Nghiên cứu nhân giống cây chanh dây (passiflora edulis) bằng kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào và thử nghiệm tạo cây vi ghép TT

ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC ***** TRẦN HIẾU NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY CHANH DÂY (Passiflora edulis) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY LỚP MỎNG TẾ BÀO VÀ THỬ NGHIỆM TẠO CÂY VI GHÉP Ngành: Sinh lý học thực vật Mã số: 9.42.01.12 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH LÝ HỌC THỰC VẬT HUẾ - 2021 Cơng trình hồn thành tại: Phịng Sinh học phân tử Chọn tạo giống trồng, Viện Nghiên cứu Khoa học Tây Nguyên Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Dương Tấn Nhựt PGS.TS Cao Đăng Nguyên Phản biện 1: PGS.TS Nguyễn Thị Tâm Trường Đại học Sư phạm, Đại học Thái Nguyên Phản biện 2: PGS.TS Trần Thanh Hương Trường Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Phản biện 3: PGS.TS Trần Thị Thanh Huyền Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Đại học Huế họp vào hồi .giờ ngày tháng năm 2021 Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Trường Đại học Khoa học, Đại học Huế Thư viện Quốc gia Việt Nam CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Trần Hiếu, Hoàng Thanh Tùng, Cao Đăng Nguyên, Dương Tấn Nhựt (2018), Tạo nguồn mẫu in vitro cho giống chanh dây tím (Passiflora edulis Sims.) vàng (Passiflora edulis f flavicarpa), Tạp chí Khoa học Đại học Huế: Khoa học Tự nhiên, 127(1C), tr 71-84 Tran Hieu, Do Thi Thuy Tam, Nguyen Thi Nhat Linh, Hoang Thanh Tung, Huynh Gia Bao, Cao Dang Nguyen, Duong Tan Nhut (2018), Stimulation of shoot regeneration through leaf thin cell layer culture of Passiflora edulis Sims., Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 16(4), tr 669-677 Trần Hiếu, Hoàng Thanh Tùng, Cao Đăng Nguyên, Dương Tấn Nhựt (2019), Cải thiện khả rễ in vitro nâng cao tỷ lệ sống sót ngồi vườn ươm chanh dây tím (Passiflora edulis Sims.) có nguồn gốc từ ni cấy lớp mỏng tế bào, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, Trường Đại học Khoa học, ĐH Huế, 15(2), tr 97-110 Trần Hiếu, Hoàng Thanh Tùng, Cao Đăng Nguyên, Dương Tấn Nhựt (2019), Hiệu tái sinh chồi vi nhân giống chanh dây tím (Passiflora edulis Sims.) thơng qua ni cấy lớp mỏng tế bào đoạn thân cắt theo chiều dọc, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 17(4), tr 699-708 Tran Hieu, Truong Hoai Phong, Hoang Dac Khai, Hoang Thanh Tung, Do Manh Cuong, Vu Quoc Luan, Cao Dang Nguyen, Nguyen Ba Nam, Duong Tan Nhut (2021), An improved micropropagation of Passiflora edulis Sims based on thin cell layer technology, Scientia Horticulturae (Submitted) Tran Hieu, Truong Hoai Phong, Hoang Dac Khai, Nguyen Thi Nhu Mai, Do Manh Cuong, Vu Quoc Luan, Hoang Thanh Tung, Nguyen Ba Nam, Duong Tan Nhut (2021), Efficient production of in vitro vigorous passion fruit rootstock (Passiflora edulis f Flavicarpa) for micrografting, Plant Cell, Tissue and Organ Culture (Submitted) MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Chanh dây (Passiflora spp.) loại trồng có nguồn gốc từ Nam Mỹ (Brazil), trồng chủ yếu vùng cận nhiệt đới nhiệt đới có Việt Nam Chanh dây có hoa đẹp, ăn (giàu vitamin A, B5 C) chứa nhiều hoạt chất có giá trị flavonoid glycoside dẫn xuất apigenin, luteolin (Ozarowski Thiem, 2013) Chính vậy, chúng xem trồng có giá trị kinh tế cao Ở nước ta, năm 2019 suất chanh dây bình quân nước đạt 20,32 tấn/ha, vùng Tây Nguyên đạt bình quân 26,1 tấn/ha Cây chanh dây giữ vị trí thứ 17 số loại ăn có quy mơ diện tích sản xuất lớn 10.000 nước ta xếp hạng vị trí thứ 10 giới loại trái xuất Trong đó, tỉnh có diện tích trồng chanh dây lớn nhất: Gia Lai, Sơn La, Đăk Nông, Lâm Đồng Đăk Lăk với tổng diện tích 9.060 ha, chiếm 86,3% diện tích trồng chanh dây nước Tại Lâm Đồng, năm gần đây, diện tích canh tác chanh dây ngày tăng cao lên đến 1.200 năm 2019 Trong đó, khu vực trồng nhiều Đức Trọng, Lâm Hà, Đơn Dương Lạc Dương (WTO, 2019; taichinhdoanhnghiep.net.vn) Giống chanh dây trồng nước ta chủ yếu nhập từ giống Đài Loan với giá thành cao nguồn cung không ổn định Bên cạnh