Nghiên cứu nhân giống cây chanh dây (passiflora edulis) bằng kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào và thử nghiệm tạo cây vi ghép

ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC **** TRẦN HIẾU NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY CHANH DÂY (Passiflora edulis) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY LỚP MỎNG TẾ BÀO VÀ THỬ NGHIỆM TẠO CÂY VI GHÉP LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH LÝ HỌC THỰC VẬT HUẾ, 2021 ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC **** TRẦN HIẾU NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY CHANH DÂY (Passiflora edulis) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY LỚP MỎNG TẾ BÀO VÀ THỬ NGHIỆM TẠO CÂY VI GHÉP Ngành: Sinh lý học thực vật Mã số: 9.42.01.12 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH LÝ HỌC THỰC VẬT NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS DƯƠNG TẤN NHỰT PGS.TS CAO ĐĂNG NGUYÊN HUẾ, 2021 LỜI CẢM ƠN Khi chập chững bước bước chân vào đường nghiên cứu khoa học, chặng đường đầy khó khăn, gian nan thách thức Nhưng bước chân chập chững chẳng đến đâu khơng có hỗ trợ, giúp đỡ dìu dắt từ quý thầy, cô, anh, chị, bạn bè, đồng nghiệp gia đình Đầu tiên tơi xin chân thành cảm ơn dành lời tri ân sâu sắc đến thầy GS.TS Dương Tấn Nhựt Thầy trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình cho tơi suốt thời gian thực luận án Thầy không người thầy đơn truyền thụ cho kiến thức chuyên môn quý báu, say mê công việc đam mê nghiên cứu khoa học mà dạy cho học đạo đức làm người, nhân cách sống Thầy gương sáng cho hệ trẻ noi theo để trở thành nhà khoa học thực thụ tương lai giúp ích cho xã hội Cũng xin gửi lời cảm ơn đến thầy PGS.TS Cao Đăng Nguyên, giảng viên trường Đại học Khoa học, Đại học Huế phối hợp với thầy GS.TS Dương Tấn Nhựt hướng dẫn giúp đỡ tơi hồn thành luận án Nhân dịp này, xin cảm ơn đến Ban giám hiệu trường Đại học Khoa học, phòng đào tạo sau đại học trường Đại học Khoa học, Đại học Huế, quý thầy khoa Sinh học tận tình dạy dỗ giúp đỡ suốt thời gian học tập trường Tôi xin chân thành cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện nghiên cứu Khoa học Tây Nguyên tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ suốt thời gian thực luận án Xin cảm ơn đến Ban giám hiệu trường Cao đẳng Sư phạm Ninh Thuận Ban Giám đốc Phân hiệu Ninh Thuận thuộc Trường Đại học Nơng lâm Thành phố Hồ Chí Minh, nơi công tác tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập thực luận án i Tiếp đến, xin cảm ơn đến anh, chị, em công tác thực tập Phòng Sinh học phân tử Chọn tạo giống trồng giúp đỡ suốt thời gian thực tập Và cuối cùng, xin dành lời tri ân, lời chúc sức khỏe tốt đẹp sâu sắc đến Má Cô Sáu Má người tần tảo chăm lo nuôi nấng lớn khôn ngày hôm Má bên cạnh con, động viên ủng hộ Em xin gửi lời cảm ơn đến anh chị gia đình cháu giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho em để học tập hoàn thành tốt luận án Anh xin gửi lời cảm ơn đặc biệt đến vợ trai, bên cạnh, ủng hộ giúp đỡ anh nhiều gặp khó khăn Vợ ln lo lắng, động viên anh chán nản công việc, buồn phiền sống Ninh Thuận, tháng 09 năm 2021 Tác giả Trần Hiếu ii LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan nghiên cứu “Nghiên cứu nhân giống chanh dây (Passiflora edulis) kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào thử nghiệm tạo vi ghép” cơng trình nghiên cứu hướng dẫn GS.TS Dương Tấn Nhựt PGS.TS Cao Đăng Nguyên Những kết nghiên cứu người khác số liệu trích dẫn luận án thích đầy đủ Đề tài hỗ trợ Phòng Sinh học phân tử Chọn tạo giống trồng - Viện Nghiên cứu Khoa học Tây Nguyên