Cây trồng biến đổi gen HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM TIỂU LUẬN AN TOÀN THỰC PHẨM Đề tài “Cây trồng biến đổi gen” 1 CÂY TRỒNG BIẾN ĐỔI GEN 1, Khái niệm • Cây trồng chuyển gen l[.]
HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM TIỂU LUẬN AN TOÀN THỰC PHẨM Đề tài: “Cây trồng biến đổi gen” CÂY TRỒNG BIẾN ĐỔI GEN 1, Khái niệm • Cây trồng chuyển gen biến đổi vật chất di truyền, tiếp nhận thêm gen mới, kết xuất tính trạng tác động môi trường Cây trồng chuyển gen biến đổi vật chất di truyền, tiếp nhận thêm gen mới, kết xuất tính trạng tác động mơi trường Q trình biến đổi vật chất di truyền (thêm gen mới) nhờ vào công nghệ chuyển gen, so sánh trình với trình đột biến tự nhiên chất hai trình một, q trình tiến hóa sinh vật phải trơng chờ vào q trình biến đổi vật chất di truyền, đột biến đóng vai trò quan trọng Dưới tác động nhân tố gây đột biến, vật chất di truyền biến đổi theo hai hướng: thêm đoạn hay bớt đoạn Như vậy, trình thêm đoạn nhờ chuyển gen tương tự trình thêm đoạn ADN đột biến tự nhiên Tuy nhiên, hai q trình có nhiều điểm khác nhau: Nếu trình chọn lọc tự nhiên giữ lại biến dị có lợi cho q trình tiến hóa lồi, kỹ thuật chuyển gen trồng giữ lại tính trạng định hướng trước, có lợi kinh tế, khơng đóng góp cho q trình tiến hóa lồi Đây điểm khác biệt đột biến tự nhiên "đột biến" nhờ kỹ thuật chuyển gen Sản phẩm đột biến tự nhiên tính trạng có lợi cho tiến hóa, cịn sản phẩm q trình chuyển gen tính trạng có lợi cho người, ưu điểm bật công nghệ chuyển gen Nhìn chung, việc ứng dụng chuyển gen có lợi ích rõ rệt sau: - Tăng sản lượng - Giảm chi phí sản xuất - Tăng lợi nhuận nông nghiệp - Cải thiện môi trường Những chuyển gen “thế hệ thứ nhất” giúp giảm chi phí sản xuất Ngày nay, nhà khoa học hướng đến việc tạo chuyển gen “thế hệ thứ hai” nhằm tăng giá trị dinh dưỡng có đặc điểm thích hợp cho cơng nghiệp chế biến Lợi ích trồng hướng trực tiếp vào người tiêu dùng Chẳng hạn như: - Lúa gạo giàu vitamin A sắt - Khoai tây tăng hàm lượng tinh bột - Vaccine thực phẩm (edible vaccine) ngô khoai tây - Những giống ngơ trồng điều kiện nghèo dinh dưỡng - Dầu ăn có lợi cho sức khoẻ từ đậu nành cải dầu Phân loại Dựa vào hướng nghiên cứu người ta phân loại trồng biến đổi gen sau: a Cây trồng chuyển gen kháng nấm gây bệnh Nấm bệnh tác nhân gây hại trồng nặng, nước nhiệt đới có độ ẩm cao Các enzyme làm thối hóa thành phần vỏ tế bào nấm chitin β-1,3 glucan loại ý Khi chuyển gen chitinase vào thuốc tăng hoạt tính kháng nấm gây hại Sự biểu đồng thời hai gen chitinase glucanase thuốc làm cho có tính kháng nấm gây hại cao có gen độc lập… b Cây trồng chuyển gen kháng vi khuẩn gây bệnh Đối với bệnh vi khuẩn, hướng nghiên cứu tạo giống công nghệ gen bắt đầu Về có ba hướng : - Dùng gen mã hóa enzyme làm thối hóa thành tế bào vi khuẩn Chẳng hạn, gen lysozyme từ nguồn tế bào động vật từ thực khuẩn thể T4 (bacteriophage T4) đưa vào thuốc khoai tây Các gen biểu hoạt tính lysozyme mạnh tế bào có khả phòng trừ vi khuẩn Erwina carotovora tốt - Gen mã hóa α-thionin-cystein chuyển giao sang thuốc phòng ngừa vi khuẩn Pseudomonas syringae - Chuyển gen sản xuất protein làm giảm độc tố vi khuẩn hướng có nhiều hứa hẹn Gen chủ yếu gen sản xuất loại enzyme