(Luận văn) nghiên cứu chuyển gen tăng chiều dài sợi gỗ (echb1) vào bạch đàn lai phục vụ công nghiệp chế biến

VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI & TÀI NGUYÊN SINH VẬT lu ĐỖ THỊ THỤC an n va NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN TĂNG CHIỀU DÀI SỢI GỖ tn to (EcHB1)VÀO BACHJ ĐÀN LAI PHỤC VỤ CÔNG NGHIỆP CHẾ p ie gh BIẾN GIẤY nl w Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm d oa Mã số: 60420114 va an lu oi lm ul nf TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC z at nh z MỞ ĐẦU http://www.lrc.tnu.edu.vn n va an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN m co l gm @ Hà Nội, 2014 ac th si Các loài Bạch đàn nhập vào Việt Nam từ năm 1930 đến trở thành nhóm trồng chủ lực chương trình trồng rừng tập trung phân tán nước ta Đến năm 2011, tổng diện tích rừng trồng Bạch đàn Việt Nam 353,000 ha, chiếm 32% diện tích rừng trồng nước (Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn, 2011) Bạch đàn lồi sinh trưởng nhanh, thích nghi tốt Tại Việt Nam, Bạch đàn trồng tỉnh thuộc vùng Tây Bắc, Đông Bắc, vùng trung tâm, đồng sông Hồng, Bắc Trung Bộ Tây Nguyên Gỗ Bạch đàn dùng làm nguyên liệu giấy (hiệu suất bột giấy 49.5%), ván dăm, ván sợi ép, trụ mỏ, gỗ lớn dùng xây lu an dựng, đóng đồ mộc; gỗ nhỏ dùng làm gỗ củi Tỷ trọng gỗ năm tuổi 488 kg m3 (Luo n va Jianzhong , 2003), chiều dài sợi gỗ 982,4 mm (cho phần gỗ mềm) 110,46 mm (cho tn to phần gỗ cứng) (Bai Jyayu cs , 2003) [15] ie gh Gỗ Bạch đàn coi nguồn cung cấp ngun liệu cho ngành cơng nghiệp p sản xuất giấy gỗ Bạch đàn có thành phần hóa học cấu tạo sợi thích hợp cho sản w xuất bột giấy Mỗi năm giới có hàng triệu bột giấy sản xuất từ gỗ Bạch oa nl đàn Bên cạch đó, gỗ Bạch đàn sử dụng làm đồ mộc, sản phẩm thủ công mỹ d nghệ, sản xuất ván dăm, ván sợi xuất khẩu, gỗ xây dựng, cột chống,… Ngoài ra, lu va an số loài Bạch đàn sử dụng để tách chiết tinh dầu, tanin chế biến dược phẩm nf Bạch đàn lai đánh giá có ưu lai sinh trưởng tốt bố mẹ chúng oi lm ul (Lê Đình Khả cs, 1993) [6] Cho đến nay, nhiều tổ hợp Bạch đàn lai có sinh trưởng vượt trội bố mẹ công nhận giống tiến khoa học kỹ thuật khuyến z at nh khích gây trồng rộng rãi z Dân số giới đạt đến số kỷ lục tỷ người dự đốn tăng lên gm @ tỷ người vào năm 2025 10 tỷ người vào năm 2050 Do vấn đề cung cấp l lương thực nguyên vật liệu khác cho nhu cầu sinh hoạt người m co thập niên tới thách thức lớn toàn nhân loại Các phương pháp chọn giống truyền thống khó đáp ứng nhu cầu cung cấp thực phẩm cho http://www.lrc.tnu.edu.vn n va an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si người tương lai Để đáp ứng nhu cầu đó, thập kỷ vừa qua, công nghệ sinh học đem lại thành to lớn, đặc biệt công nghệ biến đổi gen đem lại bước nhảy vọt việc tăng suất chất lượng trồng tạo giống suất cao, chống bệnh sâu hại, chống chịu khí hậu lạnh, khơ hạn thiếu nguồn dinh dưỡng, kháng thuốc trừ cỏ…mà cải thiện môi trường giảm hàm lượng thuốc bảo vệ thực vật, giảm lượng phân bón… Trong lĩnh vực Lâm nghiệp, biến đổi gen quan tâm nghiên cứu Trong năm gần số kết nghiên cứu chuyển gen cho số lồi lu an rừng Bạch dương, Thơng radiata, Liễu