Nghiên cứu chiết xuất tinh dầu gừng và phương pháp phân lập hợp chất zerumbone từ thân rễ cây gừng sẻ (zingiber officinale) thu hái tại huyện phú giáo, tỉnh bình dương

TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN NĂM HỌC 2013-2014 NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT TINH DẦU GỪNG VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN LẬP HỢP CHẤT ZERUMBONE TỪ THÂN RỄ CÂY GỪNG SẺ (ZINGIBER OFFICINALE) THU HÁI TẠI HUYỆN PHÚ GIÁO, TỈNH BÌNH DƯƠNG Tháng 4/ 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN NĂM HỌC 2013 -2014 NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT TINH DẦU GỪNG VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN LẬP HỢP CHẤT ZERUMBONE TỪ THÂN RỄ CÂY GỪNG SẺ (ZINGIBER OFFICINALE) THU HÁI TẠI HUYỆN PHÚ GIÁO, TỈNH BÌNH DƯƠNG Sinh viên thực hiện: Cao Trương Thanh Vân Cao Trương Thanh Liêm Đỗ Thị Thanh Phan Thị Hoa Hà Nguyễn Vương Khánh Ngọc Người hướng dẫn: TS Mai Hùng Thanh Tùng Tháng 4/ 2014 UBND TỈNH BÌNH DƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: Nghiên cứu chiết xuất tinh dầu gừng phương pháp phân lập hợp chất zerumbone từ thân rễ Gừng sẻ (Zingiber officinale) - Sinh viên thực hiện: Cao Trương Thanh Vân - Lớp: D12HH01 Khoa:Khoa học Tự nhiên - Năm thứ: Số năm đào tạo: - Người hướng dẫn: TS Mai Hùng Thanh Tùng Mục tiêu đề tài: Nghiên cứu chiết xuất tinh dầu gừng phương pháp phân lập hợp chất zerumbone từ thân rễ Gừng sẻ (Zingiber officinale) Tính sáng tạo: Lần Gừng sẻ thu hái huyện Phú Giáo, tỉnh Bình Dương nghiên cứu chiết xuất tinh dầu gừng phân tách hợp chất zerumbone Kết nghiên cứu: - Chưng cất tinh chế tinh dầu gừng từ củ gừng thu hái huyện Phú Giáo, tỉnh Bình Dương vào tháng 12 năm 2013 Hiệu suất đạt 0,24% - 0,25% - Xây dựng qui trình qui mơ phịng thí nghiệm phân tách hợp chất zerumbone từ củ gừng Hiệu suất đạt 0,0115% Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc phòng khả áp dụng đề tài: Sản phẩm thu tinh dầu gừng hợp chất zerumbone Có thể sử dụng làm nguyên liệu để sản xuất dược phẩm Ngày 16 tháng năm 2014 Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký, họ tên) Nhận xét người hướng dẫn đóng góp khoa học sinh viên thực đề tài (phần người hướng dẫn ghi): Đây lần Gừng sẻ thu hái huyện Phú Giáo, tỉnh Bình Dương em sinh viên mơn Hóa học, Đại học Thủ Dầu Một nghiên cứu chiết xuất tinh dầu phân tách hợp chất zerumbone Kết nghiên cứu đóng góp mặt học thuật, bổ sung nguồn tài liệu quí báu nghiên cứu họ Gừng Việt Nam i Ngày 16 tháng năm 2014 Người hướng dẫn (ký, họ tên) Xác nhận lãnh đạo khoa (ký, họ tên) i UBND TỈNH BÌNH DƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc THƠNG TIN VỀ SINH VIÊN CHỊU TRÁCH NHIỆM CHÍNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI I SƠ LƯỢC VỀ SINH VIÊN: Ảnh 4x6 Họ tên: Cao