Nghiên cứu nhân giống cây chanh dây (passiflora edulis) bằng kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào và thử nghiệm tạo cây vi ghép

MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Chanh dây (Passiflora spp.) loại trồng có nguồn gốc từ Nam Mỹ (Brazil), trồng chủ yếu vùng cận nhiệt đới nhiệt đới có Việt Nam Chanh dây có hoa đẹp, ăn (giàu vitamin A, B5 C) chứa nhiều hoạt chất có giá trị flavonoid glycoside dẫn xuất apigenin, luteolin [118] Chính vậy, chúng xem trồng có giá trị kinh tế cao Ở nước ta, năm 2019 suất chanh dây bình qn nước đạt 20,32 tấn/ha, vùng Tây Nguyên đạt bình quân 26,1 tấn/ha Cây chanh dây giữ vị trí thứ 17 số loại ăn có quy mơ diện tích sản xuất lớn 10.000 nước ta xếp hạng vị trí thứ 10 giới loại trái xuất Trong đó, tỉnh có diện tích trồng chanh dây lớn nhất: Gia Lai, Sơn La, Đăk Nông, Lâm Đồng Đăk Lăk với tổng diện tích 9.060 ha, chiếm 86,3% diện tích trồng chanh dây nước Tại Lâm Đồng, năm gần đây, diện tích canh tác chanh dây ngày tăng cao lên đến 1.200 năm 2019 Trong đó, khu vực trồng nhiều Đức Trọng, Lâm Hà, Đơn Dương Lạc Dương [165], [170] Giống chanh dây trồng nước ta chủ yếu nhập từ giống Đài Loan với giá thành cao nguồn cung không ổn định Bên cạnh đó, người trồng thường sử dụng phương pháp truyền thống với hệ số nhân thấp gieo hạt, giâm hom, ghép,… khiến chất lượng giống độ đồng giảm, mức độ thối hóa tỷ lệ nhiễm bệnh lại tăng lên Giải pháp giống chất lượng tốt, đáp ứng số lượng lớn mục tiêu thách thức cho nhà khoa học Các nghiên cứu nhân giống vơ tính liên quan đến chi Passiflora khởi đầu từ năm 1960, kể từ đó, nhiều nghiên cứu báo cáo [125], [160], [24] Tuy nhiên, hiệu tái sinh tương đối thấp hầu hết nghiên cứu Chính vậy, cần tìm phương thức ni cấy in vitro phù hợp để ứng dụng cho đối tượng Kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào (kỹ thuật nuôi cấy TCL) kỹ thuật nuôi cấy mẫu có kích thước nhỏ cắt từ quan thực vật khác Khi mẫu phân tách theo chiều dọc gọi lTCL (longitudinal TCL) mẫu phân tách theo chiều ngang gọi tTCL (transverse TCL) [154] Kỹ thuật có nhiều ưu điểm: mẫu tiếp xúc trực tiếp với mơi trường diện tích tiếp xúc lớn; lượng hormone nội sinh mẫu thấp; mẫu nuôi cấy đồng đáp ứng nhanh với điều kiện môi trường; phơi quan sơ khởi hình thành tần số cao, tiềm tái sinh cao; tạo giống trồng hồn chỉnh, biến dị; nhanh chóng đạt kết thời gian ngắn,… Chính ưu điểm mà kỹ thuật áp dụng thành cơng cho phát sinh phơi vơ tính tái sinh chồi nhiều loài hai mầm mầm, bao gồm vài giống Lan giống trồng khác Dendrobium aqueum [121], sâm Ngọc Linh [112] Nó ứng dụng thành công tái sinh số thân gỗ bao gồm cọ dầu, táo,… [137], [47] Ngoài ra, kỹ thuật cịn đạt tỷ lệ thành cơng cao đối tượng xem khó ni cấy lúa mì, tre, thơng [114], [115] Vi ghép kỹ thuật sử dụng vi nhân giống để cải thiện chất lượng, gia tăng suất giống nhân nhanh giống đặc biệt ăn Bởi kỹ thuật có tiềm kết hợp đặc điểm di truyền cành ghép với đặc tính kháng bệnh, khả thích nghi môi trường gốc ghép; với ưu điểm nhân nhanh ống nghiệm Mặt khác, kỹ thuật vi ghép góp phần tạo giống hồn toàn