Bạch đàn tiến hành thử nghiệm n va thành công số nước Hoa Kỳ, Nhật Bản, Brasil, Chi Lê Trung Quốc Mục tn to đích cho nghiên cứu chuyển gen lâm nghiệp chuyển số gen liên gh quan đến tăng sinh khối, chống chịu sâu bệnh điều kiện khô hạn, giảm hàm lượng p ie lignin, tăng hàm lượng độ dài sợi cellulose, mang lại lợi ích to lớn cho ngành cơng oa nl dưỡng… w nghiệp giấy cải tạo mơi trường vùng đất suy thối thiếu chất dinh d Chuyển gen gián tiếp thông qua vi khuẩn A tumefaciens sử dụng rộng rãi lu an cả, phương pháp dễ sử dụng, tốn lại mang lại hiệu cao (lượng nf va gen biến nạp tạo thuận lợi cho việc phân tích chuyển gen khơng gây tổn oi lm ul thương tế bào) Hầu hết nghiên cứu chuyển gen vào lâm nghiệp công bố sử dụng vector trung gian vi khuẩn A tumefaciens (Chen cs, 2001; Han cs, 2000; z at nh Vengadesan cs, 2006;…) [17] Ở rừng, số tính trạng có giá trị kinh tế tính chất gỗ (hàm lượng z @ cellulose, hàm lượng lignin, chiều dài sợi gỗ ) khả rễ nhiều gen l gm (polygene) quy định Những gen tùy giai đoạn phát triển mà có ảnh hưởng định, nhiên, có gen (major genes) có ảnh hưởng lớn m co đến biểu tính trạng http://www.lrc.tnu.edu.vn n va an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Đối với tính trạng chiều dài sợi gỗ, nhà khoa học xác định số gen có ảnh hưởng đến tính trạng này, có gen EcHB1 (accession number: AB458829) Gen EcHB1 xác định mã hóa cho nhân tố phiên mã HD-Zip class II Bạch đàn trắng (E camaldulensis) thường biểu thân trưởng thành tế bào rễ Các nghiên cứu cho thấy gen EcHB1 sau biến nạp vào Thuốc cho chiều dài sợi gỗ dài 1,2 lần so với đối chứng Xuất phát từ sở thực đề tài “Nghiên cứu chuyển gen tăng chiều dài sợi gỗ (EcHB1) vào Bạch đàn lai phục vụ công nghiệp chế biến giấy” lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ http://www.lrc.tnu.edu.vn n va an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀ I LIỆU 1.1 Tổng quan Bạch đàn nói chung Bạch đàn lai nói riêng Bạch đàn (Ecucalyptus) chi thực vật thuộc họ Sim (Myrtaceae), Sim (Myrtaces), phân lớp Hoa hồng (Rosidae), lớp Hai mầm (Dycotyledone) Tên Bạch đàn Ecucalyptus lần nhà thực vật học người Pháp Charles Louis L’Heritier de Brutell đặt cho vào năm 1788 Từ đến có tới 600 lồi biến chủng lu mô tả đặt tên, gần 500 lồi chấp nhận thức Theo Boland an Symphyomyrtus có nhiều lồi sử dụng trồng rừng đại trà như: E camaldulensis, n va cs (1987), Eldridge cs (1993) chi Bạch đàn chia làm chi phụ Trong đó, chi phụ to tn E urophylla, E tereticornis, E grandis… Bạch đàn có xuất xứ từ Australia có p ie gh loài phân bố Australia loài E deglupta Blume E urophylla S.T Blake Bạch đàn bao gồm nhiều loài khác trồng rừng phổ biến giới nl w Ước tính có 10 triệu Bạch đàn trồng châu Á, Nam Mỹ, Nam Âu, Úc d oa New Zealand Bạch đàn urô (Eucalyptus urophyllaST Blake) Bạch đàn grandis (E an lu grandis) thuộc chi phụ Symphyomyrtus, họ Sim (Myrtaceae), loài gỗ lớn, nf va mọc nhanh, trồng nhiều nước nhiệt đới có nhiệt độ trung bình từ 24 – 280C oi lm ul Bạch đàn thân gỗ lâu năm, mọc nhanh, trồng 5-6 năm tuổi thường có chiều cao 7m đường kính thân khoảng 9- 10cm Cây Bạch đàn có chế tự bảo z at nh