Tôi xin cam đoan số liệu kết luận án hồn tồn trung thực Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm trước nhà trường cam đoan Ninh Thuận, tháng 09 năm 2021 Tác giả Trần Hiếu iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ¼ MS : Mơi trường MS giảm phần tư khống đa lượng ½ MS : Mơi trường MS giảm phần hai khống đa lượng ½ MSM : Môi trường cải biên MSM giảm phần hai khống đa lượng ¾ MS : Mơi trường MS giảm ba phần tư khoáng đa lượng B : Blue light; LED xanh dương BA : 6-benzyladenine CĐHST : Chất điều hòa sinh trưởng DNA : Deoxyribonucleic acid FL : Flourescent Lamp; ánh sáng đèn huỳnh quang IBA : Indole-3-butyric acid Kin : Kinetin LED : Light-Emitting Diode; ánh sáng LED lTCL : Longitudinal thin cell layer; lớp mỏng tế bào cắt theo chiều dọc lTCL-L : Mẫu cắt lớp mỏng theo chiều dọc lTCL-T : Mẫu đoạn thân cắt lớp mỏng theo chiều dọc iv MS : Môi trường Murashige Skoog, 1962 MSM : Môi trường cải biên Monteri cs, 2000 NAA : α- Naphthalene acetic acid PGRs : Plant growth regulators, chất điều hoà sinh trưởng thực vật R : Red light; LED đỏ RNA : Ribonucleic acid RT-PCR : Reverse transcriptase-PCR SPAD : Soil Plant Analysis Development; số chlorophyll TCL : Thin cell layer; lớp mỏng tế bào tTCL : Transverse thin cell layer; lớp mỏng tế bào cắt theo chiều ngang tTCL-L : Mẫu cắt lớp mỏng theo chiều ngang tTCL-T : Mẫu đoạn thân cắt lớp mỏng theo chiều ngang v MỤC LỤC Lời cảm ơn i Lời cam đoan iii Danh mục chữ viết tắt iv Mục lục vi Danh mục hình xi Danh mục bảng xv MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 SƠ LƢỢC VỀ CÂY CHANH DÂY 1.1.1 Phân loại, nguồn gốc phân bố 1.1.2 Hình thái đặc tính sinh học chanh dây 1.1.3 Một số virus gây bệnh thƣờng gặp chanh dây 1.1.4 Các thành phần dinh dƣỡng chanh dây 1.1.5 Giá trị kinh tế 1.1.6 Tình hình trồng chanh dây Lâm Đồng 1.1.7 Các phƣơng pháp nhân giống chanh dây 1.1.7.1 Phương pháp truyền thống 1.1.7.2 Phương pháp vi nhân giống 10 1.1.8 Nuôi cấy mô phân sinh đỉnh 13 1.1.9 Kỹ thuật vi ghép 15 1.2 KỸ THUẬT NUÔI CẤY LỚP MỎNG TẾ BÀO 16 1.2.1 Giới thiệu chung 16 1.2.2 Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy TCL 18 1.2.2.1 Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy TCL ăn thân gỗ 18 1.2.2.2 Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy TCL dược liệu 21 1.3 ẢNH HƢỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ LÊN KHẢ NĂNG TÁI SINH, SINH TRƢỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA THỰC VẬT 22 1.3.1 Ảnh hƣởng mẫu cấy vi 22 1.3.1.1 Kiểu gen 22 1.3.1.2 Vị trí loại mẫu cấy 23 1.3.2 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng thực vật 24 1.3.3 Ảnh hƣởng ánh sáng 26 1.3.4 Ảnh hƣởng AgNO3 nano bạc (AgNPs) 26 1.3.4.1 AgNO3 26 1.3.4.2 AgNPs 27 1.3.5 Ảnh hƣởng giá thể 29 1.3.6 Ảnh hƣởng mơi trƣờng khống 30 1.3.7 Sự thống khí nồng độ CO2, O2 31 Chƣơng VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 VẬT LIỆU 33 2.1.1 Vật liệu thực vật 33 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 33 2.1.3 Thiết bị chiếu sáng 33 2.1.4 Môi trƣờng nuôi cấy 34 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 34 2.2.1 Nghiên cứu vi nhân giống chanh dây tím vàng thơng qua kỹ thuật ni cấy TCL 34 2.2.2 Nghiên cứu tạo chanh dây lai sinh dƣỡng giống chanh dây tím vàng kỹ thuật vi ghép 35 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 2.3.1 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm 35 2.3.1.1 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng nguồn mẫu lên tái sinh chồi in vitro giống chanh dây tím vàng 35 2.3.1.2 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng BA riêng lẻ, kết hợp NAA