Nghiên cứu nhân giống cây bạch đàn chanh (eucalyptus citriodora hook ) bằng phương pháp nuôi cấy mô

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Ọ Ậ ĐỀ À : “ Ê Ứ Â ÂY BẠ CHANH (EUCALYPTUS CITRIODORA ƢƠ Á À Ộ, ẤY M ” Á 9/2021 ĐÀ ) BẰ HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Ọ Ậ ĐỀ À : “ Ê Ứ Â ÂY BẠ ) BẰ CHANH (EUCALYPTUS CITRIODORA ƢƠ Á ẤY M ” Sinh viên : ê hị hàn Ngành : ông ghệ inh Khóa : K62 gƣời hƣớng dẫn : Th Vũ À Ộ, ĐÀ Á ọc oài âm guyễn hị húy 9/2021 ạnh LỜI CAM Đ Tôi xin cam đoan tồn kết khóa luận trực tiếp thực Các số liệu kết khóa luận hồn tồn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tôi xin cam đoan thông tin đƣợc trích dẫn khóa luận đƣợc ghi rõ nguồn gốc giúp đỡ đƣợc cảm ơn Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm lời cam đoan trƣớc hội đồng nhà trƣờng Hà Nội, ngày 16 tháng 09 năm 2021 Sinh viên Lê hị Nhàn i LỜI CẢM Ơ Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, ngồi cố gắng nỗ lực thân, em nhận đƣợc nhiều quan tâm giúp đỡ nhiệt tình thầy cô giáo, bạn bè ngƣời thân Lời em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban giám đốc Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Ban chủ nhiệm Khoa Công Nghệ Sinh Học thầy cô giáo truyền đạt cho em kiến thức kỹ quý báu suốt thời gian học tập rèn luyện trƣờng Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới ThS Vũ Hoài Sâm – Trung tâm Nghiên cứu Nguồn gen Giống dƣợc liệu Quốc gia, Viện Dƣợc liệu TS Thúy guyễn hị ạnh – Khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam dành nhiều thời gian, tâm huyết, tận tình bảo, hƣớng dẫn em trình nghiên cứu thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn tới anh chị Phịng Cơng Nghệ Sinh Học – Trung tâm Nghiên cứu Nguồn gen Giống dƣợc liệu Quốc gia – Viện Dƣợc liệu, Ban giám đốc Trung tâm tạo điều kiện thuận lợi cho em trình thực đề tài Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn tình cảm chân thành đến với gia đình, bạn bè hết lòng động viên, giúp đỡ tạo điều kiện vật chất tinh thần để em hoàn thành đề tài Do thời gian thực đề tài có hạn nên đề tài khơng tránh khỏi sai sót Em mong nhận đƣợc đóng góp ý kiến thầy bạn để đề tài em đƣợc hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn ! Hà Nội, ngày 16 tháng 09 năm 2021 Sinh viên Lê hị Nhàn ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii TÓM TẮT .ix PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1 Giới thiệu chung Bạch đàn chanh 2.1.1 Nguồn gốc vị trí, phân loại 2.1.2 Đặc điểm thực vật sinh thái 2.1.3 Thành phần hóa học 2.1.4 Công dụng 2.1.5 Tình hình phát triển trồng bạch đàn chanh 2.1.6 Các phƣơng pháp truyền thống nhân giống bạch đàn chanh 2.2 Kỹ thuật nhân giống nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Giới thiệu nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.2 Các bƣớc trình nhân giống in vitro 2.2.3 Môi trƣờng nuôi cấy 11 2.3 Tình hình nghiên cứu nhân giống in vitro bạch đàn chanh 13 iii 2.3.1 Kết nghiên cứu nƣớc 13 2.3.2 Kết nghiên cứu nƣớc 13 PHẦN III ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Đối tƣợng vật liệu nghiên cứu 16 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 16 3.3 Nội dung nghiên cứu 16 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 3.4.1 Phƣơng pháp nuôi cấy in vitro 16 3.4.2 Phƣơng pháp khử trùng mẫu cấy 17 3.4.3 Phƣơng pháp kế thừa tài liệu 17 3.4.4 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm 17 3.4.