vệ nhờ quan mặt đất gọi “củ gỗ” chế phát triển nhanh nhờ chồi bất định búp phụ, có khẳ thích nghi cao với nhiều loại lập địa khí hậu z lại cho suất tương đối cao (18-20m3/ha/năm) @ gm Trên giới Bạch đàn trồng rừng sản xuất với diện tích ngày m co l mở rộng Theo số liệu công bố năm 2009, rừng trồng Bạch đàn năm 2009 đạt khoảng 19,5 triệu châu lục lớn Châu Phi, Châu Mỹ Châu Á-Thái Bình http://www.lrc.tnu.edu.vn n va an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Dương, Ấn Độ nước có diện tích rừng trồng Bạch đàn lớn giới, năm 2009 ước tính có khoảng 3,9 triệu (Nguồn www.git-forestry.com) Ở Việt Nam, Bạch đàn người Pháp đưa vào gây trồng từ trước năm 1945, song việc gây trồng Bạch đàn quy mô lớn năm 1960 (Bùi Thị Huế) Trong thời gian ngắn, Bạch đàn phát triển mạnh mẽ trở thành số loài lâm nghiệp trồng rừng quan trọng nước ta Bạch đàn nhóm trồng rộng rãi nước ta, đặc biệt tỉnh miền lu Trung miền Nam Đây trồng chủ yếu đường nông thôn, bờ an vùng, bờ đồng Bắc Bộ đồng sông Cửu Long Kết nghiên cứu n va gây trồng nhiều năm qua cho thấy nhiều loài Bạch đàn nhập vào nước ta số tn to loài sinh trưởng nhanh có khả thích ứng lớn Trong đó, đáng ý loài ie gh Bạch đàn urô (E urophylla), Bạch đàn tere (E tereticornis) Bạch đàn trắng (E p camaldulensis), Bạch đàn liễu (E exserta) Ở nơi thấp Bạch đàn urô (E w urophylla) mọc lẫn với Bạch đàn trắng (E alba) (Martin and Cossalater, 1975 - oa nl 1976) Bạch đàn urơ thích hợp với lập địa có vùng đất sâu ẩm tỉnh miền d Bắc, Bắc Trung Bộ Tây Nguyên Các xuất xứ có triển vọng cho vùng trung tâm lu an miền Bắc Lewotobi Egor Flores (Lê Đình Khả, 1996) Egor Flores nf va xuất xứ có triển vọng Mang Linh Hang Hanh vùng Đà Lạt (Lê oi lm ul Đình Khả, 1996; Phạm Văn Tuấn cs, 2000) [7][14] Bạch đàn urơ lồi Bạch đàn trồng chủ yếu Việt z at nh Nam (Nguyễn Đức Kiên, 2009) Tác giả tính trạng sinh trưởng chất lượng gỗ ảnh hưởng lớn đến hiệu xuất bột giấy cho ngành công nghiệp Các nghiên cứu z @ đánh giá sinh trưởng Bạch đàn urô Việt Nam cho thấy tỷ lệ sinh trưởng l gm Bạch đàn Việt Nam chậm so với nước khác Trung Quốc, Braxin (Santos, 1990; Wei Borralho, 1998a; Nguyễn Đức Kiên, 2009) Vì vậy, chương m co trình chọn giống Bạch đàn Việt Nam tập trung chủ yếu vào tăng sinh trưởng, nhiên http://www.lrc.tnu.edu.vn n va an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si vùng sinh thái suy thoái, nghèo chất dinh dưỡng, tỷ lệ sinh trưởng Bạch đàn tồn dạng sinh trưởng chậm so với nhiều nước khác Do vậy, định hướng nghiên cứu làm tăng hiệu suất bột giấy tăng khả sinh trưởng Bạch đàn vùng sinh thái suy thoái nghèo chất dinh dưỡng Việt Nam quan tâm nghiên cứu Bạch đàn lai đánh giá có ưu lai sinh trưởng tốt bố mẹ chúng (Lê Đình Khả cs, 1993) [6] Một số giống Bạch đàn lai có suất cao chọn gây trồng thành công số nước Brasil Công Gô Tại đây, lu an lập địa tốt áp dụng kỹ thuật trồng thâm canh đạt suất 40 - 80m3/ha/năm n va Trung Quốc Philippin tạo số giống Bạch đàn lai có suất cao tn to trồng làm nguyên liệu giấy ie gh 1.2.Tình hình trồng sinh trưởng Bạch đàn lai Việt Nam p Bạch đàn nhóm gây trồng rộng rãi nước ta nl w Hiện Bạch đàn coi nguyên