(Luận văn) nghiên cứu chuyển gen echb1 làm tăng chiều dài sợi gỗ vào bạch đàn lai up (eucalyptus urophylla x e pellita) thông qua vi khuẩn agrobacterium tumefaciens

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - lu Nguyễn Thị Việt Hà an n va p ie gh tn to NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN EcHB1 LÀM TĂNG CHIỀU DÀI SỢI GỖ VÀO BẠCH ĐÀN LAI UP (Eucalyptus urophylla x E pellita) THÔNG QUA VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens d oa nl w va an lu ll u nf LUẬN VĂN THẠC SĨ: SINH HỌC oi m z at nh z m co l gm @ Hà Nội - 2021 an Lu n va ac th si BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thị Việt Hà lu an n va p ie gh tn to NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN EcHB1 LÀM TĂNG CHIỀU DÀI SỢI GỖ VÀO BẠCH ĐÀN LAI UP (Eucalyptus urophylla x E pellita) THÔNG QUA VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens nl w d oa Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm u nf va an lu Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ll oi m z at nh NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: Hƣớng dẫn 1: TS Trần Hồ Quang z an Lu Hà Nội - 2021 m co l gm @ Hƣớng dẫn 2: TS Lê Sơn n va ac th si Lời cam đoan Tôi xin cam đoan nội dung luận văn kết nghiên cứu thân dƣới hƣớng dẫn TS Trần Hồ Quang TS Lê Sơn Mọi kết nghiên cứu nhƣ ý tƣởng tác giả khác (nếu có) đƣợc trích dẫn cụ thể Đề tài luận văn chƣa đƣợc bảo vệ hội đồng bảo vệ luận văn thạc sĩ nhƣ chƣa đƣợc công bố phƣơng tiện Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan Hà Nội, ngày tháng năm 2021 lu Ngƣời cam đoan an n va tn to p ie gh Nguyễn Thị Việt Hà d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Lời cảm ơn Tôi xin cảm ơn Học viện Khoa học Cơng nghệ, phịng Đào tạo, thầy giáo, giáo Học Viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam nhiệt tình giảng dạy, tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi q trình học tập trƣờng Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, toàn thể cán Bộ môn Sinh học phân tử - Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ sinh học Lâm nghiệp - Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam lu an n va ie gh tn to Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới thầy hƣớng dẫn, TS Trần Hồ Quang (Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam) TS Lê Sơn (Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ sinh học Lâm nghiệp - Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam) tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ tơi suốt trình thực luận văn p Luận văn đƣợc sử dụng phần số liệu kết từ đề tài cấp Nhà nƣớc “Nghiên cứu tạo giống bạch đàn lai biến đổi gen cho chiều dài sợi gỗ (giai đoạn 2)” ThS Trần Đức Vƣợng làm chủ nhiệm, thuộc Chƣơng trình trọng điểm phát triển ứng dụng Công nghệ sinh học Nông nghiệp Phát triển nông thôn đến 2020 mà Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ Sinh học Lâm nghiệp đơn vị thực Xin chân thành cám ơn d oa nl w u nf va an lu ll Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc gửi tới gia đình bạn bè giúp đỡ, động viên khích lệ tơi suốt thời gian học tập thực đề tài oi m z at nh z gm @ Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Học viên m co l an Lu Nguyễn Thị Việt Hà n va ac th si Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Từ viết tắt STT Viết đầy đủ AS BAP CNSH ĐC ĐHST Điều hòa sinh trƣởng ADN Acid Deoxyribonucleic IBA Indole-3-Butyric