Luận văn khảo sát quá trình thu nhận ethanol từ bã rong enteromorpha sp sau trích ly protein bằng một số phương pháp lên menluận văn thạc sĩchuyên ngànhcông nghệ thực phẩmtp hồ chí minh năm 2018

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ SÀI GÒN - NGUYỄN MINH NHỰT KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH THU NHẬN ETHANOL TỪ BÃ RONG ENTEROMORPHA SP SAU TRÍCH LY PROTEIN BẰNG MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP LÊN MEN LUẬN VĂN THẠC SĨ Chun ngành: Cơng nghệ Thực phẩm TP Hồ Chí Minh - Năm 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHỆ SÀI GỊN - NGUYỄN MINH NHỰT KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH THU NHẬN ETHANOL TỪ BÃ RONG ENTEROMORPHA SP SAU TRÍCH LY PROTEIN BẰNG MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP LÊN MEN Luận văn Thạc sĩ chuyên ngành Công nghệ Thực phẩm Mã số:8540101 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS.Hoàng Kim Anh TP Hồ Chí Minh - Năm 2018 LỜI CẢM ƠN Khoảng thời gian năm rưỡi giảng đường, có lẽ khoảng thời gian có nhiều kỉ niệm Tôi trưởng thành hơn, học hỏi nhiều môi trường Những điều học không đơn lý thuyết hay giảng khô cứng mà học kinh nghiệm sống vô quý báu Bản thân cảm thấy trân trọng quý báu quãng đời học biết ơn nhà trường, thầy cô, cha mẹ Trong khoảng thời gian cuối khoá nhờ giúp đỡ thầy cô khoa mà thân có hội để hồn thiện mình, suốt q trình tơi ln nhận hỗ trợ nhiệt tình từ q thầy giảng viên trực tiếp hướng dẫn Với lòng biết ơn sâu sắc, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến người thầy_người PGS.TS Hồng Kim Anh – người trực tiếp hướng dẫn khoa học, định hướng nghiên cứu cho tơi q trình thực hồn thành luận văn Cô bên cạnh theo dõi, dẫn, động viên chia sẻ với khó khăn suốt thời gian thực khóa luận, ln ln có mặt để giải đáp tất thắc mắc mà tơi gặp phải q trình hồn thiện luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Quản lý khoa học - Sau đại học - Trường Đại học Công nghệ Sài Gịn; q thầy phịng thí nghiệm Hóa học, Vi sinh thực phẩm, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ thực phẩm quý thầy cô giảng viên khoa tận tình hướng dẫn, giảng dạy suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành khóa luận Trong q trình học tập hồn thành luận văn, nhận hỗ trợ kinh phí tạo điều kiện thời gian Ban giám hiệu bạn đồng nghiệp Trường Cao đẳng Bách Việt Cuối cùng, xin tri ân bày tỏ lịng thành kính biết ơn đến bố mẹ, anh chị em, người thân bên động viên khích lệ để tơi an tâm học tập nghiên cứu khoa học Xin cảm ơn bạn bè xa gần động viên, giúp đỡ học tập Chúc q thầy cơ, gia đình, bạn bè dồi sức khỏe! Học viên thực Nguyễn Minh Nhựt MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 12 1.1 Tổng quan trình sản xuất ethanol 12 1.2 Nguyên liệu sản xuất ethanol hệ I 14 1.3 Nguyên liệu sản xuất ethanol hệ II 15 1.4 Tổng quan nguyên liệu hệ thứ III .18 1.4.1 Phân loại 18 1.4.2 Thành phần hóa học rong 20 1.4.3 Ứng dụng rong 22 1.5 Tổng quan trình chuyển hóa sinh khối thành ethanol 23 1.5.1 Quá trình tiền xử lý 24 1.5.2 Quá trình thủy phân 27 1.5.2.1 Một số Enzyme dùng thủy phân rong 27 1.5.2.