Đánh giá đa dạng di truyền của cây rau mùi ta coriandrum sativum l

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -  - KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA CÂY RAU MÙI TA – CORIANDRUM SATIVUM L.” Hà Nội - 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -  - KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA CÂY RAU MÙI TA – CORIANDRUM SATIVUM L.” Sinh viên : Nguyễn Hƣơng Giang Lớp : K63CNSHC Mã sinh viên : 637218 Giảng viên hƣớng dẫn : TS Phạm Thị Dung Hà Nội - 2022 i LỜI CAM KẾT Tôi cam đoan tồn quy trình nghiên cứu đƣợc thực tơi dƣới giám sát khoa học Ts Phạm Thị Dung Tôi xin cam đoan tất nội dung nghiên cứu, kết luận thông tin luận văn tốt nghiệp tơi hồn tồn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Nguyễn Hƣơng Giang ii LỜI CẢM ƠN Khoá luận tốt nghiệp đƣợc thực Bộ môn Sinh học phân tử CNSH Ứng dụng - Khoa Công nghệ sinh học – Học viện Nông Nghiệp Việt Nam dƣới dẫn dắt Ts Phạm Thị Dung Tơi xin bày tỏ kính trọng lịng biết ơn sâu sắc tới Ts Phạm Thị Dung tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực hồn thành đề tài khố luận tốt nghiệp Xin đƣợc gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy giáo tồn thể cán nhân viên khoa Công nghệ Sinh học – Học viện Nông Nghiệp Việt Nam hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm cho tơi suốt q trình học tập trƣờng Cuối xin đƣợc gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình bạn bè, ngƣời bên cạnh quan tâm, chia sẻ tạo điều kiện, động lực cho suốt q trình học tập, nghiên cứu Một lần nữa, tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Nguyễn Hƣơng Giang iii MỤC LỤC LỜI CAM KẾT ii LỜI CẢM ƠN iii MỤC LỤC iv DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT viii TÓM TẮT ix CHƢƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu rau mùi ta 2.1.1 Phân loại phân bố 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Những giá trị dinh dƣỡng rau mùi ta 2.1.4 Phân biệt rau mùi ta rau mùi tây 2.2 Đa dạng di truyền số kĩ thuật phân tử ứng dụng nghiên cứu đa dạng di truyền thực vật 10 2.2.1 Đa dạng di truyền 10 2.2.2 Giới thiệu kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) 11 2.2.3 Chỉ thị RAPD (Random Amplified polymorphism DNA) 14 2.3 Một số kết nghiên cứu đa dạng DNA rau mùi ta 15 2.3.1 Kết nghiên cứu nƣớc 15 2.3.2 Kết nghiên cúu giới 15 CHƢƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 17 3.1 Vật liệu nghiên cứu 17 3.1.1 Vật liệu thực vật 17 3.1.2 Các mồi sử dụng nghiên cứu 17 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 3.2.1 Tách chiết DNA tổng số từ rau mùi ta 18 3.2.2 Phƣơng pháp xác định