ngƣời khác mà khơng ghi rõ nguồn tham khảo Những nội dung khóa luận có tham khảo sử dụng tài liệu, thông tin đƣợc đăng tải tác phẩm, tạp chí website đƣợc liệt kê danh mục tài liệu tham khảo khóa luận Tơi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan trƣớc hội đồng Học viện Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Phạm Thu Uyên i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn tới giáo TS Nguyễn Thị Nhiên – Bộ môn Công nghệ sinh học động vật – Khoa Công nghệ Sinh học – Học viện Nông nghiệp Việt Nam hƣớng dẫn, tận tình bảo tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình học tập thực khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến ThS Phạm Hồng Nhật ngƣời hƣớng dẫn khoa học; S Vũ Thị Huyền, toàn thể cán Trung tâm Công nghệ Sinh học Thủy sản thuộc Viện nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản tận tình hƣớng dẫn, bảo, động viên tạo điều kiện tốt cho tỏng suốt thời gian thực khóa luận Tơi xin trân trọng cảm ơn tài trợ Quỹ Phát triển khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) đề tài mã số 08/2019/TN tạo điều kiện thuận lợi để thực khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn cán thuộc môn Công nghệ sinh học động vật có đóng góp chuyên môn quý Tiếp theo, muốn gửi lời cảm ơn đến Thầy, Cô Khoa Công nghệ sinh học – Học viện Nông Nghiệp Việt Nam tạo điều kiện, tận tình giúp đỡ tơi suốt bốn năm đại học giá giúp tơi có định hƣớng q trình thực hồn thành khóa luận Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Bố, Mẹ, ngƣời thân gia đình nhƣ bạn bè ln ủng hộ, khuyến khích để tơi vững vàng suốt q trình học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Phạm Thu Uyên ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC TÊN VIẾT TẮT vi DANH MỤC HÌNH vii TÓM TẮT viii Phần I: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu Phần II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Một số đặc điểm sinh học cá rô phi vằn 2.1.1 Phân loại học 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Tập tính sống 2.1.4 Sinh sản 2.2 Sản lƣợng cá rô phi giới Việt Nam 2.2.1 Sản lƣợng cá rô phi giới 2.2.2 Sản lƣợng cá rô phi Việt Nam 2.3 Tình hình dịch bệnh xuất huyết vi khuẩn Streptococcosis rô phi 2.3.1 Tình hình dịch bênh giới 2.3.2 Tình hình dịch bệnh Việt Nam 10 2.4 Phản ứng Multiplex – PCR 13 2.5 Kiểu huyết gen độc lực vi khuẩn S algalactiae 13 iii 2.5.1 Kiểu huyết 14 2.5.2 Yếu tố độc lực vi khuẩn 15 Phần III ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 Đối tƣợng vật liệu nghiên cứu 17 3.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 17 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 17 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 18 3.2.1 Thời gian nghiên cứu 18 3.2.2 Địa điểm 18 3.3 Nội dung nghiên cứu 18 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 3.4.1 Chuẩn bị vi khuẩn S agalactiae 18 3.4.2 Tách chiết DNA vi khuẩn S agalactiae 19 3.4.1 Tối ƣu phản ứng Multiplex xác định kiểu huyết vi khuẩn S agalactiae 