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình thủy phân 32 1.5.3 Quá trình lên men sản xuất ethanol 34 1.5.3.1 Phương pháp SHF (Separate hydrolysis and fermentation) 34 1.5.3.2 Phương pháp SSF (Simultaneous saccharification and fermentation) 35 1.6 Tình hình nghiên cứu giới nước .36 1.6.1 Tình hình nghiên cứu giới 36 1.6.2 Tình hình nghiên cứu nước .39 1.7 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 40 1.7.1 Mục tiêu nghiên cứu 40 1.7.2 Nội dung nghiên cứu 41 CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 42 2.1 Vật liệu nghiên cứu 42 2.1.1 Rong Bã rong Enteromorpha sp tách protein 42 2.1.2 Nấm men 43 2.1.3 Enzyme .43 2.2 Sơ đồ nghiên cứu 44 2.2.1 Lên men SHF 44 2.2.2 Lên men SSF 45 2.3 Quy trình lên men Ethanol 46 2.3.1 Quy trình lên men SHF: 46 2.3.2 Quy trình lên men SSF: 47 2.4 Mô tả 48 2.4.1 Tiền xử lí: 48 2.4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố đến trình lên men SHF 49 2.4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố đến trình lên men SSF 53 2.5 Phương pháp phân tích 58 2.6 Phương pháp xử lý số liệu 58 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 59 3.1 Thành phần hóa học bã rong .59 3.2 Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men SHF .61 Xác định nồng độ Enzyme phù hợp cho trình thủy phân 61 3.2.1 3.2.1.1 Xác định nồng độ Enzyme Cellulase phù hợp 61 3.2.1.2 Xác định nồng độ Enzyme β- Glucosidase phù hợp cho trình thủy phân 64 3.2.2 Xác định thời gian phù hợp cho trình thủy phân .66 3.2.3 Xác định thơng số q trình lên men 66 3.2.3.1 Xác định mật độ nấm men: 69 3.2.3.2 Xác định thời gian lên men phù hợp cho trình lên men SHF 72 3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố đến trình lên men SSF .75 Xác định nồng độ Enzyme phù hợp cho tr nh thủy phân l n men 3.3.1 đồng thời (SSF) 75 3.3.1.1 Khảo sát ảnh hưởng Enzyme Cellulase 75 3.3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ Enzyme β-Glucosidase 76 3.3.2 Xác định nhiệt độ lên men phù hợp 77 3.3.3 Xác định mật độ nấm men phù hợp cho tr nh l n men SSF 79 3.3.4 Xác định thời gian l n men phù hợp 81 3.4 So sánh phương pháp l n men 84 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 89 4.1 Kết luận 89 4.2 Kiến nghị .89 TÀI LIỆU THAM KHẢO 91 PHỤ LỤC 99 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Phân