Trương Thanh Vân Sinh ngày: 22 tháng 04 năm 1994 Nơi sinh: Huyện Hàm Tân, tỉnh Bình Thuận Lớp: D12HH01 Khóa: 2012-2016 Khoa: Khoa học Tự nhiên Địa liên hệ: Điện thoại: 01666811218 Email: caotruong.thanhvan@gmail.com II QUÁ TRÌNH HỌC TẬP: * Năm thứ 1: Ngành học: Cử nhân Hóa học Khoa: Khoa học Tự nhiên Kết xếp loại học tập: Khá Sơ lược thành tích: * Năm thứ 2: Ngành học: Cử nhân Hóa học Khoa: Khoa học Tự nhiên Kết xếp loại học tập: Khá Sơ lược thành tích: Ngày 16 tháng năm 2014 Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký, họ tên) Xác nhận lãnh đạo khoa (ký, họ tên) i DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI STT Họ tên MSSV Lớp Khoa Cao Trương Thanh Liêm 1220950017 D12HH01 KHTN Đỗ Thị Thanh 1220950037 D12HH01 KHTN Phan Thị Hoa Hà 1210930013 C12HO01 KHTN Nguyễn Vương Khánh Ngọc 1210930026 C12HO01 KHTN i MỤC LỤC MỤC LỤC i MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN .2 1.1 Tổng quan họ Gừng 1.1.1 Khái quát họ Gừng (Zingiberaceae) 1.1.2 Chi Zingiber 1.2 Hợp chất zerumbone 18 1.2.1 Phân dạng hóa học 18 1.2.2 Đặc tính 19 1.2.3 Tác dụng 19 1.2.4 Nguồn zerumbone thiên nhiên .19 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 20 2.1 Đối tượng thực nghiệm 20 2.1.1 Nguyên liệu 20 2.1.2 Xử lí nguyên liệu 20 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 20 2.1.3.1 Thiết bị, dụng cụ 20 2.1.3.2 Hóa chất .20 2.2 Phương pháp tách tinh dầu zerumbone 20 2.2.1 Chưng cất tinh dầu phương pháp lôi nước 21 2.3 Phương pháp phân lập zerumbone .22 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 Chưng cất tinh dầu 23 3.2 Phân lập hợp chất zerumbone .23 KẾT LUẬN .25 TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 i i MỞ ĐẦU Ngày nay, xu hướng sử dụng sản phẩm chăm sóc sức khỏe có nguồn gốc từ thiên nhiên ngày gia tăng, đặc biệt dược phẩm Việt Nam với đặc điểm khí hậu nằm khu vực nhiệt đới gió mùa, sở hữu hệ động thực vật đa dạng phong phú Đây nguồn tài nguyên quí cần nghiên cứu sử dụng cách hiệu Cây gừng dại (Zingiber Montanum J Konig) thuộc họ gừng (Zingiberaceae) Ở Việt Nam, gừng xem dược liệu quý, thân rễ sử dụng gia vị tinh dầu dùng rộng rãi điều trị bệnh gồm: viêm khớp, thấp khớp, bong gân, đau bắp, đau nhức, viêm họng, đau bụng, khó tiêu, nơn mửa, tăng huyết áp, trí nhớ, sốt, bệnh truyền nhiễm [1], [2], [3] Zerumbone hoạt chất gừng có phổ hoạt tính rộng mạnh Kết nghiên cứu nhiều nhà khoa học khác cho thấy zerumbone có tác dụng như: chống viêm; ngăn chặn phát triển tế bào ung thư kèm với trình apoptosis; ngăn cản HIV hoạt động (IC 50 = 0,14 mM)… Nó ức chế có hiệu phát triển 10 loại ung thư khác người (ung thư cổ tử cung, ung thư buồng trứng, ung thư vú, ung thư máu ,ung thư xương, ung thư  gan, ung thư phổi , ung thư đại tràng, ung thư tũy, ung thư da) [4] [10] Các nghiên cứu