lên khả tái sinh chồi từ TCL giống chanh dây tím vàng 36 2.3.1.3 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng BA riêng lẻ, kết hợp NAA lên khả tái sinh chồi từ TCL đoạn thân giống chanh dây tím vàng 37 vii 2.3.1.4 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng vị trí mẫu TCL lên khả tái sinh chồi giống chanh dây tím vàng 38 2.3.1.5 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng giá thể lên khả tái sinh chồi từ mẫu TCL giống chanh dây tím vàng 38 2.3.1.6 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng khác lên khả tái sinh chồi từ mẫu TCL giống chanh dây tím vàng 39 2.3.1.7 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng AgNO3, AgNPs lên khả tái sinh chồi từ mẫu TCL giống chanh dây tím vàng 39 2.3.1.8 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng mơi trường khống lên nhân nhanh chồi (có nguồn gốc TCL) giống chanh dây tím vàng 39 2.3.1.9 Thí nghiệm Nghiên cứu ảnh hưởng cytokinin (BA kết hợp Kin) lên nhân nhanh chồi (có nguồn gốc TCL) giống chanh dây tím vàng 40 2.3.1.10 Thí nghiệm 10 Nghiên cứu ảnh hưởng bình ni cấy thống khí khơng thống khí lên nhân nhanh chồi (có nguồn gốc TCL) giống chanh dây tím vàng 40 2.3.1.11 Thí nghiệm 11 Nghiên cứu ảnh hưởng auxin (NAA, IBA) lên khả hình thành rễ chồi in vitro (có nguồn gốc TCL) sinh trưởng vườn ươm giống chanh dây tím vàng 41 2.3.1.12 Thí nghiệm 12 Nghiên cứu ảnh hưởng ánh sáng LED lên chất lượng in vitro (có nguồn gốc TCL) sinh trưởng vườn ươm giống chanh dây tím vàng 41 2.3.1.13 Thí nghiệm 13 Tạo nguồn vật liệu chồi thông qua nuôi cấy mô phân sinh đỉnh 41 2.3.1.14 Thí nghiệm 14 Vi ghép giống chanh dây tím vàng có nguồn gốc từ ni cấy mô phân sinh đỉnh 42 2.3.1.15 Trồng thử nghiệm giống chanh dây vi ghép vườn ươm đồng ruộng 43 2.3.2 Một số cơng thức tính thu nhận số liệu 43 2.3.3 2.3.4 Phƣơng pháp xử lý thống kê Phƣơng pháp giải phẫu hình thái 44 44 viii Bảng 3.26 Kết phân tích thống kê đặc điểm chanh dây tím sau tuần nuôi cấy LED TLRR Subset for alpha = 0.05 NT N Duncana 8.00 70.0000 7.00 73.3333 2.00 1.00 3.00 4.00 5.00 6.00 Sig 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 76.6667 80.0000 86.6667 90.0000 1.000 1.000 1.000 1.000 100.0000 100.0000 1.000 SR NT N Duncana 8.00 1.6667 1.00 2.3333 2.00 2.3333 7.00 2.3333 3.00 4.00 5.00 6.00 Sig .183 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Subset for alpha = 0.05 2.3333 2.3333 2.3333 3.0000 183 3.0000 3.6667 150 3.6667 4.3333 7.3333 1.000 150 CDR Subset for alpha = 0.05 NT N Duncana 1.00 5667 2.00 8333 3.00 1.1667 7.00 1.2333 8.00 1.7667 4.00 2.7000 5.00 6.00 Sig 1.000 1.000 201 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 CCC Subset for alpha = 0.05 NT N Duncana 8.00 3.9333 7.00 4.2667 1.00 5.4000 2.00 7.1667 4.00 7.5000 3.00 8.6000 5.00 6.00 Sig .051 1.000 051 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 3.1667 1.000 5.4000 1.000 9.4000 1.000 10.6000 1.000 SL NT N Duncana 8.00 4.0000 7.00 4.6667 1.00 7.3333 2.00 7.6667 4.00 5.00 3.00 6.00 Sig .150 461 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 SPAD Subset for alpha = 0.05 NT N Duncana 8.00 29.6333 7.00 32.7333 1.00 2.00 5.00 4.00 3.00 6.00 Sig 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 7.6667 8.3333 8.3333 8.6667 150 8.6667 9.3333 461 150 Subset for alpha = 0.05 9.3333 9.6667 461 33.8000 36.7667 37.1667 37.2667 1.000 1.000 176 37.5000 37.5667 360 Bảng 3.27 Kết phân tích thống kê đặc điểm chanh dây vàng sau tuần nuôi cấy LED TLRR NT N Duncana 8.00 70.0000 1.00 75.0000 2.00 3.00 7.00 4.00 5.00 6.00 Sig 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Subset for alpha = 0.05 80.0000 80.0000 80.0000 86.6667 90.0000 1.000 1.000 1.000 SR NT N Duncana 8.00 1.3333 7.00 2.0000 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 Sig .093 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Subset for alpha = 0.05 2.0000 2.3333 2.6667 2.6667 2.3333 2.6667 2.6667 3.0000 4.0000 118 118 1.000 6.3333 1.000 100.0000 1.000 CDR a Duncan NT 8.00 N Subset for alpha = 0.05 3667 7.00 5667 1.00 6333 2.00 9000 4.00 9333 3.00 5.00 6.00 1.1000 1.2667 3.0000 Sig 1.000 093 384 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 CCC a Duncan NT 8.00 N Subset for alpha = 0.05 5.8333 1.00 2.00 8.1667 4.00 8.5000 3.00 7.00 10.1667 5.00 10.4000 6.00 7.1667 9.3333 11.5000 Sig 1.000 1.000 096 1.000 234 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 a Duncan NT 1.00 N SL Subset for alpha = 0.05 7.0000 5.00 7.3333 7.3333 2.00 7.6667 7.6667 8.00 3.00 4.00 10.3333 7.00 11.0000 6.00 Sig 8.0000 9.3333 11.0000 11.3333 108 108 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 093 384 1.000 a Duncan NT 1.00 N 8.00 2.00 3.00 4.00 5.00 7.00 6.00 SPAD Subset for alpha = 0.05 33.1333 33.9667 35.2667 37.0667 37.3667 37.4667 37.6000 38.4667 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Bảng 3.28 Kết phân tích thống kê đặc điểm sinh trưởng chanh dây tím có nguồn gốc từ ánh sáng LED sau 10 tuần vườn ươm TLS Duncana NT 8.00 7.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 Sig N 3 3 3 3 70.0000 Subset for alpha = 0.05 76.6667 80.0000 88.3333 93.3333 1.000 122 1.000 1.000 100.0000 100.0000 100.0000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 CCC Subset for alpha = 0.05 NT a Duncan N 8.00 1.00 7.00 15.2667 2.00 15.4000 3.00 4.00 5.00 6.00 10.1667 12.3667 Sig 1.000 1.000 528 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 17.6000 19.0000 21.4000 31.1667 1.000 1.000 1.000 1.000 SL Subset for alpha = 0.05 NT a Duncan N 8.00 1.00 7.0000 4.00 7.3333 7.3333 3.00 7.6667 7.6667 7.6667 2.00 8.0000 8.0000 7.00 5.00 6.00 5.6667 8.3333 8.3333 9.0000 9.0000 9.3333 Sig 1.000 108 108 108 093 384 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 CDL Subset for alpha = 0.05 NT a Duncan N 1.00 5.6333 8.00 5.8333 2.00 6.3000 3.00 6.3667 6.3667 4.00 6.5000 6.5000 7.00 5.00 6.00 Sig 6.6667 6.6667 6.8333 7.1667 168 189 055 246 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 CRL Duncana NT 1.00 8.00 4.00 2.00 3.00 5.00 7.00 6.00 Sig N 3 3 3 3 2.4000 2.4333 2.5333 205 Subset for alpha = 0.05 2.5333 2.7333 053 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 2.7333 2.7667 2.9000 117 2.9000 3.0333 183 3.0333 3.1333 312 Bảng 3.29 Kết phân tích thống kê đặc điểm sinh trưởng chanh dây vàng có nguồn gốc từ ánh sáng LED sau 10 tuần vườn ươm TLS a Duncan NT 8.00 N Subset for alpha = 0.05 73.3333 1.00 76.6667 76.6667 7.00 76.6667 76.6667 2.00 3.00 4.00 100.0000 5.00 100.0000 6.00 100.0000 81.6667 93.3333 Sig .198 060 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 CCC a Duncan NT 8.00 N 11.4000 1.00 4.00 7.00 2.00 3.00 5.00 6.00 Sig Subset for alpha = 0.05 14.0667 16.6000 17.3667 18.0667 19.6333 21.3333 32.6667 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 SL a Duncan NT 1.00 N Subset for alpha = 0.05 5.0000 2.00 6.3333 3.00 6.6667 7.00 4.00 9.3333 5.00 9.6667 8.00 9.6667 6.00 Sig 6.6667 7.3333 10.6667 1.000 461 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 .150 485 1.000 1.000 Bảng 3.30 Kết phân tích thống kê ni cấy mơ phân sinh đỉnh giống chanh dây tím sau 4, 10 tuần ni cấy ONEWAY TLN TLS TLTS SC CCC HSTS BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Descriptives N TLN TLS TLTS