21 3.4.2 Tối ƣu phản ứng Multiplex xác định 14 gene độc lực vi khuẩn S agalactiae 22 Phần IV KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 Tách chiết DNA vi khuẩn S agalactiae 25 4.2 Kết xác định tối ƣu phản ứng Multiplex xác định kiểu huyết 27 4.3 Kết tối ƣu phản ứng Multiplex xác định 12 gene độc lực vi khuẩn Streptococcus agalactiae 28 Phần V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 30 5.1 Kết luận 30 5.2 Kiến nghị 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO 31 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Trang thiết bị dụng cụ thí nghiệm 17 Bảng 3.2 Thông tin cặp mồi sử dụng nghiên cứu 20 Bảng 3.3 Mồi sử dụng để phát kiểu huyết S agalactiae 21 Bảng 3.4 Mồi sử dụng để phát 14 gen độc lực S agalactiae 23 v DANH MỤC TÊN VIẾT TẮT Tên đầy đủ Từ viết tắt µl Microlite S agalactiae Streptococcus agalactiae DNA Deoxyribonucleic acid PCR Polymerase Chain Reaction rRNA RNA ribosome NCBI National Center for Biotechnology Information FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình ảnh cá rô phi Hình 2.2 Bức ảnh miêu tả hình dáng bên ngồi cá rơ phi Hình 2.3 Bức ảnh mơ tả tình hình dịch bệnh xuất huyết cá rơ phi Hình 4.1 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR khuếch đại vùng gen 16S rRNA vi khuẩn S agalactiae gel agarose 2% 25 Hình 4.2 Thơng tin đăng ký GenBank chủng 015-RIA1 (Mã số Genbank: OK047709.1) 26 Hình 4.3 Thơng tin đăng ký GenBank chủng 013-RIA1 (Mã số Genbank: OP290410) 26 Hình 4.4 Kết so sánh mức độ tƣơng đồng 02 trình tự gen 16S rRNA vi khuẩn S Agalactiae 27 Hình 4.5 Kết điện di sản phẩm Multiplex-PCR xác định kiểu huyết vi khuẩn S agalactiae 27 Hình 4.6 Hình ảnh điện di sản phẩm Multiplex-PCR xác định gen độc lực vi khuẩn S.agalactiae 28 vii TÓM TẮT Tên đề tài: Đề tài nghiên cứu “Xác định kiểu huyết gen độc lực vi khuẩn Streptococcus agalactiae” Giảng viên hƣớng dẫn: TS Nguyễn Thị Nhiên, ThS Phạm Hồng Nhật Sinh viên thực hiện: Phạm Thu Uyên Lớp: K63CNSHA Khóa: 63 Khoa: Cơng nghệ Sinh học Tóm tắt báo cáo Mục đích đề tài: Dự đốn đƣợc độc lực chủng vi khuẩn S.agalactiae nghiên cứu dựa vào xác định kiểu huyết gen độc lực Phƣơng pháp nghiên cứu: Phản ứng multiplex-PCR đƣợc ứng dụng rộng rãi nghiên cứu phân tử tính ƣu việt Phản ứng multiplex-PCR xác định đồng thời nhiều gen mục tiêu mồi phản ứng, giúp tiết kiệm thời gian, hóa chất, cơng sức đặc biệt có hiệu cao Trong nghiên cứu này, ứng dụng phản ứng multiplexPCR để phát kiểu huyết gen độc lực vi khuẩn Streptococcus agalactiae gây bệnh xuất huyết cá rô phi vằn (Oreochromis niloticus) Phản ứng multiplex-PCR đƣợc tối ƣu dựa kit My Taq™ HS Mix 2× sử dụng chu trình nhiệt bƣớc Kết quả: Kết xác định đƣợc vi khuẩn S agalactiae gây bệnh cá rô phi vằn Việt Nam mang kiểu huyết Ia, chứa 12 gen độc lực thuộc nhóm yếu độc lực giúp phát động trình gây bệnh vi khuẩn (yếu tố bám dính, yếu tố xâm nhập yếu tố kháng miễn dịch) Kết luận: Điều chứng tỏ chủng nghiên cứu mang độc lực Kết đƣợc ứng dụng để xác định độc lực vi khuẩn S