phân hủy độc tố vi khuẩn, vơ hiệu hóa tác hại chúng c Cây trồng chuyển gen kháng virus gây bệnh Các virus gây thiệt hại đáng kể hầu hết trồng lương thực cho sợi phạm vi giới Phương pháp chủ yếu để khắc phục tình trạng khai thác tính kháng xuất phát từ tác nhân gây bệnh Chẳng hạn, sử dụng trình tự có nguồn gốc từ virus biểu chuyển gen để cung cấp tính kháng virus thực vật Hướng dựa sở nghiên cứu gây nhiễm (inoculation) hay xâm nhiễm (infection) thực vật, khởi đầu với chủng virus nhẹ tạo phản ứng bảo vệ chống lại gây nhiễm với loại virus virus liên quan gần gũi d Cây trồng chuyển gen kháng trùng phá hoại Sử dụng hóa chất để phịng trừ sâu bọ trùng vừa đắt tiền vừa tác động xấu đến môi trường Các trồng bông, ngô khoai tây chuyển gen sản xuất thương mại biểu độc tố Bacillus thuringensis (Bt) để tạo tính kháng côn trùng loại nhai-nghiền (chewing insects) Vi khuẩn B thuringensis tổng hợp protein δendotoxin tinh thể mã hóa gen Cry Khi côn trùng ăn vào bụng, prototoxins bị đứt gãy dày kiềm côn trùng để tạo thành độc tố hoạt động Các liên kết tạo receptor đặc trưng tế bào biểu mô ruột làm thành lỗ chân lông cuối gây chết côn trùng. e Cây trồng chuyển gen cải tiến protein hạt Hàm lượng protein thành phần amino acid thay đổi nhiều thực phẩm thực vật Ngồi protein amino acid không thay phải tiếp nhận thức ăn người động vật khơng tự tổng hợp Đặc biệt, thức ăn gia súc chủ yếu đậu tương ngô, phải bổ sung amino acid sản xuất phương pháp lên men lysine, methionine, threonine tryptophan Trong tương lai, không cần thiết phải bổ sung amino acid theo phương thức Phương thức có khả tạo dòng gen đậu tương ngơ mà gen mã hóa cho protein giàu amino acid Người ta đưa gen mã hóa cho loại protein chứa amino acid có lưu huỳnh cao bất thường vào đậu lupin với mục đích biểu hạt Kết tăng 100% hàm lượng protein hạt Hạt dùng để nuôi cừu, tăng trọng lượng 7% sản lượng lông tăng 8% so với cừu nuôi loại hạt bình thường Thành cơng thúc đẩy nhà nghiên cứu đưa gen vào biểu cỏ, nhằm cải tiến cân amino acid không thay cỏ f Cây trồng chuyển gen sản xuất loại protein Thực việc sản xuất protein thực vật dễ dàng, tinh protein từ mơ thực vật khó khăn trước hết giá thành cao Vì vậy, người ta hy vọng vào phương pháp mới, giới thiệu Raskin cs (1999) Những gen mã hóa cho protein gắn với promoter đảm bảo cho protein tổng hợp rễ Tiếp theo protein tạo thành có hệ thống tín hiệu, đảm bảo cho vận chuyển vào vị trí xác định tế bào Trong trường hợp đặc biệt protein vận chuyển vào mạng lưới nội chất (endoplasmatic reticulum: ER) Protein vào ER thải bên ngồi vùng rễ, promoter đặc hiệu cho vùng Người ta dùng số dung dịch muối để tách protein cách dễ dàng với giá thành hợp lý g Cây trồng chuyển gen mang tính bất dục đực Các hoa màu đạt suất cao trồng từ hạt lai qua trình chọn lọc khắt khe Các hạt có ưu lai cao kết trình lai xa Ở tự thụ phấn ngô, trước người ta tốn công lao động để loại bỏ cờ bắp (cụm hoa đực) nhằm tránh tượng tự thụ phấn Tuy nhiên, cơng trình thử nghiệm chuyển phức hợp gồm gen rolC A tumefaciens promoter CaMV 35S (cauliflower mosaic virus: virus gây bệnh khảm súp-lơ) vào thuốc thu chuyển gen bất thụ Kết nghiên cứu áp dụng loại khác h Thực vật biến đổi gen để sản xuất acid béo thiết yếu