bố tổng tiêu thụ dạng lượng toàn cầu (2010) 14 Hình 1.2: Quy trình chuyển hóa sinh khối thành ethanol 25 Hình 1.3: Tác dụng Enzyme cellulose 30 Hình 1.4: Quá trình thủy phân cellulose hệ Enzyme Cellulase[44] 30 Hình 2.1: Rong bã rong Enteromorpha sp sau trích ly protein 43 Hình 2.2: Tế bào nấm men S cerevisiae 44 Hình 2.3 : Sơ đồ nghiên cứu trình lên men SHF 45 Hình 2.4: Sơ đồ nghiên cứu trình lên men SSF 46 Hình 2.5: Sơ đồ quy trình lên men SHF 47 Hình 2.6: Sơ đồ quy trình lên men SSF 48 Hình 2.7: Mẫu trước sau tiền xử lí 49 Hình 2.8: Sơ đồ khảo sát nồng độ Cellulase trình thủy phân 50 Hình 2.9: Sơ đồ khảo sát nồng độ β-Glucosidase cho trình thủy phân 51 Hình 2.10: Khảo sát thời gian trình thủy phân 52 Hình 2.11: Sơ đồ khảo sát mật độ nấm men 53 Hình 2.12: Khảo sát thời gian trình lên men SHF 54 Hình 2.13: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ enzyme Cellulase 55 Hình 2.14: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ enzyme β-Glucosidase 56 Hình 2.15: Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ tới trình lên men SSF 57 Hình 2.16: Khảo sát ảnh hưởng mật độ nấm men tới trình lên men SSF.57 Hình 2.17: Khảo sát thời gian trình lên men SSF 58 Hình 3.1: Ảnh hưởng nồng độ Enzyme Cellulase tới kết thủy phân.63 Hình 3.2: Ảnh hưởng nồng độ Enzyme β-Glucosidase tới kết trình thủy phân 65 Hình 3.3: Ảnh hưởng thời gian tới kết trình thủy phân 67 Hình 3.4: Ảnh hưởng mật độ nấm men tới kết trình lên men SHF 70 Hình 3.5: Ảnh hưởng mật độ nấm men tới nồng độ ethanol mật độ nấm men trình lên men SHF 72 Hình 3.6: Ảnh hưởng thời gian tới kết sau lên men 73 Hình 3.7: Ảnh hưởng thời gian tới nồng độ Ethanol mật độ nấm men sau lên men 73 Hình 3.8: Ảnh hưởng thời gian tới kết trình lên men 82 Hình 3.9: Ảnh hưởng thời gian tới nồng độ ethanol mật độ nấm men sau lên men 82 Hình 3.10: Sự biến đổi thành phần trình lên men phương pháp SSF 85 Hình 3.11: Sự biến đổi thành phần trình lên men phương pháp SSF 85 Bảng C.2 Thành phần hóa học bã rong sau trích ly protein Mẫu OD Nồng độ V (ml) KL đừng Hàm lƣợng Trung đƣờng khử carbohydrate bình khử 0.227 1.945 100 0.194 58.929 0.228 1.950 100 0.195 59.084 0.229 1.955 100 0.195 59.239 0.229 1.955 100 0.195 59.239 60.94 0.222 1.919 100 0.192 58.156 0.225 1.934 100 0.193 58.620 0.291 2.271 100 0.227 68.828 0.221 1.914 100 0.191 58.001 0.288 2.256 100 0.226 68.364 Mẫu KL cóc KL cóc Kl Mẫu Hàm lƣợng Trung sau tro bình nung 35.4569 1.003 35.5919 13.45962114 35.8131 1.003 36.0056 19.19242273 36.5599 1.003 36.7199 15.95214357 35.4553 1.003 35.5773 12.16350947 14.773 36.1088 1.003 36.2437 13.44965105 36.3531 1.003 36.4633 10.98703888 35.4544 1.003 35.6141 15.9222333 36.0128 1.003 36.1827 16.93918245 36.2458 