Microsoft Word 6543 doc BéytÕViÖn dinhd−ìng b¸oc¸okÕtqu¶®Òtµinghiªncøukhcn Kh¶os¸t«nhiÔmnÊmmècA flavus vµ®Þnhl−îng®éctèAflatoxinb»ngküth uËtELISAtrongmétsèthùcphÈmt¹iHµNéi ChñnhiÖm®Òtµi BS NguyÔn[.]
BộytếViện dinhd ỡng báocáokếtquảđềtàinghiêncứukhcn KhảosátônhiễmnấmmốcA.flavus vàđịnhlợngđộctốAflatoxinbằngkỹth uậtELISAtrongmộtsốthựcphẩmtạiHàNội Chủnhiệmđềtài Đơnvịchủtrì :BS.Nguyễn LanPhơng :Khoa Thực phẩm&VSATTP Cơquanchủquản :ViệnDinhDỡng Thờigianthựchiên:Năm2006 6543 20/9/2007 HàNội2007 Phiếuđăngkývàgiaonộpkếtquảnghiêncứukhcn 1.Tênđềtài: KhảosátônhiễmnấmmốcA.flavusvàđịnhlợngđộctốAflatoxin bằngkỹthuậtELISAtrongmộtsốthựcphẩmtạiHàNội MÃsốđềtài: Thuộcchơngtrình: 3.Cấpđềtài:Đềtàicấpcơsở 4.Cơquanchủtrì:LaboVisinhKhoaThựcphẩm&VSTP Địachỉ:48BTăngBạtHổ-HàNội Điệnthoại:048211413 5.Cơquancấptrêntrựctiếp:ViệnDinhDỡngQuốcgia Tăng Địachỉ:48 B BạtHổ-HàNội Điệnthoại:049717090 6.Bộ,địaphơngchủquản:BộYTế Địachỉ:138AGiảngVõ-BaĐình-HàNội Điệnthoại: 7.Tổngkinhphí:30.000.000,00đ(Bamơitriệuđồng) Trongđó,từngânsáchNhànuwớc:30.000.000,00đ(Bamơitriệuđồng) 8.Thờigianthựchiện:Bắtđầutháng7/2006 Kếtthúctháng12/2006 9.Chủnhiệmđềtài:NguyễnLanPhơngBácsỹCKVisinh Địachỉliênhệ:LabovisinhKhoaThựcphẩm&VSATTP Điệnthọai:049716294 10 Danhsáchcánhânthamgianghiêncứu Họvàtên Họchàm/họcvị HàThịAnhĐào PGS-TS,Dợcsỹ NguyễnLanPhơng Bácsỹ PhạmThanhYến Bácsỹ Thạcsỹ,Bácsỹ BùiThịMaiHơng Cửnhân NguyễnánhTuyết 11 Bảomậtthôngtin A PhổbiếnrộngrÃi B.Phổbiếnhạnchế C.Khôngphổbiến 12 Tómtắtkếtquảnghiêncứu Mộtnghiêncứucắtngang,khảosátsựô nhiễmnấmmốcA flavusvàđịnhlợng độctốaflatoxinbằngkỹthuậtELISAtrong129mẫu(ngô,lạc,gạomỳ)tạimộtsốcửahàngbánlẻtr ongđịabànHàNội.KếtquảchothấysốmẫucónấmmốcA.flavuslà53chiếmtỉlệ41%.Nhómlạcn hiễmA.flavuscaonhất22/43mẫuchiếmtỉlệ51%,nhómngôcó16/43chiếmtỉlệ38%vànhómgạo mỳcó15/43mẫutỉlệ35%.Trong53mẫunhiễmnấmmốcA flavuscã 22 mÉ u cã ®éctè Aflatox innång®ét õ 0.23- 420ppb.Nhómlạc6 m ẫ u c ó Aflatoxinnồngđộtừ0.231.08ppb;Nhómngô1 m ẫ u c ó Aflatoxinnồngđộtừ3.5 420ppbvà10mẫucónồngđộvợtquágiớihạnchophép;Nhómgạo,mỳkhôngcómẫunàotìmthấ yAflatoxin 13 KiếnnghịápdụngKQNC - Cácloạisảnphẩmcónguycơcaonhiễmđộctốvinấmaflatoxinnhcácloạinôngsản,ngũc ố c đềuphảibắtb u ộ c k i ể m n g h i ệ m trớckhiđav o d â y