SC CCC HSTS 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 3 3 3 3 3 3 Mean 50.0000 51.6667 50.8333 50.0000 48.3333 49.1667 50.0000 48.3333 49.1667 4.3333 4.0000 4.1667 1.5333 1.4333 1.4833 2.1667 1.9333 2.0500 Std Deviation Std Error 00000 00000 2.88675 1.66667 2.04124 83333 00000 00000 2.88675 1.66667 2.04124 83333 00000 00000 2.88675 1.66667 2.04124 83333 57735 33333 00000 00000 40825 16667 05774 03333 05774 03333 07528 03073 28868 16667 11547 06667 23452 09574 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 50.00 50.00 50.00 55.00 50.00 55.00 50.00 50.00 45.00 50.00 45.00 50.00 50.00 50.00 45.00 50.00 45.00 50.00 4.00 5.00 4.00 4.00 4.00 5.00 1.50 1.60 1.40 1.50 1.40 1.60 2.00 2.50 1.80 2.00 1.80 2.50 Minimum 50.00 50.00 50.00 50.00 45.00 45.00 50.00 45.00 45.00 4.00 4.00 4.00 1.50 1.40 1.40 2.00 1.80 1.80 Maximum 50.00 55.00 55.00 50.00 50.00 50.00 50.00 50.00 50.00 5.00 4.00 5.00 1.60 1.50 1.60 2.50 2.00 2.50 ANOVA TLN Between Groups Within Groups Total TLS Between Groups Within Groups Total TLTS Between Groups Within Groups Total SC Between Groups Within Groups Total CCC Between Groups Within Groups Total HSTS Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 4.167 df Mean Square 4.167 F 1.000 Sig .374 16.667 4.167 20.833 4.167 16.667 4.167 4.167 1.000 374 20.833 4.167 16.667 4.167 4.167 1.000 374 20.833 167 667 167 167 1.000 374 833 015 013 015 003 4.500 101 028 082 082 1.690 263 193 048 275 Bảng 3.31 Kết phân tích thống kê ni cấy mơ phân sinh đỉnh sinh giống chanh dây vàng sau 4, 10 tuần nuôi cấy ONEWAY TLN TLS TLTS SC CCC HSTS BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Descriptives N TLN TLS TLTS SC CCC HSTS TLN 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 3 3 3 3 3 3 Between Groups Within Groups Total TLS Between Groups Within Groups Total TLTS Between Groups Within Groups Total SC Between Groups Within Groups Total CCC Between Groups Within Groups Total HSTS Between Groups Within Groups Total 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound Minimum 50.00 55.00 50.00 50.00 55.00 50.00 50.00 55.00 50.00 45.00 50.00 45.00 45.00 50.00 45.00 45.00 50.00 45.00 45.00 50.00 45.00 45.00 50.00 45.00 45.00 50.00 45.00 3.00 4.00 3.00 3.00 4.00 3.00 3.00 4.00 3.00 1.30 1.40 1.30 1.40 1.50 1.40 1.30 1.50 1.30 1.50 2.00 1.50 1.35 1.80 1.35 1.35 2.00 1.35 Std Mean Deviation Std Error 51.6667 2.88675 1.66667 53.3333 2.88675 1.66667 52.5000 2.73861 1.11803 48.3333 2.88675 1.66667 46.6667 2.88675 1.66667 47.5000 2.73861 1.11803 48.3333 2.88675 1.66667 46.6667 2.88675 1.66667 47.5000 2.73861 1.11803 3.6667 57735 33333 3.3333 57735 33333 3.5000 54772 22361 1.3667 05774 03333 1.4667 05774 03333 1.4167 07528 03073 1.7667 25166 14530 1.5500 22913 13229 1.6583 24580 10035 ANOVA Sum of Squares 4.167 df Mean Square 4.167 33.333 8.333 37.500 4.167 33.333 37.500 4.167 33.333 F Maximum 55.00 55.00 55.00 50.00 50.00 50.00 50.00 50.00 50.00 4.00 4.00 4.00 1.40 1.50 1.50 2.00 1.80 2.00 500 Sig .519 4.167 8.333 500 519 4.167 8.333 500 519 37.500 167 1.333 167 333 500 519 1.500 015 013 015 003 4.500 101 028 070 070 1.216 332 232 058 302 Bảng 3.32 Kết phân tích thống kê đặc điểm chồi từ mẫu TCL giống chanh dây tím vàng có nguồn gốc mô phân sinh đỉnh sau tuần nuôi cấy ONEWAY TLTS SC CCC BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=LSD ALPHA(0.05) Descriptives Std 95% Confidence Interval Minimum Maximum Error for Mean Lower Bound Upper Bound 1.00 100.0000 00000 00000 100.0000 100.0000 100.00 100.00 2.00 87.7800 1.92258 1.11000 83.0041 92.5559 86.67 90.00 Total 93.8900 6.80272 2.77720 86.7510 