Tuyển chọn và đánh giá một số đặc điểm sinh học của chủng vi khuẩn nội sinh phân lập từ cây kim ngân (lonicera japonica) (khóa luận tốt nghiệp)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC *** KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP TUYỂN CHỌN VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CHỦNG VI KHUẨN NỘI SINH PHÂN LẬP TỪ CÂY KIM NGÂN (LONICERA JAPONICA) Hà Nội – Năm 2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC *** KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP TUYỂN CHỌN VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CHỦNG VI KHUẨN NỘI SINH PHÂN LẬP TỪ CÂY KIM NGÂN (LONICERA JAPONICA) Sinh viên thực : Hồng Thị Liễu Khóa : 62 Ngành : Cơng nghệ sinh học Giảng viên hƣớng dẫn: PGS.TS Nguyễn Văn Giang Hà Nội – Năm 2021 LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực khóa luận tốt nghiệp nhận ủng hộ giúp đỡ thầy, giáo, bạn bè gia đình Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Văn Giang, người hướng dẫn, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập định hướng cơng tác hồn thiện nghiên cứu Tơi xin cảm ơn PGS.TS Nguyễn Xuân Cảnh, ThS Trần Thị Đào tồn thể cán thuộc Bộ mơn Cơng nghệ Vi sinh, anh chị bạn bè giúp đỡ, tạo điều kiện cho thực tốt khóa luận Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn tới bố mẹ, anh chị người thân động viên tạo động lực cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 16 tháng 02 năm 2021 Sinh viên Hoàng Thị Liễu i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết số liệu nghiên cứu khóa luận trung thực chƣa đƣợc sử dụng công bố Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực khóa luận đƣợc cảm ơn thơng tin trích dẫn đƣợc rõ nguồn gốc phần tài liệu tham khảo Hà Nội, ngày 16 tháng 02 năm 2021 Sinh viên thực Hoàng Thị Liễu ii ABSTRACT Endophytic bacteria are the plant beneficial bacteria that thrive inside plants and can improve plant growth They can benefit host plants directly by improving plant nutrient uptake and producing and phytohormones This study was carried out for the purpose of evaluating some biological characteristics of endophytic bacteria isolated from Lonicera japonica As the results, 33 strains of endophytic bacteria were isolated from Lonicera japonica, which collected in Ha Noi, Hung Yen and Ninh Binh provinces A total of 33 isolated strains of endophytic bacteria were able to producing indeole-3-acetic-acid (IAA), of them 11 strains were capable of solubilization of phosphate and strains were capable of producing siderophore Based on the concentration IAA synthesized under in vitro conditions, two strains of bacteria HY9 and TT3 were exhibiting the strongest activity, so were selected to investigate the effect of L-tryptophan concentration, temperature, culture time, pH, the influence of carbon source, the influence of nitrogen source to the ability to synthesize the IAA These two strains showed the highest ability to produce IAA with the L-tryptophan concentration of 100 mg/l, at 35 oC and pH cultural medium =7, incubation time 96 hours The suitable carbon source is saccharose and the nitrogen source is NH4Cl Comparing nucleotide sequence of 16S rRNA sequence of TT3 strain with nucleotide sequences of 16S rRNA of other bacterial strains on NCBI GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) allowed to conclude that TT3 strain has a very closed relationship with Klebsiella variicola F2R9 with the similarity level of 99.28%, so strain TT3 named Klebsiella