Như biết, nguồn cung cấp chủ yếu acid béo thiết yếu dầu cá tài nguyên hải sản bị cạn kiệt gia tăng độc tố loại hải sản khác trở thành nguy tiềm tàng Do vậy, việc nghiên cứu sản xuất acid béo thiết yếu có tiềm to lớn việc phát triển nguồn cung cấp thay i Làm thức ăn chăn nuôi Một hệ trồng chuyển gen mới, thiết kế đặc biệt cho ngành chăn nuôi phát triển Những loại trồng thiết kế với thay đổi quan trọng hàm lượng thành phần (ví dụ: protein amino acid) hay thành phần thứ yếu (ví dụ: loại vitamin khống chất) Vì loại trồng chuyển gen dùng với mục đích làm thức ăn chăn ni nên khác với loại trồng bình thường, tiến trình chuẩn y loại trồng cần có thêm đánh giá an toàn chúng để người vật nuôi tiêu dùng. 3, Cơ chế tác động a, Chuyển gen trực tiếp: Bằng súng bắn gen: - Khái niệm: Là thiết bị sử dụng để đưa thông tin di truyền vào tế bào, thiết kế cho biến nạp ngoại lai vào tế bào thực vật - Nguyên tắc: sử dụng áp lực xung khí helium để đẩy cá viên đạn có kích thước nhỏ mang gen mong muốn xuyên qua lớp tế bào, mô để xâm nhập vào genome thực vật - Đối tượng áp dụng : loại mầm, có hệ thống tái sinh tốt, cho phần mơ phân hóa - Ưu điểm nhược điểm phương pháp súng bắn gen: Ưu điểm Nhược điểm Bắn lần nhiều tế Đòi hỏi thiết bị đắt tiền Quá Có thể gây xáo trộn bào trình chuyển gen nhanh, thao tác đơn giản trật tự đối tượng chuyển gen Các vetor mang gen tái tổ Tần số biến nạp ổn định hợp đơn giản cần thấp lượng vector nhỏ Bằng xung điện: - Là phương pháp sử dụng xung điện thời gian ngắn để tạo lỗ màng tế bào trần làm cho DNA bên mơi trường xâm nhập vào bên tế bào - Quy trình: tạo dung dịch tế bào huyền phù →tạo xung điện với hiệu điện cao, thời gian ngắn →protoplast bị thủng số chỗ →DNA thâm nhập , gắn vào hệ gen thực vật →nuôi cấy protoplast môi trường chọn lọc→nuôi cấy invitro, tái sinh cây→chọn lcọ chuyển gen - Áp dụng với mầm cần chủng Agrobacterium có khả biến nạp cao, kết hợp số kỹ thuật làm tăng tần số biến nạp - Ưu nhược điểm phương pháp là: Ưu điểm Nhược điểm Có thể thực với Tỷ lệ tế bào mơ invitro cịn ngun vẹn chuyển gen cịn thấp Đoạn DNA ngoại lai biến nạp có kích thước lươn Sức sống tế bào giảm đột ngột bị sốc điện , việc tái sinh số lồi khó Chuyển gen hóa chất - Là phương pháp chuyển gen vào protoplast (tế bào trần) nhờ chất hóa học polyethylene glycol (PEG) canxi phosphat - Nguyên tắc: Khi có tác động hóa chất màng protoplast bị thay đổi protoplast thu nhận DNA ngoại lai vào bên tế bào nồng độ cao PEG làm DNA cần biến nạp khơng cịn trạng thái hịa tan mà kết dính lại màng sinh chất Sau cách loại bỏ PEG xử lý nồng độ Ca2+ độ pH cao, DNA biến nạp chuyển nạp vào tế protoplast - Ưu nhược điểm : Ưu điểm Nhược điểm Hiệu chuyển gen cao, Tần số chuyển gen ổn định trình biến nạp thấp khơng kiểm sốt thành cơng q trình chuyển gen Khơng địi hỏi thiết bị đắt tiền Dễ xảy tượng dung hợp tế bào trần gây khó khăn việc phân tích Bằng vi tiêm - Chuyển gen trực tiếp từ tế bào protoplast tế bào đơn cách sử dụng vi tiêm nhỏ kính hiển vi vi thao tác - Nguyên tắc: Một lượng nhỏ DNA tiêm trực tiếp vào nhân tế bào phôi trần tế bào nguyên vẹn cách hcọ kính hiển vi Phương pháp cho phép đưa gen vào dúng vị trí mong muốn tế bào với hiệu tương đối cao - Áp dung với loại mà việc