Thực Trạng Thực Hiện Quy Trình Kỹ Thuật Nuôi Cấy Và Định Danh Vi Khuẩn Bằng Hệ Thống Bd Phoenix M50 Của Kỹ Thuật Viên Xét Nghiệm Và Một Số Yếu Tố Ảnh Hưởng Tại Bệnh Viện Quận Thủ Đức

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG NGUYỄN PHẠM PHƯƠNG TRANG THỰC TRẠNG THỰC HIỆN QUY TRÌNH KỸ THUẬT H P NUÔI CẤY VÀ ĐỊNH DANH VI KHUẨN BẰNG HỆ THỐNG BD PHOENIX M50 CỦA KỸ THUẬT VIÊN XÉT NGHIỆM VÀ MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG TẠI BỆNH VIỆN QUẬN THỦ ĐỨC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NĂM 2020 U H LUẬN VĂN THẠC SĨ QUẢN LÝ BỆNH VIỆN MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720802 HÀ NỘI, 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG NGUYỄN PHẠM PHƯƠNG TRANG THỰC TRẠNG THỰC HIỆN QUY TRÌNH KỸ THUẬT NI CẤY VÀ ĐỊNH DANH VI KHUẨN BẰNG H P HỆ THỐNG BD PHOENIX M50 CỦA KỸ THUẬT VIÊN XÉT NGHIỆM VÀ MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG TẠI BỆNH VIỆN QUẬN THỦ ĐỨC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NĂM 2020 U H LUẬN VĂN THẠC SĨ QUẢN LÝ BỆNH VIỆN MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720802 HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS Nguyễn Văn Tập HÀ NỘI, 2020 i LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ kính trọng lịng biết ơn sâu sắc đến người hỗ trợ để tơi hồn thành chương trình cao học hồn thành luận văn: - GS.TS Nguyễn Văn Tập, khoa Y tế cơng cộng, đại học Y dược TP Hồ Chí Minh ThS Trần Thị Hải, trường đại học Y tế cơng cộng tận tình hướng dẫn giúp tơi hồn thiện luận văn - Thầy, trường đại học Y tế cơng cộng tận tình bảo, hướng dẫn giúp đỡ suốt trình học tập - Bên cạnh giúp đỡ gia đình, bạn bè, tập thể lớp ThSQLBV- 4B3 nguồn động lực để tơi hồn thành luận văn H P Trong trình thực luận văn thạc sĩ, tơi cảm thấy học tập trải nghiệm nhiều điều vô hữu ích mà có lẽ khơng tự trải qua tơi khơng biết Từ giúp tơi học hỏi rút kinh nghiệm cho nghiên cứu trình làm việc sau Mặc dù cố gắng nhiều, luận khơng tránh khỏi thiếu sót; tơi U mong nhận thông cảm, dẫn, giúp đỡ đóng góp ý kiến nhà khoa học, quý thầy cô, cán quản lý bạn đồng nghiệp H Nguyễn Phạm Phương Trang ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG VÀ BIỂU ĐỒ v TÓM TẮT vii ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Chương TỔNG QUAN 1.1 Một số khái niệm H P 1.2 Tổng quan đảm bảo chất lượng xét nghiệm vi sinh lâm sàng 1.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng xét nghiệm Vi sinh 11 1.4 Thực trạng hoạt động đảm bảo chất lượng xét nghiệm giới Việt Nam 15 1.5 Giới thiệu Bệnh viện Quận Thủ Đức - Khoa Vi sinh - Hệ thống BD Phoenix M50 - Quy trình cấy bệnh phẩm nước tiểu quy trình định danh vi khuẩn hệ thống BD U Phoenix M50 18 1.6 Khung lý thuyết 24 Chương PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 H 2.1 Đối tượng nghiên cứu 25 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 25 2.3 Thiết kế nghiên cứu 25 2.4 Cỡ mẫu 26 2.5 Trình bày phương pháp chọn mẫu 27 2.6 Trình bày phương pháp thu thập số liệu 27 2.7 Các biến số nghiên cứu 29 2.8 Tiêu chuẩn đánh giá 30 2.9 Phương pháp phân tích số liệu 31 2.10 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 31 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 32 3.1 Sự tuân thủ quy trình kỹ thuật viên khoa Vi sinh 32 iii 3.1.1 Tuân thủ quy trình ni cấy bệnh phẩm nước tiểu 32 3.2.2 Tuân thủ quy trình định danh vi khuẩn hệ thống BD Phoenix M50 34 3.