đó, người trồng thường sử dụng phương pháp truyền thống với hệ số nhân thấp gieo hạt, giâm hom, ghép,… khiến chất lượng giống độ đồng giảm, mức độ thối hóa tỷ lệ nhiễm bệnh lại tăng lên Giải pháp giống chất lượng tốt, đáp ứng số lượng lớn mục tiêu thách thức cho nhà khoa học Các nghiên cứu nhân giống vơ tính liên quan đến chi Passiflora khởi đầu từ năm 1960, kể từ đó, nhiều nghiên cứu báo cáo (Prammanee cs., 2011; Vieira cs., 2014; Antoniazzi cs., 2018) Tuy nhiên, hiệu tái sinh tương đối thấp hầu hết nghiên cứu Chính vậy, cần tìm phương thức ni cấy in vitro phù hợp để ứng dụng cho đối tượng Kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào (kỹ thuật nuôi cấy TCL) kỹ thuật nuôi cấy mẫu có kích thước nhỏ cắt từ quan thực vật khác Khi mẫu phân tách theo chiều dọc gọi lTCL (longitudinal TCL) mẫu phân tách theo chiều ngang gọi tTCL (transverse TCL) (Tran Thanh Van, 2003) Kỹ thuật có nhiều ưu điểm: mẫu tiếp xúc trực tiếp với mơi trường diện tích tiếp xúc lớn; lượng hormone nội sinh mẫu thấp; mẫu nuôi cấy đồng đáp ứng nhanh với điều kiện môi trường; phôi quan sơ khởi hình thành tần số cao, tiềm tái sinh cao; tạo giống trồng hồn chỉnh, biến dị; nhanh chóng đạt kết thời gian ngắn,… Chính ưu điểm mà kỹ thuật áp dụng thành công cho phát sinh phôi vô tính tái sinh chồi nhiều lồi hai mầm mầm, bao gồm vài giống Lan giống trồng khác Dendrobium aqueum (Parthibhan cs., 2018), sâm Ngọc Linh (Nhut cs., 2012) Nó ứng dụng thành công tái sinh số thân gỗ bao gồm cọ dầu, táo,… (Scherwinski-Pereira cs., 2010; Dobránszki Teixeira da Silva, 2013) Ngồi ra, kỹ thuật cịn đạt tỷ lệ thành công cao đối tượng xem khó ni cấy lúa mì, tre, thông (Nhut cs., 2003a; Nhut cs., 2003b) Vi ghép kỹ thuật sử dụng vi nhân giống để cải thiện chất lượng, gia tăng suất giống nhân nhanh giống đặc biệt ăn Bởi kỹ thuật có tiềm kết hợp đặc điểm di truyền cành ghép với đặc tính kháng bệnh, khả thích nghi mơi trường gốc ghép; với ưu điểm nhân nhanh ống nghiệm Mặt khác, kỹ thuật vi ghép góp phần tạo giống hoàn toàn bệnh ứng dụng cho sản xuất đại trà Vì vậy, quy trình vi ghép thành công phát triển cho loại ăn khác bao gồm hạch nhân, táo, nho, dâu tằm, cam quýt,… (Hussian cs., 2014) Xuất phát từ vấn đề trên, đề tài: “Nghiên cứu nhân giống chanh dây (Passiflora edulis) kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào thử nghiệm tạo vi ghép” thực Mục tiêu đề tài - Xác định điều kiện tối ưu nhân giống in vitro chanh dây tím vàng kỹ thuật nuôi cấy TCL - Tạo chanh dây vi ghép chanh dây vàng (gốc ghép) chanh dây tím (cành ghép) có nguồn gốc từ nuôi cấy mô phân sinh đỉnh kết hợp với kỹ thuật nuôi cấy TCL vi ghép; bước đầu đánh giá sinh trưởng phát triển chanh dây vi ghép điều kiện vườn ươm đồng ruộng Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Ý nghĩa khoa học Kết đề tài cung cấp dẫn liệu khoa học kỹ thuật nuôi cấy TCL, nuôi cấy mô phân sinh đỉnh vi ghép để nghiên cứu tái sinh chồi nhân giống chanh dây ảnh hưởng yếu tố điều kiện nuôi cấy khác Ý nghĩa thực tiễn Đề tài thiết lập quy trình nhân giống chanh dây tím vàng thơng qua kỹ thuật ni cấy TCL tạo giống chanh dây vi ghép virus có nguồn gốc ni cấy mơ phân sinh đỉnh Đây hướng nghiên cứu có tiềm ứng dụng hiệu nhân giống trồng Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu đề tài Đối tượng nghiên cứu Chanh dây tím (Passiflora edulis Sims.) chanh dây vàng (Passiflora edulis f flavicarpa) Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố điều kiện nuôi cấy khác lên khả tái sinh chồi nhân giống chanh dây tím vàng giai đoạn in vitro thông qua kỹ thuật nuôi cấy TCL; tạo chanh dây vi ghép có nguồn gốc từ nuôi cấy mô phân sinh đỉnh kỹ thuật nuôi cấy TCL Trồng thử nghiệm vườn ươm ngồi đồng ruộng để đánh giá khả thích nghi, sinh trưởng phát triển chanh dây vi ghép Những đóng góp luận án Luận án nghiên cứu thành cơng quy trình nhân giống chanh dây tím vàng từ nguồn mẫu ban đầu thông qua kỹ thuật nuôi cấy TCL Luận án sử dụng kỹ thuật nuôi cấy mô phân sinh đỉnh để tạo vật liệu chanh dây tím vàng virus sử dụng vi ghép Luận án xây dựng thành công phương pháp vi ghép giống chanh dây tím (cành