bệnh ứng dụng cho sản xuất đại trà Vì vậy, quy trình vi ghép thành cơng phát triển cho loại ăn khác bao gồm hạch nhân, táo, nho, dâu tằm, cam quýt,… [74] Xuất phát từ vấn đề trên, đề tài: “Nghiên cứu nhân giống chanh dây (Passiflora edulis) kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào thử nghiệm tạo vi ghép” thực Mục tiêu đề tài Xác định điều kiện tối ưu nhân giống in vitro chanh dây tím vàng kỹ thuật ni cấy TCL Tạo chanh dây vi ghép chanh dây vàng (gốc ghép) chanh dây tím (cành ghép) có nguồn gốc từ ni cấy mơ phân sinh đỉnh kết hợp với kỹ thuật nuôi cấy TCL vi ghép; bước đầu đánh giá sinh trưởng phát triển chanh dây vi ghép điều kiện vườn ươm đồng ruộng Ý nghĩa khoa học đề tài Kết đề tài cung cấp dẫn liệu khoa học kỹ thuật nuôi cấy TCL, nuôi cấy mô phân sinh đỉnh vi ghép để nghiên cứu tái sinh chồi nhân giống chanh dây ảnh hưởng yếu tố điều kiện nuôi cấy khác Ý nghĩa thực tiễn đề tài Đề tài thiết lập quy trình nhân giống chanh dây tím vàng thông qua kỹ thuật nuôi cấy TCL tạo giống chanh dây vi ghép virus có nguồn gốc ni cấy mô phân sinh đỉnh Đây hướng nghiên cứu có tiềm ứng dụng hiệu nhân giống trồng Đối tượng phạm vi nghiên cứu đề tài Đối tượng nghiên cứu Chanh dây tím (Passiflora edulis Sims.) chanh dây vàng (Passiflora edulis f flavicarpa) Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố điều kiện nuôi cấy khác lên khả tái sinh chồi nhân giống chanh dây tím vàng giai đoạn in vitro thơng qua kỹ thuật nuôi cấy TCL; tạo chanh dây vi ghép có nguồn gốc từ ni cấy mơ phân sinh đỉnh kỹ thuật nuôi cấy TCL Trồng thử nghiệm vườn ươm đồng ruộng để đánh giá khả thích nghi, sinh trưởng phát triển chanh dây vi ghép Các thí nghiệm in vitro vườn ươm tiến hành phòng Sinh học phân tử Chọn tạo giống trồng (Viện Nghiên cứu Khoa học Tây Nguyên); trồng đồng ruộng tiến hành vườn hộ ông Trần Tâm thuộc Xã Phi Liêng, Huyện Đam Rông, Tỉnh Lâm Đồng Những đóng góp luận án Luận án nghiên cứu thành cơng quy trình nhân giống chanh dây tím vàng từ nguồn mẫu ban đầu thông qua kỹ thuật nuôi cấy TCL Luận án sử dụng kỹ thuật nuôi cấy mô phân sinh đỉnh để tạo vật liệu chanh dây tím vàng virus sử dụng vi ghép Luận án xây dựng thành công phương pháp vi ghép giống chanh dây tím (cành ghép) vàng (gốc ghép) để tạo chanh dây vi ghép virus Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 SƠ LƢỢC VỀ CÂY CHANH DÂY 1.1.1 Phân loại, nguồn gốc phân bố Cây chanh dây thuộc giới Plantae, ngành Magnoliophyta, lớp Magnoliopsida, Malpighiales, họ Passifloraceae, chi Passiflora loài Passiflora spp Phần lớn loài Passiflora edulis (P edulis) lồi địa có nguồn gốc từ vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Nam Mỹ, Brazil trung tâm đa dạng Passifloraceae Trong số 450 loài Passiflora biết có 50-60 lồi cho ăn Một vài loài mang lại giá trị kinh tế quan trọng chanh dây vàng (P edulis f flarvicapa), chanh dây tím (P edulis Sims.) chanh dây (P alata Dryand); lồi trồng chủ yếu giới Chanh dây tím bắt nguồn từ phía nam Brazil qua Paraguay đến phía bắc Argentina Tuy nhiên giống vàng lại khơng rõ nguồn gốc, bắt nguồn từ khu vực Amazon