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến tuân thủ quy trình kỹ thuật viên 37 3.2.1 Nhân khoa Vi sinh 37 3.2.2 Môi trường, ngoại cảnh khoa Vi sinh 40 3.2.3 Thiết bị, hóa chất, sinh phẩm, vật tư phục vụ cho quy trình kỹ thuật ni cấy bệnh phẩm quy trình kỹ thuật định danh hệ thống BD Phoenix M50 khoa Vi sinh 41 3.2.4 Quy trình thao tác chuẩn 45 3.3.5 Tác động từ đồng nghiệp, chủ quan, chế độ đãi ngộ quan tâm từ lãnh đạo 46 Chương BÀN LUẬN 48 H P 4.1 Sự tuân thủ quy trình kỹ thuật viên khoa Vi sinh 48 4.1.1 Tn thủ quy trình ni cấy bệnh phẩm nước tiểu 48 4.2.2 Tuân thủ quy trình định danh vi khuẩn hệ thống BD Phoenix M50 49 4.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến việc tuân thủ quy trình kỹ thuật viên 50 4.2.1 Nhân khoa Vi sinh 50 U 4.2.2 Môi trường, ngoại cảnh khoa Vi sinh 53 4.2.3 Thiết bị, hóa chất, sinh phẩm, vật tư phục vụ cho quy trình kỹ thuật ni cấy bệnh phẩm quy trình kỹ thuật định danh hệ thống BD Phoenix M50 khoa Vi sinh 54 H 4.2.4 Quy trình thao tác chuẩn 55 4.2.5 Tác động từ đồng nghiệp, chủ quan, chế độ đãi ngộ quan tâm từ lãnh đạo 56 4.3 Hạn chế nghiên cứu, sai số biện pháp khắc phục sai số 57 4.3.1 Hạn chế nghiên cứu 57 4.3.2 Sai số 58 4.3.3 Biện pháp khắc phục 58 KẾT LUẬN 59 Thực trạng tuân thủ quy trình kỹ thuật viên Khoa Vi sinh 59 Các yếu tố ảnh hưởng đến việc tuân thủ quy trình xét nghiệm 59 KHUYẾN NGHỊ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 PHỤ LỤC 67 iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ĐTYKLT Đào tạo y khoa liên tục – Continuing Medical Education ĐBCL Đảm bảo chất lượng - Quality Assurance HTQLCL Hệ thống quản lý chất lượng KSCL Kiểm soát chất lượng - Quality Control KTV Kỹ thuật viên NĐUCTT Nồng độ ức chế tối thiểu - Minimal Inhibitory Concentration NKTCL Nội kiểm tra chất lượng - Internal Quality Control NgKTCL Ngoại kiểm tra chất lượng - External Quality Assessment QTTTC Quy trình thao tác chuẩn - Standard Operating Procedure TCYTTG Tổ chức Y tế giới - World Health Organization H P H U v DANH MỤC BẢNG VÀ BIỂU ĐỒ Bảng 1.1 Các bước thực kỹ thuật cấy bệnh phẩm nước tiểu Bảng 1.2 Các bước thực kỹ thuật định danh vi khuẩn hệ thống BD Phoenix M50 Bảng 2.1 Bảng tiêu chuẩn đánh giá việc tuân thủ quy trình theo SOP Bảng 3.1 Thực trạng tn thủ quy trình ni cấy bệnh phẩm nước tiểu kỹ thuật viên khoa Vi sinh (Quy trình 1) (n=112) Bảng 3.2 Thực trạng tuân thủ quy trình định danh vi khuẩn hệ thống BD Phoenix M50 kỹ thuật viên khoa Vi sinh (Quy trình 2) (n=112) Bảng 3.3 Thực trạng tuân thủ quy trình kỹ thuật ni cấy bệnh phẩm H P quy trình kỹ thuật định danh hệ thống BD Phoenix M50 kỹ thuật viên khoa Vi sinh Bảng 3.4 Thông tin