ghép) vàng (gốc ghép) để tạo chanh dây vi ghép virus Kết cấu luận án Luận án gồm 150 trang; Mở đầu trang; Chương 1: Tổng quan tài liệu 28 trang; Chương 2: Vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu 17 trang; Chương 3: Kết thảo luận 79 trang; Phần kết luận kiến nghị trang; Các cơng trình cơng bố liên quan đến luận án trang; Phần tài liệu tham khảo 19 trang với 171 tài liệu tham khảo tiếng Việt, tiếng Anh Internet Luận án có 40 bảng, 50 hình Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Luận án tham khảo tổng kết vấn đề với nội dung liên quan đến: (1) Sơ lược chanh dây; (2) Kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào (nuôi cấy TCL); (3) Ảnh hưởng yếu tố lên khả tái sinh, sinh trưởng phát triển thực vật Chƣơng 2: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Các mẫu chồi đỉnh, đốt thân mang chồi nách đoạn thân giống chanh dây tím (Passiflora edulis Sims.) vàng (Passiflora edulis f flavicarpa) tháng tuổi thu nhận huyện Đam Rông Đức Trọng (Lâm Đồng) sử dụng làm nguồn mẫu ban đầu cho nghiên cứu tạo nguồn vật liệu in vitro nuôi cấy mô phân sinh đỉnh nghiên cứu vi ghép tạo chanh dây virus 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu vi nhân giống chanh dây tím vàng thơng qua kỹ thuật ni cấy TCL 2.2.2 Nghiên cứu tạo chanh dây lai sinh dưỡng giống chanh dây tím vàng kỹ thuật vi ghép 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 2.3.1.1 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng nguồn mẫu lên tái sinh chồi in vitro giống chanh dây tím vàng 2.3.1.2 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng BA riêng lẻ, kết hợp NAA lên khả tái sinh chồi từ TCL giống chanh dây tím vàng 2.3.1.3 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng BA riêng lẻ, kết hợp NAA lên khả tái sinh chồi từ TCL đoạn thân giống chanh dây tím vàng 2.3.1.4 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng vị trí mẫu (TCL) lên khả tái sinh chồi giống chanh dây tím vàng 2.3.1.5 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng giá thể lên khả tái sinh chồi từ nguồn mẫu TCL giống chanh dây tím vàng 2.3.1.6 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng khác lên khả tái sinh chồi từ nguồn mẫu TCL giống chanh dây tím vàng 2.2.1.7 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng AgNO3, AgNPs lên khả tái sinh chồi từ mẫu TCL giống chanh dây tím vàng 2.2.1.8 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng mơi trường khống lên nhân nhanh chồi (có nguồn gốc TCL) giống chanh dây tím vàng 2.2.1.9 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng cytokinin (BA kết hợp Kin) lên nhân nhanh chồi (có nguồn gốc TCL) giống chanh dây tím vàng 2.2.1.10 Thí nghiệm 10 Nghiên cứu ảnh hưởng bình ni cấy thống khí khơng thống khí lên nhân nhanh chồi (có nguồn gốc TCL) giống chanh dây tím vàng 2.2.1.11 Thí nghiệm 11 Nghiên cứu ảnh hưởng auxin (NAA, IBA) lên khả hình thành rễ chồi in vitro (có nguồn gốc TCL) sinh trưởng vườn ươm giống chanh dây tím vàng 2.2.1.12 Thí nghiệm 12 Nghiên cứu ảnh hưởng ánh sáng LED lên chất lượng in vitro (có nguồn gốc TCL) sinh trưởng ngồi vườn ươm giống chanh dây tím vàng 2.2.1.13 Thí nghiệm 13 Tạo nguồn vật liệu chồi thông qua nuôi cấy mô phân sinh đỉnh 2.2.1.14 Thí nghiệm 14 Vi ghép giống chanh dây tím vàng có nguồn gốc từ ni cấy mơ phân sinh đỉnh 2.2.1.15 Trồng thử nghiệm chanh dây vi ghép ngồi vườn ươm đồng ruộng 2.3.2 Một số cơng thức tính thu nhận số liệu 2.3.3 Phương pháp xử lý thống kê 2.3.4 Phương pháp giải phẫu hình thái 2.3.5 Phương pháp kiểm tra virus dựa kỹ thuật Reverse transcriptase-PCR (RT-PCR) 2.4 Điều kiện nuôi cấy 2.5 Địa điểm thời gian thực đề tài Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Vi nhân giống chanh dây tím vàng thơng qua kỹ thuật ni cấy TCL 3.1.1 Tạo nguồn vật liệu in vitro ảnh hưởng điều kiện khử trùng nguồn mẫu Kết nghiên cứu cho thấy mẫu đốt thân chứa chồi nách khử trùng AgNPs (200 mg/L) thời gian 15 phút cho hiệu so với NaOCl (10.000 mg/L) 15 phút HgCl2 (1.000 mg/L) phút 3.1.2.3 So sánh hiệu tái sinh chồi từ nguồn mẫu TCL Kết thu cho thấy giống tím, mẫu tTCL-L cho