liệu giấy chủ yếu vùng trung tâm miền Bắc d oa Các nghiên cứu nước lai giống sử dụng giống lai hướng an lu nhiều nhà chọn giống quan tâm Nghiên cứu giống lai tự nhiên Bạch đàn trắng va (E camaldulensis) với Bạch đàn đỏ (E robusta) cho thấy giống lai có suất cao ul nf nhiều so với giống bố mẹ (Lê Đình Khả, 1970) [5] Từ năm 1994, nghiên cứu oi lm lai nhân tạo cho số loài Bạch đàn tiến hành Trung tâm Nghiên cứu Giống rừng tạo hàng chục tổ hợp lai thuận nghịch loài khác loài z at nh loài Bạch đàn nước ta Bạch đàn urơ (E urophylla), Bạch đàn trắng (E z camaldulensis) Bạch đàn liễu (E exserta) Qua khảo nghiệm chọn 31 trội gm @ tổ hợp lai Bạch đàn có suất cao giống sản xuất tốt 30% l Những giống Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn công nhận giống m co tiến kỹ thuật cho phép triển khai khảo nghiệm vùng sinh thái khác Nghiên cứu lai giống Bạch đàn cho thấy số tổ hợp lai có hiệu suất bột giấy cao http://www.lrc.tnu.edu.vn n va an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si hơn, lúc độ bền giấy tương đương với lồi bố mẹ (Lê Đình Khả Nguyễn Việt Cường, 2001) [4] Ở Việt Nam từ năm 1996 – 2000, Trung tâm Nghiên cứu giống rừng thuộc Viện khoa học Lâm nghiệp Việt Nam tạo gần 80 tổ hợp lai loài lai khác lồi lồi Bạch đàn urơ (Eucalyptus urophylla), Bạch đàn trắng (E camaldulensis) Bạch đàn liễu (E.exserta) Giai đoạn 2001-2010 nghiên cứu lai giống cho loài bạch đàn tạo lu 100 tổ hợp lai đơi, ba cho lồi cho lồi bạch đàn Bạch đàn urô, Bạch đàn tere an (E.tereticornis), Bạch đàn trắng (E camaldulensis) , Bạch đàn grandis (E grandis), Bạch n va đàn saligna (E saligna), Bạch đàn microcorys (E.microcorys), Bạch đàn pellita tn to (E.pellita) Sau năm đất đồi trọc nghèo dinh dưỡng Cẩm Quỳ- Ba Vì- Hà Nội, ie gh suất tổ hợp lai P18U29 đạt 17,3dm3/cây vượt mẹ (P18) 316%, vượt bố p chúng (U29) 363% thể tích, cịn vượt giống lai đối chứng nhập từ Brasin GU8 w 160% Tổ hợp lai U29S6 tích thân đạt 16,62dm3/cây vượt thể tích mẹ oa nl (U29) 349% vượt giống lai đối chứng GU8 153% Tại trường Minh Đức- d Bình Phước sau năm tổ hợp lai T1P17, C18P17, P18U29C3, P18U29 C9G15 đạt thể lu an tích thân tương ứng 26,1; 26,1; 22,8; 21,8 21 dm3/cây vượt giống đối chứng oi lm ul 2006) [13] nf va PN14 tương ứng 383%, 384%, 335%, 321% 309% thể tích (Nguyễn Việt Cường Qua khảo nghiệm chọn 30 dòng bạch đàn lai có sinh trưởng nhanh z at nh giống đối chứng PN2, PN14, U6 GU8 hầu hết điểm khảo nghiệm tích thân vượt giống đối chứng từ 110% đến 300% năm thứ Một nghiên z @ cứu khảo nghiệm giống Bạch đàn lai lâm trường Vạn Xuân cho thấy dòng l gm lai chọn lọc có số dịng sinh trưởng vượt trội so với dòng kiểm chứng U6, GU8, PN2, PN14 đường kính, chiều cao số thể tích thân cây, đặc biệt m co http://www.lrc.tnu.edu.vn n va an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si dòng lai UE24, UE83, UE5 Những dịng có số thể tích 70,4-73,9; dịng GU8 có số thể tích 50,3 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ http://www.lrc.tnu.edu.vn n va an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Trong vài năm gần công ty trồng rừng Innov Green Quảng Ninh tiến hành trồng rừng giống