độ tuổi, giới tính, trình độ học vấn, thâm niên công tác kỹ thuật viên khoa Vi sinh (n=12) Bảng 3.5 Thơng tin trình độ chun môn chứng hành nghề U kỹ thuật viên (n=12) Bảng 3.6 Quản lý đào tạo y khoa liên tục khoa Vi sinh (n=12) Bảng 3.7 Kết quan trắc môi trường khu vực thực xét nghiệm vi sinh H năm 2019 Bảng 3.8 Quản lý bảo trì thiết bị phục vụ quy trình kỹ thuật ni cấy bệnh phẩm quy trình kỹ thuật định danh hệ thống BD Phoenix M50 khoa Vi sinh năm 2020 Bảng 3.9 Quản lý bảo quản cung cấp hóa chất, sinh phẩm, vật tư phục vụ quy trình kỹ thuật ni cấy bệnh phẩm quy trình kỹ thuật định danh hệ thống BD Phoenix M50 khoa Vi sinh Bảng 3.10 Tập huấn, triển khai cập nhật quy trình khoa Vi sinh năm 2016-2020 Bảng 3.11 Sự hài lòng kỹ thuật viên khoa Vi sinh (n=12) Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ bước khơng đạt quy trình Biểu đồ 3.2 Tỷ lệ bước khơng đạt quy trình vi Biểu đồ 3.3 Tỷ lệ bước không đạt quy trình quy trình Biểu đồ 3.4 Tỷ lệ kỹ thuật viên chưa hài lòng số yếu tố H P H U vii TĨM TẮT Các xét nghiệm vi sinh cơng cụ y học nhằm xác định tác nhân vi khuẩn gây bệnh kháng sinh đồ hỗ trợ cho lâm sàng công tác điều trị hạn chế việc sử dụng kháng sinh phổ rộng Để có xét nghiệm chất lượng việc kỹ thuật viên tuân thủ nghiêm túc quy trình kỹ thuật Bộ Y tế ban hành hướng dẫn quan trọng cần khoa xét nghiệm giám sát chặt chẽ Nghiên cứu thực với mục tiêu: Đánh giá thực trạng tuân thủ thao tác quy trình kỹ thuật ni cấy quy trình định danh kỹ thuật viên kỹ thuật viên phân tích số yếu tố ảnh hưởng đến tuân thủ quy trình thao tác chuẩn (Standard Operating Procedure – SOP) kỹ thuật viên khoa Vi sinh Nghiên cứu thực trạng thực quy trình kỹ thuật ni cấy H P bệnh phẩm định danh vi khuẩn hệ thống BD Phoenix M50 kỹ thuật viên số yếu tố ảnh hưởng bệnh viện Quận Thủ Đức thành phố Hồ Chí Minh năm 2020 nhằm cải thiện chất lượng xét nghiệm nâng cao chất lượng điều trị người bệnh Nghiên cứu thiết kế kết hợp phương pháp định lượng đánh giá bảng kiểm thao tác mục đích xác định thao tác kỹ thuật viên bỏ sót thực khơng đạt U tiêu chuẩn, phương pháp định tính ghi nhận thơng qua vấn sâu kỹ thuật viên lãnh đạo nhằm tìm nguyên nhân, yếu tố ảnh hưởng đến việc khơng tn thủ quy trình thao tác chuẩn kỹ thuật viên Quy trình lựa H nghiên cứu quy trình kỹ thuật ni cấy bệnh phẩm nước tiểu quy trình kỹ thuật định danh vi khuẩn hệ thống BD Phoenix M50 Kết nghiên cứu cho thấy tỷ lệ tuân thủ đạt kỹ thuật viên thao tác quy trình kỹ thuật ni cấy bệnh phẩm 75% Đối với quy trình kỹ thuật định danh vi khuẩn hệ thống BD Phoenix M50, tỷ lệ tuân kỹ thuật viên 66% Các yếu tố ảnh hưởng tích cực đến việc tuân thủ quy trình kỷ thuật kỹ thuật viên gồm yếu tố nhân sự, hỗ trợ từ lãnh đạo đơn vị hóa chất, sinh phẩm cung cấp đầy đủ Các yếu tố ảnh hưởng tiêu cực gồm môi trường, ngoại cảnh bị ảnh hưởng khói bụi, tiếng ồn từ cơng trình xây dựng bệnh viện Khoa triển khai tập huấn quy trình thao tác chuẩn chưa thường xuyên Nghiên cứu đề xuất khuyến nghị gồm khoa Vi sinh gia tăng số lần tập huấn thao tác chuẩn