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 21 PHẦN IV KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Nghiên cứu tạo nguồn vật liệu vô trùng 22 4.1.1 Ảnh hƣởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả tạo mẫu bạch đàn chanh vô trùng 22 4.2 Nghiên cứu nhân nhanh chồi in vitro Bạch đàn chanh 23 4.2.1 Ảnh hƣởng BAP đến khả nhân nhanh chồi in vitro Bạch đàn chanh 24 4.2.2 Ảnh hƣởng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi in vitro Bạch đàn chanh 26 4.2.3 Ảnh hƣởng tổ hợp BAP IBA/ α-NAA đến khả nhân nhanh chồi in vitro Bạch đàn chanh 28 4.2.4 Ảnh hƣởng tổ hợp Kinetin IBA/ α-NAA đến khả nhân nhanh chồi in vitro Bạch đàn chanh 31 iv 4.3 Nghiên cứu hoàn chỉnh 34 4.3.1 Ảnh hƣởng α –NAA đến khả tạo hoàn chỉnh 34 4.3.2 Ảnh hƣởng IBA đến khả tạo hoàn chỉnh 35 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 38 5.1 Kết luận 38 5.2 Đề nghị 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 PHỤ LỤC 42 v D MỤ BẢ Bảng 4.1 Ảnh hƣởng thời gian xử lý HgCl2 0,1% đến hiệu khử trùng mẫu đoạn thân Bạch đàn chanh (sau tuần nuôi cấy) 22 Bảng 4.2 Ảnh hƣởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi in vitro Bạch đàn chanh (sau tuần nuôi cấy) 24 Bảng 4.3 Ảnh hƣởng kinetin đến khả nhân nhanh chồi in vitro bạch đàn chanh (sau tuần nuôi cấy) 26 Bảng 4.4 Ảnh hƣởng tổ hợp BAP IBA/ α-NAA đến khả nhân nhanh chồi Bạch đàn chanh (sau tuần nuôi cấy) 29 Bảng 4.5 Ảnh hƣởng tổ hợp Kinetin IBA/ α-NAA đến khả nhân nhanh chồi Bạch đàn chanh (sau tuần nuôi cấy) 31 Bảng 4.6 Ảnh hƣởng α-NAA đến khả tạo rễ in vitro chồi bạch đàn chanh (sau tuần nuôi cấy) 35 Bảng 4.7 Ảnh hƣởng IBA đến khả tạo rễ in vitro chồi Bạch đàn chanh (sau tuần nuôi cấy) 36 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cây bạch đàn chanh (Eucalyptus citriodora Hook) Hình 4.1 Chồi nảy mầm từ đoạn thân có chứa mắt ngủ sau tuần khử trùng HgCl2 0,1% phút 23 Hình 4.2 Ảnh hƣởng nồng độ BAP (0,25 - 1mg/l) đến khả nhân nhanh chồi in vitro bạch đàn chanh sau tuần nuôi cấy 25 Hình 4.3 Ảnh hƣởng kinetin (0,25 - 1mg/l) đến khả nhân nhanh chồi in vitro bạch đàn chanh sau tuần nuôi cấy 27 Hình 4.4 Ảnh hƣởng tổ hợp BAP (0,25mg/l) nồng độ IBA/ α-NAA đến khả nhân nhanh chồi Bạch đàn chanh (sau tuần nuôi cấy) .30 Hình 4.5 Ảnh hƣởng tổ hợp Kinetin (0,75mg/l) nồng độ IBA/ α-NAA đến khả nhân nhanh chồi Bạch đàn chanh (sau tuần nuôi cấy) 33 Hình 4.6 Mẫu cấy Bạch đàn chanh ni cấy môi trƣờng MS bổ sung α-NAA sau tuần 35 Hình 4.7 Mẫu cấy Bạch đàn chanh nuôi cấy môi trƣờng MS bổ sung IBA sau tuần 36 vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BAP 6-Benzyl amino purine CT Công thức Cs Cộng CV% Sai số thí nghiệm ĐC Đối chứng IBA Indole – – butyric acid Kin Kinetin LSD0.05 Độ lệch chuẩn mức ý nghĩa 5% MS Môi trƣờng Murashige Skoog - 1962 MS* Môi trƣờng MS cải tiến α-NAA α - Naphthalene acetic acid viii Từ kết bảng 4.4 4.5 cho thấy kết hợp BAP IBA/α-NAA làm số chồi/mẫu tăng lên đáng kể, đồng thời chất lƣợng chồi đƣợc cải thiện: chồi xanh, to khỏe, mập Trong kết hợp BAP α-NAA tốt kết hợp BAP với IBA Sự kết hợp Kin IBA/ α-NAA không ảnh hƣởng tích cực đến khả nhân nhanh chồi, có CT4 (MS + 0,75 mg/l kin + 0,3 IBA) cho kết số chồi/mẫu cao CT1(Đ/C) Nghiên cứu Abd El-Azeem cs (2019); Thiri Myo Nyunt Thanda Aye (2019) không nghiên cứu ảnh hƣởng