Acid IFTIB lu Acetosyringone 6-Benzyl Amino Purine Công nghệ sinh học Đối chứng an n va p ie gh tn to Institute of Forest Tree Improvement and Biotechnology Km Kanamycin LB Môi trƣờng nuôi cấy Luria and Betani d oa an lu 10 nl w Môi trƣờng nuôi cấy Murashige & Skoog MS 12 NAA 13 OD Mật độ quang học (Optical Density) 14 PCR Phản ứng trùng hợp chuỗi (Polymerase Chain Reaction) u nf va 11 ll 1-Naphthyl Acetic Acid oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Danh mục bảng Bảng 1.1 Các loài bạch đàn đƣợc nghiên cứu chuyển gen thông qua vi khuẩn A tumefaciens 27 Bảng 2.1 Các cặp mồi sử dụng nghiên cứu 40 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 40 Bảng 2.3 Chu trình phản ứng PCR 40 Bảng 3.1 Ảnh hƣởng ngƣỡng nồng độ chất chọn lọc Kanamycin 42 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng ngƣỡng nồng độ Kanamycin đến khả rễ 44 lu Bảng 3.3 Ảnh hƣởng tuổi vật liệu đến mẫu tạo mô sẹo 45 an n va Bảng 3.4 Ảnh hƣởng thời gian tiền nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 47 gh tn to Bảng 3.5 Ảnh hƣởng mật độ vi khuẩn đến tỷ lệ chồi tái sinh 49 p ie Bảng 3.6 Ảnh hƣởng thời gian nhiễm khuẩn đến tỷ lệ tạo mô sẹo 50 oa nl w Bảng 3.7 Ảnh hƣởng thời gian đồng nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 52 d Bảng 3.8 Khả sống sót chồi chuyển gen sau lần chọn lọc 56 lu u nf va an Bảng 3.9 Kết kiểm tra khả rễ chồi chuyển gen sau lần chọn lọc 59 ll Bảng 3.10 So sánh hình thái thân chuyển gen với đối chứng 60 m oi Bảng 3.11 So sánh hình thái chuyển gen đối chứng 61 z at nh z Bảng 3.12 Đánh giá sinh trƣởng chiều cao vƣờn ƣơm sau 1, tháng 63 @ gm Bảng 3.13 Tổng hợp kết đo kích thƣớc giai đoạn tháng tuổi 64 m co l Bảng 3.14 Tổng hợp kết đo kích thƣớc giai đoạn tháng tuổi 65 an Lu n va ac th si Danh mục hình vẽ, đồ thị Hình 1.1 Tỷ lệ trồng biến đổi gen/tổng diện tích loại nƣớc trồng biến đổi gen lớn giới Hình 1.2 Tổng giá trị (USD) thu đƣợc từ trồng biến đổi gen tồn cầu Hình 1.3 Bạch đàn lai UP trồng khảo nghiệm Yên Bình – Yên Bái 21 Hình 1.4 Cây Bạch đàn lai UP phƣơng pháp nhân giống in vitro 23 Hình 2.1 Vật liệu Bạch đàn lai UP sử dụng chuyển gen 31 Hình 2.2 Cấu trúc vector pGWB2/35S/EcHB1 32 lu Hình 2.3 Sơ đồ quy trình tái sinh thơng qua phơi soma cho Bạch đàn lai UP 34 an n va tn to Hình 2.4 Vị trí đƣợc chọn để đánh giá hình thái 38 p ie gh Hình 3.1 Ảnh hƣởng ngƣỡng nồng độ chất chọn lọc Km đến chồi chƣa chuyển gen 43 w Hình 3.2 Bạch đàn lai UP 15 ngày tuổi tạo mô sẹo môi trƣờng chọn lọc 45 oa nl Hình 3.3 Mẫu bật chồi sau chuyển gen tiền nuôi cấy 48 48 d Hình 3.4 Mẫu nhiễm khuẩn với thời gian lần lƣợt sau 10 phút, 15 phút, 20 phút 51 va an lu u nf Hình 3.5 Sơ đồ quy trình chuyển gen EcHB1 vào Bạch đàn lai UP 54 ll Hình 3.6 Mẫu chuyển gen tái sinh môi trƣờng chọn lọc 55 oi m z at nh Hình 3.7 Bình nhân chồi dòng Bạch đàn lai UP chuyển gen EcHB1 55 Hình 3.8 Chồi chuyển gen EcHB1 mơi trƣờng chọn lọc 58 z Hình 3.9 Hình thái thân dịng bạch đàn chuyển gen đối chứng 62 gm @ m co l Hình 3.10 Cây bạch đàn chuyển gen đối chứng giai đoạn tháng tuổi 63 an Lu Hình 3.11 Hình thái kích thƣớc chuyển gen đối chứng giai đoạn tháng tuổi 64 n va ac th si Hình 3.12 Hình thái kích thƣớc chuyển gen đối chứng giai đoạn tháng tuổi 66 Hình 3.13 Bạch đàn chuyển gen rễ môi trƣờng chọn lọc vƣờn ƣơm 67 Hình 3.14 Cây chuyển gen EcHB1 trồng vƣờn ƣơm 67 Hình 3.15 Kết chạy điện di kiểm tra ADN số dòng Bạch đàn lai UP 68 Hình 3.16 Kết PCR 40 dịng bạch đàn