ban đầu cho thấy việc chiết xuất tinh dầu gừng phân lập hợp chất zerumbone có ý nghĩa khoa học ứng dụng thực tiễn cao có ý nghĩa khoa học ứng dụng thực tiễn cao Chính lí trên, chúng tơi đưa đề tài nghiên cứu: "Nghiên cứu chiết xuất tinh dầu gừng phương pháp phân lập hợp chất rezumbone từ thân rễ Gừng sẻ (Zingiber officinale) thu hái huyện Phú Giáo, tỉnh Bình Dương" i CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan họ Gừng [5], [8] 1.1.1 Khái quát họ Gừng (Zingiberaceae) [6], [7] Họ Gừng họ thảo mộc sống lâu năm với thân rễ bò ngang hay tạo củ, bao gồm 47 chi khoảng 1000 loài Nhiều loài loại cảnh, gia vị, hay thuốc quan trọng Các thành viên quan trọng họ bao gồm gừng, nghệ, riềng, đậu khấu sa nhân Họ Gừng phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, chủ yếu Nam Đông Nam Châu Á 1.1.2 Chi Zingiber Chi Zingiber thuộc tơng Zingibereae, giới có khoảng 100 lồi phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới 1.1.2.1 Đặc điểm thực vật [8] Các chi Zingiber (chi Gừng) thuộc loại thân thảo, yếu Thân rễ khỏe, nằm ngang, có nhiều mấu Lá hình mác hẹp thường có mùi Lưỡi bẹ mảnh, nguyên có hai thùy Cụm hoa mà thường mọc từ gốc mang trục ngắn có vảy khơng có Các bắc lợp chồng lên dày đặc Đài hoa hình ống, tràng hoa có chùy thuôn dài, nhọn thùy lưng thường rộng Bao phấn tận phần phụ cuộn lại thành ống mảnh dài chiều dài chứa ngăn chứa vịi nhụy Nhị khơng có khơng rõ, dính liền với cánh môi, thường tạo thành thùy bên có màu sắc khác Cánh mơi hình trứng hay hình thuỗn Nỗn sào có ngăn Quả nang, nạc, khơng mỡ Hạt hồn tồn bị bao bọc lớp áo hạt 1.1.2.2 Phân bố phân loại [6], [5] - Gừng loại gia vị cổ điển trồng nhiều nước vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, từ Đông Á đến Đông Nam Á Nam Á Trung Quốc, Ấn Độ, Nhật Bản nước trồng gừng nhiều giới Ở Việt Nam, trồng khắp địa phương, từ vùng núi cao đến đồng hải đảo - Ở Việt Nam có ba loại gừng chủ yếu trồng phổ biến (Zingiber officinale): i 1.1.2.4.7 Zingiber ruben Roxb  Đặc điểm thực vật phân bố: cao 0,6 - 1m Thân rễ dày Phát hoa cọng nằm Lá hoa đỏ tươi Phân bố vùng Đà Lạt  Một số kết nghiên cứu thành phần hóa học - Thành phần hóa học tinh dầu thân rễ loài Zingiber ruben Roxb Thái Lan thu phương pháp chưng cất lôi nước có màu xanh lơ, chưa 12 cấu tử (chiếm 84,05% lượng tinh dầu) Trong 12 hợp chất đó, có cấu tử định danh là: -pinen, camphen, -pinen copaen Phần cặn lại từ chưng cất lôi nước, tách cách ngâm dung mơi axeton sau tiến hành sắc kí cột, chất hấp phụ silicagel thu chất Trong có tinh thể màu trắng sáng Đnc 134-1390C nhận danh stigmasterol (C29H48O) -sitosterol (C29H50O), bốn chất lại tiếp tục nghiên cứu - Bộ phận rễ Zingiber ruben Roxb tách dung môi n-hexan, cloroform metanol Các dịch chiết đem sắc ký cột, chất hấp phụ silicagel thu phần