truyềnsảnxuất,c h ế biếnkểcảthự cphẩmchongờivàthứcăngiasúc Cầncóbiệnpháptuyêntruyềngiáodụchớngdẫnvềnguyhạicủanấmmốcvớisứckhoẻngờisản xuất,chếbiến,kinhdoanh,vàngờitiêudùngnhữngsảnphẩmtừc c loạihạtcódầu Đểđảmbảovàchủđộngđềphòngônhiễmđộctốvinấmtrongthựcphẩmrấtcầnm rộngvàtăngc ờnghệthốngkiểmtra,giámsátpháthiệnsựônhiễmAflatoxintạic c trungtâmkiểmnghiệmt hựcphẩm 14 Chủnhiệmđềtài HàNộingày20tháng8năm2007 15 Cơquanchủtrìđềtài Bộytế Việnd i n h dỡng báo cáo Đềtài KhảosátônhiễmnấmmốcA.flavus vàđịnhlợngđộctốAflatoxinbằngkỹth uậtELISAtrongmộtsốthựcphẩmtạiHàNội Chủnhiệmđềtài Đơnvịchủtrì : BS.NguyễnLanPhơng :KhoaThựcphẩm&VSATTP Cơquanchủquản:ViệnDinhDỡng Cánbộphốihợp Kinhphí :Ths.Bùi Thị Mai Hơng Bs.PhạmThanhYếnC n.NguyễnánhTuyết PGS.Ts.HàThịAnhĐào :30triệuđồng,nguồnNCKH HàNội2007 Mụclục Trang Đặtvấnđề Tổngquantìnhhìnhnghiêncứu 10 2.1.VaitrßcđanÊmmèc .10 2.2 §éctèvinÊm .11 2.3 Nguycơônhiễmthựcphẩmdođộctốvinấm 13 2.4 §éctÝnhAflatoxin .14 2.4.1 Nghiªncøu trªn thÕgiíi 14 2.4.2 Nghiªncøutrongn−íc .17 Đốitợngvàphơngphápnghiêncứu .20 3.1 Đốitợngnghiêncứu 20 31.1.Địađiểmnghiêncứu 20 3.1.2 Thêigiannghiªncøu 20 3.1.3 Đốitợngnghiêncứu 20 4.2.Phơngpháp nghiêncứu .20 3.2.1 Thiếtkếvàphơngphápnghiêncứu 20 3.2.2 CìmÉunghiªncøu 20 3.2.3 C¸chthuthËp mÉu .20 3.2.4 Phơngphápphântích 21 3.2.4.1 PhơngphápxácđịnhA.flavustrongngũcốc 21 3.2.4.2 PhơngphápđịnhlợngaflatoxintrênELISAbằng kítpháthiệnđộctốVeratox-HS .22 3.3.Đánhgiákếtquả 24 3.4.XưlýsèliƯu 24 Kếtquảnghiêncứu 26 4.1 Kếtquảkhảosátô nhiễmnấmmốcA.flavus 26 4.1.1 Thựctrạngnhiễmnấmmốcchungởcácmẫuphântích 26 4.1.2 Mộtsốloạinấmmốcnhiễmcủatừngnhómhạtngũcốc 26 4.1.3.ônhiễmmốctrongngô,lạc,gạotrênđịabàncácquận 26 4.2 KếtquảđịnhlợngAflatoxintrênmáyELISA 27 4.2.1 Xácđịnhkhoảngtuyếntínhvàđờngchuẩn 27 4.2.2 Giớihạnvềđịnhlợngvàphạmviđịnhlợng 28 4.2.3 Độthuhồicủakỹthuật .29 4.2.4 KếtquảđịnhlợngAflatoxincủacácmẫutrênELISA 29 bµnluËn 32 KÕtluËn .34 KiÕnn ghÞ 35 khuyÕnnghÞ .35 Tàiliệuthamkhảo Nhữngchữviếttắt CDC Centersfordiseasecontrola n d prevention(Trungt â m kiểmsoátvàphòng chốngbệnhdịch) FAO ASEAN FoodAgricultureOrganization(TổchứcthựcphẩmvànôngnghiệpcủaLiên hợpquốc) AssociationofSoutheastAsian(HiệphộicácquốcgiaĐôngNamá) QĐ-BYT QuếtđịnhBộytế ELISA