cho kỹ thuật viên; tăng cường giám sát mức độ tuân thủ quy trình viii thao tác chuẩn kỹ thuật viên nhiều hình thức kiểm tra khơng báo trước, quan sát trực tiếp; khoa tham vấn chuyên môn cho phòng vật tư trang thiết bị nhằm hạn chế việc thiếu hụt hóa chất, sinh phẩm, thiết bị; kỹ thuật viên phải tuân thủ quy trình thao tác chuẩn nhằm hạn chế sai sót chuẩn hóa lại thao tác để có kết xét nghiệm chất lượng H P H U 96 Trình độ Là cấp chuyên môn chuyên môn cao đối tượng, Danh định Bộ câu hỏi Kỹ thuật viên Định lượng Bộ câu hỏi Kỹ thuật viên Nhị giá Bảng kiểm Hồ sơ máy bao gồm: - Xét nghiệm - Công nghệ sinh học - Sinh học Thời gian Thời gian công tác cơng tác chun ngành Tình trạng Tình trạng hoạt động trang thiết bị trang thiết bị phục vụ cho H P xét nghiệm Bảo trì, bảo Các hoạt động kiểm tra dưỡng máy giúp bảo trì, thay máy móc xét nghiệm Hóa chất, sinh phẩm, vật tư U Hóa chất sử dụng cho trình xét nghiệm H Nhị giá Bảng kiểm Hồ sơ máy Phân loại Bảng kiểm Sổ kiểm hóa chất Phụ lục 13: Các biến số nghiên cứu định tính: Chủ đề Mã Cơng cụ thu thập Đối tượng áp dụng Số lượng nhân Phỏng vấn Kỹ thuật viên, lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Nhân lực Trình độ chuyên môn Phỏng vấn Kỹ thuật viên, lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Thâm niên công tác Phỏng vấn Kỹ thuật viên 97 Đào tạo tập huấn Phỏng vấn Kỹ thuật viên, lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Phỏng vấn Ánh sáng Lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Nhiệt độ Phỏng vấn lãnh đạo bệnh viện Yếu tố môi trường ngoại Lãnh đạo khoa, Tiếng ồn Phỏng vấn cảnh Lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện H P Điều kiện làm việc Phỏng vấn Kỹ thuật viên, lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Chất lượng thiết bị Trang thiết bị phịng xét nghiệm trình Lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Số lượng thiết bị U Bảo trì, bảo dưỡng H Nội dung quy trình Xây dựng quy Phỏng vấn Cập nhật quy trình Tập huấn quy trình Phỏng vấn Lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Phỏng vấn Lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Phỏng vấn Lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Phỏng vấn Lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Phỏng vấn Lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Số lượng bệnh phẩm, tác động từ đồng nghiệp, Tác động từ đồng Phỏng vấn nghiệp Số lượng bệnh phẩm Lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Phỏng vấn Lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện 98 yếu tố ảnh Hài lòng chế độ Phỏng vấn hưởng khác đãi ngộ, lương lãnh đạo khoa, thưởng lãnh đạo bệnh viện Phỏng vấn Các yếu tố khác tạo Kỹ thuật viên, Lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện nên áp lực cơng việc Sự hài lịng mơi Phỏng vấn Kỹ thuật viên, trường làm việc lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Chính sách, quyền lợi nghiệm Nhận thức tầm quan trọng xét U Nâng cao chất Ý kiến đề xuất nâng lượng xét cao chất lượng xét nghiệm Lãnh đạo khoa, H P nhân