chất rắn: +Phần rắn thứ có màu trắng, vơ định hình Đ nc 77-800C dự đốn gồm chất este khác + Phần rắn thứ hai có màu trắng, tinh thể hình kim Đ nc 205-206,50C hỗn hợp tritecpenoit có CTPT C30H50O Hai đồng phân C30H50O nhận danh -amyrin bauerenol + Phần rắn thứ có màu trắng, kết tinh hình lập phương Đ nc 171-1760C, nhận danh đường saccarozơ [42] 1.2 Hợp chất zerumbone Zerumbone serquiterpene xetone từ loại gừng ăn gọi "Zingiber Zerumbet Smith" phát triển Đông Nam Á "Zingiber aromaticum" [10] i 1.2.1 Phân dạng hóa học [9] - Danh pháp: 2,6,9,9-tetramethyl- (E,E,E)- 2,6,10- cycloundecatrien-1- one - Công thức phân tử: C15H22O O - Công thức cấu tạo: 13 - Khối lượng phân tử: 218,340 15 - Để có Zerumbone: phân lập từ thân rễ tươi 10 sản lượng 0,3-0,4% cách chưng cất đơn giản 11 14 tái kết tinh 12 1.2.2 Đặc tính Zerumbone serquyterpen xeton vịng lớn, α, β khơng no, có cơng thức chung C15H22O, cấu tạo phân tử hình 3.1, tên gọi hóa học 2,6,9,9tetramethyl- (E,E,E)- 2,6,10- cycloundecatrien-1- on Hợp chất cacbonyl α, β khơng no tự nhiên loại hợp chất có hoạt tính sinh học lý thú nhà khoa học giới đặc biệt quan tâm Zerumbone ví dụ điển hình trình bày phần tổng quan, hoạt tính sinh học bật zerumbone ức chế mạnh phát triển tế bào ung thư theo chế apoptosis, loại trừ NF- kB hoạt động Nhóm chức sinh học zerumbone nhóm cacbonyl α, β khơng no 1.2.3 Tác dụng [10] Dược tính Zerumbone - Chống viêm; - Ngăn chặn phát triển tế bào ung thư kèm với trình apoptosis: "bãi bỏ NFkappaB IkappaBalpha kinase kích hoạt dẫn đến ức chế biểu antiapoptotic di gen, điều hòa tăng apoptosis, ức chế tuyến yên xâm lược." - Ngăn cản HIV hoạt động (IC50 = 0.14mM) Lịch sử sử dụng zerumbone Zingiber Zerumbet có mặt hầu hết khắp đảo Thái Bình Dương, từ Đài Loan, Đơng Nam Á nơi sử dụng phổ biến người xứ, đến Hawaii, nơi gọi "awapuhi" Zingiber Zerumbet sử dụng hương vị nấu ăn, điều trị sưng, vết bầm tím giống thuốc i đắp, điều trị rối loạn dày, chất gây tê cho răng, điều trị vết cắt vết loét, điều trị bệnh nấm da nấm da Các thành phần chất lỏng tế bào cụm hoa sử dụng loại dầu gội Các phận sử dụng thân rễ, cụm hoa 1.2.4 Nguồn zerumbone thiên nhiên Zerumbone tìm thấy hợp chất thiên nhiên chiết xuất từ loại dâm bụt, thân rễ gừng i CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Đối tượng thực nghiệm 2.1.1 Nguyên liệu Nguyên liệu nghiên cứu thân rễ gừng thu hoạch từ huyện Phú Giáo, tỉnh Bình Dương vào tháng 12 năm 2013 Thân rễ gừng chọn loại gừng tháng tuổi, thu hoạch không bị sâu không bị loại động vật khác phá hoại, không dập nát hay thối hỏng 2.1.2 Xử lí nguyên liệu Gừng sau vận chuyển đến phịng thí nghiệm, tiến hành chọn lựa sơ bộ, loại bỏ phần rể tơ quanh thân rể gừng, loại bỏ tạp chất, rửa sạch, cắt lát nhỏ, xay nhuyển trước thực nghiên cứu 