kết hợp Kin IBA/α-NAA nhƣng tác giả cho việc kết hợp BAP α-NAA thích hợp nhân chồi bổ sung BAP Kết tƣơng tự kết tác giả Mai Đình Hồng (1999) đối tƣợng bạch đàn E.urophylla dòng U6, nhiên với lồi nồng độ sử dụng khác Tác giả sử dụng nồng độ BAP α-NAA để nhân nhanh chồi 0,5 mg/l BAP 0,25 mg/l α-NAA cho bạch đàn E.urophylla dòng U6 Nhƣ vậy, môi trƣờng MS bổ sung 0,25 mg/l BAP kết hợp với α-NAA chất điều hòa sinh trƣởng cần thiết cho giai đoạn nhân nhanh chồi Bạch đàn chanh, tốt mơi trƣờng có công thức MS + 0,25 mg/l BAP + 0,3 mg/l α-NAA 4.3 Nghiên cứu hoàn chỉnh Giai đoạn tạo hoàn chỉnh giai đoạn cuối trình nhân giống phịng thí nghiệm với mục đích tạo có đủ thân, rễ Giai đoạn cần kích thích rễ, chất auxin thƣờng đƣợc sử dụng bổ sung vào mơi trƣờng ni cấy, nhóm chất đƣợc sử dụng thơng thƣờng α-NAA IBA Một vài nghiên cứu ảnh hƣởng IBA đến khả tạo rễ chồi Bạch đàn chanh đƣợc công bố nhƣ : Abd El-Azeem M.S cs (2019) rễ mạnh đạt đƣợc cách sử dụng môi trƣờng MS bổ sung 2,5 mg/l IBA, theo Koriesh cs (2003) rễ mạnh mơi trƣờng 0,2 MS có bổ sung mg/l IBA 4.3.1 Ảnh hƣởng α – đến khả tạo hồn chỉnh Tiến hành thí nghiệm tạo hồn chỉnh bổ sung chất điều hịa sinh trƣởng αNAA với thang nồng độ khác từ mg/l (ĐC); 0,2 mg/l; 0,4 mg/l; 0,6 mg/l; 0,8 mg/l; 1,0 mg/l, sau tuần theo dõi kết đƣợc thể bảng 4.6 34 Bảng 4.6 Ảnh hƣởng α- đến khả tạo rễ in vitro chồi bạch đàn chanh (sau tuần nuôi cấy) Công thức Nồng độ α-NAA (mg/l) Tỷ lệ tạo chồi (%) CT1 (Đ/C) 0,0 00,00 CT2 0,2 00,00 CT3 0,4 00,00 CT4 0,6 10,00 CT5 0,8 16,67 CT6 1,0 00,00 Từ kết bảng 4.6 cho thấy chồi Bạch đàn chanh môi trƣờng bổ sung αNAA nồng độ mg/l (ĐC); 0,2 mg/l; 0,4 mg/l; 1,0 mg khơng có khả tạo rễ Ở CT4 CT5 chồi Bạch đàn chanh có xuất rễ nhƣng tỷ lệ chồi tạo rễ thấp, đạt cao 16,67% CT5 môi trƣờng bổ sung 0,8 mg/l α-NAA nh 4.6 Mẫu cấy Bạch đàn chanh nuôi cấy môi trƣờng MS bổ sung 0,8 mg/l α- sau tuần 4.3.2 Ảnh hƣởng B đến khả tạo hồn chỉnh Tiến hành thí nghiệm tạo hồn chỉnh bổ sung chất điều hòa sinh trƣởng IBA với thang nồng độ khác từ mg/l (ĐC); 0,2 mg/l; 0,4 mg/l; 0,6 mg/l; 0,8 mg/l; 1,0 mg/l, sau tuần theo dõi kết đƣợc thể bảng 4.7 35 Bảng 4.7 Ảnh hƣởng B đến khả tạo rễ in vitro chồi Bạch đàn chanh (sau tuần nuôi cấy) Công thức Nồng độ IBA (mg/l) Tỷ lệ chồi tạo rễ (%) CT1 (Đ/C) 0,0 00,00 CT2 0,2 00,00 CT3 0,4 00,00 CT4 0,6 13,33 CT5 0,8 20,00 CT6 1,0 33,33 Kết bảng 4.7 cho thấy tăng dần nồng độ IBA từ 0,0 – 0,4 mg/l IBA chồi Bạch đàn chanh không xuất rễ, tiếp tục tăng dần nồng độ IBA từ 0,6 – 1,0 mg/l chồi Bạch đàn chanh xuất rễ tỷ lệ chồi tạo rễ tăng dần Trong đó, bổ sung IBA nồng độ 1,0 mg/l cho tỷ lệ cao đạt 33,33% nh 4.7 Mẫu cấy Bạch đàn chanh nuôi cấy môi trƣờng MS bổ sung 1,0 mg/l B sau tuần Tuy chồi Bạch đàn chanh môi trƣờng rễ MS bổ sung α-NAA IBA có xuất rễ với tỷ lệ thấp nhƣng qua quan sát thấy mẫu Bạch đàn chanh phát triển, sau tuần héo vàng, dùng panh gắp quan sát thấy rễ rời, khơng cịn có khả sống Kết tƣơng tự kết nghiên cứu Thy Thiri Myo Nyunt Thanda Aye (2019), tác giả cho biết nghiên cứu số lƣợng rễ Bạch đàn chanh tối đa (12,2) thu đƣợc môi trƣờng 1/2MS bổ sung 1,0 36 mg/l IBA chiều dài rễ dài (1,2 cm) môi trƣờng 1/2MS bổ sung 1,5 mg/l IBA Bốn mƣơi ngày sau nuôi cấy, vấn đề việc vi nhân giống Bạch đàn xử lý IBA là: đầu cắt mẫu cấy chuyển sang màu, nhiên hình thành mơ sẹo đƣợc phát triển Vào ngày tiếp theo, quan