ni cấy thể tạo quần thể tế bào trần có tính tồn cao - Ưu nhược điểm phương pháp: Ưu điểm Nhược điểm - - Có thể tối ưu lượng DNA đưa vào tế bào - Quyết định Mỗi lần tiêm phát tiêm với 10 đưa DNA vào loại tế bào - tế bào Có thể đưa cách - Cần dùng thiết xác vào tận nhân có bị có độ xác cao cần thể quan sát - kỹ phức tạp người sử Các tế bào có cáu dụng trúc nhỏ hạt phấn tế bào tiền phôi hạn chế số lượng tiêm xác - Có thể ni riêng lẻ tế bào vi tiêm biến nạp vào giống Bằng ống phấn - Là phương pháp chuyển không qua nuôi cấy invitro DNA ngoại lai chuyển trực tiếp đường ống phấn - Nguyên tắc: DNA ngoại lai chuyển vào theo đường ống phấn, chui vào bầu nhụy Thời gian chuyển gen vào lúc hạt phấn mọc qua vòi nhụy lúc đưa tinh vào thụ tinh Thời điểm chuyển gen tốt xảy trình thụ tinh noãn cho tế bào hợp tử chưa phân chia Như chuyển gen xảy tế bào Bằng siêu âm - Là dùng sóng siêu âm để chuyển gen vào tế bào trần - Nguyên tắc: 11 Sau tạo protoplast ta tiến hành trộn protoplast với plasmid chứa gen mong muốn tạo thành dung dịch huyền phù Tiến hành cắm đầu máy siêu âm vào dung dịch huyền phù khoảng 3mm cho máy phát với tần số 20 kHz, thời gian 600 – 900 s Sóng siêu âm làm cho lớp màng protoplast biến đổi tạo lỗ giúp cho DNA ngoại lai xâm nhập vào tế bào - Quy trình: Tạo dung dịch tế bào huyền phù →tạo sóng siêu âm với tần số cao →protoplast bị thủng số chỗ →DNA xâm nhập vào→nuôi cấy protoplast →tái sinh cây→chọn lọc chuyển gen - Ưu nhược điểm phương pháp: Ưu điểm Nhược điểm Không độc hại tế bào Giá thành thiết bị tương đối cao Chuyển lượng protoplast Đòi hỏi kĩ thuật cao nhiểu b, Chuyển gen phương pháp gián tiếp Nhờ Agrobacterium tumefacients: - Agrobacterium có khả xâm nhập vào tế bào thực vật cách chuyển đoạn DNA vào tế bào thực vật - Ưu điểm: có hiệu - Nhược điểm : thực khó lớp mầm Chuyển gen nhờ virus: 12 - Là phương pháp đưa gen ngoại lai chèn vào hệ gen virus sau cho virus nhiễm vào tế bàp vật chủ - Chuyển gen virus có nhiều thuận lợi : virus dễ xâm nhập lây lan thể vật chủ đồng thời virus mang đoạn DNA lớn so với plasmid - Tuy nhiên virus làm vector chuyển gen cần có tiêu chuẩn Hệ gen virus phải DNA Virus có khả xâm nhập, di chuyển từ tế bào sang tế sau: bào khác qua lỗ vách tế bào 4, Có khả kí sinh nhiều loại vật chủ Tác động trồng biến đổi gen đến người Tích cực Các quan khoa học quốc tế hàng đầu giới đánh giá hàng trăm nghiên cứu đơn lẻ trước đến kết luận thống trồng biến đổi gen an tồn chí cịn an tồn thực phẩm truyền thống hay thực phẩm hữu số trường hợp Hiện có nhiều chuyên gia lên tiếng bảo vệ loại thực phẩm mang nhiều tính ưu việt này, cụ thể như: - Thực phẩm từ trồng cơng nghệ sinh học có khả gây dị ứng so với loại thực phẩm thông thường khác chúng thường sàng lọc trước để bảo đảm không chứa DNA tương tự trình tự để mã hóa cho protein gây dị ứng Hơn nữa, nhà nghiên cứu theo đuổi loạt phương pháp tiếp cận nhằm loại bỏ tác nhân gây dị ứng thực phẩm phổ biến đe dọa người tiêu dùng Ngoài việc nghiên cứu phương pháp đậu nành tiến hành mở rộng nhiều loại thực phẩm khác đậu phộng, sữa … Cây trồng công 13 nghệ sinh học làm cho thực phẩm an toàn cách giảm dư lượng thuốc bảo vệ thực vật giảm khả nhiễm độc tố nấm mốc - Thực phẩm từ biến đổi gen nguyên