PowerPoint Presentation HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM BÁO CÁO KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA PHƯƠNG PHÁP CỐ ĐỊNH TẾ BÀO ĐẾN HIỆU SUẤT CỐ ĐỊNH VÀ KHẢ NĂNG PHÂN G[.]
HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM BÁO CÁO KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA PHƯƠNG PHÁP CỐ ĐỊNH TẾ BÀO ĐẾN HIỆU SUẤT CỐ ĐỊNH VÀ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI HISTAMIN TRONG NƯỚC MẮM THÀNH PHẨM CỦA CHỦNG VIRGIBACILLUS CAMPISALIS TT8.5 Nội dung trình bày Phần Mở đầu Phần Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu Phần Kết thảo luận Phần Kết luận kiến nghị Mở đầu Đặt vấn đề Hệ thần kinh: histamin kích thích đầu sợi thần kinh ngoại vi gây cảm giác ngứa, đau,… Ngộ độc Là sản phẩm truyền thống người Việt Chứa axit amin: valin, methionin, lysin,… Hệ tiết: làm tăng tiết nước mắt, nước mũi, nước bọt, dịch tụy, … Hệ tim mạch: làm hạ huyết áp, gây co thắt tim, giãn mạch,… Là sản phẩm lên men từ cá Hệ hô hấp: gây sổ mũi, hen suyễn, co thắt khí quản,… Làm để giảm hàm lượng histamin??? Mở đầu Phương pháp vật lý, hóa học Chi phí cao, ảnh hưởng đến sức khỏe người Phương pháp sinh học (vi sinh vật) Hiệu cao, không độc hại, giá thành rẻ Kế thừa kết nhóm nghiên cứu TS.Trần Thị Thu Hằng, 2019 “Nghiên cứu ứng dụng công nghệ vi sinh để giảm hàm lượng histamin nước mắm truyền thống” Tuyển chọn Ứng dụng Vi sinh vật có khả phân giải histamin: Virgibacillus campisalis TT8.5 - Có khả phân giải histamin cao 30-40% Có khả chịu mặn Có tính an toàn sức khỏe Mở đầu Khả sinh trưởng chậm, hiệu suất thu hồi sinh khối không cao Không tái sử dụng tế bào Chi phí để sử dụng tế bào tự cao Bổ sung vi sinh vật tự Ảnh hưởng đến chất lượng cảm quan sản phẩm Cố định tế bào lại Có thể tái sử dụng tế bào Tế bào cố định khắc phục nhược điểm Không ảnh hưởng đến giá trị cảm quan sản phẩm Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp cố định tế bào đến hiệu suất cố định khả phân giải histamin nước mắm thành phẩm chủng Virgibacillus campisalis TT8.5 Mở đầu Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp cố định tế bào đến hiệu suất cố định khả phân giải histamin nước mắm thành phẩm chủng Virgibacillus campisalis TT8.5 Mục đích Yêu cầu Xác định khả phân giải histamin chủng Virgibacillus campisalis TT8.5 môi trường HA 21%; Xây dựng đường cong sinh trưởng chủng Virgibacillus campisalis TT8.5 môi trường HA 21% để sản xuất thu sinh khối; Ảnh hưởng phương pháp cố định tế bào đến hiệu suất cố định khả phân giải histamin chủng Virgibacillus campisalis TT8.5 Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng Chủng vi khuẩn Chủng vi khuẩn Virgibacillus campisalis TT8.5 phân lập từ chượp mắm Trần Thị Thu Hằng cs, 2019, dùng để nghiên cứu cố định tế bào khả phân giải histamin cố định Hấp phụ Bao bọc Celite Agar Liên kết chéo Alginate Chitosan Pigbone Alginate Alginatechitosan Chitosan Eggshell Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu 2.2 Nội dung Xác định khả phân giải histamin chủng Virgibacillus campisalis TT8.5 môi trường HA 21%; Nội dung nghiên cứu Xây dựng đường cong sinh trưởng chủng Virgibacillus campisalis TT8.5 môi trường HA 21%; Ảnh hưởng phương pháp hấp phụ đến hiệu suất cố định khả phân giải histamin chủng Virgibacillus campisalis TT8.5; Ảnh hưởng phương pháp bao bọc đến hiệu suất cố định khả phân giải histamin chủng Virgibacillus campisalis TT8.5; Ảnh hưởng phương pháp liên kết chéo đến hiệu suất cố định khả phân giải histamin chủng Virgibacillus campisalis TT8.5 Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Xác định khả phân giải histamin chủng Vigibacillus campisalis TT8.5 mơi trường ni cấy • Phương pháp hoạt hóa nuôi cấy chủng tiến hành theo Tapingkae cs, 2010 • Phương pháp đánh giá khả phân giải histamin phương pháp sắc khí lỏng hiệu cao HPLC tiến hành theo Trần Thị Thu Hằng cs, năm 2019 2.2.2 Xác định khả sinh trưởng chủng Vigibacillus campisalis TT8.5 (HA 21%) thu hồi sinh khối • Phương pháp xác định đường cong sinh trưởng tiến hành theo Nguyễn Lân Dũng, 1983 • Phương pháp thu hồi sinh khối tiến hành theo Tapingkae cs, 2010 Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.3 Phương pháp hấp phụ Tế bào vi khuẩn cố định vào chất mang celite miêu tả Khare Nakajima, 