sát thấy khô mẫu cấy Cuối cùng, toàn mẫu cấy bị khơ héo kết thí nghiệm IBA Trong nghiên cứu tạo hoàn chỉnh (tạo rễ in vitro) môi trƣờng MS bổ sung α-NAA IBA có nồng độ từ 0,0 – 1,0 mg/l không phù hợp với Bạch đàn chanh 37 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu thu đƣợc, rút số kết luận nhƣ sau: Mẫu đốt non từ Bạch đàn chanh năm đƣợc khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% thời gian phút cho hiệu khử trùng tốt Môi trƣờng nhân nhanh chồi Bạch đàn chanh thích hợp MS + 0,25 mg/l BAP + 0,3 mg/l α-NAA + 30g/l đƣờng + 6g/l agar, pH 5,8 Chƣa xác định đƣợc môi trƣờng hiệu để tạo Bạch đàn chanh hoàn chỉnh in vitro 5.2 Đề nghị Hiện nghiên cứu nhân giống Bạch đàn chanh phƣơng pháp nhân giống in vitro cịn Vì cần mở rộng nghiên cứu với bổ sung riêng rẽ tổ hợp nhiều loại chất điều hòa sinh trƣởng nhƣ nồng độ khác để tìm mơi trƣờng tối ƣu cho giai đoạn quy trình nhân giống Đặc biệt, cần tập trung nghiên cứu xác định thành phần môi trƣờng, điều kiện nuôi cấy yếu tố tác động khác để tạo rễ in vitro/ex vitro Bạch đàn chanh 38 TÀI LI U THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Lã Đình Mỡi, Lƣu Đàm Cƣ, Trần Minh Hợi, Trần Huy Thái, Ninh Khắc Bản (2002) Tài nguyên thực vật có tinh dầu Việt Nam tập 443 trang Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chƣơng, Nguyễn Thƣợng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam tập 1138 trang Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2009) Công nghệ sinh học tập 2- Công nghệ tế bào, Nhà xuất giáo dục 187 trang Nguyễn Đức Thành (2000) Nuôi cấy mô tế bào thực vật-Nghiên cứu ứng dụng Nhà xuất Nông Nghiệp 186 trang Nguyễn Xuân Dũng, Nguyễn Thái Hằng, K verluis, Hồ Minh Tinh, Nguyễn Văn Bé, Lê Viết Lợi (1995) Rerult of the study on Eucalyptus citriodora from Vietnam Proceeding of the NCST of Vietnam 7(1):51-57 Trần Thị Lệ, Trƣơng Thị Bích Phƣợng, Trần Thị Triêu Hà (2008) Giáo trình Cơng nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông nghiệp, Học viện Nông nghiệp Việt Nam 288 trang Trần Thị Lệ, Hoàng Thị Thu Giang (2012) Nghiên cứu nhân giống bạch đàn Eucalyptus urophylla dịng u6 phƣơng pháp ni cấy mơ Tạp chí Nông nghiệp Phát triển nông thôn số tháng 10/2012, trang 132-139 Mai Đình Hồng, 1999 Ứng dụng cơng nghệ sinh học để sản xuất nguyên liệu giấy chất lƣợng cao Thông tin khoa học công nghệ môi trƣờng tỉnh Phú Thọ tháng 9, trang 46 – 48 Đặng Ngọc Hùng (2009) Nhân giống dòng bạch đàn lai UE35 UE56 Eucalyptus Urophylla E.Exserta phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào, luận văn thạc sỹ lâm sinh, trƣờng Đại học Nông Lâm, Thái Ngun 10 Đồn Thị Mai, Nguyễn Việt Cƣờng, Ngơ Minh Duyên, Nguyễn Thanh Hƣơng , 2000 Kết bƣớc đầu nhân giống Bạch đàn lai phƣơng pháp nuôi cấy mơ phân sinh Tạp chí Lâm nghiệp, (số 10/2000), tr 46-47 11 Triệu Thị Thu Hà, Cấn Thị Lan (2015) Nghiên cứu nhân giống bạch đàn lai UP (Eucalyptus urophylla x Eucalyptus pellita) phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào Tạp chí Nơng nghiệp PTNT Số 6/2015 : 124-130 12 Phan Quyền (2014) Nghiên cứu nhân giống phƣơng pháp ni cấy mơ cho hai dịng bạch đàn UP54 UP99: giống lai bạch đàn URO (Eucalyptus urophyla) bạch đàn 39 pellita (Eucalyptus pellita) Luận văn thạc sỹ sinh học Viện Hàn lâm khoa học Công nghệ Việt Nam II Tài liệu tiếng Anh 13 Hill, Kenneth D.; Johnson, Lawrence A.S (1995) "Systematic