Nhân giống chanh dây tím (passiflora edulis sims ) đài nông f1 bằng nuôi cấy mô (khóa luận tốt nghiệp)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC *** KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NHÂN GIỐNG CHANH DÂY TÍM (Passiflora edulis Sims.) ĐÀI NÔNG F1 BẰNG NUÔI CẤY MÔ Người thực : PHAN THỊ QUẾ Lớp : K62- CNSHA Giáo viên hướng dẫn : PGS TS NGUYỄN THANH HẢI ThS NGUYỄN THỊ THƠM Hà Nội – 2/2021 LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan khóa luận tốt nghiệp “NHÂN GIỐNG CHANH DÂY TÍM (Passiflora edulis Sims) ĐÀI NƠNG F1 BẰNG NI CẤY MƠ” cơng trình nghiên cứu thân Những phần sử dụng tài liệu tham khảo đồ án nêu rõ phần tài liệu tham khảo Các số liệu, kết trình bày đồ án hoàn toàn trung thực, sai em xin chịu hoàn toàn trách nhiệm chịu kỷ luật Bộ môn Học viên đề Hà Nội, ngày tháng … năm… Người cam đoan Phan Thị Quế i LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận này, em xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: PGS TS Nguyễn Thanh Hải ThS Nguyễn Thị Thơm, tận tình hướng dẫn suốt trình viết Khóa luận tốt nghiệp Em chân thành cảm ơn quý thầy, cô khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình truyền đạt kiến thức năm em học tập Với vốn kiến thức tiếp thu q trình học khơng tảng cho q trình nghiên cứu khóa luận mà hành trang quý báu để em bước vào đời cách vững tự tin Em chân thành cảm ơn Ban giám đốc Học viện Nông nghiệp Việt Nam cho phép tạo điều kiện thuận lợi để em thực tập Công ty Cuối em kính chúc q thầy, dồi sức khỏe thành công nghiệp cao quý Đồng kính chúc cơ, chú, anh, chị Cơng ty dồi sức khỏe, đạt nhiều thành công tốt đẹp công việc ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung Chanh dây tím 2.1.1 Nguồn gốc phân bố 2.1.2 Vị trí phân loại 2.1.3 Đặc điểm hình thái 2.1.4 Điều kiện ngoại cảnh 2.1.5 Thành phần hóa học chanh dây tím 2.1.6 Ứng dụng chanh dây tím 2.2 Tình hình sản xuất 2.2.1 Tình hình sản xuất giới 2.2.2 Tình hình sản xuất Việt Nam 2.3 Các nghiên cứu Chanh dây PHẦN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu iii 3.1.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 10 3.2 Nội dung nghiên cứu 10 3.3 Điều kiện nuôi cấy 11 3.4 Các tiêu theo dõi 12 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 13 4.1 Giai đoạn khử trùng mẫu 13 4.2 Giai đoạn nhân nhanh 15 4.2.1 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân chồi Chanh dây tím 16 4.2.2 Ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân chồi Chanh dây tím 17 4.2.3 Ảnh hưởng nhóm tổ hợp BAP GA3 đến khả nhân nhanh kéo dài chồi 19 4.3 Giai đoạn tạo hoàn chỉnh 21 4.3.1 Ảnh hưởng IBA tới hình thành rễ Chanh dây tím 22 4.3.2 Ảnh hưởng NAA tới khả rễ Chanh dây tím 23 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 25 5.1 Kết luận 25 5.2 Kiến nghị 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CT : Công thức ĐC : Đối chứng MS : Murashige and Skoog BAP : 6-Benzylaminopurine NAA : α-Naphthaleneacetic acid GA3 : Acid gibberellic KI : Kinetine IBA : Indole – – butyric acid v DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Thành phần môi trường MS Bảng 4.1 Ảnh hưởng loại hóa chất, nồng độ hóa chất thời gian khử trùng đến kết nghiên cứu 14 Bảng 4.2 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân chồi Chanh dây tím (sau tuần ni cấy) 16 Bảng 4.3 Ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân chồi Chanh dây tím (sau tuần nuôi cấy) 18 Bảmg 4.4 Ảnh hưởng nhóm tổ hợp BAP GA3 đến khả nhân nhanh kéo dài chồi (sau tuần nuôi cấy) 20 Bảng 4.5 Ảnh hưởng IBA tới hình thành rễ Chanh dây tím (sau tuần ni cấy) 22 Bảng 4.6 Ảnh hưởng NAA tới hình thành rễ Chanh dây tím (sau tuần ni cấy) 23 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cây Chanh dây tím Hình 2.2 Hoa Chanh dây tím Hình 2.3 Quả Chanh dây tím Hình 4.1 Chồi sau 15 ngày khử trùng 15 Hình 4.2 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân chồi 17 Hình 4.3 Ảnh hưởng KI đến khả nhân chồi 19 Hình 4.4 Ảnh hưởng BAP + GA3 đến khả nhân nhanh chồi 21 Hình 4.5 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ 23 Hình 4.6 Ảnh hưởng NAA đến khả rễ 24 vii PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Trong năm gần đây, người tiêu dùng có xu hướng chuyển từ nước có ga sang sử dụng loại nước trái tự nhiên nên nhu cầu nguồn nguyên liệu trái ngày tăng Trong đó, nướp ép chanh dây nhiều người ưa chuộng vị chua dễ chịu hương thơm lạ Hiện nay, chanh dây đến với vai trò nước giải khát mà nhiều giá trị cho ngành cơng nghiệp thực phẩm, dược phẩm, hóa mĩ phẩm hoa đẹp với mục đích trồng làm cảnh Đây xem loại trồng có thu nhập cao, ổn định xen canh với nhiều trồng khác nên nhu cầu giống tăng nhanh Cây chanh dây trồng hạt, giâm hom nuôi cấy mô Trồng hạt phương pháp phổ biến, dễ dàng tốn nhiều thời gian, không đồng nhất, không giữ đặc tính mẹ lâu Giâm hom có ưu điểm thời gian nhân giống rút ngắn, sớm khó tạo nguồn giống bệnh, khó thu nguồn giống tốt số hom thu có hạn Do đó, phương pháp nuôi cấy mô kĩ thuật định khắc phục đặc tính tốt mẹ, giá thành rẻ so với giống nhập phù hợp với túi tiền người nơng dân Đó lý em tiến hành nghiên cứu đề tài “NHÂN GIỐNG CHANH DÂY TÍM (Passiflora edulis Sims.) ĐÀI NÔNG F1 BẰNG NUÔI CẤY MÔ” với mục tiêu nhằm nghiên cứu nhân giống in vitro chanh dây với hệ số nhân chồi cao 1.2 Mục đích Hồn thiện quy trình nhân giống chanh dây tím ni cấy mơ 1.3 u cầu Xác định loại hóa chất, nồng độ hóa chất thời gian khử trùng đến mẫu cấy Xác định ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin (KI, GA3, BAP) đến khả phát sinh hình thái nhân nhanh mẫu cấy Xác định ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng thuộc nhóm auxin (IAA, IBA, NAA) đến khả rễ mẫu cấy PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Giai đoạn khử trùng mẫu Trong nuôi cấy mô tế bào khâu vào mẫu khâu quan trọng định thành cơng hay thất bại quy trình Mơi trường dùng cho ni cấy mơ tế bào thực vật có chứa đường, khống vitamin, thích hợp cho phát triển vi khuẩn loại nấm mốc Hơn nữa, tốc độ phát triển nấm mốc