Brazil giống lai P edulis loài thân cận giống đột biến P edulis [149] Cây chanh dây du nhập vào Việt Nam khoảng đầu kỷ XX đến năm gần đây, xác định loại trồng mang lại giá trị kinh tế cao [2] Hiện nay, chanh dây trồng khắp tỉnh từ Bắc vào Nam, chủ yếu tập trung Lâm Đồng, Gia Lai, Kon Tum, Kiên Giang, Cần Thơ với diện tích lớn tập trung [171] 1.1.2 Hình thái đặc tính sinh học chanh dây Cây chanh dây lâu năm, dây leo gỗ nhỡ, có rễ nơng, leo tua Lá mọc xen kẽ, xanh tươi quanh năm, có thùy sâu, trưởng thành có dạng khía răng, dài 7,5-20 cm, mặt xanh đậm bóng nhẵn, mặt có màu nhạt giống thân non tua cuốn, có nhuốm màu đỏ hay tím, đặc biệt chanh dây vàng Hoa đơn, thơm, rộng 5,0-7,5 cm, hoa đốt nhánh tăng trưởng Hoa ôm chặt bắc lớn màu xanh Hoa gồm đài hoa trắng xanh, tràng hoa trắng, vành tua trắng xen kẽ màu xanh, trắng, nhị với bao phấn to, nỗn vịi nhụy Đặc biệt nỗn vịi nhụy có nhánh tạo thành cấu trúc trung tâm bật Hoa chanh dây vàng có màu sặc sỡ đậm Quả gần tròn hay dạng trứng, đường kính 4,0-7,5 cm, có vỏ cứng, nhẵn, màu sắc từ tím đậm đến vàng nhạt Vỏ dày mm dính chặt vào lớp ruột trắng mm Bên khoang gồm túi màu vàng, thơm chứa nước có nhiều 250 túi vậy, bên túi có chứa hạt nhỏ, cứng, màu nâu đậm hay đen Mùi hương quyến rũ, giống mùi ổi [149] Cây chanh dây vàng sinh trưởng mạnh vùng nhiệt đới cận nhiệt đới; có khả chống lại bệnh gây Fusarium (F oxysporum f passiflorae) tuyến trùng Trong đó, chanh dây tím sinh trưởng vùng cận nhiệt đới dễ bị tác động tác nhân gây bệnh đất; nhiên, lại cho suất cao ưa chuộng thị trường Dựa vào đặc tính sinh học này, người lai tạo giống thường sử dụng chanh dây tím làm cành ghép ghép vào gốc ghép chanh dây vàng để tạo chanh dây ghép vừa sinh trưởng mạnh, có khả kháng nhiễm bệnh cho suất cao [48], [76] 1.1.3 Một số virus gây bệnh thƣờng gặp chanh dây Một số bệnh chanh dây liên quan đến virus thuộc chi Potyvirus mô tả vùng khác giới Potyvirus phát lây nhiễm chanh dây Passion fruit woodiness virus (PWV) Potyvirus chủ yếu lây lan từ chanh dây sang chanh dây khác chích hút rệp [57] Một bệnh xem quan trọng chanh dây có liên quan đến Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) gây Cây chanh dây bị nhiễm virus CABMV có triệu chứng như: gây tượng khảm lá, nhăn nheo biến dạng nghiêm trọng; giảm phát triển cây, bị biến dạng [57] Cucumber mosaic virus (CMV) lần báo cáo liên quan đến chanh dây Úc [147] Cây chanh dây nhiễm virus CMV biểu biểu lốm đốm màu vàng tươi lá, điểm ngẫu nhiên phần giảm dần phía ngọn, trở nên khơng có triệu chứng trưởng thành [57] Tomato ringspot virus (ToRSV) gây bệnh chanh dây báo cáo lần Peru Tác nhân truyền bệnh virus xác định tuyến trùng Xiphinema americanum Virus gây chủ yếu đốm vòng bị nhiễm trùng làm bị hoại tử [57] 1.1.4 Các thành phần dinh dƣỡng chanh dây Quả chanh dây vàng chứa ascorbic acid so với chanh dây tím, có tổng acid (phần lớn citric) carotene nhiều hơn, chủ yếu niacin riboflavin so với chanh dây tím Các amino acid tự nước chanh dây tím gồm có: arginine, aspartic acid, glycine, leucine, lysine, proline, threonine, tyrosine