hệ số nhân chồi (16,00) cao gấp 3,40 lần so với mẫu lTCL-T (4,70); giống vàng, mẫu lTCL-T lại cho hệ số nhân chồi (4,30) cao gấp 4,30 lần so với mẫu tTCL-L mẫu lTCL-L (0,00) (Hình 3.8) Hình 3.8 Biểu đồ hệ số nhân chồi từ mẫu tTCL-L, lTCL-T giống chanh dây tím vàng sau tuần nuôi cấy 3.1.2.4 Ảnh hưởng vị trí mẫu Bảng 3.8 Ảnh hưởng vị trí mẫu tTCL-L giống chanh dây tím lên khả tái sinh chồi sau tuần ni cấy Vị trí mẫu TLTSC (%) 31,67c* 83,33b 100,00a 68,33c 21,67d SC 2,67b 4,00a 4,67a 3,00b 1,33c CCC (cm) 0,20c 0,47b 1,17a 0,23c 0,20c Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan Kết thu thí nghiệm cho thấy, mẫu tTCL-L giống chanh dây tím mẫu lTCL-T giống chanh dây vàng thu nhận từ vị trí đốt thân thứ (vị trí phần giữa) cho hiệu tái sinh chồi cao (Bảng 3.8 3.9) 10 Bảng 3.9 Ảnh hưởng vị trí mẫu lTCL-T giống chanh dây vàng lên khả tái sinh chồi sau tuần ni cấy Vị trí mẫu TLTSC (%) 41,67c* 68,33b 86,67a 0,00d 0,00d SC -1 2,67b 3,67a 0,00c 0,00c CCC (cm) 0,93b 1,17a 0,00c 0,00c Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan cụm chồi gồm chồi có kích thước nhỏ (< mm) 3.1.2.5 Ảnh hưởng giá thể Sau tuần nuôi cấy kết cho thấy, agar giá thể nuôi cấy thích hợp cho khả cảm ứng tái sinh chồi (Bảng 3.10 3.11) Bảng 3.10 Ảnh hưởng giá thể lên khả tái sinh chồi từ tTCL-L giống chanh dây tím sau tuần ni cấy Giá thể Gelrite Bơng gịn Agar TLTSC (%) 0,00c* 46,67b 100,00a SC 0,00b 1,67b 4,33a CCC (cm) 0,00c 0,37b 1,57a Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan Bảng 3.11 Ảnh hưởng giá thể lên khả tái sinh chồi từ lTCL-T giống chanh dây vàng sau tuần nuôi cấy Giá thể TLTSC (%) SC CCC (cm) Gelrite 31,67c* -1 Bơng gịn 48,33b 2,33b 0,27b a a Agar 88,33 3,33 1,43a Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan cụm chồi gồm chồi có kích thước nhỏ (< mm) 3.1.2.6 Ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng Điều kiện chiếu sáng (16 giờ/ngày tối hồn tồn) khơng ảnh hưởng đến phát sinh hình thái chồi, mà cịn ảnh hưởng đến cảm ứng tái sinh chồi trực tiếp gián tiếp thông qua phát sinh mô sẹo từ mẫu tTCL-L chanh dây tím lTCL-T chanh dây vàng sau tuần nuôi cấy (Bảng 3.12 3.13) 11 Bảng 3.12 Ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng lên khả từ tTCL-L giống chanh dây tím sau tuần ni cấy Tỷ lệ phát sinh hình thái (%) Điều kiện SC chiếu sáng Chồi Mô sẹo * 16 giờ/ngày 100,00 ± 0,00 4,44 ± 1,11 4,33 ± 0,33 Tối hoàn toàn 71,11 ± 2,22 100,00 ± 0,00 3,33 ± 0,33 tái sinh chồi CCC (cm) 1,13 ± 0,33 0,47 ± 0,33 Ghi chú: * Giá trị trung bình ± SE có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 theo phép thử LSD Bảng 3.13 Ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng lên khả tái sinh chồi từ lTCL-T giống chanh dây vàng sau tuần nuôi cấy Điều kiện chiếu sáng Tỷ lệ phát sinh hình thái (%) Chồi Mơ sẹo 16 giờ/ngày Tối hồn tồn 87,78 ± 2,22 * 54,44 ± 1,11 0,00 ± 0,00 12,22 ± 1,11 SC CCC (cm) 3,67 ± 0,33 2,67 ± 0,33 1,37 ± 0,33 0,33 ± 0,33 Ghi chú: * Giá trị trung bình ± SE có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 theo phép thử LSD 3.1.2.7 Ảnh hưởng AgNO3, AgNPs Bảng 3.14 Ảnh hưởng AgNO3, AgNPs lên tTCL-L giống chanh dây tím sau tuần ni cấy Tỷ lệ phát sinh hình thái Nghiệm thức (%) AgNO3 AgNPs Chồi Mô sẹo (mg/L) (mg/L) a* 0,0 0,0 100,00 7,78e k 1,0 8,89 100,00a i 2,0 20,56 100,00a a 3,0 100,00 0,00f b 4,0 84,44 0,00f c 5,0 67,78 31,11b k 6,0 7,78 100,00a f 0,5 37,22 16,67c h 1,0 25,56 12,22d d 1,5 51,11 11,67d a 2,0 100,00 0,00f g 2,5 28,89 6,67e f 3,0 36,67 0,00f e 3,5 47,78 0,00f j 4,0 16,11 0,00f khả tái sinh chồi từ SC CCC (cm) 3,67bc 1,33g 1,67fg 6,00a 4,33b 2,67de 1,33g 1,33g 2,33ef 3,33cd 6,67a 1,67fg 2,00efg -1 -1 1,47b 0,53f 0,47fg 1,13d 1,23c 1,57a 0,23h 0,27h 0,47fg 0,73e 1,63a 0,47fg 0,40g - Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan cụm chồi gồm chồi có kích thước nhỏ (< mm) 12 Bảng 3.15 Ảnh hưởng AgNO3, AgNPs lên khả tái sinh chồi từ lTCL-T giống chanh dây vàng sau tuần nuôi cấy Nghiệm thức AgNO3 AgNPs (mg/L) (mg/L) 0,0 0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 Tỷ lệ phát sinh hình thái (%) Chồi Mơ sẹo 86,11b* 83,89bc 