2000: 5g Celite 10 l m Tris-HCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M chứa 1g sinh khối Khuấy từ 0-4oC, Lọc, rửa TrisHCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M Sấy đông khô 48 Bảo quản 4oC sử dụng 10 Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.3 Phương pháp hấp phụ Tế bào vi khuẩn cố định vào chất mang chitosan miêu tả Pereira cs 2003: Đưa vào bình tam giác Chitosan kích hoạt hexan 10 m Khuấy từ nhiệt độ phòng 3giờ Lọc, rửa TrisHCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M l Tris-HCl 50 mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M chứa 1g sinh khối Giữ độ, 18 Bảo quản 4oC sử dụng Sấy đông khô 48 12 Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.4 Phương pháp bao bọc Tế bào vi khuẩn cố định vào chất mang agar miêu tả Takeno cs, 2005: Hấp tiệt trùng 121oC Đệm tiêu chuẩn Tris-HCl 50mM; pH 7,0 chứa NaCl 4,3M chứa 4% agar 2,5 ml Tris-HCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M + 4% agar (đã hấp) Để ấm 50oC 2,5ml Tris-HCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4.3M chứa 1g sinh khối Để ấm 50oC bể ổn nhiệt Cắt miếng, rửa Tris HCl Bảo quản 4oC sử dụng 13 Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.4 Phương pháp bao bọc Tế bào vi khuẩn cố định vào chất mang Ca2+ alginate miêu tả Takeno cs, 2005 Dùng pipet man hút dịch 2,5 ml Natri alginate 3% 2, m l 100ml CaCl2 0,5M Rửa dung dịch đệm tiêu chuẩn Tris- HCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M Tris- HCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M chứa 1g sinh khối Bảo quản 4oC sử dụng Để lắng 30 phút 14 Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.5 Phương pháp liên kết chéo Tế bào vi khuẩn cố định vào chất mang alginate-chitosan miêu tả Vidyasagar cs, 2006: 2,5 ml Natri alginate 3% Bảo quản 4oC sử dụng Dùng pipet man đường kính 2mm hút dịch 2,5 ml Tris-HCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M chứa 1g sinh khối Rửa dung dịch đệm tiêu chuẩn Tris- HCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M Nhỏ giọt vào hỗn hợp bao gồm: +100ml axit axetic 3% + 5g mảnh chitosan + 5g CaCl2 Để lắng 30p 15 Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.5 Phương pháp liên kết chéo Tế bào vi khuẩn cố định vào chất mang alginate miêu tả Vidyasagar cs, 2006 1ml Glutaraldehyde 0.5% 2ml Natri alginate 3% Bảo quản 4oC sử dụng 2ml Tris- HCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M chứa 1g sinh khối Trộn nhẹ giữ 30oC, 90p Dùng pipet man đường kính 2mm hút dịch Sau 30p Rửa dung dịch đêm tiêu chuẩn Tris- HCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M 100ml CaCl2 0.5% 16 Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.5 Phương pháp liên kết chéo Tế bào vi khuẩn cố định vào chất mang chitosan miêu tả Carrara and Rubiolo, 1994: 100ml Axit axetic 2% Khuấy nhẹ liên tục 90p, nhiệt độ phòng Lọc vải thưa, để loại bỏ cặn 3g Chitosan flakes Bảo quản o C đến sử dụng Khuấy nhẹ 100v/p giữ qua đêm Tris- HCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M chứa 1g sinh khối Rửa Tris Kích hoạt glutaraldehyde 1% 24h Nhỏ giọt (đường kính 4mm) vào 150ml dung dịch natri triphotphat 1,5% 17 Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.5 Phương pháp liên kết chéo Tế bào vi khuẩn cố định vào chất mang eggshell miêu tả Venkaiah Kumar, 1994: 5g Ủ hỗn hợp 10oC, 12h Khuấy nhẹ 100v/p Thêm từ từ 2ml glutaraldehyde 6% 10 m l Eggshell Cô đặc chân không 30oC, 30p Tris-HCl 50mM, pH 7,0 chứa NaCl 4,3M chứa 1g sinh khối Bảo quản 4oC đến sử dụng Chia ống epp ly tâm thu cặn 6000v/15p, 4oC 18 Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu Phương pháp xác định khả phân giải histamin tiến hành theo Tapingkae cs, 2010 0,1g tế bào (ban đầu)/ cố định 1ml HCl 0,1N 1ml chứa đệm HCl 50mM, pH 7.0; NaCl 4.3M; 500µM 1-methoxy PMS, histamin 5mM 1ml HCl 0,1N 1ml HCl 0,1N 1ml chứa đệm HCl 50mM, pH 7.0; NaCl 4.3M; 500µM 1-methoxy PMS, histamin 5mM 1ml HCl 0,1N Ly tâm thu dịch Ủ 37oC, thời gian 2h 0,1g tế bào (ban đầu)/ cố định Xác định hàm lượng histamin 19 Kết thảo luận 3.1 Kết xác định khả phân giải histamin chủng Vigibacillus campisalis TT8.5 môi trường HA 21% Bảng 3.1 Kết phân giải histamin chủng Vigibacillus campisalis TT8.5 Khả phân giải (%) ngày 13,49±0,70 33,65±0,15 20