hàm lƣợng độ DNA tổng số 19 iv 3.2.3 Phƣơng pháp phân tích tính đa hình DNA kĩ thuật RAPD 20 3.2.4 Phân tích số liệu 21 CHƢƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Đa dạng hình dáng mẫu giống rau mùi ta thu thập đƣợc 23 4.1.1 Đa dạng hình thái mẫu giống rau mùi ta thu thập đƣợc 23 4.1.2 Các mẫu rau mùi ta thu thập có chiều cao khác thời điểm đƣợc đƣa thị trƣờng 24 4.6 Thảo luận 32 CHƢƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 33 5.1 Kết luận 33 5.2 Kiến nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 PHỤ LỤC 36 v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Phân biệt rau mùi ta rau mùi tây Bảng 3.1: Kí hiệu địa điểm thu thâp mẫu 17 Bảng 3.2: Danh sách trình tự mồi RAPD 18 Bảng 3.3: Pha đệm tách chiết 19 Bảng 3.4: Thành phần phản ứng PCR – RAPD 20 Bảng 4.1: Đặc điểm hình thái giống rau mùi ta 23 Bảng 4.2: Chiều cao trung bình cây/ mẫu giống mùi thu thập 25 Bảng 4.3: Bảng giá trị đo OD 10 mẫu nghiên cứu 26 Bảng 4.4: Tỉ lệ % phân đoạn đa hình 10 mẫu rau mùi ta phân tích với 10 mồi 28 Bảng 4.5: Bảng tổng số phân đoạn DNA đƣợc tạo 10 mẫu rau mùi ta với 10 mồi 29 Bảng 4.6: Bảng hệ số tƣơng đồng 10 mẫu rau mùi ta 30 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình ảnh Hoa, Lá, Rễ Quả Rau mùi ta (Franz Eugen Köhler, 1897) Hình 2.2: Hình A: Hình ảnh rau mùi ta; Hình B: Hình ảnh rau mùi tây 10 Hình 4.1: Hình A: Lá có khía trịn to; Hình B: Lá có khía nhỏ, nhọn 24 Hình 4.2: Chiều cao mẫu rau mùi ta thời điểm thu thập 24 Hình 4.3: Hình ảnh DNA tổng số 10 mẫu gel agarose 1% 27 Hình 4.4: Sơ đồ hình 10 mẫu giống rau mùi ta 31 vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ đầy đủ RAPD Random Amplified polymorphism DNA PCR Polymerase Chain Reaction STT Số thứ tự EDTA Ethylene diamine tetracetate CTAB Cetyl tri – methylamonium bromide DNA Axit deoxyribonucleic TAE Tris axetat EDTA UV Ultraviolet L Ladder 10 Cs Coriandrum sativum 11 NaCl Natri clorua 12 Bp Base pair 13 RFLP Restriction fragment length polymorphism 14 OD Optical density 15 AFLP Amplified Fragment Length Polymorphism 16 AP – PCR Arbitrary Primer – PCR 17 SSR Single Sequence Repeat viii TÓM TẮT Rau mùi ta – Coriandrum sativum L loại thảo mộc thuộc họ Hoa tán thƣờng đƣợc sử dụng để tạo hƣơng vị cho ăn Nó có nguồn gốc từ Coriandrum sativum Rau mùi đƣợc trồng phổ biến nƣớc ta nhƣng hầu hết ngƣời lấy để làm gia vị để khô đun nƣớc tắm vào dịp Tết Rau mùi thuốc đƣợc sử dụng rộng rãi nhất, có giá trị dinh dƣỡng nhƣ dƣợc tính Do đó, việc khai thác hiệu nguồn gen phục vụ cho công tác chọn tạo giống việc làm cần thiết Hiện nay, thị phân tử ( RFLP, AFLP, RAPD, ISSR,… ) công