85,00b 100,00a 82,22c 58,89f 0,00j 48,89g 67,78e 72,22d 100,00a 60,00f 44,44h 38,33i 0,00j 0,00i 0,00i 0,00i 0,00i 5,00h 33,33c 100,00a 0,00i 7,22gf 6,11gh 0,00i 8,33ef 8,89e 13,89d 76,11b SC CCC (cm) 3,33b -1 1,67cd 3,00b 1,33d -1 0,00e -1 2,00c 3,00b 5,00a 1,33d -1 -1 0,00e 1,30a 0,37e 0,57c 0,47d 0,00f 0,43d 0,67b 1,27a 0,33e 0,00f Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan cụm chồi gồm chồi có kích thước nhỏ (< mm) 3.2 3.2.1 Nhân nhanh chồi Ảnh hưởng mơi trường khống Kết thu nhận thí nghiệm cho thấy, hàm lượng khống đa lượng mơi trường ni cấy có ảnh hưởng rõ rệt đến nhân nhanh chồi sau tuần nuôi cấy (Bảng 3.16 3.17) Bảng 3.16 Ảnh hưởng mơi trường khống lên nhân nhanh chồi giống chanh dây tím sau tuần ni cấy Mơi trng khoỏng MS ẳMS ẵMS ắMS MSM ẵMSM SC 3,67c* 3,00c 3,33c 6,67a 5,00b 3,00c CCC (cm) 1,93b 1,33d 1,63c 2,13b 2,93a 1,43cd SL 4,00b 3,00c 3,67bc 5,67a 5,33a 3,67bc SPAD (nmol/cm2) 17,40c 7,30e 5,97f 8,60d 24,27a 21,30b Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan SL: Số 13 Bảng 3.17 Ảnh hưởng mơi trường khống lên nhân nhanh chồi giống chanh dây vàng sau tun nuụi cy Mụi trng khoỏng MS ẳMS ẵMS ắMS MSM ½MSM SC 3,00bc* 3,67b 2,67cd 2,00d 4,67a 3,33bc CCC (cm) 1,87a 1,43b 1,30c 1,20c 1,47b 1,23c SL 4,33a 3,33b 3,00b 2,67b 4,67a 3,33b SPAD (nmol/cm2) 17,73c 18,73b 5,37e 4,77e 26,83a 16,00d Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan 3.2.1.1 Ảnh hưởng BA kết hợp Kin Bảng 3.18 Ảnh hưởng BA kết hợp Kin lên nhân chồi giống chanh dây tím sau tuần ni cấy BA (mg/L) 0,0 0,5 0,5 0,5 0,5 1,0 1,0 1,0 1,0 1,5 1,5 1,5 1,5 2,0 2,0 2,0 2,0 Kin (mg/L) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 0,5 1,0 1,5 2,0 0,5 1,0 1,5 2,0 0,5 1,0 1,5 2,0 SC 1,00g* 2,00f 2,67ef 5,67a 3,67cd 2,67ef 3,67cd 5,00ab 3,67cd 3,67cd 4,33bc 5,00ab 2,00f 3,00de 2,67ef 3,67cd 2,67ef CCC (cm) 1,37jk 2,33ab 2,43a 2,50a 2,23bc 2,13cd 1,33k 1,87ef 1,67gh 1,57hi 1,83fg 2,03de 1,53hij 1,47ijk 1,43ijk 1,87ef 1,43ijk SL 3,67g 6,33bc 6,67ab 7,33a 4,67defg 4,67defg 5,33de 6,67ab 4,67defg 5,00def 5,67cd 6,33bc 4,00fg 4,33efg 3,67g 4,67defg 4,33efg SPAD (nmol/cm2) 21,13hi 25,60ef 26,63bc 30,80a 24,70f 25,17fg 26,03de 26,63bc 26,53cd 21,47hi 21,03i 27,10b 21,63h 23,53g 23,70g 24,03g 23,80g Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan 14 Bảng 3.19 Ảnh hưởng BA kết hợp Kin lên nhân chồi giống chanh dây vàng sau tuần nuôi cấy BA (mg/L) 0,0 0,5 0,5 0,5 0,5 1,0 1,0 1,0 1,0 1,5 1,5 1,5 1,5 2,0 2,0 2,0 2,0 Kin (mg/L) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 0,5 1,0 1,5 2,0 0,5 1,0 1,5 2,0 0,5 1,0 1,5 2,0 SC 1,00i* 2,00h 3,00fg 4,33cd 4,67bcd 5,00bc 5,30b 6,30a 3,00fg 2,67fgh 4,00de 4,33cd 5,00bc 2,00h 2,67fgh 3,33ef 2,33gh CCC (cm) 1,23g 1,50ef 1,53e 1,83cd 1,93c 2,23ab 1,87c 2,33a 1,57e 1,53e 1,57e 2,13b 1,73d 1,17g 1,27g 1,40f 1,17g SL 4,00gh 3,67h 6,00cd 6,67abc 6,33bcd 6,67abc 7,33a 7,00ab 5,00ef 4,67fg 6,00cd 5,67de 7,33a 4,00gh 4,00gh 4,67fg 4.33fgh SPAD (nmol/cm2) 21,60i 21,10j 23,63g 25,63e 26,07d 27,17bc 20,50k 26,87c 25,43e 21,57i 21,37ij 27,37b 27,77a 21,63i 22,27h 24,83f 23,63g Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan 3.2.1.2 Ảnh hưởng bình ni cấy thống khí khơng thống khí Bảng 3.20 Ảnh hưởng bình ni cấy thống khí khơng thống khí lên nhân chồi giống chanh dây tím sau tuần ni cấy BNC KTK TK SC 6,67±0,33* 8,00±0,00 CCC (cm) 2,77±0,03 3,07±0,07 SL 8,33±0,33 11,67±0,33 SPAD (nmol/cm2) 30,00±0,12 35,70±0,15 Ghi chú: * Giá trị trung bình ± SE có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 theo phép thử LSD BNC: Bình ni cấy; KTK: Khơng thống khí; TK: Thống khí Bảng 3.21 Ảnh hưởng bình ni cấy thống khí khơng thống khí lên nhân chồi giống chanh dây vàng sau tuần nuôi cấy BNC KTK TK SC 6,00±0,00* 7,33±0,33 CCC (cm) 2,27±0,07 2,77±0,03 SL 6,33±0,33 9,33±0,33 SPAD (nmol/cm2) 27,80±0,12 31,40±0,21 Ghi chú: * Giá trị trung bình ± SE có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 theo phép thử LSD 15 Kết nghiên cứu cho thấy, chồi chanh dây tím chanh dây vàng ni cấy điều kiện thống khí cho hiệu nhân chồi cao so với điều kiện khơng thống khí (Bảng 3.20 3.21) 