valine Hàm lượng carotenoid chanh dây tím 1,16%; chanh dây vàng 0,058%; hàm lượng flavonoid chanh dây tím 1,06%; chanh dây vàng 1,0%; alkaloid chanh dây tím 0,012%; chanh dây vàng 0,7% Hàm lượng tinh bột nước chanh dây tím 0,74%; chanh dây vàng 0,06%, [84] Ngoài thành phần giá trị dinh dưỡng 100g nước chanh dây tím thể bảng 1.1 Bảng 1.1 Giá trị dinh dưỡng 100 g nước chanh dây tím [149] Thành phần Năng lượng Carbohydrate Protein Chất béo tổng Chất xơ Folates Niacin Pyridoxine Riboflavin 1.1.5 Giá trị kinh tế Nước ép chanh dây loại nước ép có nguồn ascorbic acid (vitamin C) carotenoid (vitamin A) tốt Nó giàu hương vị mùi thơm Nên, nước ép chanh dây làm hay pha loãng với nước hay loại nước ép khác (đặc biệt nước cam, nước thơm) để làm gia tăng hương vị chất lượng Vì vậy, chanh dây tím (P edulis Sims.) chanh dây vàng (P edulis f Flavicarpa) có giá trị để trồng thương mại [84] Ngoài ra, Tây Ấn, Mexico Nam Mỹ Indonesia, rễ chanh dây sử dụng làm thuốc gây nôn mữa lợi tiểu Ở Brazil, bột giấy chanh dây sử dụng chất kích thích tiêu hóa thuốc bổ; Ý, chanh dây sử dụng chất chống co thắt an thần [84] 1.1.6 Tình hình trồng chanh dây Lâm Đồng Ở nước ta, chanh dây hay gọi mác mác Đây giống rừng tự nhiên có mặt Đà Lạt từ lâu, thích hợp độ cao từ 800 m trở lên Hiện nay, vài cơng ty Lâm Đồng Hồng Long Foods, Trường Hoàng… nhập giống chanh dây từ Đài Loan trồng, ký hợp đồng với nông dân gieo trồng thu mua để chế biến, xuất Ở số hộ dân, việc thu mua chanh dây nhà với giá dao động từ vài nghìn đến vài chục nghìn đồng/kg tùy theo thời điểm Hiện nay, chanh dây đưa tiêu thụ siêu thị Thành phố Hồ Chí Minh, Hà Nội, số tỉnh miền Trung số chợ lẻ Gần đây, chanh dây Lâm Đồng nói riêng nước nói chung xuất sang thị trường Trung Quốc, Châu Âu Thái Lan nên giá tăng liên tục Vì vậy, Lâm Đồng, diện tích canh tác chanh dây tồn tỉnh năm 2019 đạt 1.200 khu vực ghi nhận trồng nhiều Đức Trọng, Lâm Hà, Đơn Dương Lạc Dương [170] 1.1.7 Các phƣơng pháp nhân giống chanh dây 1.1.7.1 Phương pháp truyền trống Nhân giống hạt Chanh dây thường trồng từ hạt Một vài nghiên cứu cho nên giữ hay tuần để chúng xoăn lại chín tốt trước hạt lấy Nếu trồng sớm sau lấy khỏi quả, hạt nảy mầm sau 2-3 tuần Hạt rửa cất giữ có tỷ lệ nảy mầm thấp chậm Sự nảy mầm có lẽ đẩy nhanh để phần thịt lên men vài ngày trước tách hạt, hay nhờ chà xát hạt Trước gieo, hạt thường ngâm với nước ấm, nhiên điều mang lại hiệu không cao Hạt trồng sâu 1,25 cm, mầm chuyển cao 25 cm [84] Nhân giống giâm hom Giâm hom nên chọn cành bánh tẻ (không già không non quá) để cắt làm hom giống, dùng dao lam sắc cắt cành chọn thành đoạn hom, đoạn hom cắt khoảng 3-4 đốt (có mắt lá), sau cắt mắt phía gốc cho vào xô nước để hom khỏi bị héo Chú ý nên cắt gần sát mắt gốc để hom dễ rễ Tiếp theo, nhúng ngập mắt hom gốc vào thuốc kích thích rễ pha sẵn, sau dùng dớn xé nhỏ quấn quanh mắt gốc giâm vào vỉ xốp (loại vỉ 102 lỗ, giâm hom cách hom 01 hàng lỗ vỉ) Khi giâm hom giống vào vỉ xốp xong nên tưới sương nhẹ cho hom để hom giống khỏi bị héo để nhà lưới có mái che lưới đen 70% (cần che chắn xung quanh để tránh