cụ hữu hiệu để đánh giá mức độ đa dạng di truyền Nhiều đối tƣợng trồng, thị RAPD tƣơng đối đơn giản, dễ làm mà đem lại hiệu Vì vậy, tơi tiến hành: “ Đánh giá đa dạng di truyền rau mùi ta – Coriandrum sativum L 10 mẫu giống rau mùi đƣợc thu thập 10 địa điểm khác địa bàn Hà Nội đƣợc dùng để đánh giá mức độ đa dạng di truyền loài 10 thị RAPD đƣợc sử dụng cho việc phân tích đa dạng di truyền 10 thị cho kết đa hình Số lƣợng phân đoạn đƣợc nhân với mồi dao động từ – 12 phân đoạn 10 mẫu rau mùi ta có hệ số tƣơng đồng di truyền cặp nằm khoảng 0,48 đến 0,83 Có 97,78% cặp mẫu rau mùi ta có quan hệ di truyền gần (khoảng 0,5 đến 0,82) 2,22 % cặp mẫu có quan hệ di truyền xa (với hệ số tƣơng đồng di truyền 0,48) ix vƣợt trội hẳn mẫu địa điểm khác, mẫu Cs4 có màu sắc thân màu xanh nhạt, thân mảnh, cịn mẫu Cs2 có thân mập màu sắc thân đậm Số lƣợng mẫu Cs2 nhiều mẫu khác Mẫu Cs10 gốc có cuống dài có chét, xẻ thành thuỳ, khía nhỏ trịn, phía có chét chia thành thuỳ hình sợi nhỏ nhọn Mẫu Cs2 có chét, xẻ thành thuỳ, khía to trịn, phía có chét chia thành thuỳ hình sợi, trịn to Bảng 4.2: Chiều cao trung bình cây/ mẫu giống mùi thu thập STT Mẫu Chiều cao trung bình((±0,5 cm) Cs1 16,48 Cs2 13,14 Cs3 17,82 Cs4 17,20 Cs5 23,74 Cs6 16,06 Cs7 20,06 Cs8 22,62 Cs9 12,76 10 Cs10 20,70 Bảng 4.2 cho thấy chiều cao trung bình 10 mẫu thu thập đƣợc dao động từ 12,76 cm đến 23,74 cm 25 4.2 Kết tách chiết DNA tổng số từ 10 mẫu thu thập Tách chiết DNA tổng số từ 10 mẫu rau mùi theo phƣơng pháp CTAB Farhad Masoomi – Aladizgeh cộng sự, 2016 (có cải tiến Đinh Trƣờng Sơn) Kiểm tra độ tinh hàm lƣợng DNA phƣơng pháp đo quang phổ hấp phụ kết hợp điện di gel agarose 1% Kết thu đƣợc bảng 4.3 Bảng 4.3: Bảng giá trị đo OD 10 mẫu nghiên cứu STT Mẫu OD 260/280 Nồng độ DNA (ng/µl) Cs1 1,86 562 Cs2 1,60 300 Cs3 1,82 170 Cs4 1,68 406 Cs5 1,37 422 Cs6 1,66 442 Cs7 1,57 890 Cs8 1,74 661 Cs9 1,84 326 10 Cs10 1,40 69 Qua bảng 4.3 cho ta thấy lƣợng DNA tách chiết đƣợc từ 10 mẫu rau mùi ta dao động từ 69 đến 890ng/µl Tỉ lệ OD260nm/OD280nm 10 mẫu câu rau mùi dao động từ (1,37 – 1,86) Các mẫu đo độ tinh với bƣớc sóng 260nm/280nm đủ điều kiện để thực bƣớc chạy PCR điện di Kết điện di DNA tổng số hình 4.3 cho thấy có phân đoạn nhất, tƣơng đối rõ nét, khơng có đứt gãy Kết lần cho thấy chất lƣợng DNA tách chiết đƣợc hoàn toàn đảm bảo cho phân tích 26 Hình 4.3: Hình ảnh DNA tổng số 10 mẫu gel agarose 1% 4.3 Phân tích tính đa dạng DNA 10 mẫu rau mùi thị RAPD DNA 10 mẫu rau mùi ta đƣợc phân tích với 10 thị phân tử RAPD tất thị tính đa hình thể bảng 4.4 Trong 10 thị có mồi OPA – 3, OPA – 7, OPA – 10 100% số phân