chuyển gen EcHB1 69 Hình 3.17 Kết kiểm tra có mặt gen EcHB1 PCR 70 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỤC LỤC MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU 1.1.1 Hiện trạng vai trò trồng biến đổi gen 1.1.1.1 Hiện trạng trồng biến đổi gen 1.1.1.2 Vai trò trồng biến đổi gen lu an 1.1.1.3 Tình hình trồng biến đổi gen nước ta va Các phƣơng pháp chuyển gen 11 1.1.2 n tn to 1.1.2.1 Chuyển gen trực tiếp 11 ie gh 1.1.2.2 Chuyển gen gián tiếp 12 p 1.1.3 Tình hình nghiên cứu chuyển gen lâm nghiệp 13 oa nl w 1.1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 13 d 1.1.3.2 Các nghiên cứu nước 15 lu va an 1.2 TỔNG QUAN VỀ CÂY BẠCH ĐÀN LAI UP 17 u nf 1.2.1 Tổng quan bạch đàn Bạch đàn lai UP 17 ll 1.2.1.1 Tổng quan bạch đàn 17 m oi 1.2.1.2 Nghiên cứu phát triển giống Bạch đàn lai UP Việt Nam 20 z at nh z 1.2.3 Các hƣớng cải thiện giống bạch đàn ứng dụng Công nghệ sinh học 22 @ gm 1.2.3.1 Nhân giống vơ tính in vitro bạch đàn 22 m co l 1.2.3.2 Tái sinh in vitro thơng qua hình thành callus phôi soma 24 an Lu 1.2.3.3 Nghiên cứu phát triển sử dụng thị phân tử chọn tạo lai giống 25 n va ac th si 1.2.3.4 Chuyển gen cho loài bạch đàn 26 1.2.4 Gen EcHB1 ứng dụng cải thiện chiều dài sợi gỗ 28 1.2.4.1 Vai trò nhân tố phiên mã sinh trưởng thực vật 28 1.2.4.2 Nhân tố phiên mã gen EcHB1 30 CHƢƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 31 2.1.1 Vật liệu thực vật 31 lu 2.1.2 Vật liệu di truyền chủng vi khuẩn 31 an n va 2.1.3 Trang thiết bị hóa chất 32 tn to 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 gh 2.2.1 Nghiên cứu tái sinh in vitro dòng Bạch đàn UP 33 p ie 2.2.2 Xác định ngƣỡng nồng độ chất chọn lọc Kanamycin 35 nl w 2.2.3 Xác định tuổi vật liệu đến tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 35 d oa 2.2.4 Xác định thời gian tiền nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 36 an lu 2.2.5 Xác định mật độ tế bào vi khuẩn A tumefaciens 36 ll u nf va 2.2.6 Xác định thời gian nhiễm khuẩn đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 36 oi m 2.2.7 Xác định thời gian đồng nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 37 z at nh z 2.2.8 Tái sinh từ mẫu biến nạp gen, nhân dòng biến nạp gen, rễ trồng chăm sóc bên vƣờn ƣơm 37 @ l gm 2.2.9 Phƣơng pháp đánh giá hình thái chuyển gen 37 m co 2.2.10 Phƣơng pháp tách chiết ADN tổng số 38 2.2.11 Xác định có có mặt gen chuyển gen PCR 39 an Lu 2.2.12 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm xử lý số liệu 41 n va ac th si Bảng Thành phần môi trƣờng nuôi cấy vi khuẩn LB (Bertani, 1951) Môi trƣờng Thành phần Hàm lƣợng (g/l) Môi trƣờng LB lỏng Tryptone 10 Yeast Extract NaCl 10 Tryptone 10 Yeast Extract NaCl 10 Agar Môi trƣờng LB đặc lu an va Dịch lỏng tạo dịch Mơi trƣờng ½ MS n huyền phù vi khuẩn p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Bảng Thành phần môi trƣờng nuôi cấy Thành phần Loại môi trƣờng Tạo chồi in vitro MS + 30g/l sucrose + 7g/l Agar MS + 30g/l sucrose + 15mg/l Riboflavin Nhân nhanh & tạo đa chồi + 0,5mg/l BAP + 0,2mg/l NAA+ 6,5g/l Agar MS* + 20g/l Sucrose + 100ml Nƣớc dừa + 3mg/l Tạo vật liệu nhận gen BAP + 0,5mg/l NAA +100 µM AS + 2,4g/l Gelrite lu an 10g/l Tryptone + 5g/l Yeast Extract + 10g/l NaCl n va Nuôi cấy vi khuẩn A + 7g/l Bactor Agar + 50 mg/l Kanamycin + 50 mg/l Rifamycin tn to tumefaciens tạo khuẩn lạc 10g/l Tryptone + 5g/l Yeast Extract + 10g/l NaCl + 50 mg/l Kanamycin + 50 mg/l Rifamycin MS* + 20g/l