Bạch đàn lai nhập từ Trung Quốc (giống lai Bạch đàn urô x grandis, Bạch đàn urô x tere, với tên gọi Bạch đàn cự vĩ vĩ hệ) với diện tích vài trăm Quảng Ninh Bạch đàn lai có sinh trưởng nhanh Bạch đàn U6 (Bảng 1.1) Bảng 1.1 Sinh trưởng dòng Bạch đàn lai cự vĩ vĩ hệ Quảng Ninh (2007-2009) IG03 IG04 U6 Tên KH UxG GxU UxG UxT Uro (BĐ cự vĩ) (BĐ cự vĩ) (BĐ cự vĩ) (BĐ vĩ hệ) Nơi trồng Xã Quảng Xã Quảng Xã Quảng Xã Quảng Xã Quảng ( 2007 Sơn Huyện Sơn Huyện Sơn Huyện Sơn Huyện Sơn Huyện 2008) Hải Hà- QN Hải Hà- QN Hải Hà- QN Hải Hà- QN Hải Hà- QN 1,2 1,7 3,6 1500 1500 1500 1500 9,3 7,9 9,8 7,7 9,0 12,8 7,6 n va IG02 ie an IG01 tn lu Kí hiệu to gh p nl w 246 d oa D.tích (ha) 12,5 12,1 z at nh (Nguồn: Innov Green Quảng Ninh) [12] oi lm ul Hvn (m) nf 10,4 va D13 (m) an 1500 lu Mật độ z m co l gm @ http://www.lrc.tnu.edu.vn n va 10 an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si - Sử dụng kết tìm cho Bạch đàn lai UU để tạo Bạch đàn chuyển gen mang gen đích có giá trị khác TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TRONG NƯỚC Hà Thị Hiền (2000) Nghiên cứu nhân giống đen (Hopea odorata roxb) phương pháp giâm hom Luận văn thạc sỹ KH Lâm nghiệp,Trường ĐHLN Huỳnh Đức Nhân, (1996) Khảo nghiệm dòng dõi bạch đàn urô (1989- 1994) lu an ''Kết nghiên cứu khoa học công nghệ lâm nghiệp 1991-1995" trang 205-208, Nhà n va xuất nông nghiệp, Hà nội 1996 tn to Lê Đình Khả cộng tác viên, (1995) Nghiên cứu xây dựng sở khoa học gh công nghệ cho việc cung cấp nguồn gốc rừng cải thiện Thông tin khoa học p ie kinh tế lâm nghiệp số – 1995 Lê Đình Khả Nguyễn Việt Cường (2001), Ưu lai sinh trưởng tính w d 41-43 oa nl chống chịu số tổ hợp lai khác lồi Bạch đàn, NXB Nơng nghiệp, Hà Nội, tr lu va an Lê Đình Khả, (1970), "Một dạng Bạch đàn sinh trưởng nhanh miên Bắc ul nf Việt Nam", Tập san lâm nghiệp, (số 3), trang chí lâm nghiệp, số 2, trang 9-10 oi lm Lê Đình Khả, (1993) Trồng bạch đàn nước ta cho có hiệu Tạp z at nh Lê Đình Khả, Phạm văn Tuấn, Đồn Thị Bích, (1996) Nghiên cứu chọn giống z bạch đàn '' Kết nghiên cứu khoa học công nghệ lâm nghiệp 1991-1995" trang 151- @ gm 155, Nhà xuất nông nghiệp, Hà Nội kháng bệnh Việt Nam, NXB Nông nghiệp, Hà Nội http://www.lrc.tnu.edu.vn n va 58 an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN m co l Nguyễn Hoàng Nghĩa (2000), Chọn giống bạch đàn Eucalytus theo sinh trưởng ac th si Nguyễn Quang Hà Trần Xuân Thiệp, (1990) Có nên trồng rừng bạch đàn cơng nghiệp khơng? Tạp chí lâm nghiệp, số 8, Trang 4-6 10 Nguyễn Quang Thạch, (chủ biên), Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phương Thảo (2005) Giáo trình cơng nghệ sinh học nơng nghiệp, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 11 Nguyễn Thị Thanh Nga, Hồ Mạnh Tường, Phạm Thị Vân, Nguyễn Tường Vân, Chu Hoàng Hà, Lê Trần Bình (2012) Nghiên cứu quy trình chuyển gen vào dưa hấu Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 34(3): 389-396 lu 12 Nguyễn Việt Cường (2012) Lai giống Bạch đàn, Tràm, Keo, Thông khảo an n va nghiệm chọn lọc giống lai, NXB Nông nghiệp, Hà Nội to 13 Nguyễn Việt Cường, (2006) “Nghiên cứu lai tạo số dòng bạch đàn, keo,tràm