đoạn đa hình Bốn mồi OPB – 5, OPB – 6, OPA – 5, OPA – có số phần trăm phân đoạn đa hình từ 14,29% đến 50% Ba mồi OPA – 1, OPA – 2, OPB – có số phân đoạn đa hình lớn 50% Số lƣợng phân đoạn DNA đƣợc nhân với mồi dao động từ đến 12 phân đoạn, tổng số phân đoạn DNA phân tích với 10 mồi 63 phân đoạn Trong có 45 phân đoạn đa hình chiếm 71,43% 18 phân đoạn đồng hình chiếm 28,57% 27 Bảng 4.4: Tỉ lệ % phân đoạn đa hình 10 mẫu rau mùi ta phân tích với 10 mồi STT Tên mồi Phân đoạn đa Phân đoạn Tổng số % Phân đoạn hình đồng hình phân đoạn đa hình OPA – 80 OPA – 85,71 OPB – 1 50 OPB – 75 OPB – 57,14 OPA – 5 100 OPA – 3 50 OPA – 9 100 OPA – 6 12 50 10 OPA – 10 6 100 45 18 63 71,43 Tổng Nhƣ từ kết cho thấy thị RAPD có hiệu cho nghiên cứu đa dạng DNA 10 mẫu giống rau mùi ta đƣợc thu thập 4.4 Tổng hợp kết phân tích DNA 10 mẫu giống rau mùi ta thị phân tử RAPD Kết sản phẩm PCR đƣợc trình bày bảng 10 cho thấy tổng số phân đoạn DNA nhân đƣợc 10 mẫu rau mùi ta với 10 mồi 423 Số phân đoạn DNA đƣợc nhân nhiều 10 mẫu rau mùi mồi OPA – (81 phân đoạn DNA) mồi OPB – (15 phân đoạn DNA) Số lƣợng phân đoạn DNA đƣợc nhân với 10 mồi dao động từ 30 – 51 phân đoạn Trong mẫu 28 Cs6 có số phân đoạn nhân đƣợc (30 phân đoạn) nhiều mẫu Cs8 (51 phân đoạn) Qua việc đánh giá đa hình DNA 10 mẫu rau mùi ta thị RAPD cho thấy mẫu phân tích rõ ràng có khác mức độ phân tử Bảng 4.5: Bảng tổng số phân đoạn DNA đƣợc tạo 10 mẫu rau mùi ta với 10 mồi OPA1 OPA2 OPB -5 OPB -6 OPB -8 OPA -3 OPA -5 OPA -7 OPA -8 OPA 10 TPĐ Cs1 2 32 Cs2 7 7 43 Cs3 5 41 Cs4 4 11 48 Cs5 10 48 Cs6 6 30 Cs7 4 9 48 Cs8 8 51 Cs9 3 46 Cs10 3 36 TỔNG 31 59 15 39 54 33 37 51 81 23 423 4.5 Mối quan hệ di truyền 10 mẫu mùi ta với 10 mồi RAPD Các số liệu phân tích PCR – RAPD đƣợc xử lý phân tích chƣơng trình NTSYSpc2.02 nhằm tìm khoảng cách di truyền mẫu nghiên cứu thông qua hệ số tƣơng đồng di truyền sơ đồ 29 Bảng 4.6: Bảng hệ số tƣơng đồng 10 mẫu rau mùi ta Cs1 Cs2 Cs3 Cs4 Cs5 Cs6 Cs7 Cs8 Cs9 Cs1 1.0000000 Cs2 0.63366336 1.0000000 Cs3 0.66336633 0.73267326 1.0000000 Cs4 0.54455445 0.71287128 0.70297029 1.0000000 Cs5 0.56435643 0.77227722 0.64356435 0.78217821 1.0000000 Cs6 0.73267326 0.70297029 0.63366336 0.47524752 0.57425742 1.0000000 Cs7 0.62376237 0.69306930 0.58415841 0.76237623 0.74257425 0.57425742 1.0000000 Cs8 0.62376237 0.71287128 0.68316831 0.82178217 0.70297029 0.51485148 0.78217821 1.0000000 Cs9 0.59405940 0.72277227 0.73267326 0.79207920 0.71287128 0.54455445 0.71287128 0.79207920 1.0000000 Cs10 0.73267326 0.66336633 0.71287128 0.61386138 0.63366336 0.68316831 0.55445544 0.63366336 0.72277227 30 Cs10 1.0000000 Kết cho thấy