variicola TT3 iii TÓM TẮT Vi khuẩn nội sinh vi khuẩn có lợi cho phát triển bên mô thực vật góp phần cải thiện phát triển trồng Chúng mang lại lợi ích trực tiếp cho chủ việc cải thiện khả hấp thụ chất dinh dƣỡng cho trồng sản xuất phytohormone Nghiên cứu đƣợc thực nhằm mục đích đánh giá số đặc điểm sinh học vi khuẩn nội sinh đƣợc phân lập từ kim ngân (Lonicera japonica) Kết quả, 33 chủng vi khuẩn nội sinh đƣợc phân lập từ kim ngân tỉnh Hà Nội, Hƣng Yên Ninh Bình Tất 33 chủng vi khuẩn nội sinh đƣợc phân lập có khả sinh indole-3-acetic acid (IAA), 11 chủng có khả phân giải phosphate khó tan, chủng có khả sinh siderophore Trên sở nồng độ IAA đƣợc tổng hợp điều kiện in vitro Hai chủng vi khuẩn HY9 TT3 biểu hoạt tính mạnh mẽ nên đƣợc tuyển chọn để khảo sát ảnh hƣởng nồng độ L-tryptophan, nhiệt độ, thời gian nuôi cấy, pH, ảnh hƣởng nguồn carbon, ảnh hƣởng nguồn nitơ đến khả tổng hợp IAA Hai chủng biểu khả sinh IAA cao nồng độ Ltryptophan 100 mg/l, nhiệt độ thích hợp 35oC, pH=7, ni cấy 96 Nguồn carbon thích hợp saccharose nguồn nitơ NH4Cl So sánh trình tự nucelotide 16S rRNA chủng TT3 với trình tự nucleotide 16S rRNA chủng vi khuẩn NCBI GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) cho phép kết luận chủng TT3 có quan hệ gần gũi với với chủng Klebsiella variicola F2R9 mức tƣơng đồng 99,28%, chủng TT3 đƣợc đặt tên Klebsiella variicola TT3 iv MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii ABSTRACT iii TÓM TẮT iv MỤC LỤC v DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC BẢNG x DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT xi PHẦN I ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục đích ý nghĩa đề tài 1.2.1 Mục đích nghiên cứu 1.2.2 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan vi khuẩn nội sinh 2.1.1 Lịch sử vi khuẩn nội sinh 2.1.2 Vị trí cách thức xâm nhập vi khuẩn nội sinh 2.2 Vai trò vi khuẩn nội sinh 2.2.1 Vi khuẩn nội sinh thúc đẩy tăng trƣởng thực vật 2.2.2 Khả đối kháng vi sinh vật gây bệnh thực vật 2.2.3 Khả sinh tổng hợp IAA 2.2.4 Khả hịa tan phosphate khó tan 2.2.5 Khả tổng hợp siderophore 11 2.3 Tổng quan kim ngân 11 2.4 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn nội sinh từ dƣợc liệu giới nƣớc 13 2.4.1 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn nội sinh từ dƣợc liệu giới 13 2.4.2 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn nội sinh từ dƣợc liệu nƣớc 16 v PHẦN III PHƢƠNG PHÁP VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 19 3.1 Đối tƣợng vật liệu nghiên cứu 19 3.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 19 3.1.2 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 19 3.1.3 Môi trƣờng 19 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 20 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu 20 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 20 3.3 Nội dung nghiên cứu 20 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 3.4.1 Phân lập chủng vi khuẩn nội sinh từ kim ngân 21 3.4.2 Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào 22 3.4.3 Khả sinh tổng hợp siderophore 23 3.4.4 Khả sinh tổng hợp IAA 23 3.4.5 Khả hịa tan phosphate khó tan 24 3.4.6 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ L-tryptophan, pH, nhiệt độ thời gian đến khả sinh IAA chủng tuyển chọn 27 3.4.7 Khảo sát ảnh hƣởng số yếu tố môi trƣờng đến khả sinh IAA chủng tuyển chọn 28 3.4.8 Đánh giá số đặc điểm sinh hóa chủng vi khuẩn đƣợc tuyển chọn 29 3.4.9 Phƣơng pháp nhuộm Gram 30 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 