studies in the Eucalyptus A revision of the bloodwoods, genus Corymbia (Myrtaceae)" Telopea 6: 185-504 14 Hajari E., Watt PMP., Mycock DJ., McAlister B (2006) Plant regeneration from induced callus of improved Eucalyptus clones S Afr J Bot., 72:195-201 15 Doran JC, 1999 Corymbia citriodora (Hook.) Hill & L.A.S Johnson In: Plant Resources of South-East Asia No 19: Essential-oil plants [ed by Oyen, L P A \Nguyen Xuan Dung] Leiden, The Netherlands: Backhuys Publisher, 89-95 16 Orwa C; Mutua A; Kindt R; Jamnadass R; Simons A, 2009 Agroforestree Database: a tree reference and selection guide version 4.0 World Agroforestry Centre 17 George EF (1993) Plant propagation by tissue culture Part 1: the technology 18 Tolba H., Moghrani H., Benelmouffok A., Kellou D., Maachi R (2015) Essential oil of Algerian Eucalyptus citriodora: Chemical composition, antifungal activity J Mycol Med., 25(4):128-33 19 Filho JA., Ribeiro WL., André WP ƣ, Cavalcante GS., Rios TT., Schwinden GM., Rocha LO., Macedo IF., Morais SM., Bevilaqua CL., Oliveira LM (2019) Anthelmintic activity of Eucalyptus citriodora essential oil and its major component, citronellal, on sheep gastrointestinal nematodes Rev Bra Parasitol Vet., 28(4):644-651 20 Boland, D.J., Brophy, J.J & House, A.P.N., 1991 Eucalyptus leaf oils: use, chemistry, distillation and marketing Inkata Press, Melbourne, Australia 21 Gill, L.S., 1992 Ethnomedical uses of plants in Nigeria Uniben Press, Benin City, p 170 22 Arbonnier, M., 2004 Trees, Shrubs and Lianas of West African Dry Zones Cirad, Magraf Publihers GMBH Pg 418–421 23 Singh HP, Kaur S, Negi K, Kumari S, Saini V, Batish DR, Kohli RK Assessment of in vitro antioxidant activity of essential oil of Eucalyptus citriodora (lemon-scented eucalypt; Myrtaceae) and its major constituents LWT - Food Sci Technol 2012;48:237–41 40 24 Singh HP, Kaur S, Negi K, Kumari S, Saini V, Batish DR, Kohli RK (2012) Assessment of in vitro antioxidant activity of essential oil of Eucalyptus citriodora (lemon-scented Eucalypts; Myrtaceae) and its major constituents Food Sci Technol., 48 (2012), pp 237-241 25 Brito DR, Ootani MA, Ramos ACC, Sertão WC, Aguiar RWS (2012) Efeito dos óleos de citronela, eucalipto e composto citronelal sobre microflora e desenvolvimento de plantas de milho J Biotec Biodivers., (2012), pp 184-192 26 Cimanga K, Kambu K, Tona L, Apers S, De Bruyne T, Hermans N, Totté J, Pieters L, Vlietinck AJ (2002) Correlation between chemical composition and antibacterial activity of essential oils of some aromatic medicinal plants growing in the Democratic Republic of Congo J Ethnopharmacol., 79 (2002), pp 213-220 27 Gbenou JD, Ahounou JF, Akakpo HB, Laleye A, Yayi E, Gbaguidi F, Baba-Moussa L, Darboux R, Dansou P, Moudachirou M, Kotchoni SO (2013) Phytochemical composition of Cymbopogon citratus and Eucalyptus citriodora essential oils and their anti-inflammatory and analgesic properties on Wistar rats Mol Biol Rep., 40 (2013), pp 1127-1134 28 Seyoum A, Killeen GF, Kabiru EW, Knols BGJ, Hassanali A (2019) Field efficacy of thermally expelled or live potted repellent plants against African malaria vectors in western Kenya Trop Med Int Health, (2003), pp 1005-1011 29 Clemente MA, Monteiro CMO, Scoralik MG, Gomes FT, Prata MCA, Daemon E (2010) Acaricidal activity of the essential oils from