EnzymeLinkedImmuno-Sorbent-AssayHS HighS e n s i t i v i t y HPLC HighPerformanceLiquidChromatography(Sắckhílngcaoáp)TLC ThinLayerChromatography(sắckýlớpmỏng) TCN Tiêuchuẩnngành TQTP ThờngquithựcphẩmVSATTP VệsinhantoànthựcphẩmVSTP Vệsinhthựcphẩm VSV Visinhvật WHO WorldHealthOrganization(TổchứcYtếThếgiới) TTYTDP TrungtâmYtếdựphòngppb Microgam/kilogamAfla (TS) Aflatoxin(tổngsố) A flavus Aspergillusflavus Tp.HCM ThànhphốHồChíMinh OD OpticalDensity(Mậtđộquang) tsbtNm TổngsốbàotửnấmmốcADN Aciddesoxyribonucleic Afla Afla.b1 Afla.M1 aflatoxin AflatoxinB1 AflatoxinM1 ĐặtvấnĐề Khíhậunóngẩm,thờigianmakéodàivàbÃolụtthờngxảyra,làđiềukiệntốtc h o nấmmố cpháttriểnnhanhgâyônhiễmtớilơngthực,thựcphẩm.Cácloạinôngs ả n thựcphẩmthờngth uhoạchtrongthờivụdễgặpmadàingày,đólàmốinguyc lớnchovấnđềantoànvệsinhthựcp hẩm Trongquátrìnhthuhoạch,bảoquản,dựtrữlơngthựcvàthựcphẩmnấmmốccóthểxâmnhập ,pháttriển,gâyđộcvàobấtkỳgiaiđoạnnào.Nhiềuloàinấmmốccóýnghĩacôngnghiệp,đợcdù ngtrongsảnxuấtchấtkhángsinh,vitamin,mộtsốdạngtơng Ngợclạic ó r ấ t nhiềuchủngn ấ m mốcgâyhhạiv l m độct h ự c phẩm,g â y bệnhchongời,độngvậtvàthựcvật.Nấmmố cgâyônhiễmởkhắpmọinơivà độct ố thờngđợcpháthiệnở cácthựcphẩmbịô nhiễmdosảnxuất,bảoquảntrongkhokhihàm lợngnớctrongchúngởmức cao.NấmmốcAspergillusflavuslàloạiapháttriểntrênnhữngl oạihạtcódầunhngô,lạc,đậu,càphê,lúamạch vàsinhrađộctố.Cónhiềuloạiđộctốvinấmnh ngAflatoxinlàmộtđộctố đángsợnhấtvànấmAspergillusflavuslàloàicungcấplợngAflatoxinchủyếu Aflatoxinnhiễmvàotrongcácnôngsản,thứcăngiasúc,ngờiv giasúcă n phảithứcă n nh iễmAflatoxin,độct ố nàysẽt Ý c h lị méts è c ¬ q u a n trongc thểg â y nhiễmđộcgan,thận,x uấthuyếtđờngtiêuhoá,ungthgan.C c điềutrachot h ấ y c ó sựtơngquangiữahàmlợ ngAflatoxintrongthựcphẩmvàsốbệnhnhânungthganởnhiềunứơcnhTháiLan,Uganda,K enya,malaysia,NhậtBản,Philippin[1].TạiấnĐộvànhiềunớcChâuPhingờitacònnhậnthấ ynhữngtrẻem đợcnuôidỡngkémthờngđễbịnhiễmvàtíchluỹAflatoxincaotronggandoănnhiềubộtlạc, ngô,đậu,hạtcódầu,thựcphẩmlênmenbịnhiễmnấmmốc[2] ởViệtnamtrongkhicácbệnhtruyềnnhiễmđangtừngbớcđợcđẩylùithìcácbệnhdoăn phảicácloạithựcphẩmcóđộcnóichungvàđộcvinấmnóiriênglạicóchiềugiatăng.H i ệ n n a y ch−ac ã t h è n g k ª nàonóil ê n sốngờibịngộđộcv i nấmnhngn h ữ n g l i ê n quancủaAflato