agalactiae phục vụ phát triển thị phân tử (microsatellite SNPs) chọn giống cá rô phi vằn kháng bệnh xuất huyết viii cpsL III cpsL cpsG IV cpsL cpsJ cpsG IX cpsL cpsG cpsI cpsJ-Ib-R GCGTTTCTTTATCACATACTCTTG cpsL-F CAATCCTAAGTATTTTCGGTTCATT cpsL-R TAGGAACATGTTCATTAACATAGC cpsL-F CAATCCTAAGTATTTTCGGTTCATT cpsL-R TAGGAACATGTTCATTAACATAGC cpsG-F ACATGAACAGCAGTTCAACCGT cpsG-2-3 6-R TCCATCTACATCTTCAATCCAAGC cpsL-F CAATCCTAAGTATTTTCGGTTCATT cpsL-R TAGGAACATGTTCATTAACATAGC cpsJ-2-4-F CATTTATTGATTCAGACGATTACATTGA cpsJ-4-R CCTCAGGATATTTACGAATTCTGTA cpsG-F ACATGAACAGCAGTTCAACCGT cpsG-R ATGCTCTCCAAACTGTTCTTGT cpsL-F CAATCCTAAGTATTTTCGGTTCATT cpsL-R TAGGAACATGTTCATTAACATAGC cpsG-F ACATGAACAGCAGTTCAACCGT cpsG-R ATGCTCTCCAAACTGTTCTTGT cpsI-7-9-F CTGTAATTGGAGGAATGTGGATCG cpsI-9-R AATCATCTTCATAATTTATCTCCCATT 688 688 352 688 538 272 688 272 229 (Theo Imperi ctv., 2010) 3.4.2 Tối ƣu phản ứng Multiplex xác định 14 gene độc lực vi khuẩn S agalactiae Tổng số tổ hợp cặp mồi (multiplex) 14 gen độc lực đƣợc thiết kế phần mềm Multiplex Manager software (Holleley & Geerts, 2009) kiểm tra việc bắt chéo cặp mồi Multiple Primer Analyzer (Thermo Scientific, UK), đƣợc thể bảng Quy trình phản ứng PCR đa mồi xác định gen độc lực vi khuẩn đƣợc tối ƣu theo kit 2× My Taq™ HS Mix (Meridian Bioscience, Đức) Thành phần 22 phản ứng PCR thể tích 50µl gồm: 25µl MyTaq Mix 2ì, 1àl mi xuụi v mi ngc mi loại (nồng độ mồi 10µM), 5µl DNA vi khuẩn (~ 100 ng) nƣớc đề ion Chu trình nhiệt đƣợc thực nhƣ sau: Giai đoạn tiền biến tính 95°C phút; tiếp 25 chu kỳ lần (biến tính 95°C 60 giây, nhiệt độ gắn mồi Tm 60 giây, tổng hợp kéo dài 72°C phút); tiếp 15 chu kỳ lần (biến tính 95°C 60 giây, nhiệt độ gắn mồi Tm 60 giây, tổng hợp kéo dài 72°C phút); hoàn thành 72°C 10 phút giữ 4°C Sản phẩm PCR đƣợc kiểm tra điện di gel 1,5% với thang DNA chuẩn 100bp (Invitrogen, Mỹ) Kết đƣợc xác định diện nhiều band sản phẩm PCR Bảng 3.4 Mồi sử dụng để phát 14 gen độc lực S agalactiae Yếu tố độc lực Gene độc lực Tên mồi Trình tự mồi (5’-3’) Kích thƣớc (bp) Chức 936 Chất kết dính 750 Né tránh miễn dịch (Immune evasin) 600 Xâm nhập (Invasin) 278 Chất kết dính 939 Né tránh miễn dịch (Immune evasin) Multiplex I: Fibrino genbinding protein B fbsB C-β protein bac CAMP factor Fibrino genbinding protein A cfb fbsA fbsB-F CACTCGATAACACTGTGGAT fbsB-R CTGGAACTGTTTCTGTCTTG bac-F CTCCAAGCTCTCACTCATAG bac-R GAAACATCTGCCACTGATAC cfb-F GGATTCAACTGAACTCCAAC cfb-R GACAACTCCACAAGTGGTAA fbsA-F AACCGCAGCGACTTGTTA fbsA-R AAACAAGAGCCAAGTAGGTC Multiplex II: Penicill inbinding protein 1A pbp1A/pon A pbp1A/ponA-F AGGGGTAGTAGCATTACCAT pbp1A/ponA-R CAACTATATGACTGGGATCG 23 Fibrone ctinbinding protein C-α protein Hyalur onate lyase Lamini nbinding protein pavA bca hylB lmb pavA-F TACTACCAAGAGAAGGCTGA pavA-R GGAGAGACGAGCTTTAGAGT bca-F TAACAGTTATGATACTTCACAG AC bca-R ACGACTTTCTTCCGTCCACTTAG G hylB-F TCTATGCTGACGGTTCTTAC hylB-R GAGGTCTAAGTTTCGCTCTT lmb-F TCAGTTAGTTGCTCTGCTTC lmb-R CTTTATGACCCACATACCTG 729 Chất kết dính 535 Xâm nhập (Invasin) 323 Xâm nhập (Invasin) 152 Chất kết dính 971 Né tránh miễn dịch (Immune evasin) 648 Xâm nhập (Invasin) 425 Xâm nhập (Invasin) 255 Chất kết dính Multiplex III: Serine proteas e cspA Hemol ysin III Surface protein rib C5a peptida se βhemoly sin/cyto lysin cspA spb1 rib scpB cylE cspA-F CTGCTAAAGCACACCTAAAC cspA-R ATCAGTAGTGGTTCCTTTCC spb1-F CTGCTCCAAGCATAATGCTT spb1-R ACCCATCAGAACCAAAAGT rib-F GGGGTTACACAAGGTAATCT rib-R TCCACTTAGGATCGTTTG scpB-F ACAACGGAAGGCGCTACTGTTC scpB-R ACCTGGTGTTTGACCTGAACTA cylE-F GTACATTAGGTGCCTTTGG cylE-R TACTCAGCCTTTCTCCATC 564 Xâm nhập 24 Phần IV ẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1.Tách chiết DNA vi khuẩn S agalactiae Kết điện di sản phẩm PCR khuếch đại vùng gen 16S rRNA 02 mẫu vi khuẩn phân tích cho thấy vạch băng sáng rõ, khơng bị đứt gãy Sản phẩm PCR xuất vạch băng DNA với kích thƣớc khoảng 1.400bp tƣơng ứng với đối chứng dƣơng bên cạnh mẫu đối chứng âm khơng xuất vạch băng DNA Hình 4.1 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR khuếch đại vùng gen 16S rRNA vi khuẩn S agalactiae gel agarose 2% Giếng 1: Chủng 015-RIA1; Giếng 2: Chủng 013-RIA1, Giếng (-): Mẫu đối chứng âm; Giếng (+): Mẫu đối chứng dương; M: Ladder 50bp Trình tự gene 16s rRNA hồn chỉnh vi khuẩn đƣợc xác định 1421bp đƣợc đăng kí Genbank với mã số OK047709.1 OP290410 25 Hình 4.2 Thơng tin đăng ký GenBank chủng 015-RIA1 (Mã số Genbank: OK047709.1) Hình 4.3 Thơng tin đăng ký GenBank chủng 013-RIA1 (Mã số Genbank: OP290410) Kết so sánh mức độ tƣơng đồng 02 trình tự gen 16S rRNA vi khuẩn S agalactiae nghiên cứu với chủng cơng bố 26 Hình 4.4 Kết so sánh mức độ tƣơng đồng 02 trình tự gen 16S rRNA vi khuẩn S Agalactiae Kết so sánh mức độ tƣơng đồng 02 trình tự gen 16S rRNA vi khuẩn S Agalactiae cho thấy rằng, gene tƣơng đồng 99% với chủng vi khuẩn phân lập từ cá nƣớc cá biển: chẽm (Iran), cá trạch (Trung Quốc), cá mập (Isaren) chủng chuẩn ATCC 4.2 ết xác định tối ƣu phản ứng Multiplex xác định kiểu huyết Hình 4.5 Kết điện di sản phẩm Multiplex-PCR xác định kiểu huyết vi khuẩn S agalactiae Giếng 1: Chủng 15-RIA1; Giếng 2: Chủng 013 -RIA1;Giếng (-): Mẫu ĐC âm; M: Ladder 50bp 27 Phản ứng multiplex-PCR đƣợc phát triển để xác định kiểu huyết vi khuẩn S agalactiae dựa diện gen cps (cpsG, cpsJ cpsL) Kết điện di sản phẩm Multiplex-PCR xác định kiểu huyết vi khuẩn S agalactiae xuất vach băng sáng rõ, không bị đứt gãy (Hình 4.5) Kết cho thấy chủng 015-RIA1 013-RIA1 có kiểu huyết Ia, với diện gen cpsL (khoảng 700bp) cpsG (khoảng 250bp) 4.3 ết tối ƣu phản ứng Multiplex xác định 12 gene độc lực vi khuẩn Streptococcus agalactiae Hình 4.6 Hình ảnh điện di sản phẩm Multiplex-PCR xác định gen độc lực vi khuẩn S.agalactiae Giếng 1,2,3: Chủng 015 -RIA1; Giếng 4,5,6: Chủng 013-RIA1; Giếng (-): Mẫu ĐC âm; M: Ladder 50bp Trong trình tối ƣu phản ứng multiplex-PCR xác định gen độc lực vi khuẩn S.agalactiae, chúng tơi lựa chọn chu trình nhiệt hai bƣớc Trong đó, nhiệt độ gắn mồi chu trình nhiệt bƣớc bƣớc lần lƣợt 55°C 28 60°C, dựa