loại vi khuẩn nhanh nhiều so với tốc độ phát triển tế bào thực vật Các mô tế vào thực vật sống mơi trường bị nhiễm khuẩn Do mơi trường dùng cho nuôi cấy mô tế bào thực vật phải đảm bảo điều kiện vơ trùng tuyệt đối, thích hợp cho mơ tế bào phát triển Cùng với đó, vật liệu ban đầu đem vào nuôi cấy khởi đầu phải đảm bảo vô trùng Nếu môi trường nuôi cấy vật liệu ban đầu đem vào nuôi cấy bị nhiễm vài bào tử nấm vi khuẩn sau vài ngày tồn bề mặt môi trường nuôi cấy mẫu cấy bị phủ đầy nấm Khi đó, thí nghiệm phải dừng lại điều kiện mô tế bào phát triển chết dần Mục tiêu thí nghiệm tìm cơng thức khử trùng tối ưu đạt yêu cầu sau: Tỉ lệ mẫu nhiễm thấp, tỉ lệ sống cao, mẫu bật chồi tốt Hiện nay, phương pháp hóa học sử dụng phổ biến để vơ trùng mẫu cấy Hóa chất chọn dùng cho q trình vơ trùng mẫu cấy chất có khả diệt vi sinh vật cao, khơng có có độc tính tế bào thực vật để đảm bảo sau tiến hành khử trùng mẫu cấy vô trùng không làm tổn thương đến tế bào Một số hóa chất sử dụng để khử trùng mẫu cấy nuôi cấy mô như: NaClO, Ca(OCl)2, HgCl2, H2O2, AgNO3, chất kháng sinh Thí nghiệm sử dụng hóa chất khử trùng HgCl2 vi nồng độ khác thời gian 6, 10 phút Ca(OCl)2 với nồng độ khác thời gian 25 30 phút thu kết bảng: 13 Bảng 4.1 Ảnh hưởng loại hóa chất, nồng độ hóa chất thời gian khử trùng đến kết nghiên cứu Hóa chất Nồng độ Thời gian Tỷ lệ mẫu nhiễm Tỷ lệ mẫu bật chồi (phút) (%) (%) 87,4 3,0 79,2 9,6 68,9 27,4 10 59,2 17,0 85,2 2,2 65,2 29,6 10 58,5 12,6 10 92,6 3,0 15 83,0 4,4 20 73,3 3,0 ĐC HgCl 0,05% 0.1% 0,15% Canxihypoc 5% 25 63,0 5,2 lorit 10% 30 54,1 3,0 Từ bảng kết cho thấy kết vào mẫu dùng HgCl đạt kết tốt so với Ca(ClO) Tỷ lệ nhiễm HgCl2 0.15% cao, lên đến 92,6% Theo Trần Hiếu, Hoàng Thanh Tùng, Cao Đăng Nguyên, Dương Tấn Nhựt (2018) nghiên cứu phương pháp khử trùng cho mẫu chanh dây tím HgCl 0.15% tỷ lệ nhiễm 73,33% thấp so với thí nghiệm Tỷ lệ bật chồi cao dùng Ca(ClO) 5,2% thấp 17,5% so với tỷ lệ bật chồi cao dùng HgCl 29,6% Vì vậy, nên sử dụng HgCl để khử trùng vào mẫu 14 Hình 4.1 Chồi sau 15 ngày khử trùng 4.2 Giai đoạn nhân nhanh Các nghiên cứu giai đoạn nhằm tìm mơi trường thích hợp cho q trình nhân nhanh chồi chanh dây tím Đây giai đoạn định hiệu tốc độ công nghệ nhân giống Giai đoạn cần đạt u cầu: - Tìm mơi trường thích hợp để tạo hệ số nhân nhanh cao - Quy trình nhân phải cho hiệu kinh tế cao (tiết kiệm tối đa nguyên liệu, sử dụng môi trường đơn giản, hóa chất giá hợp lý, dễ làm) - Các chồi tạo phải bệnh, đồng mặt di truyền, có sức sinh trưởng cao, phát triển khỏe, khơng biến dị Việc nhân nhanh chồi xảy mơi trường có khơng có chất điều hịa sinh trưởng Thơng thường, chất điều hịa sinh trưởng đóng vai trị quan trọng việc kích thích phát sinh hình thái tăng hệ số nhân chồi Trong trình thực tác động chất điều hòa sinh trưởng nồng độ khác nghiên cứu nhằm tìm nồng độ thích hợp để hệ số nhân cao 15 4.2.1 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân chồi Chanh dây tím Trong nuôi cấy mô tế bào thực vật, BAP Cytokinin tổng hợp có