viên xét nghiệm Phỏng vấn H lãnh đạo bệnh viện Phỏng vấn Kỹ thuật viên, lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Phỏng vấn nghiệm Kỹ thuật viên, lãnh đạo khoa, lãnh đạo bệnh viện Phụ lục 14: Bảng tiêu chuẩn kiểm tra thao tác quy trình cấy bệnh phẩm nước tiểu: Nội dung Thao tác - KTV nhận mẫu bệnh phẩm Mẫu chấp nhận khi: Nhận mẫu bệnh phẩm kiểm tra lọ đựng bệnh - Đựng lọ vơ trùng phẩm - Trên lọ có đủ thông tin: tên bệnh nhân, tuổi, tên bệnh phẩm, khoa phòng Đối chiếu tên, tuổi, khoa phòng bệnh nhân lọ KTV đối chiếu trùng khớp thông bệnh phẩm phiếu định tin lọ bệnh phẩm phiếu 99 định: tên bệnh nhân, tuổi, tên bệnh phẩm, khoa phòng với phiếu định xét nghiệm KTV chuẩn bị đầy đủ hóa chất, Chuẩn bị hóa chất kiểm tra hạn sử dụng: nhuộm Gram, dầu soi kính KTV chuẩn bị đầy đủ sinh phẩm, kiểm tra hạn sử dụng: môi trường Chuẩn bị sinh phẩm thạch Blood agar thạch H P MacConkey KTV chuẩn bị đầy đủ que cấy định Chuẩn bị dụng cụ lượng, que cấy thường Xử lý mẫu: Thực Nếu thấy > 10 vi khuẩn/vi KTV thực nhuộm Gram mẫu mẫu nhuộm Gram trường, số lượng vi khuẩn nghiệm phẩm KTV tìm Dùng pipette mẫu nước tiểu tương diện vi khuẩn, bạch cầu đa Pasteur trộn đương > 105 /ml nhân tế bào biểu mô Soi mẫu mẫu nước tiểu U H Nếu thấy > 10 tế bào bạch kính hiển vi dầu có độ phóng cầu đa nhân/vi trường: đại 100x dấu hiệu chứng tỏ tình trạng Mẫu nhuộm Gram đạt tiêu chuẩn: nhiễm trùng tiết niệu Vi khuẩn khuẩn bắt màu Gram âm Nếu có nhiều tế bào biểu mô Gram dương, tế bào biểu mô nhiệt nhuộm mẫu nước tiểu bắt màu Gram âm, bạch cầu bắt Gram Soi mẫu bệnh nhân nữ, số màu Gram âm kính hiển vi lượng vi khuẩn: dấu dầu có độ phóng hiệu mẫu nước tiểu bị nhiễm đại 100x, tìm vi khuẩn thường trú vùng diện vi âm hộ, âm đạo hút giọt nhỏ lên lame kính, không dàn Làm khô mẫu 100 khuẩn, bạch cầu đa Nếu có yêu cầu kết khẩn nhân tế bào biểu cấp, kết nhuộm Gram mô cần gửi cho bác sĩ điều trị kèm ghi “Kết nuôi cấy trả sau” Sàng lọc: Sàng lọc dựa Nếu soi nhuộm Gram khơng có Soi mẫu kính hiển vi dầu có độ kết soi lame: vi khuẩn bạch cầu: mẫu nước phóng đại 100x Tìm diện tiểu đánh giá không vi khuẩn, bạch cầu đa nhân tế bào nhiễm trùng, khơng cần biểu mô H P phải tiến hành nuôi cấy Mẫu nhuộm Gram đạt tiêu chuẩn: Vi Nếu soi nhuộm Gram có vi khuẩn khuẩn bắt màu Gram âm khuẩn bạch cầu: tiến hành Gram dương, tế bào biểu mô bắt màu cấy định lượng mẫu nước tiểu Gram âm, bạch cầu bắt màu Gram âm Cấy định lượng mẫu nước tiểu: U Dùng que cấy 1µl Cấy môi trường Blood KTV sử dụng loại que 1µl để để lấy nước tiểu agar lấy nước tiểu H thực nuôi cấy Lưu ý không nhúng que Cấy môi trường Blood agar định lượng cấy vào sâu mẫu nước Lắc nhẹ mẫu nước tiểu tiểu cho đều, cho que cấy µl chạm vào mẫu nước tiểu theo chiều thẳng đứng Dùng que cấy lấy KTV dùng que cấy lấy nước tiểu nước tiểu vạch vạch đường đĩa thạch (hình 1), đường đĩa ria đường zig-zag gần cắt thạch (hình 1), ria ngang qua đường (hình 2), vạch đường zig-zag gần 101 cắt ngang qua đường giao với đường đường (hình2), zig-zag (hình 3) vạch đường giao đường với