gh tn thông” giai đoạn 2001 – 2005, Báo cáo tổng kết đề tài p ie 14 Phạm Văn Tuấn, Nguyễn Hoàng Nghĩa, Lê Đình Khả, Hồng Chương, (2000) Kết w khảo nghiệm loài xuất xứ bạch đàn Việt Nam Tài liệu viết cho Hội nghị công oa nl nhận giống bạch đàn keo, 17 trang d TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI an lu 15 Bai Jyayu, Xu Jianmin and Gan Siming (2003) Genetic improvement of Tropical va oi lm Turbull J.E edit 64-70 ul nf Eucalypts in China In Eucalyptus in Asia Procedding of an international conference 16 Carabelli, M., Morelli, G., Whitelam, G., Ruberti, I., 1996 Twilight-zone and z at nh canopy shade induction of the Athb-2 homeobox gene in green plants Proceedings of the z National Academy of Sciences 93, 3530-3535 @ gm 17 Chen Z.Z., Chang S.H., Ho C.K., Chen Y.C., Tsai J.B., Chiang V.L (2001) Plant m co l production of transgenic Eucalyptus camaldulensis carrying the populous tremuloides cinnamate 4-hydroxylase gene Taiwan J For Sci 16: 249-258 http://www.lrc.tnu.edu.vn n va 59 an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si 18 Cheng (2006) Eucalyptus urophylla transformation anf selection Patent: US20060101535 A1 19 Demura, T and Ye, Z.-H (2010) Regulation of Plant Biomass Production Current Opin Plant Biology in press 20 Demura, T., Tashiro, G., Horiguchi, G., Kishimoto,N., Kubo, M., Matsuoka, N., Minami,A., Nagata-Hiwatashi, M., Nakamura,K., Okamura, Y., Sassa, N., Suzuki,S., Yazaki,J., Kikuchi,S., and Fukuda, H (2002) Visualization by comprehensive microarray lu analysis of gene expression programs during transdifferentiation of mesophyll cells into an xylem cells Proc Natl Acad Sci USA 99: 15794-15799 va n 21 Di Cristina, M., Sessa, G., Dolan, L., Linstead, P., Baima, S., Ruberti, I., Morelli, to gh tn G., 1996 The Arabidopsis Athb-10 (GLABRA2) is an HD-Zip protein required for regulation of root hair development The Plant Journal 10, 393-402 p ie 22 Diwakar Aggarwal., Anil Kumar., Sudhakara Reddy M (2001) Agrobacterium nl w tumefaciens mediated genetic transformation of selected elite clone(s) of Eucalyptus d oa tereticornis Acta Physioll Plant 33: 1603-1611 lu an 23 Endo, S., Pesquet, E., Yamaguchi, M., Tashiro, G., Sato, M., Toyooka, K., nf va Nishikubo, N., Udagawa-Motose, M., Kubo, M., Fukuda, H., and Demura, T (2009) oi lm ul Identifying new components participating in the secondary cell wall formation of vessel elements in zinnia and Arabidopsis Plant Cell, 21: 1155-1165 z at nh 24 Gubis J Zuzana L., Jurai F., Zuzana J., (2004) Effect of growth regulators on shoot induction and plant regerenation in tomato Biologia, Brastislava 59/3: 405-408 z gm @ 25 Haake, V., Cook, D., Riechmann, J., Pineda, O., Thomashow, M F., Zhang, J Z., 2002 Transcription factor CBF4 is a regulator of drought adaptation in Arabidopsis l m co Plant Physiology 130, 639-648 http://www.lrc.tnu.edu.vn n va 60 an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si 26 Ho C.K., Chang S.H., Tsay J.Y., Tsai C.J., Chiang V.L., Chen Z.Z (1998) Agrobacterium tumefaciens - mediated transformation of Eucalyptus camaldulensis and production of transgenic