4.1 Kết phân lập tuyển chọn vi khuẩn nội sinh 34 4.1.1 Kết phân lập 34 4.1.2 Khảo sát hoạt tính enzyme ngoại bào 35 4.1.3 Khảo sát khả sinh siderophore 36 4.1.4 Khảo sát khả sinh IAA chủng vi khuẩn nội sinh 37 4.1.5 Sàng lọc vi khuẩn nội sinh có khả phân giải phosphate khó tan 39 vi 4.2 Ảnh hƣởng nồng độ L-tryptophan, pH, nhiệt độ thời gian nuôi cấy đến khả sinh tổng hợp IAA 42 4.2.1 Ảnh hƣởng nồng độ L-tryptophan đến khả sinh tổng hợp IAA 42 4.2.2 Ảnh hƣởng pH đến khả sinh tổng hợp IAA 43 4.2.3 Ảnh hƣởng thời gian nuôi cấy đến khả sinh tổng hợp IAA 44 4.2.4 Ảnh hƣởng nhiệt độ nuôi cấy đến khả sinh tổng hợp IAA 46 4.3 Khảo sát ảnh hƣởng số yếu tố môi trƣờng đến khả sinh IAA chủng tuyển chọn 47 4.3.1 Ảnh hƣởng nguồn carbon đến khả sinh IAA chủng vi khuẩn tuyển chọn 47 4.3.2 Ảnh hƣởng nguồn nitơ đến khả sinh IAA chủng vi khuẩn tuyển chọn 48 4.4 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa chủng vi khuẩn nội sinh đƣợc tuyển chọn 50 4.4.1 Đặc điểm hình thái chủng vi khuẩn đƣợc tuyển chọn 50 4.4.2 Khảo sát số đặc điểm sinh hóa chủng vi khuẩn đƣợc tuyển chọn 51 4.5 Kết định danh chủng vi khuẩn nội sinh TT3 phƣơng pháp giải trình tự nucleotide 16S rRNA 54 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 5.1 Kết luận 57 5.2 Kiến nghị 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ LỤC 65 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cây kim ngân 12 Hình 4.1 Kết phân lập 34 Hình 4.2 Hình thái khuẩn lạc chủng vi khuẩn nội sinh HY9 TT3 sau đƣợc làm môi trƣờng NA 35 Hình 4.3 Khả sinh siderophore chủng vi khuẩn nội sinh 37 Hình 4.4 Đồ thị đƣờng chuẩn thể tƣơng quan giá trị OD530nm với nồng độ IAA (µg/ml) 38 Hình 4.5 Nồng độ IAA đƣợc tổng hợp chủng vi khuẩn nội sinh 38 Hình 4.6 Khả phân giải phosphate số chủng vi khuẩn nội sinh 40 Hình 4.7 Đồ thị đƣờng chuẩn tƣơng quan OD820nm nồng độ PO43- (mg/l) 40 Hình 4.8 Khả phân giải phosphate khó tan chủng vi khuẩn nội sinh 41 Hình 4.10 Ảnh hƣởng nồng độ L-tryptophan tới khả sinh IAA chủng vi khuẩn đƣợc tuyển chọn 43 Hình 4.11 Ảnh hƣởng pH tới khả sinh IAA chủng vi khuẩn đƣợc tuyển chọn 44 Hình 4.12 Ảnh hƣởng thời gian nuôi cấy tới khả sinh IAA chủng vi khuẩn đƣợc tuyển chọn 45 Hình 4.13 Ảnh hƣởng nhiệt độ tới khả sinh IAA chủng vi khuẩn đƣợc tuyển chọn 46 Hình 4.14 Ảnh hƣởng nguồn carbon đến khả sinh IAA chủng vi khuẩn đƣợc tuyển chọn 47 Hình 4.15 Ảnh hƣởng nguồn nitơ đến khả sinh IAA chủng vi khuẩn đƣợc tuyển chọn 48 Hình 4.16 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TT3 50 Hình 4.17 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng HY9 51 Hình 4.18 Phản ứng Methyl-Red (MR) chủng vi khuẩn nội sinh đƣợc tuyển chọn 51 Hình 4.19 Khả di động chủng vi khuẩn đƣợc tuyển chọn 52 Hình 4.20 Phản ứng citrate chủng vi khuẩn nội sinh đƣợc tuyển chọn 53 viii PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận - Đã phân lập đƣợc ba mƣơi ba chủng vi khuẩn nội sinh từ kim ngân (Lonicera japonica), tất có khả tổng hợp IAA, số 11 chủng có khả phân giải phosphate khó tan, chủng có khả sinh siderophore - Đã tuyển chọn đƣợc hai chủng có khả sinh IAA cao HY9 (42,9 µg/ml) TT3 (49,07 µg/ml) sau 72 ni cấy nồng độ phosphate đƣợc giải phóng vào mơi trƣờng hai chủng lần lƣợt 6,21 mg/l 7,02 mg/l - Điều kiện ni cấy thích hợp để hai chủng vi khuẩn nội sinh HY9 TT3 tổng hợp IAA mạnh sau ngày nuôi cấy nhiệt độ 35oC, pH=7, nồng độ L-tryptophan 100mg/l Chủng HY9 TT3 tổng hợp nhiều IAA đƣợc nuôi môi trƣờng với nguồn carbon saccharose nitơ NH4Cl - Chủng vi khuẩn TT3 đƣợc xác định có quan hệ gần với lồi Klebsiella variicola F2R9 dựa phân tích so sánh trình tự 16S rRNA, đƣợc đặt tên Klebsiella variicola TT3 5.2 Kiến nghị - Tiến hành đánh giá khả kích thích sinh trƣởng kiểm sốt sinh học chủng HY9 TT3 điều kiện nhà lƣới - Sử dụng hai chủng vi khuẩn nội sinh để sản xuất chế phẩm sinh học 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Đỗ Tất Lợi (2004) Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Y học Huỳnh Văn Chƣơng, Nguyễn Hữu Hiệp & Lê Xuân Trƣờng (2015) Phân lập xác định số đặc điểm vi khuẩn nội sinh diếp cá (Houttuynia cordata Thunb.) huyện Trần Đề tỉnh Sóc trăng, Việt Nam Tạp chí Cộng nghệ Sinh học 13: 251-257 Lƣơng Đức Phẩm (2004) Công nghệ vi sinh vật NXB Nông nghiệp, Hà Nội Lƣơng Thị Hồng Hiệp & Cao Ngọc Điệp (2011) Phân lập nhận diện vi khuẩn nội sinh cúc xuyến chi (wedelia trilobata (L.) hitche.) kỹ thuật PCR Tạp chí khoa học:18a: 168-176 Nguyễn Hải Vân & Nguyễn thị Minh (2017) Nghiên cứu sử dụng vi khuẩn nội sinh phân lập từ vùng sinh thái khác Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 15(5): 605-618 Nguyễn Hồng Ái Vy & Nguyễn Hữu Hiệp (2018) Phân lập tuyển chọn vi khuẩn nội sinh có khả kháng khuẩn chùm ngây (Moringa oleifera LAM.) huyện Châu Thành, tỉnh Đồng Tháp Tạp chí Khoa học Trƣờng Đại học Cần Thơ 55(2): 82-88 Nguyễn Lân Dũng & Đinh Thúy Hằng (2006) Vi sinh vật NXB Giáo dục Nguyễn Thị Thúy Duy, Nguyễn Hữu Hiệp, Đinh Thị Thái Hà & Đỗ Thị Nhứt (2019) Phân lập tuyển chọn vi khuẩn nội sinh thù lù cạnh (Physalis angulata L.) có khả kháng khuẩn khu vực thành phố cần thơ Tạp chí Khoa học Trƣờng Đại học Cần Thơ 55(4B): 10-20 Nguyễn Văn Giang & Trần Thị Tuyết (2017) Phân lập đánh giá số đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn nội sinh từ rễ nghệ (Curcuma longa L.) Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam 9(82) 10 Nguyễn Văn Giang, Trần Thị Đào & Trịnh Thị Thúy An (2016) Phân lập đánh giá đặc điểm sinh học số chủng vi khuẩn nội sinh rễ 58 nha đam (Aloe vera) Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 14(5): 772778 11 Trần Bảo Trâm, Phạm Hƣơng Sơn, Nguyễn Thị Hiền, Ngô Thị Hoa, Nguyễn Thu Hiền & Nguyễn Huy Hoàng (2016) Phân lập xác định số đặc điểm sinh học vi khuẩn phân giải cellulose từ đất trồng sâm Ngọc Linh tỉnh Quảng Nam Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 14(1): 55-61 12 Trần Trọng Hiếu & Nguyễn Hữu Hiệp (2016) Phân lập khảo sát đặc tính vi khuẩn nội sinh trinh nữ (Mimosa pudica L.) tỉnh Trà Vinh Tạp chí Khoa học Trƣờng Đại học Cần Thơ 46: 23-29 13 Vi sinh vật - Xác định khả sinh tổng hợp axit 3-indol-axetic (IAA) (2015) TCVN 10784:2015 Viện Thổ nhƣỡng Nơng hóa biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lƣờng Chất lƣợng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Tiếng Anh: Apine Onkar A & Jadhav Jyoti P (2011) Optimization of medium for indole-3-acetic acid production using Pantoea agglomerans strain PVM Journal of Applied Microbiology 1105-1235 Bao A., Zhao Z., Ding G., Shi L., Xu F & Cai H (2014) Accumulated Expression Level of Cytosolic Glutamine Synthetase Gene (OsGS1;1 or OsGS1;2) Alter Plant Development and the Carbon-Nitrogen Metabolic Status in Rice PLoS One 9(4): e95581 Bhoonobtong A., Sawadsitang S., Sodngam S & Mongkolthanaruk W (2012) Characterization of Endophytic Bacteria, Bacillus Amyloliquefaciens for Antimicrobial Agents Production International Conference on Biological and Life Sciences Volume: 40 Borah A & Thakur D (2020) Phylogenetic and functional characterization of culturable endophytic actinobacteria associated with Camellia spp for growth promotion in commercial tea cultivars Front Microbiol 11: 318 Chanway C.P (1997) Inoculation of tree roots with plant growth promoting soil bacteria: an emerging technology for reforestation Forest Sci.Volume 43: 99-112 59 Compant S., Duffy B., Nowak J., Clément C & Barka E.A (2005a) Use of plant growth-promoting bacteria for biocontrol of plant diseases: principles mechansms of action and future prospects Appl Environ Microbiol.71: 4951 – 4959 Compant S., Clément C & Sessitsch A (2010) Plant growth-promoting bacteria in the rhizo- and endosphere of plants: Their role, colonization, mechanisms involved and prospects for utilization Soil Biology and Biochemistry 42(5): 669-678 De Bary H.A (1884) Vergleichende morphologie und biologie der pilze mycetozoen und bacterien Leipzig: Verlag von Wilhelm Engelmann de Freitas J.R., Banerjee M.R & Germida J.J (1997) Phosphate solubilizing rhizobacteria enhance the growth and yield but not phosphorus uptake of canola (Brassica napus) Biol Fertil Soils 24: 358 – 364 10 Dhungana S A & Itoh K (2019) Effects of Co-Inoculation of Indole-3Acetic Acid-Producing and -Degrading Bacterial Endophytes on Plant Growth Horticulturae 1-9 11 El-Deep B A., Salih B., Gherbawy Y & Elhariry H (2012) Characterization of endophytic bacteria associated with rose plant (Rosa damascena trigintipeta) during flowering stage and their plant growth promoting traits Journal of plant interactions 7(3): 248-258 12 Masoomi-Aladizgeh F., Leila J., Reza K N & Ali A (2016) A Simple and Rapid System for DNA and RNA Isolation from Diverse Plants Using Handmade Kit Doi:10.1038/protex.2016.015 13 Gaonkar T., Kumar N P., Garg S & Bhosle S (2012) SiderophoreProducing Bacteria from a Sand Dune Ecosystem and the Effect of Sodium Benzoate on Siderophore Production by a Potential Isolate ScientificWorldJournal 2012: 857249 14 Hardoim P R., Overbeek L S., Berg G., Pirttilä A M., Compant S., Campisano A., Döring M & Sessitsch A (2015) The Hidden World within Plants: Ecological and Evolutionary Considerations for Defining Functioning of Microbial Endophytes Microbiol Mol Biol Rev 79(3): 293320 60 15 Saad El-Din H (2017) Plant grownth-promoting activities for bacterial and fungal endophytes isolated from medicinal plant of Teucrium polium L J Adv Res 8(6): 687-695 16 Jasim B., Joseph Aswathy A., John C J., Mathew J & Radhakrishnan E K (2014) Isolation and characterization of plant growth promoting endophytic bacteria from the rhizome of Zingiber officinale Biotech 4(2): 197-204 17 Kandel S L., Joubert P M & Doty S L (2017) Bacterial Endophyte Colonization and Distribution within Plants Microorganisms 5(4): 77 18 Khamna S., Yokota A., Peberdy J F & Lumyong S (2010) Indole-3-acetic acid production by Streptomyces sp isolated from some Thai medicinal plantrhizosphere soils EurAsia Journal of Biosciences 4: 23-32 19 Koser S A (1923) Utilization of the salts of organic acids by the colonaerogenes group J Bacteriol 8:493 20 Kumari S., Prabha C., Singh A., Kumari S & Kiran S (2018) Optimization of Indole-3-Acetic Acid Production by Diazotrophic B subtilis DR2 (KP455653), Isolated from Rhizosphere of Eragrostis cynosuroides International Journal of Pharma Medicine and Biological Sciences 7(2): 2027 21 Kushwaha P., Kashyap P L., Srivastava A K & Tiwari R K (2020) Plant growth promoting and antifungal activity