gió lùa vào làm héo), sau cần tưới từ 2-4 lần/ngày để đảm bảo không bị nước, tạo điều kiện thuận lợi cho trình rễ hom giống [84] Nhân giống ghép cành Phương pháp có ý nghĩa quan trọng việc trì lai làm giảm tổn hại tuyến trùng bệnh nhờ sử dụng thân rễ chanh dây vàng Cành ghép từ non khoẻ mạnh ưa chuộng so với cành ghép từ trưởng thành Đường kính cành ghép nên thích hợp với đường kính thân ghép Nếu việc ghép chuẩn bị xong, hàng chậu cành ghép đặt gần dọc theo hàng gốc ghép để thực ghép ¾ chiều cao Nên tiến hành cắt rễ trước ghép tuần Việc ghép thực tốt vào lúc trời lạnh, có mây Đất nên chuẩn bị bón phân trước tháng [84] Nhu cầu giống chanh dây chất lượng tốt suất cao yêu cầu cấp thiết người trồng chanh dây Để chủ động nguồn giống, người trồng nhà sản xuất giống thường sử dụng phương pháp nhân giống truyền thống thông dụng phương pháp ghép cành (ghép cành ghép chanh dây tím với gốc ghép chanh dây vàng) Tuy nhiên, phương pháp cho hệ số nhân thấp khiến chất lượng giống độ đồng giảm, mức độ thối hóa tỷ lệ nhiễm bệnh lại tăng 1.1.7.2 Phương pháp vi nhân giống Những nghiên cứu vi nhân giống loài Passiflora spp báo cáo vào năm 1960 1970, mô tả cảm ứng phát sinh quan P caerulea, P edulis f flavicarpa P molissima [104] Kể từ đó, phương pháp nuôi cấy in vitro khác phát triển thành cơng cho lồi khác chi Passiflora thơng qua q trình phát sinh hình thái (phát sinh chồi, mơ sẹo, phơi vơ tính) ảnh hưởng nguồn mẫu (mẫu lá, đoạn thân, đốt thân, rễ, trụ mầm, phơi hữu tính,…), chất điều hòa sinh trưởng (CĐHST) thực vật (BA, TDZ, KIN, 2,4-D, NAA, IAA,…) mơi trường ni cấy (MS, ½ MS, MSM,…) tóm tắt Bảng 1.2 Bảng 1.2 Những nghiên cứu nhân giống in vitro Passiflora spp TT Giai đoạn Thiết lập nguồn mẫu Tái sinh chồi trực tiếp gián tiếp thông qua mô sẹo 4.00 5.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 CDR Duncan a NT 8.00 7.00 1.00 2.00 4.00 3.00 5.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Duncan a NT 8.00 1.00 2.00 4.00 3.00 7.00 5.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Duncan a NT 1.00 5.00 2.00 8.00 3.00 4.00 7.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 SPAD Duncan NT 1.00 a 8.00 2.00 3.00 4.00 5.00 7.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Bảng 3.28 Kết phân tích thống kê đặc điểm sinh trưởng chanh dây tím có nguồn gốc từ ánh sáng LED sau 10 tuần vườn ươm TLS a Duncan NT 8.00 7.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 NT Duncan a 8.00 1.00 7.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 SL NT Duncan a 8.00 1.00 4.00 3.00 2.00 7.00 5.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 NT Duncan a 1.00 8.00 2.00 3.00 4.00 7.00 5.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 NT a Duncan 1.00 8.00 4.00 2.00 3.00 5.00 7.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Bảng 3.29 Kết phân tích thống kê đặc điểm sinh trưởng chanh dây vàng có nguồn gốc từ ánh sáng LED sau 10 tuần vườn ươm Duncan a Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 CCC Duncan a NT 8.00 1.00 4.00 7.00 2.00 3.00 5.