101.0290 86.67 100.00 1.00 3.6667 57735 33333 2.2324 5.1009 3.00 4.00 2.00 4.3333 57735 33333 2.8991 5.7676 4.00 5.00 Total 4.0000 63246 25820 3.3363 4.6637 3.00 5.00 1.00 1.3667 05774 03333 1.2232 1.5101 1.30 1.40 2.00 1.4000 10000 05774 1.1516 1.6484 1.30 1.50 Total 1.3833 07528 03073 1.3043 1.4623 1.30 1.50 ANOVA Sum of Squares df Mean Square F Sig Between Groups 223.993 223.993 121.198 000 N TLTS SC CCC Mean TLTS Within Groups SC CCC Std Deviation 7.393 1.848 Total Between Groups Within Groups 231.385 667 1.333 667 333 2.000 230 Total Between Groups 2.000 002 002 250 643 Within Groups 027 007 Total 028 Bảng 3.33 Kết phân tích thống kê đặc điểm chồi (từ mẫu TCL giống chanh dây tím vàng) nhân nhanh có nguồn gốc mơ phân sinh đỉnh sau tuần nuôi cấy ONEWAY SC CCC SL SPAD BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=LSD ALPHA(0.05) N SC CCC SL SPAD 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total Mean 3 3 3 3 8.0000 6.6667 7.3333 3.2667 3.0000 3.1333 10.6667 8.3333 9.5000 31.1000 31.0000 31.0500 Std Deviation 00000 57735 81650 11547 10000 17512 57735 57735 1.37840 26458 43589 32711 Descriptives Std Error 00000 33333 33333 06667 05774 07149 33333 33333 56273 15275 25166 13354 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 8.0000 8.0000 5.2324 8.1009 6.4765 8.1902 2.9798 3.5535 2.7516 3.2484 2.9496 3.3171 9.2324 12.1009 6.8991 9.7676 8.0535 10.9465 30.4428 31.7572 29.9172 32.0828 30.7067 31.3933 Minimum Maximum 8.00 6.00 6.00 3.20 2.90 2.90 10.00 8.00 8.00 30.90 30.50 30.50 8.00 7.00 8.00 3.40 3.10 3.40 11.00 9.00 11.00 31.40 31.30 31.40 Between Groups ANOVA Sum of Squares df 2.667 Mean Square 2.667 667 167 F 16.000 Sig .016 SC Within Groups 3.333 107 047 107 012 9.143 039 CCC Total Between Groups Within Groups 153 8.167 1.333 8.167 333 24.500 008 SL Total Between Groups Within Groups Total Between Groups 9.500 015 015 115 751 Within Groups 520 130 Total 535 SPAD Bảng 3.34 Kết phân tích thống kê đặc điểm chanh dây vi ghép sau 10 tuần nuôi cấy ONEWAY TLTC TLRR SR CDR CCC SL SPAD BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) TLTC TLRR SR CDR CCC SL SPAD 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total N 3 3 3 3 3 3 3 Mean 46.6667 73.3333 60.0000 67.7800 79.5233 73.6517 3.0000 3.3333 3.1667 1.8667 1.2333 1.5500 5.9000 8.4333 7.1667 5.0000 5.3333 5.1667 30.6000 31.2000 30.9000 Std Deviation 2.88675 2.88675 14.83240 1.92258 82561 6.56681 00000 57735 40825 11547 25166 38859 10000 05774 1.38948 00000 57735 40825 17321 20000 36878 Descriptives 95% Confidence Interval for Mean Std Lower Upper Error Bound Bound Minimum 1.66667 39.4956 53.8378 45.00 1.66667 66.1622 80.5044 70.00 6.05530 44.4344 75.5656 45.00 1.11000 63.0041 72.5559 66.67 47667 77.4724 81.5743 78.57 2.68089 66.7602 80.5431 66.67 00000 3.0000 3.0000 3.00 33333 1.8991 4.7676 3.00 16667 2.7382 3.5951 3.00 06667 1.5798 2.1535 1.80 14530 6082 1.8585 1.00 15864 1.1422 1.9578 1.00 05774 5.6516 6.1484 5.80 03333 8.2899 8.5768 8.40 56725 5.7085 8.6248 5.80 00000 5.0000 5.0000 5.00 33333 3.8991 6.7676 5.00 16667 4.7382 5.5951 5.00 10000 30.1697 31.0303 30.50 11547 30.7032 31.6968 31.00 15055 30.5130 31.2870 30.50 Maximum 50.00 75.00 75.00 70.00 80.00 80.00 3.00 4.00 4.00 2.00 1.50 2.00 6.00 8.50 8.50 5.00 6.00 6.00 30.80 31.40 31.40 ANOVA TLTC Between Groups Within Groups Sum of Squares 1066.667 Total TLRR Between Groups Within Groups Total SR Between Groups Within Groups Total CDR Between Groups Within Groups Total CCC Between Groups Within Groups Total SL Between Groups Within Groups Total SPAD Between Groups Within Groups Total df