nhân làm tăng khả kháng thuốc kháng sinh Các nghiên cứu phát triển vi khuẩn kháng thuốc kháng sinh thể người "gen thị" (được sử dụng số giống trồng công nghệ sinh học thương mại hóa đầu tiên), chứng minh cách thuyết phục nguyên vấn đề sử dụng liều loại thuốc kháng sinh thương mại riêng biệt Hơn nữa, nghiên cứu thực vào năm 2010 cho thấy người trồng bắp truyền thống bên cạnh bắp Bt hưởng lợi từ việc giảm áp lực sâu đục thân bắp giống châu Âu - Đặc biệt thực phẩm biến đổi gen thực phẩm giàu đạm so với thực phẩm truyền thống Các chất đạm lại đóng vai trị quan trọng sức khỏe người loại vật nói chung Những trồng có giá trị dinh dưỡng cải thiện gồm giống Gạo vàng (cung cấp tiền sinh tố A để khắc phục tình trạng thiếu vi-ta-min A nhóm dân số tiêu dùng gạo), Ngơ Lysine (cung cấp chất lyzin chức cho thức ăn chăn nuôi lợn gia cầm), đậu nành SDA (có chứa dầu đậu bổ sung hàm lượng a-xít béo Omega-3 tốt cho tim mạch) Tiêu cực Đối với sức khỏe: FDA kết luận khơng có chứng cho thấy thực phẩm hay trồng biến đổi sinh học an toàn so với thành phần sản xuất phương pháp thông thường Tuy nhiên, ăn thực phẩm biến đổi gen biết đến phá vỡ vi khuẩn lành mạnh ruột Trong nhiều trường hợp, dấu hiệu dị 14 ứng trẻ em bị dị ứng nặng ngừng hoàn toàn sau chúng ngừng ăn thực phẩm biến đổi gen Ngoài ra, nghiên cứu động vật báo cáo tác dụng phụ khác: tổn thương quan, phản ứng miễn dịch, dị ứng, vô sinh, dị tật bẩm sinh, bệnh da (bao gồm mụn trứng cá bệnh chàm), tăng nguy ung thư, tăng lão hóa triệu chứng khác Rất khó để nghiên cứu ảnh hưởng lâu dài từ GMC, chúng có mặt thị trường thời gian ngắn, lần giới thiệu vào năm 1996 Tuy nhiên, ngày có nhiều vấn đề sức khỏe xuất mà liên quan đến GMC 5, Thực trạng ứng dụng sản xuất a, Tình hình phát triển trồng biến đổi gen giới Đến tháng 12/2008, có 61 nước phê chuẩn 677 sản phẩm biến đổi gen cho xuất thị trường, khoảng 40% sản phẩm phê chuẩn từ châu Á Trên 25 quốc gia trồng 125 triệu chuyển gen theo báo cáo hàng năm ISAAA, sau 19 năm phát triển (kể từ năm 1996), loại trồng chuyển gen thương mại hóa ngày tăng qua năm Tính riêng năm 2014, trồng biến đổi gen trồng rộng rãi 28 nước với tổng diện tích khoảng 181,5 triệu (số nước trồng biến đổi gen tăng lần, diện tích tăng 100 lần so với năm 1996), tỷ lệ tăng trưởng hàng năm khoảng đến 4% Trong Mỹ quốc gia đứng đầu diện tích trồng chuyển gen giới (73,1 triệu ha, chiếm 40%), tiếp đến Barazil (42,2 triệu ha), Argentina (24,3 triệu ha), Ấn Độ (11,6 triệu ha), Canada (11,6 triệu ha) Điều đáng ý số quốc gia phát triển đưa trồng biến đổi gen vào canh tác ngày tăng nước phát triển (đặc biệt nước Châu Âu) hạn chế mở rộng diện tích Khoảng 10 năm đầu, từ 1996-2006, nước phát triển sử dụng trồng biến đổi gen canh tác cịn Tuy nhiên khoảng 15 cách dần thu hẹp năm sau Trong năm gần diện tích trồng biến đổi gen nước phát triển cao nước phát triển (khoảng 100 so với 81 triệu năm 2014) Điều cho thấy, trồng chuyển gen đóng góp tích cực cho phát triển nông nghiệp tăng trưởng kinh tế đặc biệt nước phát triển giảm chi phí sản xuất, nâng cao suất Dựa kết 147 nghiên cứu thực 20 năm cho thấy, việc trồng chuyển gen giảm 37% lượng phân bón hóa học, tăng 22% suất trồng, lợi nhuận người nông dân tăng 68% Ngoài việc