Eucalyptus citriodora and Cymbopogon nardus on larvae of Amblyomma cajennense (Acari: Ixodidae) and Anocentor nitens (Acari: Ixodidae) Parasitol Res., 107 (2010), pp 987-992 30 Thiri Myo Nyunt and Thanda Aye In vitro propagation of Eucalyptus citriodora Hook under control of some phytohormones and sucrose J Myanmar Acad Arts Sci 2019 Vol XVII No.4 31 Abd El-Azeem M.S., Hassan, H M.S and S.A.S Abdallah (2019) In vitro propagation of Eucalyptus citriodora plant The future Journal of Biology 2019;3:34-43 32 Koriesh, E.M.; Abd El-Fattah, Y.M.; Abd ElDayem, M and El-Etriby, M.A (2003) Micropropagation of juvenile Eucalyptus citriodora Acta Hort., 625: 283-288 33 McComb JA, Bennett IJ (1986) Eucalypts (Eucalyptus spp.) In: Bajaj YPS, ed Biotechnology in agriculture and forestry Vol 1: Tress Berlin: Springer Verlag, 340-362 41 PHỤ LỤC Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng BAP đến khả nhân nhanh chồi in vitro bạch đàn chanh BALANCED ANOVA FOR VARIATE CM FILE BAP2 29/ 8/21 18: :PAGE VARIATE V003 CM LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 373334E-01 186667E-01 2.15 0.178 CT 55.6707 13.9177 ****** 0.000 * RESIDUAL 693316E-01 866645E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 55.7773 3.98410 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE BAP2 29/ 8/21 18: :PAGE VARIATE V004 CCC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 828933E-01 414466E-01 5.39 0.033 CT 16.2466 4.06164 528.29 0.000 * RESIDUAL 615065E-01 768831E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 16.3910 1.17078 BALANCED ANOVA FOR VARIATE LC FILE BAP2 29/ 8/21 18: :PAGE VARIATE V005 LC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 121333 606666E-01 2.82 0.117 CT 75.7840 18.9460 881.18 0.000 * RESIDUAL 172005 215006E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 76.0773 5.43410 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAP2 29/ 8/21 18: :PAGE MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 5 CM 3.66000 3.58000 3.70000 CCC 2.00800 1.82600 1.92200 LC 4.32000 4.20000 4.42000 SE(N= 5) 0.416328E-01 0.392130E-01 0.655753E-01 5%LSD 8DF 0.135760 0.127870 0.213834 MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 CM 0.000000 5.23333 4.70000 4.90000 3.40000 CCC 0.000000 2.74667 2.90333 2.16333 1.78000 LC 0.000000 6.00000 5.53333 5.83333 4.20000 SE(N= 3) 0.537477E-01 0.506238E-01 0.846574E-01 5%LSD 8DF 0.175266 0.165079 0.276059 - 42 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAP2 29/ 8/21 18: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CM CCC LC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.6467 15 1.9187 15 4.3133 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.9960 0.93094E-01 2.6 0.1777 1.0820 0.87683E-01 4.6 0.0329 2.3311 0.14663 3.4 0.1174 |CT | | | 0.0000 0.0000 0.0000 | | | | Thí nghiệm 3: Ảnh hƣởng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi in vitro bạch đàn chanh BALANCED ANOVA FOR VARIATE CM FILE KIN6 29/ 8/21 19:18 :PAGE VARIATE V003 CM LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 133334E-02 666672E-03 0.08 0.922 CT 38.2307 9.55767 ****** 0.000 * RESIDUAL 653325E-01 816656E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 38.2973 2.73552 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE KIN4 29/ 8/21 19:18 :PAGE VARIATE V004 CCC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 