vào nhiệt độ gắn mồi tổ hợp mồi Multiplex; lựa chọn 25 chu kỳ cho chu trình nhiệt Kết cho thấy, 12 gen độc lực vi khuẩn S agalactiae đƣợc tối ƣu thành công, trừ gen sbp1 thuộc multiplex III Sau đó, phản ứng PCR khuếch đai gen sbp1 đƣợc thực độc lập Kết điện di sản phẩm PCR gen sbp1 cho băng sáng rõ kích thƣớc khoảng 650bp tƣơng ứng với kích thƣớc dự kiến (hình 4.6)  Vi khuẩn S agalactiae chủng 013-RIA1 015-RIA1 có mang độc lực có kiểu huyết Ia, đƣợc coi chủng có độc lực cao gây bệnh cá rô phi Gen độc lực S Agalactiae Kiểu huyết Yếu tố bám dính Yếu tố xâm nhập Yếu tố kháng miễn dịch lmb scpB pavA fbsA fbsB bca rib cfb hylB Spb1 bac csp Pbp1A/ ponA Serotype - - + + + + + + + + + + + Ia Kết nghiên cứu phù hợp với liệu nƣớc Đông Nam Á: Malaysia, Philipine, Thái Lan Trung Quốc Tất báo cáo vi khuẩn S agalactiae mang kiểu huyết Ia nguyên nhân phổ biến gây bệnh xuất huyết cá rô phi nuôi nhƣ: Trung Quốc: 90%, Philippine: 83%, Thái Lan: 44% Các nghiên cứu trƣớc chứng rằng, vi khuẩn S agalactiae mang kiểu huyết thành Ia chứa 11 gene độc lực thuộc nhóm: yếu tố bám dính giúp vi khuẩn thúc đẩy bám dính, yếu tố xâm nhập giúp vi khuẩn xâm nhập qua niêm mạc hàng rào máu não, yếu tố kháng miễn dịch giúp vi khuẩn thoát khả miễn dịch vật ch 29 Phần V: ẾT LUẬN VÀ IẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Nghiên cứu tách chiết thành công DNA vi khuẩn Nghiên cứu thành công tối ƣu phản ứng Multiplex-PCR cho xác định vi khuẩn mang kiểu huyết Ia (sử dụng phản ứng Multiplex-PCR) vi khuẩn S aglactiae gây bệnh cá rô phi vằn Việt Nam Tối ƣu thành công phát triển phản ứng Multiplex-PCR cho xác định 12 gen độc lực (sử dụng phản ứng Multiplex-PCR) vi khuẩn S aglactiae gây bệnh cá rô phi vằn Việt Nam 5.2 Kiến nghị Ứng dụng kết để sàng lọc kiểu huyết xác định gen độc lực chủng vi khuẩn S aglactiae phân lập nhằm lựa chọn chủng vi khuẩn mang độc lực cao 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO A TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Phạm Hồng Nhật, Vũ Thị Huyền, Vũ Thị Trang, Ngô Phú Thỏa, Phạm Thu Uyên, Nguyễn Thị Nhiên, Phạm Anh Tuấn, Phan Thị Vân Ứng dụng phản ứng Multiplex-PCR xác định kiểu huyết gen độc lực vi khuẩn Streptococcus agalactiae gây bệnh cá rơ vằn Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Đại học Thái Nguyên ISSN 1859-2171 thuộc ACI (Asean Citation Index), 2020 Trƣơng Thị Mỹ Hạnh, Nguyễn Thị Hạnh, Nguyễn Hữu Nghĩa, Phạm Hồng Nhật, Lê Minh Hải, Trƣơng Thị Thành Vinh, Phan Thị Vân Một số đặc điểm Streptococcus agalactiae cá rơ phi (Oreochromis sp) ni nƣớc lợ Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn, số 387, 7379pp ISSN 1859-4581, 2020 Nguyễn Ngọc Phƣớc, Trần Thị Nhật Anh, Nguyễn Thị Huế Linh 2019 Phân lập xác định số đặc điểm sinh học chủng Streptococcus agalactiae gây bệnh cá rô phi đỏ (Orechromis sp) Nuôi Thừa Thiên Huế, Tạp chí khoa học cơng nghệ nơng nghiệp Tập 3(3)-2019: 1591-1601 Hồ Thu Thủy, Vũ Đức Hạnh, Nguyễn Bá Tiệp, Nguyễn Viết Không, Lại Thị Lan Hƣơng 2019 Phân