xinv i đờisốngsứckhoẻcộngđồngđÃđợcđềcậpđến.CácnhàkhoahọccũngđÃkhuyếncáoph ảiđặcbiệtchúýđếntớilạc,ngô,gạov cács ả n phẩmc h ế biếnt chúngbởirấtd ễ bịô n h i ễ m n ấ m mốcvàđộct ố Aflatoxin Nôngsản,thựcphẩmkhôngchỉsửdụngchotiêudùngnộiđịamàcònchoxuấtkhẩu.Một sốthị trờngnớcngoàithờngxuyêngiámđịnhlôhàngvàloạibỏcácchuyếnhàngcóhàmlợ ngđộctốvinấmcaohơn210ppb.Vìvậynênnhucầukiểmt r a lợngAflatoxintrongcácsảnphẩmngàycàngcao Đểxácđịnhhàmlợngđộct ố Aflatoxintrongthựcphẩmrấtc ầ n t h i ế t phảilựachọnm ộ t p hơngp h p phùhợptrongđ i Ị u k i Ư n k i Ĩ m t r a nhanh,chínhxácđốivớitừngcơsở,labo.Kh ánhiềunớcđÃchọnphơngphápSắckýlỏngcaoáp(HPLC), làphơngphápchínhthứcđợcc h ấ p nhậnt r ê n toàn c ầ u [ ] N go ài raphơngphápS ắc k ýlớpmỏng(TLC)cũngđợclựachọnkhiphòngthínghiệmkhôngđợctrangbịHPLC,đâylàp hơngphápthờngđợcdùngởphầnlớncácphòngphântíchtạicácnớcđangpháttriển[3].Hi ệnnaynhữngphơngphápnàycóđộpháthiệnrộng,chínhxác,vàđangđợcadùng.Tuynhiên quytrìnhphânt í c h AflatoxinbằngphơngphápHPLChayTLCtrongcácmẫuthựcphẩmph ảiquanhiềucôngđoạntừk h â u chiếttách,làmsạchmẫusửdụngdungmôisiêutinhkhiếtnên rấttốnkém,mấtnhiềuthờigian.Quátrìnhtáchtriếtsửdụngnhiềudungmôirấtđộcnêncónguy cơg â y ônhiễmmôitrờngvàđộchạichokiểmnghiệmviên Sửdụngphơngphápđịnhlợngđộct ố Aflatoxint r ê n máyELISAbằngbộkítpháthiệnđộ ct ố Veratox- HSp h ầ n nàoc ó thểkhắcphụcđợcnhữngnhợcđ i ể m t r ê n VeratoxHSđịnhlợngAflatoxinlàmộtthửnghiệmELISA,chophépthu đợcchấtk ế t t ủ a chínhx c đ ế n phầnt ỷ (ppb).Phơngphápn y đơngiản,dễlàm, đápứngđợcnhuc ầ u m u ố n kiểmtralợngđộctốAflatoxinthấp.Vìtrongnhữngn ă m gần đâ yxuhớnggiảmmứcgiớihạ n độctốvinấmtrongthựcphẩmởmộtsốnớctrênthếgiớingàycà nggiatăng(trứơcđâygiớihạncủaAflatoxinB1trongthức ănđasốcácnuớclấymứcdới10mcg/kg,nhnggầnđâycótới29quốcgiađÃđểở mức4mcg/ kg).HơnnữakỹthuậtnàylạiphùhợpchonhiềuTrungtâmytếdựphòngv mộtsốcơsởkiểmng hiệmchacóđiềukiệntrangbịHPLC,TLC HàNộikhôngphảilànơisảnxuấtchínhracácloạinôngsảnnhngô,lạc,gạo,m ỳ màlợ ngthựcphẩmnàynguồnchínhvẫnlàchuyểnđếntừcácvùnggiápgianh.Tuynhiêntrongtất cảc ácchợ vàmộtsố tuyến phốđềuthấy mặtcủa cácloại nôngsảnthựcphẩmnày.Tìnhtrạngôn hiễmnấmmốcA.flavusvàđộctốAflatoxintrongngũcốctạiHàNộirasaohiệnnaycũngcònítđ ềtàiđềcậpđến.VìvậychúngtôiđÃchọnđềtài:K