tác dụng kích thích phân chia tế bào, phân hóa chồi kích thích nảy mầm chồi ngủ Để nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP đến hệ số nhân chồi, mẫu đoạn thân mang mắt ngủ đỉnh chồi có kích thước tương đối cấy vào mơi trường MS có bổ sung BAP với nồng độ thay đổi 0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 (mg/l) Sau tuần theo dõi, kết trình bày bảng 4.2 Bảng 4.2 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân chồi Chanh dây tím (sau tuần ni cấy) Nồng độ BAP Hệ số nhân Chiều cao (mg/l) (chồi/cụm) (cm) CT 0,0 3,20 3,00 + CT 0,5 5,20 5,50 ++ CT 1,0 6,30 6,30 +++ CT 1,5 5,80 5,60 ++ CT 2,0 5,90 5,70 ++ Công thức Nhận xét Kết từ bảng 4.2 cho thấy: Sau tuần nuôi cấy, bổ sung BAP vào môi trường ni cấy tỷ lệ mẫu tạo chồi đạt 100%, hệ số nhân chồi cao công thức đối chứng với hệ số dao động từ 5,2 chồi/cụm đến 6,3 chồi/cụm, chiều cao trung bình chồi dao động từ 5,5 cm đến 6,3 cm Trong có cơng thức cho hệ số nhân cao công thức 1,0mg/l với hệ số nhân 6,3 chồi/cụm, chiều cao chồi 6,3cm chồi xanh khỏe phát triển tốt Trên môi trường MS có bổ sung BAP với nồng độ tăng dần từ 0,5 đến 2,0mg/l cho hệ số nhân chồi chiều cao Chanh dây tím có xu hướng tăng dần từ 0,0 đến 1,0 mg/l xong giảm dần từ 1,0 đến 2,0 mg/l 16 So sánh với kết nghiên cứu Lê Văn Tường Huân, Phạm Quang Vũ (2010) tạo cụm chồi Passiflora edulis Sims từ đoạn thân mang chồi nách (có nguồn gốc in vitro) môi trường MS + 0.5 mg/l BA lượng chồi thu (3.95 chồi/mẫu) Vậy với mơi trường MS có bổ sung BAP với nồng độ 1,0 mg/l kết tốt cho nhân nhanh chồi Chanh dây tím với hệ số nhân chồi cao 6,3 chồi/cụm, chiều cao chồi 6,3 cm, chồi phát triển tốt Hình 4.2 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân chồi 4.2.2 Ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân chồi Chanh dây tím Kinetin thành phần nhóm hợp chất gọi Cytokinin Đây lớp nhân tố điều hịa sinh trưởng thực vật Ở lồi thực vật, Kinetin thúc đẩy phân chia tế bào hoạt động quy trình sinh trưởng biệt hóa tế bào Chức chất kháng oxi hóa, ngăn chặn tổn thương oxi hóa gây gốc tự Kinetin thường sử dụng ni cấy mơ thực vật để kích thích hình thành mơ sẹo để tái tạo chồi từ mô sẹo Việc bổ sung Kinetin hoạt hóa q trình tổng hợp acid nucleic protein, ảnh hưởng rõ rệt lên hình thành phân hóa quan thực vật 17 Ở thí nghiệm nghiên cứu tái sinh chồi từ thân mang mắt ngủ Chanh dây tím nồng độ Kinetin khác để tìm nồng độ thích hợp để nhân nhanh chồi Chanh dây tím Bảng 4.3 Ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân chồi Chanh dây tím (sau tuần ni cấy) Cơng thức Nồng độ KI (mg/l) Hệ số nhân chồi (chồi/cụm) Chiều cao chồi (cm) Nhận xét CT 0,0 3,00 3,20 + CT 1,0 4,37 5,30 ++ CT 1,5 4,37 6,50 ++ CT 2,0 5,31 5,50 +++ CT 2,5 5,49 5,90 +++ Ghi chú: +: Chồi nhỏ, phát triển chiều cao ++: Chồi phát triển ổn định, độ đồng thấp +++: Chồi phát triển tốt, độ đồng cao Sau tuần nuôi cấy, bổ sung KI vào mơi trường ni cấy tỷ lệ mẫu tạo chồi đạt 100%, hệ số nhân chồi cao công thức đối chứng với hệ số nhân chồi