lập, xác định tính kháng nguyên độc lực chủng Streptococcus agalactiae gây bệnh cá rô phi tỉnh, thành nƣớc Khoa học kỹ thuật thú y tập XXVI số – 2019 Phạm Hồng Quân, Hồ Thu Thủy, Nguyễn Hữu Vũ, Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Lê Văn Khoa (2013) Một số đặc tính sinh học vi khuẩn Streptococcus spp gây bệnh xuất huyết cá rô phi nuôi số tỉnh miền Bắc Việt Nam Tạp chí Khoa học Phát triển, 11(4), 506-513 31 B TÀI LIỆU TIẾNG ANH Dong H T., Nguyen K V., and Nguyen H T (2011) “Some characteristics of Streptococcus agalactiae, causative agent of Streptococcosis disease of tilapia in Northern Vietnam,” National Aquculture Conference for Student and Young Scientists, Nha Trang university, pp 348-356 Klesius, P H., Evans, J J., Shoemaker, C A., & Pasnik, D J (2006) Vaccines to prevent S iniae and S agalactiae disease in tilapia, O niloticus International Symposium on Tilapia in Aquaculture (pp 15-24) Charles Town, WV, USA, American Tilapia Association Amal, M., & Zamri-Saad, M (2011) Streptococcosis in tilapia (Oreochromis niloticus): a review Lin, F P.-Y., Lan, R., Sintchenko, V., Gilbert, G L., Kong, F., & Coiera, E (2011) Computational bacterial genome-wide analysis of phylogenetic profiles reveals potential virulence genes of Streptococcus agalactiae PloS one, 6(4), e17964 Chattopadhyay G C., Carey D., Caliot A J., Webbd E., Laytone R , Wang J R., Bohnsack Y, Adderson J F., and Ulett E E (2011) “Phylogenetic Lineage and Pilus Protein Spb1/SAN1518 Affect Opsonin Independent Phagocytosis and Intracellular Survival of Group B Streptococcus,” Microbes Infect, vol 13(4), pp 369-382, doi: 10.1016/j.micinf.2010.12.009 Delannoy, C M., Crumlish, M., Fontaine, M C., Pollock, J., Foster, G., Dagleish, M P., Zadoks, R N (2013) Human Streptococcus agalactiae strains in aquatic mammals and fish [Research Support, Non-U S Gov't] BMC Microbiol, 13(41), 1471-2180 Kannika, K., Pisuttharachai, D., Srisapoome, P., Wongtavatchai, J., Kondo, H., Hirono, I., Areechon, N (2017) Molecular serotyping, virulence gene profiling and pathogenicity of Streptococcus agalactiae isolated from tilapia farms in Thailand by multiplex PCR J Appl Microbiol, 122(6), 1497-1507 Legario F S., Choresca C H., Turnbull J F., and Crumlish M.(2020) “Isolation and molecular characterization of streptococcal species recovered from clinical infections in farmed Nile tilapia (Oreochromis 32 niloticus) in the Philippines,” Journal of Fish Diseases, vol 43, pp 14311442, doi: 10.1111/jfd.13247 Liu, C., Chang, O., Zhang, D., Li, K., Wang, F., Lin, M., Shi, C., Jiang, L., Wang, Q., & Bergmann, S (2018a) Aeromonas shuberti as a cause of multi‐organ necrosis in internal organs of Nile tilapia, Oreochromis niloticus Journal of Fish Diseases, 41(10), 1529-1538 10 Liu, C., Feng, J., Zhang, D., Xie, Y., Li, A., Wang, J., & Su, Y (2018b) Clustering analysis of antibiograms and antibiogram types of Streptococcus agalactiae strains from tilapia in China Microbial drug resistance, 