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 2.1.3.1 Thiết bị, dụng cụ Các thiết bị sử dụng q trình nghiên cứu gồm có: - Cân 1kg - Máy quay cất dung môi áp suất thấp - Bộ dụng cụ chưng cất lôi nước - Các dụng cụ thủy tinh dùng trình nghiên cứu gồm có: bình cầu lít, bình tam giác 500 ml, bình trụ có nắp lít, phểu chiết 250 ml 2.1.3.2 Hóa chất Các dung mơi: n-hexane, ethanol, nước cất 2.2 Phương pháp tách tinh dầu zerumbone 2.2.1 Chưng cất tinh dầu phương pháp lôi nước Cho 500 g củ gừng xay nhuyễn với khối lượng lượng nước chưng cất 1000 ml vào bình cất hệ thống chưng cất Clevenger Mẫu gia nhiệt bếp điện thời gian 16 giờ, hỗn hợp sôi nước tạo thành lôi tinh dầu lên vào hệ thống ngưng tụ Sau ngưng tụ, thu hỗn hợp lỏng gồm tinh dầu nước chiết tiếp để tách riêng phần nước tinh dầu i Hình Hệ thống chưng cất lơi nước Tiếp tục chưng cất thay nước cất 1000 ml nước muối 10% Bảng Tinh dầu thu chưng cất nước thường nước muối 10% Nước thường i Nước muối 10% Tinh dầu thu (g) Hiệu suất tách tinh dầu (%) lần 1,12 0,224 lần 1,23 0,246 lần 1,21 0,242 lần 1,20 0,240 lần lần 1,25 1,22 0,250 0,244 2.3 Phương pháp phân lập zerumbone Ngâm kg củ gừng tươi xay nhuyễn với ethanol 96% khoảng (ngâm lần) Dịch chiết ethanol lọc qua giấy lọc để loại bỏ cặn học Sau tách bớt dung mơi ethanol máy quay cất dung môi áp suất thấp Thêm vào dịch chiết ethanol lượng nước muối (tỉ lệ EtOH:nước muối = 1:4), tiến hành chiết nhiều lần n-hexan dịch chiết n-hexan lấy nhạt màu dừng lại Tách bớt dung mơi dịch chiết n-hexan máy quay cất dung môi áp suất thấp Để dịch chiết sau quay cất vào tủ lạnh thấy xuất tinh thể màu trắng, lọc lấy tinh thể 250 mg Tiến hành kết tinh phân đoạn hệ dung môi EtOAc : n-hexan (1:20) thu 230 mg zerumbone i CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Chưng cất tinh dầu Từ kết bảng ta thấy hiệu suất tách tinh dầu 0,24% - 0,25% Nếu dùng nước muối để cất nước tách tinh dầu cải thiện hiệu suất lên khơng đáng kể Tinh dầu tách có màu vàng nhạt, thơm dịu có mùi đặc trưng gừng; vị cay Trong trình chưng cất, tinh dầu nhiều giai đoạn từ 3h-8h đầu tiên, hàm lượng tinh dầu giảm theo thời gian cất 3.2 Phân lập hợp chất zerumbone Hiệu suất tách zerumbone 0,0115% Mang mẫu zerumbone đo điểm Củ gừng xay nhuyễn (2 kg) Chiết EtOH 96% Loại bớt EtOH 1/5V Thêm 4/5V nước vào, chiết n-hexan Làm khô, loại n-hexan Dầu zerumbone (thành phần zerumbone) Kếttinh tinhởphân nhiệt độ thấp 1.1.Kết nhiệtđoạn độ thấp với hệ dung môi EtOAc : n-hexan (1:20) Lọc qua phểu lọc sứ có giấy lọc Lọc qua phểu lọc sứ có giấy lọc Zerumbone thơ i Hình Qui trình phân lập zerumbone chảy ta thu tonc = 65oC Ngoài ra, phổ MS xuất peak ion giả phân tử m/z 219,1 [M+H]+, nghĩa phân tử lượng zerumbone 218 đvC i [M+H]+ Hình Phổ MS zerumbone Từ liệu trên, ta khẳng định tinh thể phân tách