in endophytic Bacillus strains from pearl millet (Pennisetum glaucum) Braz J Microbiol 51(1): 229-241 22 Liaqat F & Eltem R (2016) Identification and characterization of endophytic bacteria isolated from in vitro cultures of peach and pear rootstocks Biotech 6(2): 120 23 Lodewyckx C., Vangronsveld J., Porteous F., Moore E.R.B., Taghavi S., Mezgeay M & van der Lelie D (2002) Endophytic bacteria and their potential applications Crit Rev Plant Sci 21:583-606 24 Louden B.C., Haarmann D & Lynne A.M (2011) Use of Blue Agar CAS Assay for Siderophore Detection J Microbiol Biol Educ 12(1): 51-53 25 Maiti R., Jana D., Das U.K & Ghosh D (2004) Antidiabetic effect of aqueous extract of seed of Tamarindus indica in streptozotocininduced diabetic rats J Ethnopharmacol 92: 85-91 61 26 Mohite B (2013) Isolation and characterization of indole acetic acid (IAA) producing bacteria from rhizospheric soil and its effect on plant growth Journal of Soil Science and Plant Nutrition 13(3): 638-649 27 Mukherjee A., Bhattacharjee P., Das R., Pal A & Paul A K (2017) Endophytic bacteria with plant growth promoting abilities from Ophioglossum reticulatum L AIMS Microbiol.3(3): 596-612 28 Murugappan R M., Begum S.B & Roobia R.R (2013) Symbiotic influence of endophytic Bacillus pumilus on growth promotion and probiotic potential of the medicinal plant Ocimum sanctum Symbiosis 60(2): 91-99 29 Muthukumar A., Udhayakumar R & Naveenkumar R (2017) Role of bacteria endophytes in plant disease control Endophytes: Crop productivity and Protection Chapter 7: 133-161 30 Nalini G., Rao Y R & Tirupati K V (2014) Effect of Different Carbon and Nitrogen Sources on Growth and Indole Acetic Acid Production by Rhizobium Species Isolated from Cluster Bean [Cyamopsis tetragonoloba (L.)] British Microbiology Research Journal 4(11): 1189-1197 31 Oliveira Marcelo N.V., Santos Thiago M.A., Vale Helson M.M., Delvaux Júlio C., Cordero Alexander P., Ferreira Alessandra B., Miguel Paulo S.B., Tótola Marcos R., Costa Maurício D., Moraes Célia A & Borges Arnaldo C (2013) Endophytic microbial diversity in coffee cherries of Coffea arabica from Southeastern Brazil Canadian journal of microbiology 59(4): 221-230 32 Oteino N., Lally R D., Kiwanuka S., Lloyd A., Ryan D., Germaine K J & Dowling D N (2015) Plant growth promotion induced by phosphate solubilizing endophytic Pseudomonas isolates Front Micobiol 6: 745 pages 33 Panigrahi S., Mohanty S & Rath C C (2020) Characterization of endophytic bacteria Enterobacter cloacae MG00145 isolated from Ocimum sanctum with Indole Acetic Acid (IAA) production and plant growth promoting capabilities against selected crops South African Journal of Botany 134: 17-26 62 34 Patil Nita B., Gajbhiye M., Ahiwale S S., Gunjal A B & Kapadnis B P (2011) Optimization of Indole 3-acetic acid (IAA) production byAcetobacter diazotrophicus L1 isolated from Sugarcane International Journal of Environmental Sciences 2(1): 295-302 35 Petrini O (1991) Fungal endophytes of tree leaves, p 179-197 In Andrews JH, Hirano SS (ed), Microbial ecology of leaves Springer-Verlag, New York, NY doi:10.1007/978-1-4612-3168-4-9 36 Rajendran G., Sing F., Desai A J & Archana G (2008) Enhanced growth and nodulation of pigeon pea by co-inoculation of Bacillus strains with Rhizobium spp Biores Technol 99:4544 – 4550 37 Ryan R P., Germaine K., Franks A., Ryan D J & Dowling D N (2008) Bacterial endophytes: Recent developments and applications 278(1): 1-9 38 Schulz B J & Boyle C (2006) What are endophytes? Microbial Root Endophytes.1-13 Springer-Verlag, Berlin 39 Shang X., Pan H., Li M., Miao X & Ding H (2011) Lonicera japonica Thunb: Ethnopharmacology, phytochemistry and pharmacology of an important traditional Chinese medicine J Ethnopharmacol 138(1):1-21 40 Sharon J A, Hathwaik L.T., Glenn G.M., Imam S H & Lee C.C (2016) Isolation of efficient phosphate solubilizing bacteria capable of enhancing tomato plant growth Journal of soil science and plant nutrition versión Online ISSN 0718-9516 41 Shehata Hanan R., Dumigan C., Watts S & Raizada M N (2017) An endophytic microbe from an unusual volcanic swamp corn seeks and inhabits root hair cells to extract rock phosphate Sci Rep 7: 13479 42 Silva C.F., Vitorino L.C., Mendoca M.A.C, Araújo W.L., Douradoc M.N., Albuquerqued L.C., Soarese M.A., Souchie E.L (2019) Screening of plant growth-promoting endophytic bacteria from the roots of the medicinal plant Aloe vera South African Journal of Botany Volume 134, pages: 3-16 43 Singh A K., Sharma R K., Sharma V., Singh T., Kumar R & Kumari D (2017) Isolation, morphological identification and in vitro antibacterial activity of endophytic bacteria isolated from Azadirachta indica (neem) leaves Vet World 10(5): 510–516 63 44 Spaepen S & Vanderleyden J (2011) Auxin and Plant-Microbe Interactions Cold Spring Harbor perspectives in biology 3(4): a001438 45 Stępniewska Z and Kuźniar A (2013) Endophytic microorganisms promising applications in bioremediation of greenhouse gases Appl Microbiol Biotechnol 97(22): 9589-9596 46 Strobel G & Daisy B (2003) Bioprospecting for Microbial Endophytes and Their Natural Products Microbiol Mol Biol Rev 67(4): 491-502 47 Sudha M., Shyamala G R., Prbhavati P., Astapritya P., Yamuna D Y & Saranya A (2012) Production and optimization of Indole acetic acid by indigenous microflora using agro waste as substrate Pakistan Journal of Biological Sciences 15, 39-43 48 Suleman M., Yasmin S., Rasul M., Yahya M., Atta B M & Mirza M S (2018) Phosphate solubilizing bacteria with glucose dehydrogenase gene for phosphorus uptake and beneficial effects on wheat PloS One 13(9): e0204408 49 Suliasih H & Widawati S (2020) Isolation of Indole Acetic Acid (IAA) producing Bacillus siamensis from peat and optimization of the culture conditions for maximum IAA production IOP Conference Series: Earth and Environmental Science 572 012025 50 Theologis A & Ray P M.(1982) Early auxin-regulated polyadenylylated mRNA sequences in pea stem tissue Proc Natl Acad Sci U S A 79(2): 418– 421 51 Verma S C., Ladha J K & Tripathi A K (2001) Evaluation of plant growth promoting and colonization ability of endophytic diazotrophs from deep water rice Journal of Biotechnology 91(2-3): 127- 141 52 Zhao L., Xu Y., Xin-He L., Shan C., Deng Z & Ji Y (2015) Screening and characterization of endophytic Bacillus and Paenibacillus strains from medicinal plant Lonicera japonica for use as potential plant growth promoters Braz J Microbiol 46(4): 977-989 64 PHỤ LỤC Kết đƣờng chuẩn IAA Kết đƣờng chuẩn phosphate 65 Khảo sát sinh tổng hợp IAA chủng vi khuẩn nội sinh phân lập đƣợc 66 Kết ảnh hƣởng nồng độ L-Tryptophan đến khả sinh IAA Kết ảnh hƣởng pH đến khả sinh IAA 67 Kết ảnh hƣởng thời gian đến khả sinh IAA Kết ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả sinh IAA 68 Kết ảnh hƣởng nguồn cacbon đến khả sinh 69 Kết ảnh hƣởng nguồn nitơ đến khả sinh 10 Khả sinh enzyme ngoại bào - Protease: 70 - Cellulase: - Amylase: 71