3.2.2 Hình thành rễ cải thiện chất lƣợng in vitro 3.2.2.1 Ảnh hưởng NAA IBA lên khả hình thành rễ in vitro Đối với giống chanh dây tím, nồng độ 2,5 mg/L NAA IBA, tỷ lệ rễ in vitro (68,33%; 78,33%; tương ứng), số rễ (4,67; 4,00; tương ứng) số SPAD (35,83 nmol/cm2; 34,78 nmol/cm2; tương ứng) thu cao (Bảng 3.22) Ở giống vàng, bổ sung IBA vào môi trường nuôi cấy cho hiệu rễ in vitro cao so với NAA đạt cao nồng độ 2,5 mg/L IBA, với tỷ lệ rễ (75,00%), số rễ (4,67), chiều cao chồi (8,10 cm), số (8,67) số SPAD (31,73 nmol/cm2) (Bảng 3.23) Bảng 3.22 Ảnh hưởng auxin (NAA, IBA) lên hình thành rễ chồi in vitro giống chanh dây tím sau tuần ni cấy NAA (mg/L) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 - IBA (mg/L) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 TLRR (%) 0,00j* 23,33h 28,33g 40,00ef 51,67d 68,33b 56,67c 15,00i 36,67f 43,33e 56,67c 78,33a 60,00c CDR (cm) 0,00i 0,30gh 0,43fgh 0,83ef 1,77d 3,00b 3,50a 0,20gh 0,63fg 2,33c 1,30e 3,73a 0,87ef SR 0,00h 1,33fg 2,00ef 3,00cd 3,67bc 4,67a 2,33de 1,00g 2,67de 3,00cd 3,67bc 4,00ab 3,67bc CCC (cm) 3,00i 3,57h 3,63h 3,93g 5,50de 5,80c 8,33a 3,63h 3,73gh 5,10f 5,67cd 7,53b 5,33ef SL 3,00g 4,33f 4,00f 4,67ef 6,00cd 6,33c 7,33b 3,00g 4,33f 6,67bc 7,33b 9,33a 5,33de SPAD (nmol/cm2) 31,80c 26,63ef 24,87h 23,40i 20,83j 35,83a 30,40d 27,17e 26,90ef 26,40f 25,67g 34,73b 32,23c Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan TLRR: Tỷ lệ rễ; SR; Số rễ; CDR: Chiều dài rễ 16 Bảng 3.23 Ảnh hưởng auxin (NAA, IBA) lên khả rễ chồi in vitro chanh dây vàng sau tuần nuôi cấy NAA (mg/L) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 - IBA (mg/L) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 TLRR (%) 0,00j* 28,33h 33,33g 40,00f 68,33b 60,00c 48,33e 18,33i 38,33f 48,33e 53,33d 75,00a 56,67cd SR 0,00g 1,33f 1,67ef 2,67cd 3,67b 2,67cd 2,33de 1,00f 2,67cd 3,00bcd 3,33bc 4,67a 3,33bc CDR (cm) 0,00i 0,97bcd 0,63efg 0,43gh 1,50a 0,77def 1,10bc 0,23hi 1,00bcd 1,27ab 0,63efg 0,93cde 0,50fgh CCC (cm) 3,47i 5,53de 3,00j 6,07c 6,57b 4,87gh 6,73b 4,57hi 4,77hi 5,33ef 5,80cd 8,10a 5,13fg SL 4,00fg 4,67ef 2,67i 4,00fg 6,67b 7,00b 6,33bc 3,67gh 3,00hi 5,33de 5,67cd 8,67a 5,67cd SPAD (nmol/cm2) 28,73c 27,17d 25,17f 24,20g 26,27e 27,07d 25,67f 25,60f 26,96d 30,10b 30,27b 31,73a 32,10a Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05theo phép thử Duncan 3.2.2.2 Ảnh hưởng LED lên chất lượng in vitro Kết ghi nhận bảng 3.26 3.27 cho thấy, điều kiện chiếu sáng khác cho tỷ lệ rễ cao (trên 70,00%) tỷ lệ đạt cao (100,00%) nghiệm thức 70R:30B Bảng 3.26 Sinh trưởng giống chanh dây tím ni cấy in vitro điều kiện ánh sáng LED sau tuần NT FL 100B 100R 90R:10B 80R:20B 70R:30B 60R:40B 50R:50B TLRR (%) 80,00d 76,67e 86,67c 90,00b 100,00a 100,00a 73,33f 70,00g SR 2,33de* 2,33de 3,00cd 3,67bc 4,33b 7,33a 2,33de 1,67e CDR (cm) 0,57g 0,83f 1,17e 2,70c 3,17b 5,40a 1,23e 1,77d CCC (cm) 5,40e 7,17d 8,60c 7,50d 9,40b 10,60a 4,27f 3,93f SL 7,33e 7,67de 9,33ab 8,33cd 8,67bc 9,67a 4,67f 4,00f SPAD (nmol/cm2) 33,80d 36,77c 37,50a 37,27b 37,17b 37,57a 32,73e 29,63f Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan NT: Nghiệm thức 17 Bảng 3.27 Sinh trưởng giống chanh dây vàng nuôi cấy in vitro điều kiện ánh sáng LED sau tuần NT FL 100B 100R 90R:10B 80R:20B 70R:30B 60R:40B 50R:50B TLRR (%) 70,00f 80,00d 80,00d 86,67c 90,00b 100,00a 80,00d 75,00e SR 2,33cd* 2,67cd 2,67cd 3,00c 4,00b 6,33a 2,00de 1,33e CDR (cm) 0,63e 0,90d 1,10c 0,93d 1,27b 3,00a 0,57e 0,37f CCC (cm) 7,17e 8,17d 9,33c 8,50d 10,40b 11,50a 10,17b 5,83f SL 7,00e 7,67de 9,33c 10,33b 7,33de 11,33a 11,00ab 8,00d SPAD (nmol/cm2) 33,13h 35,27f 37,07e 37,37d 37,47c 38,47a 37,60b 33,97g Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 theo phép thử Duncan Sau 10 tuần tiếp tục sinh trưởng điều kiện vườn ươm, in vitro nghiệm thức 70R:30B sinh trưởng tốt so với nghiệm thức lại, với chiều cao đạt cao 32,67 cm chanh dây vàng; đó, chanh dây tím chiều cao cao 31,17 cm (Bảng 3.28 3.29) Bảng 3.28 Sinh trưởng in vitro giống chanh dây tím ánh sáng LED sau 10 tuần giai đoạn vườn ươm NT TLS (%) CCC (cm) Số CDL (cm) CRL (cm) FL 80,00d 