Sucrose + 0,5 mg/l BAP + 0,2 mg/l khuẩn w p ie gh Tạo dịch huyền phù vi oa nl Đồng nuôi cấy NAA + 100 µM AS + 2,4g/l Gelrite d lu MS* + 20g/l Sucrose + 0,5 mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA + 400 mg/l Cefotaxim + 2,4g/l Gelrite u nf va an Diệt khuẩn tái sinh chồi NAA + 15 mg/l Riboflavin + 400 mg/l Cefotaxim oi + 150 mg/l Kanamycin + 2,4g/l Gelrite z at nh ½ MS + 15 g/l Sucrose + mg/l IBA + mg/l z Ra rễ chọn lọc m sinh chồi MS* + 20g/l Sucrose + 0,5 mg/l BAP + 0,2 mg/l ll Tái sinh chọn lọc phát m co l gm @ NAA + g/l Agar + 50 mg/l Kanamycin an Lu n va ac th si Bảng Danh mục trang thiết bị cần thiết TT Máy móc, trang thiết bị, vật tƣ TT Máy móc, trang thiết bị, vật tƣ Máy lọc nƣớc 17 Đèn tia cực tím treo tƣờng Máy sản xuất nƣớc cất lần 18 Máy điều hòa nhiệt độ Nồi hấp vô trùng 19 Máy hút ẩm Tủ sấy vô trùng 20 Máy lắc gia nhiệt Cân phân tích 21 Quạt thơng gió gắn tƣờng Bình tam giác 250 ml, 350 ml lu an Cân kỹ thuật 500 ml; bình trụ thủy tinh rễ; 22 n va đĩa petri vô trùng Máy khuấy từ gia nhiệt Tủ đựng hóa chất dự trữ bảo quản 23 tn to Máy đo pH để bàn đong, ống đong, bình định mức, 24 pipet, bình chứa, thìa đong, ống nl w p ie gh Bếp gas, nồi đun, loại cốc oa hút, … d Tủ lạnh sâu -80 oC, Tủ lạnh sâu - lu 20 oC; Tủ mát oC, Tủ ổn nhiệt Máy nghiền mẫu 26 Máy đo nồng độ quang phổ u nf có gắn máy lắc 25 va an ll 10 Tủ an toàn sinh học cấp oi m Bộ panh, kéo, dao cấy, que cấy khuẩn, đèn cồn Bộ chạy điện di 28 Máy ảnh z 12 Ghế ngồi + Xe đẩy 27 z at nh 11 13 Giàn ni phịng ni 29 @ 14 Giá xếp mơi trƣờng 30 Tủ hút khí độc 15 Giá úp chai lọ 31 Máy bơm, hệ thống tƣới, che sáng 16 Thiết bị kiểm tra nhiệt độ, độ ẩm 32 Các loại vật tƣ mau hỏng khác m co l gm Máy ly tâm an Lu n va ac th si PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU Ảnh hƣởng nồng độ chất chọn lọc Kanamycin Trong chọn lọc chồi Sau tuần: Anova: Single Factor (Số mẫu sống sau tuần) lu SUMMARY Groups Count 10 50 75 100 150 an n va Average 250 244.4 216.8 180.6 133.4 45.8 Variance 5.3 17.2 60.3 38.8 14.2 df MS F 30569.66 24 22.63333333 tn to Sum 1250 1222 1084 903 667 229 p ie gh ANOVA Source of Variation SS Between Groups 152848.3 Within Groups 543.2 d oa nl w P-value F crit 1.40366E1350.647717 28 2.620654148 153391.5 29 ll u nf va an lu Total oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Sau tuần Anova: Single Factor (Số mẫu sống sau tuần) lu an n va gh tn to SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 1250 250 10 1084 216.8 29.7 50 806 161.2 72.7 75 348 69.6 127.3 100 209 41.8 15.7 150 0 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between 3.68069EGroups 254801.77 50960.35333 1245.974409 28 2.620654148 Within Groups 981.6 24 40.9 Total 255783.37 29 ie p Sau tuần oa nl w Anova: Single Factor (Số mẫu sống sau tuần d SUMMARY Groups Count 10 50 75 100 150 ll Average 250 189 111 33.2 22.2 Variance 87.5 37.5 3.7 7.7 oi m z at nh z 51052.22 545.6 24 22.73333333 255806.7 29 P-value 3.2045E2245.698827 31 F crit 2.620654148 an Lu 255261.1 F m co MS l df gm SS @ Total u nf ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups va an lu Sum 1250 945 555 166 111 n va ac th si Trong chọn lọc rễ Anova: Single Factor (Số chồi rễ sau tuần) SUMMARY Groups 10 50 75 Count 5 5 lu an n va Sum 141 0 Average 28.2 0 Variance 14.7 0 df MS F 994.05 270.4897959 16 3.675 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 2982.15 Within Groups 58.8 P-value 6.46736E14 F