24(9), 1431-1439 11 Imperi, M., Pataracchia, M., Alfarone, G., Baldassarri, L., Orefici, G., & Creti, R (2010) Amultiplex PCR assay for the direct identification of the capsular type (Ia to IX) of Streptococcus agalactiae Journal of microbiological methods, 80(2), 212-214 12 Mian, G F., Godoy, D T., Leal, C A., Yuhara, T Y., Costa, G M., & Figueiredo, H C (2009) Aspects of the natural history and virulence of S agalactiae infection in Nile tilapia [Comparative Study Research Support, Non-U S Gov't] Vet Microbiol, 136(1-2), 180-183 13 Evans, J J., Klesius, P H., Pasnik, D J., & Bohnsack, J F (2009) Human Streptococcus agalactiae isolate in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) Emerging Infectious Diseases,Lin 15(5), 774 14 Chideroli, R T., Amoroso, N., Mainardi, R M., Suphoronski, S A., de Padua, S B., Alfieri, A F., Alfieri, A A., Mosela, M., Moralez, A T., & de Oliveira, A G (2017) Emergence of a new multidrug-resistant and highly virulent serotype of Streptococcus agalactiae in fish farms from Brazil Aquaculture, 479, 45-51 15 Ye X., Li J., Lu M., Deng G., Jiang X, Tian Y., Quan Y., and Jian Q (2011)“Identification and molecular typing of Streptococcus agalactiae 33 isolated from pond-cultured tilapia in China,” Fisheries Science, vol 77, pp 623-632, doi: 10.1007/s12562-011-0365-4 16 Plumb, J.A., Schachte, J.H., Gaines, J.L., Peltier, W., & Carrol, B (1974) Streptococcus sp From marine fshes along the Alabama and northwest Florida coast of the Gulf of Mexico Transactions of the American Fisheries Society, 103, 358-361 17 Najiah, M., Aqilah, N., Lee, K., Khairulbariyyah, Z., Mithun, S., Jalal, K., Shaharom-Harrison, F., & Nadirah, M (2012) Massive mortality associated with Streptococcus agalactiae infection in cage-cultured red hybrid tilapia Oreochromis niloticus in Como River, Kenyir Lake, Malaysia Journal of Biological Sciences, 12(8), 438-442 18 Musa, N., Wei, L S., N., Hamdan, R H., Leong, L K., Wee, W., Abdullah, S Z (2009) Streptococcosis in red hybrid tilapia (Oreochromis niloticus) commercial farms in Malaysia Aquaculture Research, 40(5), 630-632 doi: doi:10.1111/j.1365-2109.2008.02142 19 Yanong, R P., Francis-Floyd, R., & (2010) Streptococcal infections of fish Fisheries and Aquatic Sciences, University of Florida, Circular 57 Yue G.H Recent advances of genome mapping and marker-assisted selection in aquaculture Fish Fish 2014;15:376–396 20 Wen-de, W., Min, L., Ming, C., Li-Ping, L., Rui, W., Hai-Lan, C., HanZhong, C (2017) Development of a colloidal gold immunochromatographic strip for rapid detection of Streptococcus agalactiae in tilapia [Evaluation Studies] Biosens Bioelectron, 91, 66-69 21 Berridge, B R., Fuller, J D., de Azavedo, J., Low, D E., Bercovier, H., & Frelier, P F (1998) Development of specific nested oligonucleotide PCR primers for the Streptococcus iniae 16S-23S ribosomal DNA intergenic spacer [Research Support, Non-U S Gov't] J Clin Microbiol, 36(9), 27782781 22 