12,37f 7,00e 5,63e 2,40e 100B 88,33c 15,40e 8,00cd 6,30d 2,73cd 100R 93,33b 17,60d 7,67cde 6,37cd 2,77c 90R:10B 100,00a 19,00c 7,33de 6,50cd 2,53de 80R:20B 100,00a 21,40b 9,00ab 6,83b 2,90bc 70R:30B 100,00a 31,17a 9,33a 7,17a 3,13a 60R:40B 76,67d 15,27e 8,33bc 6,67bc 3,03ab 50R:50B 70,00e 10,17g 5,67f 5,83e 2,43e Ghi chú: * Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 theo phép thử Duncan CDL:Chiều dài lá; CRL: Chiều rộng 18 Bảng 3.29 Sinh trưởng in vitro giống chanh dây vàng ánh sáng LED sau 10 tuần giai đoạn vườn ươm NT TLS (%) CCC (cm) Số CDL (cm) CRL (cm) FL 76,67cd 14,07g 5,00e 5,63e 2,57cd 100B 81,67c 18,07d 6,33d 6,20cd 2,87b 100R 93,33b 19,63c 6,67cd 6,37cd 2,83b 90R:10B 100,00a 16,60f 9,33b 6,30cd 2,57cd 80R:20B 100,00a 21,33b 9,67b 6,80b 2,97ab 70R:30B 100,00a 32,67a 10,67a 7,23a 3,03a 60R:40B 76,67cd 17,37e 7,33c 6,47c 2,67c 73,33d 11,40h 9,67b 6,13d 2,47d 50R:50B * Ghi chú: Những chữ khác cột thể khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 theo phép thử Duncan 3.2 TẠO CÂY CHANH DÂY LAI SINH DƢỠNG GIỮA GIỐNG CHANH DÂY TÍM VÀ VÀNG BẰNG KỸ THUẬT VI GHÉP 3.2.1 Tạo nguồn vật liệu in vitro thông qua nuôi cấy mô phân sinh đỉnh Bảng 3.30 Nuôi cấy mô phân sinh đỉnh giống chanh dây tím sau 4, 10 tuần ni cấy tuần NT T1 T2 10 tuần TLS (%) 50,00±0,00 48,33±1,67 TLN (%) * 50,00±0,00 51,67±1,67 TLTSC (%) 50,00±0,00 48,33±1,67 SC CCC (cm) x 4,33±0,33 4,00±0,00y 1,53±0,33 1,43±0,33 Ghi chú: * Giá trị trung bình ± SE có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 theo phép thử LSD x, y cụm chồi gồm chồi có kích thước nhỏ (< mm); T1: Huyện Đam Rông; T2: Huyện Đức Trọng; TLS: Tỷ lệ sống; TLN: Tỷ lệ nhiễm Kết sau tuần nuôi cấy cho thấy, tỷ lệ nhiễm mẫu tất nghiệm thức giống chanh dây tím vàng (T1, T2, V1 V2) cho tỷ lệ cao (trên 50,00%) Như vậy, khu vực thu mẫu giống chanh dây (huyện Đam Rơng Đức Trọng) thí 19 nghiệm không ảnh hưởng đến khả tạo nguồn vật liệu chồi in vitro thông qua nuôi cấy mô phân sinh đỉnh (Bảng 3.30 3.31) Kết điện di gel agarose mẫu loại virus gây bệnh cho thấy, mẫu thử nghiệm: V2, T1 T2 không phát band đặc hiệu loại virus khảo sát; có mẫu V1 xuất band có kích thước tương đương 327 bp Potyvirus, không phát band đặc hiệu CMV, ToRSV Bảng 3.31 Nuôi cấy mô phân sinh đỉnh giống chanh dây vàng sau 4, 10 tuần nuôi cấy tuần NT V1 V2 10 tuần TLS (%) 48,33±1,67 46,67±1,67 TLN (%) * 51,67±1,67 53,33±1,67 TLTSC (%) 48,33±1,67 46,67±1,67 SC CCC (cm) x 3,67±0,33 3,33±0,33y 1,37±0,33 1,47±0,33 Ghi chú: * Giá trị trung bình ± SE có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 theo phép thử LSD x, y cụm chồi gồm chồi có kích thước nhỏ (< mm) V1: Huyện Đam Rông; V2: Huyện Đức Trọng 3.2.2 Tái sinh nhân nhanh chồi (chồi có nguồn gốc từ nuôi cấy mô phân sinh đỉnh) thông qua kỹ thuật nuôi cấy TCL Bảng 3.32 Tái sinh chồi từ mẫu TCL giống chanh dây tím vàng sau tuần ni cấy Nguồn mẫu tTCL-L chanh dây tím lTCL-T chanh dây vàng TLTSC (%) 100±0,00* 87,78±1,11 SC 3,67±0,33 4,33±0,33 CCC (cm) 1,37±0,33 1,40±0,58 Ghi chú: * Giá trị trung bình ± SE có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 theo phép thử LSD Sau tuần nuôi cấy, khả tái sinh chồi nguồn mẫu TCL có nguồn gốc từ mơ phân sinh đỉnh giống chanh dây tím chanh dây vàng có khác biệt (Bảng 3.32) Ở giai đoạn nhân chồi, chồi có nguồn gốc từ tTCL-L chanh dây tím có khả sinh trưởng tốt so với chồi có nguồn gốc từ lTCL-T chanh dây vàng sau tuần nuôi cấy thể tiêu 20 số chồi/mẫu (8,00 chồi), chiều cao chồi (3,27 cm) số (10,67) (Bảng 3.33) Bảng 3.33 Nhân nhanh chồi giống chanh dây tím vàng sau tuần ni cấy Nguồn mẫu SC CCC (cm) SL SPAD (nmol/cm2) tTCL-L chanh dây tím 8,00±0,00* 3,27±0,07 10,67±0,33 31,10±0,15 lTCL-T chanh dây vàng 6,67±0,33 3,00±0,06 8,33±0,33 31,00±0,25 Ghi chú: * Giá trị trung bình ± SE có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 theo phép thử LSD 3.2.3 Vi ghép Kết cho thấy, mẫu đốt thân chứa chồi nách sử dụng làm cành ghép cho tỷ lệ thành công (73,33%) cao so với chồi đỉnh (46,67%) (Hình 3.42) Hình 3.42 Biểu đồ tỷ lệ vi ghép từ loại cành ghép sau tuần ni cấy 3.2.4 Thích nghi, sinh