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Duncan a NT 1.00 2.00 3.00 7.00 4.00 5.00 8.00 6.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Bảng 3.30 Kết phân tích thống kê ni cấy mơ phân sinh đỉnh giống chanh dây tím sau 4, 10 tuần ni cấy ONEWAY TLN TLS TLTS SC CCC HSTS BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Descriptives TLN TLS TLTS SC CCC HSTS TLN 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total Between Groups Within Groups TLS Total Between Groups Within Groups TLTS Total Between Groups Within Groups SC Total Between Groups Within Groups CCC Total Between Groups Within Groups HSTS Total Between Groups Within Groups Total Bảng 3.31 Kết phân tích thống kê ni cấy mơ phân sinh đỉnh sinh giống chanh dây vàng sau 4, 10 tuần nuôi cấy ONEWAY TLN TLS TLTS SC CCC HSTS BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Descriptives TLN 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total TLS TLTS SC CCC HSTS ANOVA TLN Between Groups Within Groups TLS Total Between Groups Within Groups TLTS Total Between Groups Within Groups SC Total Between Groups Within Groups CCC Total Between Groups Within Groups HSTS Total Between Groups Within Groups Total Bảng 3.32 Kết phân tích thống kê đặc điểm chồi từ mẫu TCL giống chanh dây tím vàng có nguồn gốc mô phân sinh đỉnh sau tuần nuôi cấy ONEWAY TLTS SC CCC BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=LSD ALPHA(0.05) Descriptives 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total TLTS SC CCC ANOVA Between Groups TLTS Within Groups Total Between Groups SC Within Groups Total Between Groups CCC Within Groups Total Bảng 3.33 Kết phân tích thống kê đặc điểm chồi (từ mẫu TCL giống chanh dây tím vàng) nhân nhanh có nguồn gốc mơ phân sinh đỉnh sau tuần nuôi cấy ONEWAY SC CCC SL SPAD BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=LSD ALPHA(0.05) Descriptives SC CCC SL SPAD 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total ANOVA Between Groups SC Within Groups Total Between Groups CCC Within Groups Total Between Groups SL Within Groups Total Between Groups SPAD Within Groups Total Bảng 3.34 Kết phân tích thống kê đặc điểm chanh dây vi ghép sau 10 tuần nuôi cấy ONEWAY TLTC TLRR SR CDR CCC SL SPAD BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Descriptives TLTC TLRR SR CDR CCC SL SPAD 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total ANOVA TLTC Between Groups Within Groups TLRR Total Between Groups Within Groups SR Total Between Groups Within Groups CDR Total Between Groups Within Groups CCC Total Between Groups Within Groups SL Total Between Groups Within Groups Total Between Groups SPAD Within Groups Total Bảng 3.35 Kết phân tích thống kê đặc điểm sinh trưởng vi ghép sau 10 tuần vườn ươm ONEWAY TLS CCC SL CDL CRL BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) 1.00 TLS CCC SL CDL CRL 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total ANOVA Between Groups TLS Within Groups Total Between Groups CCC Within Groups Total Between Groups SL Within Groups Total Between Groups CDL Within Groups Total Between Groups CRL Within Groups Total Hình 3.1 Kết phân tích thống kê biểu đồ hệ số tái sinh chồi nguồn mẫu giống chanh dây tím chanh dây vàng sau tuần ni cấy Giống chanh dây tím HSTS Duncan NT 7.00 8.00 9.00 4.00 1.00 5.00 2.00 6.00 3.