Poyart, C., Tazi, A., Réglier-Poupet, H., Billoët, A., Tavares, N., Raymond, J., & Trieu-Cuot, P (2007) Multiplex PCR assay for rapid and accurate capsular typing of group B streptococci Journal of Clinical Microbiology, 45(6), 1985-1988 23 Zhang X., Li D., Guo A., Zhang Y., Chen Q., and X Gong (2013) “Molecular characterization of Streptococcus agalactiae in diseased farmed tilapia in China,” Aquaculture, vol 412-413, pp 64-69 34 24 Zhang, Z., Lan, J., Li, Y., Hu, M., Yu, A., Zhang, J., & Wei, S (2018) The pathogenic and antimicrobial characteristics of an emerging Streptococcus agalactiae serotype IX in Tilapia Microbial Pathogenesis, 122, 39-45 25 Sudpraseart, C., Wang, P C., & Chen, S C (2020) Phenotype, genotype and pathogenicity of Streptococcus agalactiae isolated from cultured tilapia (Oreochromis spp.) in Taiwan 26 Syuhada, R., Zamri-Saad, M., Ina-Salwany, M., Mustafa, M., Nasruddin, N., Desa, M., Nordin, S., Barkham, T., & Amal, M (2020) Molecular characterization and pathogenicity of Streptococcus agalactiae serotypes Ia ST7 and III ST283 isolated from cultured red hybrid tilapia in Malaysia Aquaculture, 515, 734543 27 Barkham, T., Zadoks, R N., Azmai, M N A., Baker, S., Bich, V T N., Chalker, V., Chau, M L., Dance, D., Deepak, R N., & van Doorn, H R (2019) One hypervirulent clone, sequence type 283, accounts for a large proportion of invasive Streptococcus agalactiae isolated from humans and diseased tilapia in Southeast Asia PLoS neglected tropical diseases, 13(6), e0007421 28 Nguyen, H T., Kanai, K., & Yoshikoshi, K (2002) Ecological investigation of Streptococcus iniae in cultured Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) using selective isolation procedures Aquaculture, 205(1), 7-17 doi: https://doi.org/10.1016/S0044-8486(01)00667-6 29 Kim, J H., Gomez, D K., Choresca, C H., & Park, S C (2007) Detection of major bacterial and viral pathogens in trash fish used to feed cultured flounder in Korea Aquaculture, 272(1), 105-110 doi: https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.2007.09.008 30 Bowser, P R., Wooster, G A., Getchell, R G., & Timmons, M B (1998) Streptococcus iniae Infection of Tilapia Oreochromis niloticus in a Recirculation Production Facility Journal of the World Aquaculture Society, 29(3), 335-339 doi: doi:10.1111/j.1749-7345.1998.tb00655.x 31 Bunch, E C., & Bejerano, I (1997) The effect of environmental factors on the susceptibility of hybrid tilapia Oreochromis niloticus × Oreochromis aureus to streptococcosis (Vol 49) 35 32 Chang, P H., & Plumb, J A (1996) Histopathology of experimental Streptococcus sp infection in tilapia, Oreochromis niloticus (L.), and channel catfish, Ictafurus punctatus (Ratinesque) Journal of Fish Diseases, 19(3), 235-241 doi: doi:10.1111/j.1365-2761.1996.tb00130.x 33 FAO (2018) The state of world fisheries and aquaculture 2018 Meeting the Sustainable Development Goals Food and Agriculture Organization of the United Nations, Licence: CC BY-NC-SA 3.0 IGO, Rome 36