336533E-01 168267E-01 0.93 0.437 CT 17.1885 4.29712 236.84 0.000 * RESIDUAL 145148 181436E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 17.3673 1.24052 BALANCED ANOVA FOR VARIATE LC FILE KIN4 29/ 8/21 19:18 :PAGE VARIATE V005 LC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 105333 526666E-01 2.41 0.151 CT 76.2333 19.0583 872.86 0.000 * RESIDUAL 174675 218343E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 76.5133 5.46524 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KIN4 29/ 8/21 19:18 :PAGE MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 5 CM 2.66000 2.64000 2.64000 CCC 1.99200 2.10800 2.05200 LC 4.44000 4.58000 4.38000 SE(N= 5) 0.404143E-01 0.602388E-01 0.660823E-01 5%LSD 8DF 0.131787 0.196433 0.215488 - 43 MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 CM 0.000000 1.90000 3.13333 4.70000 3.50000 CCC 0.000000 2.20000 2.62333 3.09667 2.33333 LC 0.000000 5.13333 5.43333 6.06667 5.70000 SE(N= 3) 0.521746E-01 0.777679E-01 0.853119E-01 5%LSD 8DF 0.170136 0.253593 0.278193 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KIN4 29/ 8/21 19:18 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CM CCC LC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.6467 15 2.0507 15 4.4667 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.6539 0.90369E-01 3.4 0.9219 1.1138 0.13470 6.6 0.4366 2.3378 0.14776 3.3 0.1506 Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hƣởng tổ hợp B |CT | | | 0.0000 0.0000 0.0000 | | | | B / α- đến khả nhân nhanh chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE CM FILE BAPNAA 29/ 8/21 18:49 :PAGE VARIATE V003 CM LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 218095 109048 0.59 0.572 CT 24.3124 4.05206 22.08 0.000 * RESIDUAL 12 2.20190 183492 * TOTAL (CORRECTED) 20 26.7324 1.33662 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE BAPNAA 29/ 8/21 18:49 :PAGE VARIATE V004 CCC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 134000E-01 669999E-02 0.54 0.603 CT 2.34413 390689 31.24 0.000 * RESIDUAL 12 150067 125056E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 2.50760 125380 BALANCED ANOVA FOR VARIATE LC FILE BAPNAA 29/ 8/21 18:49 :PAGE VARIATE V005 LC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 126667 633335E-01 1.61 0.240 CT 2.77810 463016 11.74 0.000 * RESIDUAL 12 473333 394444E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 3.37810 168905 - 44 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAPNAA 29/ 8/21 18:49 :PAGE MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 7 CM 4.54286 4.71429 4.78571 CCC 2.61143 2.63571 2.67286 LC 5.74286 5.80000 5.92857 SE(N= 7) 0.161905 0.422671E-01 0.750661E-01 5%LSD 12DF 0.498884 0.130239 0.231304 MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 CM 5.26667 3.06667 4.16667 5.06667 3.43333 5.50000 6.26667 CCC 2.79000 2.23333 2.41333 2.50000 2.37667 2.91000 3.25667 LC 5.90000 5.33333 5.53333 5.66667 6.06667 5.73333 6.53333 SE(N= 3) 0.247314 0.645641E-01 0.114665 5%LSD 12DF 0.762057 0.198944 0.353323 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAPNAA 29/ 8/21 18:49 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CM CCC LC GRAND MEAN (N= 21) NO OBS 21 4.6810 21 2.6400 21 5.8238 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.1561 0.42836 9.2 0.5717 0.35409 0.11183 4.2 0.6031 