trƣởng chanh dây vi ghép điều kiện vƣờn ƣơm trồng thử nghiệm đồng ruộng Sau 10 tuần trồng vườn ươm, kết cho thấy tỷ lệ sống ghép cao (> 65,00%), ghép mang cành ghép đốt thân chứa chồi nách cho tỷ lệ sống (83,33%) cao so với ghép 21 mang cành ghép chồi đỉnh (66,67%) Ngoài ra, ghép mang cành ghép đốt thân chứa chồi nách sinh trưởng mạnh điều kiện vườn ươm so với ghép mang cành ghép chồi đỉnh (Bảng 3.35) Bảng 3.35 Sinh trưởng chanh dây vi ghép (có nguồn gốc từ loại cành ghép) sau 10 tuần giai đoạn vườn ươm NT TLS (%) CCC (cm) Số CDL (cm) CRL (cm) CĐ 66,67±1,67* 23,57±0,23 9,67±0,33 6,93±0,07 3,13±0,07 ĐT 83,33±1,67 35,23±0,15 11,67±0,33 7,37±0,07 3,57±0,07 * Ghi chú: Giá trị trung bình ± SE có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 theo phép thử LSD CĐ: Chồi đỉnh; ĐT: Đốt thân Kết thực nghiệm đồng ruộng cho thấy, sinh trưởng phát triển chanh dây vi ghép với cành ghép đốt thân chứa chồi nách chanh dây vi ghép với cành ghép chồi đỉnh khơng có khác biệt Tuy nhiên nghiên cứu này, chanh dây vi ghép với cành ghép đốt thân chứa chồi nách lựa chọn sử dụng cho mục đích nhân giống chanh dây vi ghép virus KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Kết luận 1: Vi nhân giống chanh dây tím vàng từ đốt thân chứa chồi nách đƣợc thực thành công kỹ thuật nuôi cấy TCL Khử trùng mẫu AgNPs (200 mg/L) thời gian 15 phút thích hợp cho tạo nguồn mẫu in vitro từ đốt thân chứa chồi nách Mẫu tTCL-L (giống chanh dây tím) mẫu lTCL-T (giống chanh dây vàng) thu đốt thân thứ cho hiệu tái sinh cao môi trường MS bổ sung 1,0 mg/L BA (giống chanh dây tím) 1,5 mg/L BA, 1,0 mg/L NAA (giống chanh dây vàng), 2,0 22 mg/L AgNPs, 30 g/L sucrose, g/L agar ánh sáng huỳnh quang (16 giờ/ngày) Chồi nhân nhanh hiệu môi trường MSM bổ sung 0,5 mg/L BA (giống chanh dây tím) 1,0 mg/L BA (giống chanh dây vàng), 1,5 mg/L Kin, 30 g/L sucrose, g/L agar bình ni cấy thống khí Hình thành rễ chồi in vitro thích hợp mơi trường MSM bổ sung 2,5 mg/L IBA, 30 g/L sucrose, g/L agar ánh sáng LED với tỷ lệ 70R:30B Cây thích nghi sinh trưởng tốt sau 10 tuần điều kiện vườn ươm Kết luận 2: Cây chanh dây lai sinh dƣỡng giống chanh dây tím vàng kỹ thuật vi ghép Chồi in vitro virus (CMV, ToRSV Potyvirus) giống chanh dây có nguồn gốc từ nuôi cấy mô phân sinh đỉnh tái sinh hiệu kỹ thuật nuôi cấy TCL Cây chanh dây vi ghép ghép từ cành ghép đốt thân chứa chồi nách có kích thước 1,5 cm giống chanh dây tím với gốc ghép chồi cắt bỏ đỉnh, với kích thước 1,5 cm giống chanh dây vàng nuôi cấy môi trường MSM bổ sung 2,5 mg/L IBA, 30 g/L sucrose g/L agar để tạo vi ghép Cây chanh dây vi ghép thích nghi, sinh trưởng phát triển tốt trồng thử nghiệm giai đoạn vườn ươm đồng ruộng KIẾN NGHỊ Trong khuôn khổ giới hạn kinh phí thời gian nghiên cứu, nên luận án thực nội dung trình bày Do vậy, để nghiên cứu sâu, hồn chỉnh có khả ứng dụng cao hơn, số kiến nghị đề xuất sau: 23 Kiểm tra nhiều loại virus gây bệnh chanh dây mẫu chanh dây có nguồn gốc từ ni cấy mơ phân sinh đỉnh Tiếp tục nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến tỷ lệ thành công chanh dây vi ghép nồng độ đường, chất điều hòa sinh trưởng thực vật bổ sung vào môi trường nuôi cấy; điều kiện chiếu sáng; kích thước cành ghép; tiền xử lý cành ghép Triển khai, nhân rộng quy trình nhân giống chanh dây vi ghép bệnh với số lượng lớn tạo kỹ thuật nuôi cấy mô phân sinh đỉnh kết hợp với nuôi cấy TCL vi ghép Tiến hành so sánh suất giống chanh dây vi ghép với giống trồng đại trà 24 ... tài: ? ?Nghiên cứu nhân giống chanh dây (Passiflora edulis) kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào thử nghiệm tạo vi ghép? ?? thực Mục tiêu đề tài - Xác định điều kiện tối ưu nhân giống in vitro chanh dây. .. in vitro nuôi cấy mô phân sinh đỉnh nghiên cứu vi ghép tạo chanh dây virus 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu vi nhân giống chanh dây tím vàng thơng qua kỹ thuật ni cấy TCL 2.2.2 Nghiên cứu. .. dây tím vàng kỹ thuật ni cấy TCL - Tạo chanh dây vi ghép chanh dây vàng (gốc ghép) chanh dây tím (cành ghép) có nguồn gốc từ ni cấy mơ phân sinh đỉnh kết hợp với kỹ thuật nuôi cấy TCL vi ghép;