dao động từ 4,37 chồi/cụm đến 5,49 chồi/mẫu, chiều cao trung bình chồi dao động từ 5,3 cm đến 6,5 cm Cụ thể sau: Ở công thức đối chứng với môi trường MS không bổ sung KI có phản ứng tạo chồi, hệ số nhân chồi thấp công thức chồi/cụm, chiều cao chồi 3,2 cm Khi bổ sung KI vào môi trường nuôi cấy với nồng độ KI tăng dần từ 1,0 – 2,5 mg/l cho hệ số nhân chồi tăng cao Ở công thức với nồng độ KI 1,0 mg/l cho hệ số nhân chồi 4,37 chồi/cụm, chiều cao chồi 5,3 cm, chồi phát triển ổn định, độ đồng thấp Công thức với nồng độ KI 1,5 mg/l cho hệ số nhân chồi 4,37 chồi/cụm, chiều cao chồi 6,5 cm, chồi phát triển ổn định, độ đồng thấp 18 Công thức nồng độ KI 2,0 mg/l cho hệ số nhân chồi tương ứng 5,31 chồi/cụm, chiều cao chồi 5,5 cm, chồi phát triển tốt, độ đồng cao Công thức nồng độ KI 2,5 mg/l cho hệ số nhân chồi tương ứng 5,49 chồi/cụm, chiều cao chồi 5,9 cm, chồi phát triển tốt, độ đồng cao Trên mơi trường MS có bổ sung KI với nồng độ tăng dần từ 1,0 – 2,5 mg/l cho hệ số nhân chồi tăng dần tương ứng 4,37 – 5,49 cm Điều cho thấy KI có ảnh hưởng rõ rệt đến nhân nhan chồi Vậy với mơi trường MS có bổ sung KI với nồng độ 2,5 mg/l kết tốt cho nhân nhanh chồi Chanh dây tím với hệ số nhân chồi cao 5,49 chồi/cụm, chiều cao chồi 5,9 cm, chồi phát triển tốt Hình 4.3 Ảnh hưởng KI đến khả nhân chồi 4.2.3 Ảnh hưởng nhóm tổ hợp BAP GA3 đến khả nhân nhanh kéo dài chồi Kết hợp nhóm Cytokinin Gibberellin có ảnh hưởng tốt đến số lồi cây, để tìm hiểu cơng thức nhân nhanh tốt cho Chanh dây tím, tơi tiến hành thí nghiệm ảnh hưởng BAP GA3, BAP vơi nồng độ tốt thí nghiệm 1,0 mg/l GA3 với dải nồng độ 0,5 – 2,0 mg/l 19 Bảmg 4.4 Ảnh hưởng nhóm tổ hợp BAP GA3 đến khả nhân nhanh kéo dài chồi (sau tuần nuôi cấy) Hệ số nhân Công thức BAP (mg/l) GA3 (mg/l) chồi (chồi/cụm) Chiều cao chồi (cm) Nhận xét CT 0,0 6,30 6,30 +++ CT 0,5 5,49 5,30 +++ 1,0 6,33 6,50 +++ CT 1,5 5,89 5,50 +++ CT 2,0 5,71 5,90 +++ CT 1,0 Qua bảng 4.4 ta thấy kết hợp BAP GA3 sau tuần ni cấy hệ số nhân chồi cao so với hệ số nhân chồi BAP; hệ số nhân chồi dao động từ 5,49 – 6,33 chồi/cụm, chiều cao trung bình dao động từ 5,3 – 6,5 cm Cụ thể sau: Ở công thức đối chứng với môi trường MS + 1,0 mg/l không bổ sung thêm GA3 có hệ số nhân chồi cao 6,3 chồi/cụm, chiều cao chồi 6,3 cm Khi bổ sung GA3 vào môi trường nuôi cấy với nồng độ GA3 tăng dần từ 0,5 – 2,0 mg/l cho hệ số nhân chồi cao Ở công thức với nồng độ GA3 0,5 mg/l cho hệ số nhân chồi 5,49 chồi/cụm, chiều cao chồi 5,3 cm Công thức với nồng độ GA3 1,0 mg/l cho hệ số nhân chồi cao 6,33 chồi/cụm, chiều cào chồi 6,5 cm Ở công thức với nồng độ GA3 1,5 mg/l cho hệ số nhân chồi tương ứng 5,89 chồi/mẫu, chiều cao chồi 5,5 cm Ở công thức với nồng độ GA3 2,0 mg/l cho kết hệ số nhân chồi 5,71 chồi/cụm, chiều cao chồi tương ứng 5,9 cm Ở công thức, chồi phát triển tốt với độ đồng cao Vậy với môi trường MS có bổ sung kết hợp BAP GA3, công thức bổ sung 1,0 mg/l BAP 1,0 mg/l GA3 cho tỷ lệ tái sinh chồi Chanh 20 dây tím cao so với nồng độ cịn lại, với hệ số nhân