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Giống chanh dây vàng Duncan NT 4.00 7.00 1.00 5.00 8.00 2.00 6.00 9.00 3.00 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Hình 3.8 Kết phân tích thống kê biểu đồ hệ số tái sinh chồi từ tTCL-L, lTCL-T giống chanh dây tím vàng sau tuần ni cấy Giống chanh dây tím ONEWAY TLTS SC HSNC BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Descriptives TLTS SC HSTS 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total ANOVA TLTS Between Groups Within Groups SC HSTS Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Giống chanh dây vàng ONEWAY TLTS SC HSNC BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) TLTS SC HSTS 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total TLTS Between Groups Within Groups SC HSTS Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Hình 3.35 Kết phân tích thống kê biểu đồ hệ số tái sinh chồi thông qua nuôi cấy mô phân sinh đỉnh giống chanh dây tím chanh dây vàng Đam Rông (T1, V1), Đức Trọng (T2, V2) sau 10 tuần Giống chanh dây tím ONEWAY HSTS BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=LSD ALPHA(0.05) Descriptives HSTS N 1.00 2.00 Total HSTS Between Groups Within Groups Total Giống chanh dây vàng ONEWAY HSTS BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=LSD ALPHA(0.05) HSTS N 1.00 2.00 Total HSTS Between Groups Within Groups Total Kết giải trình tự thu đoạn DNA có độ dài 344 nucleotid, xác định rõ 326 nucleotid Trình tự virus có mẫu v1 > v1 Pos NNNNGTACGCATTTGATTTTTATGAAGTCAACTCAAAGACTCCTGAGAGAGCCAGAGAAGCGGTTGCACAGATG AAAGCAGCAGCCCTCGCCAACGTTAACACTAGGATGTTTGGCCTAGATGGTAACGTGGCAACCACCAGCGAAA ATACTGAAAGGCATACTGCACGTGATGTAAATCAGAACATGCATACTCTTTTGGGTATGGGACCAGTCCAGTAAA GGATTGGTAAACTCTCCACAGTTAGCATTTCGCAACGCTAGTATCTACGTATAGTAAATAGTACTTTAAGGTTCAA TCAGTGTGGTTATACCACCTCGCATTATCTTANNNNN Trình tự xác định rõ thành phần nucleotide >v1Pos GTACGCATTTGATTTTTATGAAGTCAACTCAAAGACTCCTGAGAGAGCCAGAGAAGCGGTTGCACAGATGAAAG CAGCAGCCCTCGCCAACGTTAACACTAGGATGTTTGGCCTAGATGGTAACGTGGCAACCACCAGCGAAAATACT GAAAGGCATACTGCACGTGATGTAAATCAGAACATGCATACTCTTTTGGGTATGGGACCAGTCCAGTAAAGGAT TGGTAAACTCTCCACAGTTAGCATTTCGCAACGCTAGTATCTACGTATAGTAAATAGTACTTTAAGGTTCAATCAG TGTGGTTATACCACCTCGCATTATCTTA ... kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào thử nghiệm tạo vi ghép? ?? thực Mục tiêu đề tài Xác định điều kiện tối ưu nhân giống in vitro chanh dây tím vàng kỹ thuật nuôi cấy TCL Tạo chanh dây vi ghép chanh. .. trình nhân giống chanh dây tím vàng thơng qua kỹ thuật nuôi cấy TCL tạo giống chanh dây vi ghép virus có nguồn gốc ni cấy mơ phân sinh đỉnh Đây hướng nghiên cứu có tiềm ứng dụng hiệu nhân giống. .. cấy khác lên khả tái sinh chồi nhân giống chanh dây tím vàng giai đoạn in vitro thông qua kỹ thuật nuôi cấy TCL; tạo chanh dây vi ghép có nguồn gốc từ ni cấy mơ phân sinh đỉnh kỹ thuật nuôi cấy