plants Plant Cell Reports 17: 675 - 680 27 Johannesson, H., Wang, Y., Engström, P., 2001 DNA-binding and dimerization preferences of Arabidopsis homeodomain-leucine zipper transcription factors in vitro Plant Molecular Biology 45, 63-73 28 Kawaoka A., Nanto K., Ishii K., Ebinuma H (2006) Reduction of lignin content lu by suppression of expression of the LIM domain transcription factor in Eucalyptus an camaldulensis Silvae Genet 55(6): 269-277 va n 29 Kawasu T., Keigo D K., Keiko Kondo K (2003) Process for transformation of to gh tn mature trees of Eucalyptus plants Patent No: US 6.563.024 B1 p ie 30 Kawasu T., Suzuki Y , Wada T., Kondo K., Koyama H (2003) Over expression of a plant mitochondrial citrate synthase in Eucalyptus trees improved growth when oa nl w cultured by alphosphate as a sole phosphate source Plant Cell Physiol 44: S91 d 31 Kondo K., Furuyo A., Ishigi N., Kasuga M., Shinozaki K., Yamaguchi S.K, lu an Hibino T (2003) Analysis of the stress rresponse genes in Eucalyptus and effect of nf va introducing several stress tolerance- giving genes in to Eucalyptus ; A development oi lm ul situation and a practical possibility of an environmental stress resistant tree Plant and Animal Genome 11th, San Diego California z at nh 32 Laudete M S., Luis P B Cid, Ana C M.B (2002) Biolistic transformation of Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla callus Functional Plant Biology 29(8): 917- z gm @ 924 33 Luo Jianzhong (2003) Variation in growth and wood density of Eucalyptus l m co urophylla In Eucalyptus in Asia Procedding of an international conference Turbull J.E edit 94-100 http://www.lrc.tnu.edu.vn n va 61 an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si 34 Mullins K V., Llewllyn D J., Hartney V J., Strauss S., Dennis E S (1997) Regeneration and transformation of Eucalyptus camaldulensis Plant Cell Reports 16: 787-791 35 Nguyen Duc Kien, Tran Ho Quang, Gunnar Jansson, Chris Harwood, David Clapham, Sara von Arnold (2009) Cellulose content as a selection trait in breeding for kraft pulp yield in Eucalyptus urophylla (Ann For Sci (66) 711-719) 36 Poke, F.S., R.E Vaillancourt, R.C Elliott & J.B Reid (2003) Sequence variation lu in two lignin biosynthesis genes, cinnamoyl CoA reductase (CCR) and cinnamyl alcohol an dehydrogenase (CAD2) Mol Breed 12(2): 107-118 va n 37 Prakash M.G., Gurumurthi K (2009) Genetic transformation and regeneration of to gh tn transgenic plant from precultured cotyledon and hypocotyl explants of Eucalyptus tereticornis Sm Using Agrobacterium tumefaciens In vitro Cell.Biol-Plant 45: 429-434 p ie 38 Ruan, J., 2013 Transcription Factor In: Dubitzky, W., Wolkenhauer, O., Cho, K.- nl w H.,Yokota, H (Ed.)^(Eds.) Encyclopedia of Systems Biology ed Springer New York, d oa vol p.