h ả o sátô nhiễmnấmm è c A fl av u s v µ định lợngđộctốAflatoxinbằngkỹthuậtELISAtrongmộtsốthựcphẩmtạiHàNội Mụctiêunghiêncứu XácđịnhmứcnhiễmnấmmốcA flavus trongmộtsốmẫu thựcphẩmt ại HàN ộ i Địnhlợngđộct ố Aflatoxin(tổngsố)trongm ẫ u nhiễmnấmmốcA flavus bằngkỹthuậtELISA Tổngquantìnhhìnhnghiêncứu 2.1.Vaitròcủanấmmốc Trongthếgiớicủanấmcónhiềuloàinấmlớnvànấmnhỏ(vinấm).Nhữngnấm ănđợclànguồndinhdỡngquývàhơngvịđặctrngchỉcónấmmớicó.Chúngcónhiềuý nghĩatrongnềnkinhtếcùngn h tronglĩnhvựcl m thứcăn.N ấ m m ọ c hoangdÃhoặcnuôitrồ ngđ ề u c ó hàmlợngprotein,vitaminvàchấtkhoángcao.Nhngcũngcóloàisinhrađộctốgây ranỗikinhhoàngchongời Nấmmốcthuộcv i nấmlàloàithựcvậtkhôngc ó chấtd iệ p lục,nênchúngchỉsốngđợcn hờcóhệsợibámvàocácchấthữucơ.Hệsợicủanấmmốccómộtsốănsâuvàocơchấtgọilàkhu ẩntidinhdỡng,mộtsốmọcrangoàibềmặtcơchấtgọilàkhuẩntikhísinh.Mộtsốsợicủakhuẩn tikhís i n h dầndầnsẽpháttriểnthànhcơquansinhsảnđặcbiệtmangbàotử.Màusắccủabàotửsẽ đặctrngchom u củanấmmốckhigià Nấmmốcphổbiếnrộngtrongtựnhiên,làmộtnhómrấtlớn,ngờitathờngxếpvàoloạivisi nhvật.Chúngmọctrêncơchấtdinhdỡngvàtạo thànglớplôngmợtcómàusắckhácnhau.Nh iềuloàinấmmốccóýnghĩacôngnghiệp,ngợclạinhiềun ấ m mốclàmhỏngthựcphẩmvàhà ngcôngnghiệp,làmt h a y đổirấtnhiềuthànhphầnhoáh ọc củ a c ch ất vàthảir a s ả n phẩmtra ođổic hấ t Sảnphẩmtraođổichấtcủ a mốclànhữngchấtđộc(Mycotoxin)đốivớingờicũng nhđộngvật.Mộttrongn h ữ n g họnấmmốcthờnggặplàhọnấmAspergillus,chúngcótới 200loài Trongkhoảngmấychụcnămgầnđây,ngờitachúýnhiềuđếnnấmmốcA s p e r g i l l u s f lavusmọctrêncơchấtlàbộtcóchấtbéonhbộtlạc,bộtngô,bộtđậutơng,l ú a m ỳ , mạch,c phê,c a cao,cùidừa Mốcnàyr ấ t g i ố n g m ố c Apergillusoryzaemộtnấmmốccómàuvànghoacausửdụngtrongnghềlàmtơng,nósinhr a mộtloạiđộctốgọilà Aflatoxin.HailoạinấmmốclànơisảnxuấtchínhrađộctốAflatoxinđólànấmmốcAspergillusfl avus,As pe r g il lu s parasiticus.Nhữngloạinấmn y hầunh đợct ìm thấyởkhắpmọinơ itrênthếgiới.Chúngđợcsinhra từđấttrồngnhngl i apháttriểnở nhữngl o i hạtgiàudinh dỡng,độct ố c ủ a c h ú n g đợcsảnsinhtrớckhithuhoạcht r ê n cánhđồngvàs a u khithuhoạchở nơibảoquản.Trongcả haitrờnghợpthìnhữnghhạidocôntrùnggâyra,dovậnchuyểnb ả o quảnsaiquycách,dotác độngcủamôitrờngđềuchophépnấmmốcxâmnhậpvàohạt