trồng chuyển gen kháng thuốc diệt cỏ, kháng sâu bệnh hại giảm đáng kể lượng thuốc trừ sâu sử dụng, góp phần hạn chế ô nhiễm môi trường, cân sinh thái b, Tình hình phát triển trồng biến đổi gen Việt Nam Ở Việt Nam trồng biến đổi gen chưa xuất nhiều, năm gần trồng biến đổi gen ứng dụng phát triển số loại trồng Các sản phẩm trồng biến đổi gen sử dụng nhiều chăn nuôi tiêu dùng chủ yếu nhập Cây trồng biến đổi gen câu trả lời cho nhiều vấn đề nan giải mà ngành nông nghiệp Việt Nam gặp phải. Theo số liệu Hiệp hội Thức ăn chăn nuôi, tháng đầu năm 2013, Việt Nam nhập 1,34 triệu ngô 897000 đậu dùng làm nguyên liệu thức ăn chăn nuôi Số liệu Tổng Cục Hải Quan cho biết, tháng năm 2014, nước nhập 580 nghìn ngô, tăng gấp lần so với tháng 01/2013. Đáng ý nguồn nhập ngô Việt Nam chủ yếu có xuất xứ từ thị trường Braxin, Argentina, Mỹ, Ấn Độ, Thái Lan (chiếm tới 90%), nước có diện tích trồng biến đổi gen lớn giới 16 6, Hậu giải pháp Bên cạnh ưu điểm có nguy tiềm ẩn việc phát triển kỹ thuật Bao gồm: - Mối nguy hiểm việc vơ tình đưa chất gây dị ứng làm giảm dinh dưỡng vào thực phẩm - Khả phát tán gen biến nạp trồng sang họ hàng hoang dại - Sâu bệnh có nguy tăng cường tính kháng với chất độc tiết từ chuyển gen - Nguy chất độc tác động tới sinh vật loại sinh vật cần diệt, làm cân sinh thái a Đối với người (a) ảnh hưởng sức khỏe cách trực tiếp (độc tính), (b) khuynh hướng gây phản ứng dị ứng (dị ứng); (c) thành phần cụ thể chứa chất dinh dưỡng chất độc hại; (d) ổn định gen chèn; (e) ảnh hưởng đến giá trị dinh dưỡng liên quan đến biến đổi gen; (f) tác dụng không mong muốn từ kết chèn gen I Kết luận Nhìn chung, cịn điểm cịn chưa rõ ràng chuyển gen với khả tạo giống trồng có giá trị kinh tế, cơng nghệ có vai trị khơng thể phủ nhận Tuy vậy, số vấn đề đáng lo ngại Để giải vấn đề 17 kết luận thu phải dựa thơng tin tin cậy có sở khoa học Vì tầm quan trọng lương thực thực phẩm cho người, nên sách liên quan tới trồng chuyển gen phải dựa tranh luận cởi mở trung thực có tham gia thành phần xã hội Tài liệu tham khảo [1]:Government, U.S Advances in Biotechnology and Genetic Engineering : Implications for the development of new biological warfare Agents by U.S Government (U.S Defense Dept., 2011) [2]:Bernardo, R Breeding for quantitative traits in plants (Stemma press Woodbury, 2002) [3]:Carpenter, J.E Peer-reviewed surveys indicate positive impact of commercialized GM crops Nat Biotech 28, 319-321 (2010) [4]:Hellmich, R.L & Hellmich, K.A Use and Impact of Bt Maize Nature Education Knowledge 3, (2012) [5]: Potrykus, I Golden Rice and Beyond Plant Physiology 125, 1157-1161 (2001) [6]: http://www.plenish.com/ [7]:Buhr, T et al Ribozyme termination of RNA transcripts down-regulate seed fatty acid genes in transgenic soybean The Plant Journal 30, 155-163 (2002) [8]:Katsumoto, Y et al Engineering of the Rose Flavonoid Biosynthetic Pathway Successfully Generated Blue-Hued Flowers Delphinidin Plant and Cell Physiology 48, 1589-1600 (2007) 18 Accumulating [9]:Awale, M.M et al Transgenic Plant Vaccine: A Breakthrough in Immunopharmacotherapeutics Vaccines and Vaccination 3, (2012) [10]: McElroy, D Sustaining Agrobiotechnology Through Lean Times Nature Biotechnology 21, 996-1002 (2003) 19