cho thấy hệ số tƣơng đồng di truyền dao động từ 0,48 đến 0,82 điều chứng tỏ mẫu giống rau mùi ta có mức độ đa dạng cao mặt di truyền Hệ số tƣơng đồng cao giống 04 giống 08 0,82 thấp giống 04 06 0,48 Tỷ lệ số cặp có hệ số tƣơng đồng lớn 0,65 60% (tƣơng ứng 27/45 cặp mẫu), khoảng từ 0,50 đến 0,65 37,78% ( tƣơng ứng 17/45 cặp mẫu) Điều có nghĩa có 97,78% (60% + 37,78%) mẫu rau mùi ta nghiên cứu có quan hệ di truyền gần (khoảng 0,5 đến 0,82), tạo điều kiện cho tạo ƣu lai tiến hành lai cặp mẫu với Các cặp mẫu lại (chiếm 2,22 % ứng với 1/45 cặp mẫu) có quan hệ di truyền xa (0,48) Hệ số tƣơng đồng giống rau mùi ta với cao khoảng 0,5 – 0,82, (trừ giống 04 giống 06 có hệ số tƣơng đồng di truyền thấp 0,48) chứng tỏ giống giống rau mùi ta có quan hệ gần di truyền giống với Hình 4.4: Sơ đồ hình 10 mẫu giống rau mùi ta Xử lý phần mềm NTSYSpc2.02 thu đƣợc kết phân loại mẫu nghiên cứu theo phân loại (hình 8) Theo phân loại dựa theo hệ số tƣơng đồng di truyền chia mẫu thành nhóm nhóm I gồm giống có hệ số tƣơng đồng nằm khoảng 0,67 Nhóm II gồm 31 giống 03 10 có hệ số tƣơng đồng cao 0,72, nhóm III gồm giống 02 05, nhóm IV gồm giống 4,8,9,7 giống có hệ số tƣơng đồng di truyền gần 4.6 Thảo luận Tomar cộng sự, 2014 sử dụng mồi RAPD để đánh giá đƣợc 25 kiểu gen rau mùi Nghiên cứu đƣợc thực để mô tả đặc điểm nghiên cứu đa dạng mối quan hệ loại rau mùi sử dụng thông tin để tạo giống Sự kết hợp hình thái thị phân tử đƣợc ứng dụng thành công để nghiên cứu đa dạng lồi rau mùi ý nghĩa việc lai tạo bảo tồn Tầm quan trọng nghiên cứu liên quan đến phân loại , chƣơng trình nhân giống nỗ lực bảo quản Các liệu kiểu gen đóng vai trị công cụ mạnh mẽ giữ liệu nguồn để xác định giống giống rau mùi 32 CHƢƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Cây rau mùi đƣợc mang thị trƣờng cao khoảng 12 – 24 cm, thân nhẵn phía phân nhánh Lá rau mùi gốc có cuống dài, có – chét hình trịn, xẻ thành thuỳ, có khía trịn nhọn Cây rau mùi có mùi thơm dễ chịu, vị cay nhẹ Bề mặt có màu xanh đậm, bề mặt dƣới có màu xanh nhạt 10 mồi RAPD đƣợc sử dụng hiệu đánh giá mối quan hệ di truyền 10 giống rau mùi ta Các mồi có hệ số tƣơng đồng cao, 10 mẫu rau mùi ta có hệ số tƣơng đồng di truyền cặp nằm khoảng 0,48 đến 0,83 Có 97,78% cặp mẫu rau mùi ta có quan hệ di truyền gần (khoảng 0,5 đến 0,82), 2,22 % cặp mẫu có quan hệ di truyền xa (với hệ số tƣơng đồng di truyền 0,48) tạo nên đa dạng di truyền lớn mẫu Nói chung, 10 giống rau mùi ta đƣợc chia thành gồm nhóm I (1 6), nhóm II (3 10), nhóm III (2 5) nhóm IV (4, 8, 9, 7) 5.2 Kiến nghị Các mẫu rau mùi ta có hệ số tƣơng đồng di truyền cao cần có biện pháp, kế hoạch