crit 3.238871517 tn to Total 3040.95 19 ie gh p Anova: Single Factor (Số chồi rễ sau tuần) d Sum 876 0 Average 175.2 0 Variance 41.7 0 ll u nf va an lu df MS F 115106.4 38368.8 3680.460432 166.8 16 10.425 115273.2 19 z at nh SS oi m P-value F crit 6.41224E23 3.238871517 z m co l gm @ Total Count 5 5 oa ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups nl w SUMMARY Groups 10 50 75 an Lu n va ac th si Anova: Single Factor (Số chồi rễ sau tuần) SUMMARY Groups 10 50 75 Count 5 5 Sum 1191 0 Average 238.2 0 Variance 31.7 0 SS df MS F 212772.15 126.8 16 212898.95 19 ANOVA lu an n va ie gh tn to Source of Variation Between Groups Within Groups p Total 70924.05 8949.40694 P-value F crit 5.28E-26 3.238872 7.925 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Ảnh hƣởng tuổi vật liệu đến khả biến nạp gen Đoạn thân Anova: Single Factor SUMMARY Groups 10 ngày 15 ngày 20 ngày 25 ngày lu an n va Total Sum 230 336 286 202 Average 46 67.2 57.2 40.4 Variance 34 51.2 99.2 6.8 SS df MS F 2133.4 764.8 16 2898.2 19 Average 39.2 62.4 52 37.6 Variance 9.2 20.8 34 4.8 P-value F crit 6.87E711.1333 14.87727 05 9.005937 47.8 p ie gh tn to ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Count 5 5 w Mảnh u nf va an Sum 196 312 260 188 ll Count 5 5 lu SUMMARY Groups 10 ngày 15 ngày 20 ngày 25 ngày d oa nl Anova: Single Factor oi m 2319.2 19 39.6124 m co Total 681.3333 17.2 P-value F crit 1.24E07 9.005937 l 16 F gm 2044 275.2 MS @ df z SS z at nh ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups an Lu n va ac th si Ảnh hƣởng thời gian tiền nuôi cấy Đoạn thân Anova: Single Factor SUMMARY Groups 24 48 72 lu an n va Total Sum 207.3 263.3 323.3 223.3 Average 41.46 52.66 64.66 44.66 Variance 9.503 63.268 48.023 25.578 SS df MS F 1602.4 585.488 16 534.1333 36.593 14.5966 2187.888 19 P-value F crit 7.66E05 9.005937 p ie gh tn to ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Count 5 5 nl w Mảnh d oa Anova: Single Factor u nf Sum 183.3 233.3 293.3 186.6 ll Average 36.66 46.66 58.66 37.32 Variance 27.723 16.668 19.868 18.912 oi m Count 5 5 va z at nh MS 529.6112 332.684 16 20.79275 1921.518 19 P-value F crit @ gm 25.47095 2.48E-06 9.005937 an Lu 1588.834 F m co df l SS z Total an ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups lu SUMMARY Groups 24 48 72 n va ac th si Xác định mật độ tế bào vi khuẩn A tumefaciens Anova: Single Factor SUMMARY Groups 0,1 0,3 0,5 0,7 lu an n va gh tn to ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Sum 50 66 101 50 Average 10 13.2 20.2 10 Variance 2.5 0.7 1.7 SS df MS F P-value F crit 346.95 115.65 42.44036697 7.64E-08 3.238872 43.6 16 2.725 390.55 19 p ie Total Count 5 5 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Ảnh hƣởng thời gian nhiễm khuẩn Đoạn thân Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) SUMMARY Groups Count 10 15 20 lu an n va SS df MS F P-value F crit 32333.33 8083.333 577.381 8.9E-12 3.47805 140 10 14 32473.33 14 p ie gh tn to ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Sum Average Variance 0 250 83.33333 25.33333 400 133.3333 20.33333 350 116.6667 20.33333 300 100 oa nl Mảnh w Total d Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) an u nf Sum Average Variance 0 210 70 43 420 140 73 290 96.66667 32.33333 260 86.66667 49.33333 ll oi m z at nh Count 3 3 va z 7810 395.3333 10 39.53333 31635.33 14 P-value F crit 197.5548 1.81E-09 3.47805 an Lu 31240 F m co MS l df gm SS @ Total lu SUMMARY Groups 10 15 20 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups n va ac th si Ảnh hƣởng thời gian đồng nuôi cấy Đoạn thân Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 24 213 71 48 415 138.3333 24.33333 72 437 145.6667 20.33333 96 411 137 28 120 303 101 16 ANOVA lu an n va SS df 12108.27 183.3333 10 18.33333 12291.6 14 p ie gh tn to Source of Variation Between Groups Within Groups Pval MS F ue F crit 4.37E3027.067 165.1127 09 3.47805 Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) lu u nf va Sum 228 427 446 417 306 ll Average 76 142.3333 148.6667 139 102 Variance 16.33333 26.33333 21 oi m Count 3 3 an SUMMARY Groups 24 48 72 96 120 d oa nl Mảnh w Total z at nh ANOVA z 2946.567 147.3333 11933.6 10 14 14.73333 199.9932 Pval ue 1.7E09 F crit 3.47805 an Lu 11786.27 F m co MS l df gm SS @ Source of Variation Between Groups Within Groups Total n va ac th si Hình thái thân giai đoạn in vitro Số lóng trung bình Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Row Row Row 3 Row lu an Sum 10.13 11.13 9.7 10.94 Average 3.376667 3.71 3.233333 3.646667 Variance 0.004633 0.0012 0.004233 0.004633 MS F n va SS df 0.454967 0.0294 Total 0.484367 11 P-value F crit 3.26E0.151656 41.26682 05 4.066181 0.003675 ie gh tn to ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups p Chiều dài lóng trung bình w oa nl Anova: Single Factor d SUMMARY an lu Varianc e 0.0039 0.0028 0.0052 Count 3 Row 3.1 ANOVA Source of Variation Between Groups SS df 0.0971 0.06326 0.16036 Sum 2.67 3.18 2.55 ll u nf va Groups Row Row Row 0.019733 z at nh z 4.092729 P-value 0.04926 F crit 4.06618 m co l an Lu 11 F gm MS 0.03236 0.00790 @ Total oi m Within Groups Average 0.89 1.06 0.85 1.03333 n va ac th si Chiều cao chồi Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Row Row Row 3 Row lu ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups an n va Average 2.843333 3.183333 2.92 3.116667 Variance 0.000933 0.002633 0.0063 0.001033 SS df MS F 0.231492 0.077164 28.31702 0.0218 0.002725 0.253292 11 P-value F crit 0.00013 4.066181 p ie gh tn to Total Sum 8.53 9.55 8.76 9.35 nl w Chiều dài trung bình d oa Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Row Row Row 3 Row ANOVA Source of SS Variation Between 31.634625 Groups Within 1.3948 Groups Total 33.029425 ll u nf va an lu Sum Average Variance 15.86 5.286666667 0.487033333 23.57 7.856666667 0.046433333 20.54 6.846666667 0.021033333 29.28 9.76 0.1429 oi m df z at nh 10.544875 0.17435 MS F P-value z 7.6927E4.066181 06 60.48107256 m co l gm @ 11 F crit an Lu n va ac th si Chiều rộng Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Row Row Row 3 Row lu an n va tn to ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups gh Total Sum Average Variance 9.53 3.176666667 0.003033333 11.59 3.863333333 0.009633333 13.49 4.496666667 0.007233333 14.64 4.88 0.0487 SS df 5.022691667 0.1372 5.159891667 11 MS F P-value F crit 1.21698E4.066181 06 1.674230556 97.62277292 0.01715 p ie Chỉ số d va an Sum Average Variance 1.82 0.606666667 0.006533333 1.48 0.493333333 0.000233333 1.97 0.656666667 0.000433333 1.5 0.5 0.0013 ll u nf oi m Count 3 3 lu SUMMARY Groups Row Row Row Row oa nl w Anova: Single Factor df 0.058491667 0.017 0.075491667 11 MS F P-value F crit 0.00572875 4.066181 z @ 0.019497222 9.175163399 m co l 0.002125 gm an Lu Total SS z at nh ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups n va ac th si