chồi 6,33 chồi/cụm, chiều cao chồi 6,5 cm; chồi sinh trưởng phát triển tốt, độ đồng cao Hình 4.4 Ảnh hưởng BAP + GA3 đến khả nhân nhanh chồi 4.3 Giai đoạn tạo hoàn chỉnh Sự phát triển khỏe mạnh rễ nuôi cấy mô điều kiện thiết yếu định đến tỷ lệ sống, sinh trưởng phát triển tốt đưa ngồi nhà lưới, vườn ươm Do để giúp sau nuôi môi trường ni cấy ngồi mơi trường tự dưỡng bên ngồi có tỷ lệ sống cao, phát triển tốt việc nghiên cứu tìm mơi trường phù hợp cho rễ, tạo hoàn chỉnh cần thiết Ở giai đoạn người ta thường bổ sung vào mơi trường ni cấy Auxin nhóm hocrmon thực vật quan trọng có chức tạo rễ phụ từ mơ ni cấy Chính vậy, thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến việc rễ, tạo hoàn chỉnh 21 4.3.1 Ảnh hưởng IBA tới hình thành rễ Chanh dây tím IBA có vai trò điều chỉnh phân chia tế bào, tăng trưởng tế bào, sinh tổng hợp ethylene, hình thành rễ, tượng ưu ngọn, tính định hướng thực vật Bảng 4.5 Ảnh hưởng IBA tới hình thành rễ Chanh dây tím (sau tuần ni cấy) Hóa chất Nồng độ (mg/l) Số mẫu/lặp Chiều dài rễ (cm) Số rễ/chồi 45 3,30 3,20 0,25 45 5,30 5,40 0,5 45 5.70 6,00 0,75 45 5,60 5,80 ĐC IBA Chỉ số đo đếm Từ kết bảng 4.5 cho thấy chanh dây tím hình thành rễ môi trường MS không bổ sung auxin, nhiên số lượng rễ/chồi thấp, rễ ngắn yếu IBA có ảnh hưởng tốt đến khả rễ chanh dây tím Tất cơng thức mơi trường có bổ sung IBA cho số lượng rễ/chồi cao công thức đối chứng từ 1,5 đến lần, chiều dài rễ cải thiện đáng kể Khi bổ sung IBA từ nồng độ 0,25 đến 0,75 mg/l số rễ/ chồi chiều dài rễ chanh dây tím có xu hướng tăng, nhiên bổ sung IBA với nồng độ 0,75 mg/l số rễ/ chồi chiều dài rễ lại giảm xuống Như vậy, nồng độ IBA cao ức chế khả tạo rễ chanh dây tím Nồng độ IBA tốt cho rễ chanh dây tím 0,5 mg/l 22 Hình 4.5 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ 4.3.2 Ảnh hưởng NAA tới khả rễ Chanh dây tím NAA chất điều tiết sinh trưởng thược nhóm Auxin thành phần sản phẩm kích rễ Do NAA nơng nghiệp thường sử dụng trình nhân giống, thân cắt kích thích rễ Trong ni cấy mơ thực vật, NAA kết hợp với hormone khac Cytokinin để thêm vào mơi trường có thành phần dinh dưỡng đủ cung cấp cho Bảng 4.6 Ảnh hưởng NAA tới hình thành rễ Chanh dây tím (sau tuần ni cấy) Hóa chất Nồng độ (mg/l) Chỉ tiêu đo đếm Chiều dài rễ Số rễ /chồi 45 3,30 3,20 0,25 45 4,10 5,90 0,5 45 4,20 5,60 0,75 45 3,90 4,00 ĐC NAA Số mẫu/lặp Các cơng thức mơi trường có bổ sung NAA cho tỉ lệ rễ/ chồi chiều dài rễ cao so với công thức đối chứng Ở công thức bổ sung 0,25 23 mg/l NAA cho số rễ chồi cao nhất, nhiên chiều dài rễ chất lượng rễ lại so với công thức Công thức ( bổ sung 0,75 mg/l NAA) cho rễ Từ thí nghiệm nhận thấy IBA NAA có ảnh hưởng tốt đến khả rễ chanh dây tím Tuy nhiên mơi trường bổ sung IBA cho hiệu rễ tốt môi trường bổ sung NAA Môi trường rễ tốt cho triệu chng mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l IBA Hình 4.6 Ảnh hưởng NAA đến khả rễ 24 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết thí nghiệm tiết hành, rút kết luận sau: - Công thức