zerumbone i KẾT LUẬN Đã chưng cất tinh chế tinh dầu gừng từ củ Gừng sẻ (Zingiber officinale) thu hái huyện Phú Giáo, tỉnh Bình Dương vào tháng 12 năm 2013 Hiệu suất đạt 0,24% - 0,25% Đã xây dựng qui trình qui mơ phịng thí nghiệm phân tách hợp chất zerumbone từ củ Gừng sẻ (Zingiber officinale) Hiệu suất đạt 0,0115% i TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] http://chothuoc24h.com/caythuoc [2] http://vietbao.vn/Suc-khoe/Cu-gung-gio-trong-dieu-tri-xo-gan [3] http://www.sc.chula.ac.th/department/chemistry/npru/6Senior/Abssenior.html [4] http://www.rausach.com.vn/forum_posts.asp?TID=5511&PN=3&title=cy-gng-gi-gngdi [5] Tống Thị Ánh Ngọc (2011), Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chưng cất tinh dầu gừng, Trường Đại học Cần Thơ [6] GS.TS Đỗ Tất Lợi(2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y Học [7] http://vi.wikipedia.org/wiki/H%E1%BB%8D_G%E1%BB%ABng [8] Trịnh Đình Chính (1995), “Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu loài chi riềng (Alpinia) gừng (Zingiber) thuộc họ Gừng (Zingiberaceae) Việt Nam”, Luận án tiến sĩ hóa học, Hà Nội [9] Lê Thị Thùy (2011), Nghiên cứu phương pháp phân lập zerumbone có chất lượng cao từ thân rễ gừng gió( Zingiber zerumbet Sm) chuyển hóa zerumbone thành hợp chất có hoạt tính sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên [10] http://www.zerumbone.com/ [11] Phan Thị Sửu, Bùi Quang Thuật (2005), Nghiên cứu công nghệ sản xuất nhựa dầu gừng số gia vị chọn lọc Việt Nam (ớt, tỏi) - Báo cáo tổng kết đề tài độc lập cấp nhà nước, Mã số ĐTĐL-2002/14, Hà Nội i [12] Ah-Reum Han, Hye-Young Min, Tri Windono, Gwang-Ho Jeohn, Dae Sik Jang, Sang Kook Lee, Eun-Kyong Seo (2004), “A new cytotoxic phenylbutenoid dimer from the rhizomes of zingiber cassumunar”, Planta Med 2004, 70: 1095-1097 [13] Ah-Reum HAN, Moon-Sun KIM, Yeon Hee JEONG, Sang Kook LEE, and Eun-Kyoung SEO (2005), “Cyclooxygenase-2 Inhibitory Phenylbutenoids from the Rhizomes of Zingiber cassumunar”, Chem Pharm Bull 53(11) 1466—1468 [14] Akiko Jitoe, Toshiya Masuda, and Tom J Mabry Novel Antioxidants, “Cassumunarin A, B, and C, from Zingiber cussumunar”, Tetrahedron Letters, Vol 35 No 7, pp 981-984 1994 [15] Akiko Jitoe, Toshiya Masuda and Nobuji Nakatani (1993), “Phenylbutenoid Dimers From The Rhizomes Of Zingiber Cassumunar”, Phytochemistry, VoL 32, No 2, pp 351-3631, 1993 [16] Chane-Ming, Jimmy, Vera, Robert, Chalchat, Jean-Claude (2003), “Chemical composition of the essential oil from zhizomes, leaves and flowers of Zingiber zerumbet Smith from Reunion Island”, Journal of essential oil research [17] Dae Sik Jang and Eun-Kyoung Seo1 (2005), “Potentially Bioactive Two New Natural Sesquiterpenoids fromthe Rhizomes of Zingiber zerumbet”, Arch Pharm Res Vol 28, No 3, 294-296, 2005 [18] Dae