phát triển hợp lý nguồn gen 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tài liệu nƣớc Lê Trọng Cúc, 2002 “Đa dạng sinh học bảo tồn thiên nhiên” Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội Hồ Huỳnh Thuỳ Dƣơng, 2005 “Sinh học phân tử” Nxb Giáo dục, Hà Nội Phạm Thanh Huyền cộng 2009 “Kết hợp thị hình thái, thị hố học, thị DNA nghiên cứu phân loại, định hƣớng bảo tồn góp phần tiêu chuẩn hố dƣợc liệu hai lồi thuốc ngũ gia bì hƣơng (Acanthopanax gracilistylus) ngũ gia bì gai (Acanthopanax trifoliatus (L) Voss) Việt Nam” Tuyển tập báo cáo khoa học hội nghị sinh học toàn quốc 2009 Võ Thị Thƣơng Lan, 2006 “Sinh học phân tử” Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội Lê Đình Lƣơng, Quyền Đình Thi, 2004 “Kĩ thuật di truyền ứng dụng” Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội Lê Duy Thành, 2001 “Cơ sở di truyền chọn giống thực vật” Nxb Khoa học Kĩ thuật, Hà Nội Quyền Đình Thi, Nơng Văn Hải, 2008 “Những kĩ thuật PCR ứng dụng phân tích DNA” Nxb Khoa học Tự nhiên Công nghệ Phan Hữu Tơn, 2005 “Giáo trình cơng nghệ sinh học chọn tạo giống trồng” Nxb Đại học Nông nghiệp Hà Nội Phùng Tuấn Giang, 2022 “ Loại rau thơm quen thuộc ngày Tết chứa nhiều công dụng chữa bệnh” Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam 10 Báo Khuyến Nông, 2021 “Cây rau mùi – Đặc điểm, công dụng lưu ý sử dụng” 11 Zicxa.com, 2022 “ Rau mùi, Ngò: Nguồn gốc, Đặc điểm, Tác dụng, Cách sử dụng, Giá bán, Nơi mua uy tín” 12 Đinh Thị Phƣơng Anh, 2005 “Nghiên cứu đa dạng sinh học khu rừng đặc dụng Nam Hải Vân thành phố Đà Nẵng” 34 B Tài liệu nƣớc 1.Tomar Rukam, S., Kulkarni, G U., Parakhia, M v., Thakkar, J R., Rathod, V M., Solanki, R K., & Golakiya, B A (2014) Genetic diversity analysis in coriander (Coriandrum sativum) genotypes through morphological and molecular characterization Research Journal of Biotechnology, 9(3) LittM., Luty J A, 1898 “A hypervariable microátellite revealed by invitro amplification of dinucleotide repeat within the cardiac actin gene” Am J Hum Genet., 44(3) Yee E., Kidwell KK., Sills GR., Lumpkin TA, 1999 “Diversity among selected Vigna angularis (Azuki) accessions on the basis of RAPD and AFLP markers” Crop Sci 39 Williams J.G.K., Kubelik A.E., Levak K.J., Rafalski J.A., Tingey S.V, 1990 “DNA polymorphisms amplified by arbitrary primer are useful as genetic markers” Nucleic Acids Res, 18 D J mackill, Z Zhang, E D Redona, P M Colowit, 1996 “Level of polymorphism and genetic mapping of AFLP markers in rice” Heun M, Schaefer pregl R, Klawan D, Castagna R, Accerbi M, Borghi B, Salamini F, 1997 “ Site of einlorn wheat domestication