khử trùng hiệu HgCl 1,0% thời gian phút có tỷ lệ bật chồi 29,6%, tỷ lệ nhiễm 65,2% - Môi trường nhân nhanh môi trường MS bổ sung 1,0 mg/l BAP cho hệ số nhân chồi 6,30 chồi/mẫu - Môi trường nhân nhanh môi trường MS bổ sung 2,5 mg/l KI cho hệ số nhân chồi 5,49 chồi/mẫu - Môi trường nhân nhanh môi trường MS bổ sung tổ hợp 1,0 mg/l BAP 1,0 mg/l GA3 cho hệ số nhân chồi 6,33 chồi/mẫu - Môi trường rễ môi trường MS bổ sung 0,5 mg/l IBA Số rễ/chồi 6,00 rễ/chồi - Môi trường rễ môi trường MS bổ sung 0,5 mg/l NAA Chiều dài rễ 4,20cm số rễ/chồi 5,60 → Môi trường phù hợp cho nhân nhanh môi trường MS bổ sung tổ hợp 1,0 mg/l BAP 1,0 mg/l GA3 cho hệ số nhân chồi 6,33 chồi/mẫu → Môi trường phù hợp cho rễ môi trường MS bổ sung 0,5 mg/l IBA với số rễ/chồi 6,00 rễ/chồi 5.2 Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu giai đoạn nhân nhanh nhằm nâng cao hệ số nhân chồi, tiến hành tổ hợp với nhóm auxin để tìm mơi trường có khả nhân chồi chất lượng chồi tốt - Nghiên cứu giai đoạn tạo hồn chỉnh để tìm cơng thức tốt cho rễ chanh dây tím - Tiến hành nghiên cứu giai đoạn vườn ươm giá thể để xác định chế độ chăm sóc phù hợp cho chanh dây tím 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Lê Văn Hồng 2008, Cơng nghệ ni cấy mơ tế bào thực vật, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Lê Văn Tường Huân, Phạm Quang Vũ 2010, Nghiên cứu nhân giống vơ tính in vitro chanh dây (Passiflora edulis Sims.) sử dụng đoạn thân mang chồi nách, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học (Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam), Tập 8, 3:379385 Lê Đình Bích, Trần Văn Ơn (2005), Thực vật học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Tr.243 Phạm Quang Vũ (2008), Nghiên cứu tạo cụm chồi tạo rễ điều kiện in vitro chanh dây (Passiflora edulis Sims.), Luận văn thạc sĩ khoa học sinh học, trường Đại học Khoa học Huế Trần Hiếu, Hoàng Thanh Tùng, Cao Đăng Nguyên, Dương Tấn Nhựt, Tạo nguồn mẫu in vitro cho giống chanh dây tím (Passiflora edulis Sims.) vàng (Passiflora edulis f flavicarpa), Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên; ISSN 1859–1388 Tập 127, Số 1C, 2018, Tr 71–84 Tài liệu tiếng anh Guzzo F, Ceoldo S, Andreetta F, Levi M 2004, In vitro culture from mature seeds of Passiflora species Sci Argic (Piracicaba, Braz), v.61, 1:108-113 Jardim Rosa YB, Monte Bello CC & Dornelas MC 2016, In vitro organogenesis and efficient plant regeneration froom root explants of Passiflora suberosa L (Passifloraceae), In vitro Cell Dev Biol Plant, 52:64-71 26 Monteiro ACBdA, Higashi EN, Goncëalves AN , and Rodriguez APM 2000, A novel approach for the definition of the inorganic medium components for micropropagation of yellow passionfruit (Passiflora edulis Sims f flavicarpa Deg.), In Vitro Cell Dev Biol Plant, 36:527-531 Ożarowski M 2011, Influence of the physico-chemical factors, plant growth regulators, elicitors and type of explants on callus cultures of medicinal climbers of Passiflora L., Herba Pol, 57:58-75 27