Sik Jang, Ah-Reum Han1, Gowooni Park1, Gil-Ja Jhon, and EunKyoung Seo1 (2004), “Flavonoids and Aromatic Compounds from the Rhizomes of Zingiber zerumbet”, Arch Pharm Res Vol 27, No 4, 386-389, 2004 [19] Dr Robert S Pappas, Thailand Insitute of Scientific and Technological Research at Chatuchak – “ ….has done research on anti-inflammatory activity of essential oil of Z.cassumunar The most active component DMPBD was twice potent than reference drug DICLOFENAC (VOLTAROL)…” [20] John Boukouvalas and Jian-Xin Wang (2008), “Structure Revision and Synthesis of a Novel Labdane Diterpenoid from Zingiber ottensii”, organic letters, Vol 10 No.16 3397-3399 2008 [21] J R Dai, J.H.Cardellina, J.B Mc Mahon, M R Boyd (1997), “Catalog of compounds isolated and charaterized by MIDP scientists from NCI Natural i Products Repository Extracts Sorted by Extract Source Identity”, Nat Pro Lett 10: 115-118 [22] Kayo Akiyama, Hiroe Kikuzaki, Takako Aoki, Akiko Okuda, Nordin H Lajis, and Nobuji Nakatani (2006), “Terpenoids and a Diarylheptanoid from Zingiber ottensii”, J Nat Prod 2006, 69, 1637-1640 [23] Masako Abe, Yoshio Ozawa, Yasujiro Morimitsu, Kikue Kubota (2008), “Mioganal, A novel pungent principle in Myoga (Zingiber mioga Roscoe) and a quantitative evaluation of its pungency”, Biosci Biotechnol Biochem.72 (10), 2681-2686, 2008 [24] Masako Abe, Yoshio Ozawa,Yashusi Uda, Yasujiro Morimitsu, Fuminori Yamada, Yoshimasa Nakamura, Toshihiko Osawa (2004), “Antimicrobial Activitives of Diterpene Dialdehydes, Constituents from Myoga (Zingiber mioga Roscoe), and Their Quantitative Analysis”, Biotechnol Biochem.72 (10), 26812686, 2004 [25] Murakami, A / Takahashi, M / Jiwajinda, S / Koshimizu, K / Ohigashi, “Identification of zerumbone in Zingiber zerumbet Smith as a potent inhibitor of 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced Epstein-Barr virus activation”, Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 63 (10), p.1811-1812, Oct 1999 [26] M Nhareet Somchit, M.H Nurshukriyah (2003), “Anti-inflammatory property of ethanol and water extracts of Zingiber zerumbet”, Indian Journal of Pharmacology, 35: 181-182 [27] Nguyen Xuan Dung, Trinh Dinh Chinh and P.A Leclercq (1993), “The constituents of the rhizomes oil of Zingiber zerumbet Sm From Vietnam”, Journal of Essential Oil Research, 5, 553 [28] Nicole Perez (2005), Essential oil Zingiber officinale Roscoe, Published in the Aromatherapy Times Vol 1-No 63 [29] N.P Chahabra, R.S Dhillton, M.S Wadia and P.S Kalsi (1975), “Structure of zerumbone oxide, a new sesquiterpene epoxy ketone from Zingiber zerumbet Smith (wild ginger oil)”, Indian J.Chem.,13, 222-224 [30] N.P Damodaran and S Dev (1968), “Studies in sesquiterpene-XXXIX, Structure of humulenols”, Tetrahedron, 24, 4133-4142 