Mean Square 1066.667 F 128.000 Sig .000 33.333 8.333 1100.000 206.859 8.756 206.859 2.189 94.501 001 215.615 167 667 167 167 1.000 374 833 602 153 602 038 15.696 017 755 9.627 027 9.627 007 1444.000 000 9.653 167 667 167 167 1.000 374 833 540 540 15.429 017 140 035 680 Bảng 3.35 Kết phân tích thống kê đặc điểm sinh trưởng vi ghép sau 10 tuần vườn ươm ONEWAY TLS CCC SL CDL CRL BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Descriptives N TLS CCC SL CDL CRL Mean Std Deviation Std Error 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum 1.00 66.6667 2.88675 1.66667 59.4956 73.8378 65.00 70.00 2.00 83.3333 2.88675 1.66667 76.1622 90.5044 80.00 85.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 3 3 3 75.0000 23.5667 35.2333 29.4000 9.6667 11.6667 10.6667 6.9333 7.3667 7.1500 3.1333 9.48683 40415 25166 6.39719 57735 57735 1.21106 11547 11547 25884 11547 3.87298 23333 14530 2.61164 33333 33333 49441 06667 06667 10567 06667 65.0442 22.5627 34.6082 22.6866 8.2324 10.2324 9.3957 6.6465 7.0798 6.8784 2.8465 84.9558 24.5706 35.8585 36.1134 11.1009 13.1009 11.9376 7.2202 7.6535 7.4216 3.4202 65.00 23.20 35.00 23.20 9.00 11.00 9.00 6.80 7.30 6.80 3.00 85.00 24.00 35.50 35.50 10.00 12.00 12.00 7.00 7.50 7.50 3.20 2.00 3.5667 11547 06667 3.2798 3.8535 3.50 3.70 Total 3.3500 25884 10567 3.0784 3.6216 3.00 3.70 ANOVA Sum of Squares Between Groups TLS CCC CDL CRL Mean Square 416.667 416.667 33.333 8.333 Total 450.000 Between Groups 204.167 204.167 453 113 204.620 Between Groups 6.000 6.000 Within Groups 1.333 333 Total 7.333 Between Groups 282 282 Within Groups 053 013 Total 335 Between Groups 282 282 Within Groups 053 013 Total 335 Within Groups Within Groups Total SL df F Sig 50.000 002 1801.471 000 18.000 013 21.125 010 21.125 010 Hình 3.1 Kết phân tích thống kê biểu đồ hệ số tái sinh chồi nguồn mẫu giống chanh dây tím chanh dây vàng sau tuần ni cấy Giống chanh dây tím HSTS Duncan NT N 0000 0000 0000 Subset for alpha = 0.05 7.00 8.00 9.00 4.00 6333 1.00 9500 9500 5.00 1.0500 2.00 6.00 3.00 Sig 1.000 072 554 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.7167 2.0667 1.000 1.000 2.7333 1.000 Giống chanh dây vàng HSTS Duncan NT N 3000 Subset for alpha = 0.05 4.00 7.00 6667 1.00 8000 5.00 1.2000 8.00 1.4500 2.00 6.00 9.00 3.00 Sig 1.000 367 100 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.4500 1.5667 1.9000 428 1.000 2.6000 2.6667 649 Hình 3.8 Kết phân tích thống kê biểu đồ hệ số tái sinh chồi từ tTCL-L, lTCL-T giống chanh dây tím vàng sau tuần ni cấy Giống chanh dây tím ONEWAY TLTS SC HSNC BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Descriptives N TLTS SC HSTS 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 3 3 3 Mean 100.0000 78.3333 89.1667 4.0000 3.0000 3.5000 16.0000 4.7000 10.3500 Std Deviation 00000 2.88675 12.00694 00000 00000 54772 00000 17321 6.19023 Std Error 00000 1.66667 4.90181 00000 00000 22361 00000 10000 2.52715 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 100.0000 100.0000 71.1622 85.5044 76.5662 101.7672 4.0000 4.0000 3.0000 3.0000 2.9252 4.0748 16.0000 16.0000 4.2697 5.1303 3.8537 16.8463 Minimum 100.00 75.00 75.00 4.00 3.00 3.00 16.00 4.50 4.50 Maximum 100.00 80.00 100.00 4.00 3.00 4.00 16.00 4.80 16.00 ANOVA TLTS Between Groups Within Groups Sum of Squares 704.167 Total SC Between Groups Within Groups Total HSTS Between Groups Within Groups Total df Mean Square 704.167 F 169.000 Sig .000 16.667 4.167 720.833 1.500 000 1.500 000 1.500 191.535 191.535 12769.000 000 060 015 191.595 Giống chanh dây vàng ONEWAY TLTS SC HSNC BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Descriptives