zig-zag (hình3) Tiến hành tương tự Cấy mơi trường KTV sử dụng loại que 1µl để cấy thạch Mac MacConkey agar lấy nước tiểu conkey Cấy môi trường Mac conkey KTV dùng que cấy lấy nước tiểu H P vạch đường đĩa thạch (hình 1), ria đường zig-zag gần cắt ngang qua đường (hình 2), vạch đường giao với đường U Ủ đĩa cấy 350C 16-24h H zig-zag (hình 3) Ủ đĩa cấy 350C 16-24h 102 Phụ lục 15: Bảng tiêu chuẩn kiểm tra thao tác quy trình định danh hệ thống BD Phoenix M50 Nội dung Thao tác Trên dĩa thạch ghi đầy đủ thông tin: tên bệnh nhân, bệnh phẩm, thời Kiểm tra dĩa thạch cấy bệnh phẩm gian ngày tháng năm cấy bệnh phẩm, khoa phịng Đối chiếu phù hợp thơng tin Đối chiếu tên, tuổi, khoa phòng dĩa thạch cấy dĩa thạch: tên bệnh nhân, bệnh phẩm ngày tháng năm cấy bệnh H P bệnh phẩm phiếu xét nghiệm phẩm, khoa phòng với phiếu định xét nghiệm Kiểm tra điều kiện hoạt động máy Máy không báo lỗi Đăng nhập vào hệ thống liệu Đăng nhập vào hệ thống máy Chuẩn bị hóa chất Chuẩn bị sinh phẩm H U máy mà không bị báo lỗi, máy sẵn sàng hoạt động Chuẩn bị đầy đủ hóa chất, kiểm tra hạn sử dụng : ống ID-Broth Chuẩn bị đầy đủ sinh phẩm, kiểm tra hạn sử dụng bao gồm: PID panel PID/MIC panel cho tụ cầu khuẩn, Gram dương; NID panel NID/MIC panel trực khuẩn, Gram âm Chuẩn bị đầy đủ dụng cụ bao gồm: Chuẩn bị dụng cụ đầu col, pipet, máy Vortex, tăm vô trùng, máy đo quang Phoenixspec Nephelometer 103 Lựa chọn khúm khuẩn ban đầu Chọn khúm khuẩn thực Khúm khuẩn lựa Khúm khuẩn lựa chọn khúm quy trình nhuộm chọn khúm thuần Số lượng khúm đủ cho Soi mẫu kính hiển vi dầu có độ Gram việc tiến hành pha phóng đại 100x huyền dịch vi khuẩn Vi khuẩn khuẩn bắt màu Gram âm Nếu số lượng khúm Gram dương khuẩn không đủ cần tiến hành cấy chuyền thạch Blood agar H P (ủ 35oC/16-24h) Đánh giá sơ hình thái, Dùng PID panel Dùng PID panel PID/MIC panel tính chất bắt màu vi PID/MIC panel cho tụ cho tụ cầu khuẩn, Gram dương khuẩn nhằm lựa chọn cầu khuẩn, định danh dương kháng sinh đồ phù hợp Gram Dùng NID panel NID/MIC U panel cho trực khuẩn, Gram âm Dùng NID panel NID/MIC panel cho trực khuẩn, Gram âm H Chuẩn bị sinh phẩm Chọn khúm khuẩn sau thực quy trình ni cấy 24 tán vào ống ID-Broth Vortex ống ID-Broth Tiến hành lấy khúm khuẩn que gịn vơ Tiến hành lấy khúm khuẩn que trùng Tán xoay nhẹ gịn vơ trùng Tán xoay nhẹ trên thành ống ID- thành ống ID-Broth Broth Vortex Vortex khúm vi khuẩn khúm vi khuẩn hòa hòa tan tạo độ đục ống tan tạo độ đục ống 104 Đo độ đục máy đo Độ đục chuẩn giao Độ đục chuẩn giao động quang động khoảng khoảng 0.5-0.6 McFarland Phoenixspec Nephelometer 0.5-0.6 McFarland Rót huyền dịch định Rót dung dịch nhẹ Rót huyền dịch định danh ID-Broth danh ID-Broth pha nhàng không tạo bong pha vào phần giếng định danh, vào phần giếng định bóng khí đóng nắp danh (51 giếng), đóng Rót dung dịch nhẹ nhàng khơng tạo nắp chuẩn bị chạy máy bong bóng khí Cấy chuyển vi khuẩn Cấy chuyển vi khuẩn vào đĩa môi vào đĩa môi trường H P trường Blood agar Blood agar H U 105 H P H U 106 H P H U 107 H P H U 108 H P H U 109 H P H U 110 H P H U