1.003 36.3952 14.89531406 Lipid 3.1 Protein 5.1 111 C.1 Ảnh hưởng nồng độ Enzyme Cellulase tới kết q trình thủy phân: (Mẫu pha lỗng 2.5 lần trƣớc đo ) Nồng độ đường khử One –way ANOVA: Đường khử versus Nồng độ cellulose: Level 10 15 20 25 30 40 MAU 30 40 25 10 20 15 N 3 3 3 N 3 3 3 Mean 13.696 13.730 14.062 14.589 20.263 17.260 Mean 20.2634 17.2604 14.5893 14.2575 14.0619 13.7301 Nồng độ chất ức chế (HMF) One –way ANOVA: HMF versus Nồng độ cellulose: StDev 0.372 0.128 0.516 0.090 0.906 0.479 Level 10 15 20 25 30 40 Grouping A B C C C C MAU 10 40 20 25 30 15 Nồng độ glucose One –way ANOVA: Glucose versus Nồng độ cellulose: Level N Mean StDev 10 5.5123 0.2246 15 6.2905 0.3127 20 7.4903 0.2574 25 7.4254 0.1486 30 9.5331 0.0973 40 8.4955 0.1486 MAU 30 40 20 25 15 10 N 3 3 3 Mean 9.5331 8.4955 7.4903 7.4254 6.2905 5.5123 N 3 3 3 N 3 3 3 Mean 0.21167 0.13667 0.15233 0.14267 0.14167 0.15333 Mean 0.21167 0.15333 0.15233 0.14267 0.14167 0.13667 StDev 0.00058 0.02268 0.00981 0.00058 0.01250 0.01102 Grouping A B B B B B C.2 Ảnh hưởng nồng độ Enzyme βglucose tới kết trình thủy phân: Nồng độ đường khử One –way ANOVA: Đường khử versus Nồng độ β-glucose : Level N Mean StDev 16.307 0.041 10 16.900 0.041 15 16.640 0.135 20 19.756 0.136 25 17.439 0.204 Grouping A B C C D E 112 MAU 20 25 10 15 N 3 3 Mean 19.7556 17.4389 16.9001 16.6397 16.3075 20 0.046542 C 0.046168 C 25 0.020588 D C.3 Ảnh hưởng thời gian đến kết thủy phân: Grouping A B C C D D Nồng độ đường khử One –way ANOVA: Đường khử versus Thời gian: Nồng độ glucose Level 12 18 24 28 32 36 40 48 One –way ANOVA: Glucose versus Nồng độ β-glucose : Level N Mean StDev 5.5761 0.1067 10 6.9008 0.0534 15 6.6235 0.1067 20 8.0715 0.1412 25 7.3937 0.3332 MAU 20 25 10 15 N 3 3 Mean 8.0715 7.3937 6.9008 6.6235 5.5761 Grouping A B C C D GIO 40 24 18 12 28 32 36 48 Nồng độ chất ức chế (HMF) One –way ANOVA: HMF versus Nồng độ β-glucose : Level N Mean StDev 0.046168 0.000432 10 0.049661 0.000864 15 0.075490 0.000779 20 0.046542 0.000216 25 0.020588 0.000648 MAU 15 10 N 3 Mean 0.075490 0.049661 Grouping A B 113 N 3 3 3 3 3 N 3 3 3 3 3 Mean 9.453 12.131 13.760 15.327 17.906 13.641 13.367 13.293 19.604 12.535 Mean 19.604 17.906 15.327 13.760 13.641 13.367 13.293 12.535 12.131 9.453 StDev 0.152 0.222 0.287 0.278 0.162 0.064 0.240 0.281 0.376 0.160 Grouping A B C D D D D E E F 40 48 Nồng độ Glucose One –way ANOVA: Glucose versus Thời gian: Level 12 18 24 28 32 36 40 48 N 3 3 3 3 3 Mean 1.059 5.829 5.632 5.611 8.486 7.146 6.878 6.669 10.505 8.180 GIO 18 28 12 48 36 40 24 32 StDev 0.075 0.061 0.009 0.152 0.085 0.197 0.064 0.062 0.140 0.207 GIO N Mean Grouping 40 10.5054 A 24 8.4862 B 48 8.1804 B 28 7.1462 C 32 6.8783 C D 36 6.6686 