N TLTS SC HSTS 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 1.00 2.00 Total 3 3 3 Mean 0000 71.6667 35.8333 0000 3.0000 1.5000 0000 4.3000 2.1500 Std Deviation 00000 2.88675 39.29589 00000 00000 1.64317 00000 17321 2.35775 Std Error 00000 1.66667 16.04248 00000 00000 67082 00000 10000 96255 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound Minimum 0000 0000 00 64.4956 78.8378 70.00 -5.4052 77.0718 00 0000 0000 00 3.0000 3.0000 3.00 -.2244 3.2244 00 0000 0000 00 3.8697 4.7303 4.20 -.3243 4.6243 00 Maximum 00 75.00 75.00 00 3.00 3.00 00 4.50 4.50 ANOVA TLTS Between Groups Within Groups Total SC Between Groups Within Groups Total HSTS Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 7704.167 df Mean Square 7704.167 F 1849.000 Sig .000 16.667 4.167 7720.833 13.500 000 13.500 000 13.500 27.735 27.735 1849.000 000 060 015 27.795 Hình 3.35 Kết phân tích thống kê biểu đồ hệ số tái sinh chồi thông qua nuôi cấy mô phân sinh đỉnh giống chanh dây tím chanh dây vàng Đam Rông (T1, V1), Đức Trọng (T2, V2) sau 10 tuần Giống chanh dây tím ONEWAY HSTS BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=LSD ALPHA(0.05) Descriptives HSTS N 1.00 2.00 Total Mean 3 Std Deviation 1.7667 1.5500 1.6583 Std Error 95% Confidence Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 14530 1.1415 2.3918 13229 9808 2.1192 10035 1.4004 1.9163 25166 22913 24580 Minimum Maximum 1.50 1.35 1.35 2.00 1.80 2.00 ANOVA HSTS Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 070 232 302 df Mean Square 070 058 F 1.216 Sig .332 Giống chanh dây vàng ONEWAY HSTS BY NT /STATISTICS DESCRIPTIVES /POSTHOC=LSD ALPHA(0.05) Descriptives HSTS N 1.00 2.00 Total Mean 3 Std Deviation 1.7667 1.5500 1.6583 25166 22913 24580 Std Error 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound 14530 1.1415 2.3918 13229 9808 2.1192 10035 1.4004 1.9163 Minimum Maximum 1.50 1.35 1.35 2.00 1.80 2.00 ANOVA HSTS Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 070 232 302 df Mean Square 070 058 F 1.216 Sig .332 Kết giải trình tự thu đoạn DNA có độ dài 344 nucleotid, xác định rõ 326 nucleotid Trình tự virus có mẫu v1 > v1 Pos NNNNGTACGCATTTGATTTTTATGAAGTCAACTCAAAGACTCCTGAGAGAGCCAGAGAAGCGGTTGCACAGATG AAAGCAGCAGCCCTCGCCAACGTTAACACTAGGATGTTTGGCCTAGATGGTAACGTGGCAACCACCAGCGAAA ATACTGAAAGGCATACTGCACGTGATGTAAATCAGAACATGCATACTCTTTTGGGTATGGGACCAGTCCAGTAAA GGATTGGTAAACTCTCCACAGTTAGCATTTCGCAACGCTAGTATCTACGTATAGTAAATAGTACTTTAAGGTTCAA TCAGTGTGGTTATACCACCTCGCATTATCTTANNNNN Trình tự xác định rõ thành phần nucleotide >v1Pos GTACGCATTTGATTTTTATGAAGTCAACTCAAAGACTCCTGAGAGAGCCAGAGAAGCGGTTGCACAGATGAAAG CAGCAGCCCTCGCCAACGTTAACACTAGGATGTTTGGCCTAGATGGTAACGTGGCAACCACCAGCGAAAATACT GAAAGGCATACTGCACGTGATGTAAATCAGAACATGCATACTCTTTTGGGTATGGGACCAGTCCAGTAAAGGAT TGGTAAACTCTCCACAGTTAGCATTTCGCAACGCTAGTATCTACGTATAGTAAATAGTACTTTAAGGTTCAATCAG TGTGGTTATACCACCTCGCATTATCTTA ... kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào thử nghiệm tạo vi ghép? ?? thực Mục tiêu đề tài Xác định điều kiện tối ưu nhân giống in vitro chanh dây tím vàng kỹ thuật nuôi cấy TCL Tạo chanh dây vi ghép chanh. .. TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC **** TRẦN HIẾU NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY CHANH DÂY (Passiflora edulis) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY LỚP MỎNG TẾ BÀO VÀ THỬ NGHIỆM TẠO CÂY VI GHÉP Ngành: Sinh lý học thực vật Mã... trƣờng nuôi cấy 34 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 34 2.2.1 Nghiên cứu vi nhân giống chanh dây tím vàng thơng qua kỹ thuật nuôi cấy TCL 34 2.2.2 Nghiên cứu tạo chanh dây lai