identified by DNA fingerprinting 35 PHỤ LỤC Phụ lục Mồi OPA – Kết điện di sản phẩm PCR – RAPD 10 mẫu rau mùi ta với mồi OPA -1 đƣợc trình bày dƣới hình phụ Hình phụ 1: Sản phẩm PCR 10 mẫu rau mùi ta với mồi OPA -2 Trong số phân đoạn nhân đƣợc có tới phân đoạn đa hình chiếm tới 85,71% Các mẫu Cs3, Cs4, Cs5, Cs7 nhân đƣợc nhiều phân đoạn (7 phân đoạn DNA) phân tích với mồi OPA – 2, Trong mẫu Cs1 nhân đƣợc phân đoạn DNA Tính đa hình thể tƣơng đối rõ so sánh mẫu với nhau, khoảng 400bp mẫu Cs1 tƣơng ứng với giếng khơng xuất phân đoạn DNA mẫu cịn lại xuất phân đoạn DNA Kết phân tích với mồi OPA – cho thấy 10 mẫu rau mùi ta khơng có khác biệt rõ (trừ mẫu Cs1) 36 Phụ lục Mồi OPB – Kết điện di sản phẩm PCR 10 mẫu rau mùi với mồi OPB – đƣợc trình bày hình phụ Hình phụ 2: Sản phẩm PCR 10 mẫu rau mùi ta với mồi OPB – Kết điện di sản phẩm PCR 10 mẫu rau mùi ta với mồi OPB – có tổng phân đoạn đƣợc nhân có tới phân đoạn đa hình chiếm 75% Các mẫu Cs2, Cs3, Cs4, Cs5, Cs7, Cs8 nhân đƣợc nhiều phân đoạn (4 phân đoạn) Các mẫu Cs1, Cs6, Cs9, Cs10 nhân đƣợc phân đoạn Tính đa hình mẫu đƣợc thể rõ với mồi OPB – 6, vị trí kích thƣớc khoảng 400bp mẫu Cs2, Cs3, Cs4, Cs5, Cs7, Cs8 tƣơng đƣơng với giếng 2,3,4,5,7,8 xuất phân đoạn DNA mẫu lại không xuất phân đoạn DNA 37 Phụ lục Mồi OPA - Kết điện di sản phẩm PCR 10 mẫu rau mùi ta với mồi OPA – đƣợc thể hình phụ Hình phụ 3: Sản phẩm PCR 10 mẫu rau mùi ta với mồi OPA – Trong số phân đoạn đƣợc nhân có phân đoạn đa hình chiếm 50%.Trong tất mẫu có mẫu Cs6 nhân đƣợc nhiều phân đoạn DNA (5 phân đoạn) Các mẫu Cs3, Cs9, Cs10 nhân đƣợc phân đoạn DNA Tính đa hình 10 mẫu giống rau mùi đƣợc thể rõ ràng, khoảng 700bp có mẫu Cs6, Cs7 tƣơng ứng giếng 6, xuất phân đoạn DNA cịn mẫu cịn lại khơng xuất phân đoạn DNA, Tƣơng tự nhƣ vị trí khoảng 250bp có mẫu Cs8 tƣơng ứng giếng nhân đƣợc phân đoạn DNA mẫu cịn lại khơng nhân đƣợc phân đoạn DNA Kết phân tích cho thấy mẫu rau mùi có khác genome 38 Phụ lục Mồi OPA – Kết điện di sản phẩm PCR 10 mẫu giống rau mùi ta với mồi OPA – đƣợc trình bày dƣới hình phụ Hình phụ 4: Sản phẩm PCR 10 mẫu rau mùi ta với mồi OPA - Trong số 12 phân đoạn có tới phân đoạn đa hình chiếm 50% kích thƣớc phân đoạn đƣợc nhân đƣợc dao động từ khoảng 150bp – 1000bp Trong tất mẫu có mẫu Cs11 nhân đƣợc 11 phân đoạn DNA Tính đa hình đƣợc thể rõ ràng, vị trí 300bp có mẫu Cs2, Cs5, Cs7 tƣơng ứng với giếng 2, 5, xuất phân đoạn DNA cịn mẫu cịn lại khơng xuất phân đoạn DNA Tƣơng tự vị trí 250bp 750bp có mẫu Cs4 tƣơng ứng với giếng xuất phân đoạn DNA mẫu cịn lại khơng xuất Kết cho thấy mẫu rau mùi ta khơng có khác biệt lớn (trừ mẫu Cs4) 39