^pp 2224-2224 lu an 39 Santos, P.E.T (1990) Potential for genetic improvement program, estimates of nf va genetic parameters and genotype x environment interaction in Eucalyptus urophylla oi lm ul S.T.Blake stands Scienctia Forestalis 43-44,11-19 40 Schena, M., Davis, R W., 1994 Structure of homeobox-leucine zipper genes Academy of Sciences 91, 8393-8397 z at nh suggests a model for the evolution of gene families Proceedings of the National z gm @ 41 Shao Z., Chen W., Luo H., Ye X., Zhang J (2002) Studio on the introduction of the cecropin D gene into Eucalyptus urophylla to breed the resistant varieties to http://www.lrc.tnu.edu.vn n va 62 an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN m co l Pseudomonas solanacearum Scientia Silvae Sinicae 38: 92-97 ac th si 42 Sonoda, T., Koita, H., Nakamoto-Ohta, S., Kondo, K., Suezaki, T., Kato, T., Ishizaki, Y., Nagai,N., Iida, N., Sato, S., Umezawa, T., and Hibino, T (2009) Increasing fiber length and growth in transgenic tobacco plants overexpressing a gene encoding the Eucalyptus camaldulensis HD-Zip class II transcription factor Plant Biotech 26: 115120 43 Spokevicius A.V., Beveren K.V., Leith M.A., Bossinger G (2005) Agrobacterium mediated in vitro transformation of wood- producing stem segments in eucalyptus Plant Cell Reports 23: 617-624 lu an 44 Suzuki Y., Kawasu T., Tsuyama M., Wada T., Kondo K., Mizuno R., Hara T., n va Koyama H (2004) Characteristics of transgenic Eucalyptus hybrids with an over to tn expression of a plant mitochondrial citrate synthase Nippon Shokubutsu Seiri Gakkai ie gh nenkai oyobi Shinpojiumu Koen Yoshishu 45:07 p 45 Tournier V., Grat S., Marque C., kayal W., Penchel R., Andrade D.G., Boudet nl w A.M., Teulieres C (2003) An efficient procedure to stably introduce genes into an an lu Res 12: 403-411 d oa economically important pulp tree (Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla) Trans va 46 Wei, X and Borralho, N.M.G (1998a) Genetic control of growth traits of oi lm ul nf Eucalyptus urophylla S.T Blake in Southest China Silvae Genetica 47(2-3), 158-165 47 Yamada-Watanabe K., Kawaoka A., Matsunaga K., Nanto K., Sugita K., Endo S., z at nh Ebinuma H., Murata N (2003) Molecular breeding of Eucalyptus: analysis of salt stress tolerance in transgenic Eucalyptus camaldulensis that overexpressed choline oxidase z gene (cod A) IUFRO tree biotechnology Umea Plant Science Centre, Umea: S7-S9 @ l gm 48 Zhang, H., Jin, J., Tang, L., Zhao, Y., Gu, X., Gao, G., Luo, J., 2011 PlantTFDB 2.0: update and improvement of the comprehensive plant transcription factor database m co Nucleic Acids Research 39, D1114-D1117 http://www.lrc.tnu.edu.vn n va 63 an Lu Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si PHỤ LỤC Phụ lục 1: Môi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) lu an Hàm lượng (mg/l) KNO3 1900 NH4NO3 1650 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 CaCl2 332 H3BO3 6,2 MnSO4.H2O 22,3 ZnSO4 8,6 Na2MO4 0,25 n va Thành phần p ie gh tn to d oa nl w 0,025 CoCl2 0,025 Glycin 27,8 z at nh FeSO4.7H2O 37,3 oi lm Na2EDTA ul nf va an lu CuSO4.7H2O z 100 Nicotinic acid gm @ Myo-inositol Thiamin.HCl 0,1 0,5 an Lu http://www.lrc.tnu.edu.vn n va 64 m co l Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Prydoxin.HCl 0,5 Phụ lục 2: Kết xử lý thống kê Thí nghiệm tạo mẫu in vitro Thí nghiệm nhân nhanh chồi Table Analyzed Nhan nhanhchoi lu One-way analysis of variance an P value P