0.41098 0.19861 3.4 0.2405 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hƣởng tổ hợp |CT | | | 0.0000 0.0000 0.0003 i B / α- | | | | đến khả nhân nhanh chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE CM FILE KINNAA 29/ 8/21 19:15 :PAGE VARIATE V003 CM LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 352382E-01 176191E-01 0.18 0.842 CT 14.0324 2.33873 23.29 0.000 * RESIDUAL 12 1.20476 100397 * TOTAL (CORRECTED) 20 15.2724 763619 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE KINNAA 29/ 8/21 19:15 :PAGE VARIATE V004 CCC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 542854E-03 271427E-03 0.02 0.977 CT 4.68446 780743 69.78 0.000 * RESIDUAL 12 134258 111881E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 4.81926 240963 - 45 BALANCED ANOVA FOR VARIATE LC FILE KINNAA 29/ 8/21 19:15 :PAGE VARIATE V005 LC LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= NL 857143E-02 428571E-02 0.13 0.882 CT 8.17238 1.36206 40.38 0.000 * RESIDUAL 12 404763 337302E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 8.58571 429286 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KINNAA 29/ 8/21 19:15 :PAGE MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 7 DF CM 3.50000 3.40000 3.45714 CCC 2.15571 2.14571 2.14429 LC 4.97143 5.01429 4.97143 SE(N= 7) 0.119760 0.399788E-01 0.694162E-01 5%LSD 12DF 0.369021 0.123188 0.213895 MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 CM 4.46667 2.73333 3.60000 4.80000 3.16667 2.90000 2.50000 CCC 2.81333 1.69667 2.39333 2.71000 2.13667 1.77333 1.51667 LC 5.90000 4.30000 5.23333 5.73333 4.83333 4.76667 4.13333 SE(N= 3) 0.182936 0.610686E-01 0.106035 5%LSD 12DF 0.563688 0.188173 0.326730 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KINNAA 29/ 8/21 19:15 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CM CCC LC GRAND MEAN (N= 21) NO OBS 21 3.4524 21 2.1486 21 4.9857 STANDARD DEVIATION C OF V |NL SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.87385 0.31685 9.2 0.8419 0.49088 0.10577 4.9 0.9768 0.65520 0.18366 3.7 0.8817 46 |CT | | | 0.0000 0.0000 0.0000 | | | | HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM Ộ Ị Ọ KHOA VÊ S XÃ Ộ Ủ Độc lập – ự – BẢ Ậ XÉ ÀM Ậ Ĩ V M ạnh phúc Họ tên sinh viên: ………………………………………………… Lớp: ……………………… Chuyên ngành: …………………………………………………………………………………… Tên đề tài Khóa luận tốt nghiệp: ………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… ……… …………………………………………………………………………………… ……………… …………………………………………………………………………… Thời gian địa điểm thực tập: Thời gian thực tập: ………………………………………………………………………………… Địa điểm thực tập: ………………………………………………………………………………… Ý Ế Ậ XÉ inh thần, thái độ học tập thực Ủ Á VÊ ƢỚ DẪ hóa luận tốt nghiệp: ………………………………………………………………………………………… ………… ………………………………………………………………………………………… ………… ………………………………………………………………………………… ………………… ………………………………………………………………………… ………………………… ………………………………………………………………… ………………………………… Mức độ hồn thành hóa luận tốt nghiệp đƣợc giao:    47 ăng lực sáng tạo nghiên cứu viết hóa luận tốt nghiệp: ………………………………………………………………………………………… ………… ………………………………………………………………………………… ………………… ………………………………………………………………………… ………………………… ………………………………………………………………… ………………………………… ………………………………………………………… ………………………………………… Kết luận:   Sinh viên đủ điều kiện nộp Khóa luận Sinh viên khơng đủ điều kiện nộp Khóa luận Hà Nội, ngày tháng Giáo viên hƣớng dẫn 48 năm 20