i [31] Pino, Jorge A, Marbot, Rolando, Rosado (2004), “Chemical composotion of the essential oil of Zingiber officinale Roscoe L from Cuba”, Journal of Essential Oil Research [32] Qiao Feng Tao,Yan Xu,Rosanna Y Y Lam,Bernd Schneider,Hui Dou,Po Sing Leung,Shu Yun Shi,Chang Xin Zhou, Lei Xiang Yang, Rong Ping Zhang, Ye Cheng Xiao, Xiumei Wu, Joachim Stöckigt, Su Zeng, Christopher H K Cheng, and Yu Zhao (2008), “Diarylheptanoids and a Monoterpenoid from the Rhizomes of Zingiber officinale: Antioxidant and Cytoprotective Properties”, J Nat Prod 2008, 71, 12–17 [33] Rattima Jeenapongsa , Krongtong Yoovathaworn, Kittima M Sriwatanakul, Ubonwan Pongprayoon, Kampon Sriwatanakul (2003), “Anti-inflammatory activity of (E)-1-(3,4-dimethoxyphenyl) butadiene from Zingiber cassumunar Roxb”, Journal of Ethnopharmacology 87 (2003) 143–148 [34] Reena Charles, S.N GargU, Sushil Kumar (2000), “New gingerdione from the rhizomes of Zingiber officinale”, Fitoterapia 71 - 2000 716-718 [35] S.I.A Wahab, A.B Abdul, H.C Yeel, A.S Alzubairi, M.M Elhassan and M.M Syam (2008), “Anti-tumor activitives of analogues derived from the Bioactive compound of Zingiber zerumbet”, International Jounal of Cancer Research (4), 154-159, 2008 [36] S Thubthimthed, P Limsiriwong, U Rerk-am, T Suntorntanasat, “Chemical composition and cytotoxic activity of the essetial oil of Zingiber ottensii”, HIS Acta horticulturae 675: III WOCMAP Congress on Medicinal and Aromatic Plants-Vol 1: Bioprospecting and Ethnopharmacology [37] T.Y Chien, L.G Chen, C.J Lee, F.Y Lee, C.C Wang (2008), “Antiinflammatory constituents of Zingiber zerumbet”, Food Chemistry 110 (2008) 584– 589 [38] Tepy USIA, Tadashi Watabe, Shigetoshi Kadota, and Yasuhiro Tezuka (2005), “Mechanism-Based Inhibition of CYP3A4 by Constituents of Zingiber aromaticum”, Biol Pharm Bull 28(3) 495—499 (2005) [39] Tepy Usia, Hiroshi Iwata, Akira Hiratsuka, Tadashi Watabe, Shigetoshi Kadota, and Yasuhiro Tezuka (2004), “Sesquiterpenes and Flavonol Glycosides i from Zingiber aromaticum and Their CYP3A4 and CYP2D6 Inhibitory Activities”, Journal of natural products, Volume 67, Number 7, July 2004 [40] T Masuda, A Jitoe, S Kato, N Nakatani, “Acetylated flavonol glycosides from Zingiber zerumbet”, Phytochemistry, 30 (7), p.2391-2392, Jan 1991 [41] Yu Zhao, Qiao Feng Tao, Rong Ping Zhang, Chang Xin Zhou, Hui Dou, Shu Yun Shi, Ye Cheng Xiao, Lian Li Sun, Su Zeng, Ke Xin Huang, Xiao Dong Zhang, Xiao Kun Li (2007), “Two new compounds from Zingiber officinale”, Chinese Chemical Letters 18 (2007) 1247–1249 [42] W John Kress, Linda M Prince and Kyle J Williams (2002), “The Phylogeny and a new classification of the Gingers (Zingiberaceae): Evidence from molecular data”, American Journal of Botany 89(11): 1682-1696, 2002 i