D 5.8288 E 12 5.6320 E 18 5.6105 E 1.0592 F Nồng độ chất ức chế (HMF) One –way ANOVA: HMF versus Thời 12 18 24 28 32 36 3 3 3 3 0.06933 0.07324 0.08108 0.09600 0.07778 0.09001 0.07699 0.07961 0.00626 0.00437 0.00488 0.04384 0.00450 0.00743 0.00109 0.00396 114 3 N 3 3 3 3 3 0.07894 0.08040 Mean 0.09600 0.09001 0.08108 0.08040 0.07961 0.07894 0.07778 0.07699 0.07324 0.06933 0.00193 0.00335 Grouping A A A A A A A A A A  QUÁ TRÌNH LÊN MEN SHF C.4 Ảnh hưởng mật độ nấm men đến kết trình lên men  NỒNG ĐỘ ĐƯỜNG KHỬ  One-way ANOVA: DUONG KHU versus MAT DO NAM MEN MDNM N Mean StDev 16.3973 0.0467 14.7720 0.0866 10 13.8831 0.0823 15 13.6855 0.0678 MDNM N Mean Grouping 16.3973 A 14.7720 B 10 13.8831 C 15 13.6855 D  NỒNG ĐỘ ĐƯỜNG GLUCOSE  One-way ANOVA: GLUCOSE versus MAT DO NAM MEN MDNM N Mean StDev 0.7371 0.1229 0.2867 0.0709 10 0.7781 0.0709 15 0.5733 0.0709 MDNM N Mean Grouping 10 0.7781 A 0.7371 A 15 0.5733 A 0.2867 B  NỒNG ĐỘ CHẤT ỨC CHẾ (HMF)  One-way ANOVA: HMF versus MAT DO NAM MEN MDNM N Mean StDev 0.1606 0.0000 0.1595 0.0000 115 10 15 0.139626 0.000648 0.127398 0.000216 MDNM N Mean Grouping 0.1606 A 0.1595 B 10 0.139626 C 15 0.127398 D  NỒNG ĐỘ ACID TỔNG  One-way ANOVA: ACID TONG versus MAT DO NAM MEN MDNM N Mean StDev 6.824 0.408 5.882 0.408 10 8.235 0.408 15 8.941 0.408 MDNM N Mean Grouping 15 8.941 A 10 8.235 A 6.824 B 5.882 B NỒNG ĐỘ ETHANOL  One-way ANOVA: CON versus MAT DO NAM MEN MDNM N Mean StDev 10.2161 0.1351 9.544 0.435 10 12.70 0.00 15 12.784 0.177 MDNM N Mean Grouping 15 12.784 A 10 12.70 A 10.2161 B 9.544 C  MẬT ĐỘ NẤM MEN SAU LÊN MEN 116  One-way ANOVA: NAM MEN SAU THUY PHAN versus MAT DO NAM MEN MDNM N Mean StDev 16500000 41500000 10 43000000 15 49500000 MDNM N Mean Grouping 15 49500000 A 10 43000000 B 41500000 C 16500000 D C.5 Ảnh hưởng thời gian đến kết qúa lên men:  NỒNG ĐỘ ĐƯỜNG KHỬ  One-way ANOVA: DUONG KHU versus THOI GIAN TG N Mean StDev 47.3053 0.1122 32.4704 0.1020 19.3425 0.0156 12 18.4715 0.0269 16 17.5197 0.0561 20 16.5320 0.0467 24 16.3434 0.0713 28 14.7720 0.0561 32 14.2512 0.0311 36 13.0569 0.0467 40 12.4553 0.0678 44 13.1108 0.0971 48 12.0423 0.0622 TG N Mean Grouping 47.3053 A 32.4704 B 117 19.3425 C 12 18.4715 D 16 17.5197 E 20 16.5320 F 24 16.3434 F 28 14.7720 G 32 14.2512 H 44 13.1108 I 36 13.0569 I 40 12.4553 J 48 12.0423 K   NỒNG ĐỘ ĐƯỜNG GLUCOSE  One-way ANOVA: GLUCOSE versus THOI GIAN TG N Mean StDev 15.461 0.374 7.6693 0.0598 0.2258 0.0304 12 0.22576 0.01150 16 0.2390 0.0199 20 0.2457 0.0304 24 0.5179 0.0527 28 0.03320 0.01150 32 0.0398 0.0199 36 0.03320 0.01150 40 0.02656 0.01150 44 0.01992 0.00000 48 0.02656 0.01150 TG N Mean Grouping 15.461 A 7.6693 B 24 0.5179 C 20 0.2457 CD 16 0.2390 CD 12 0.22576 CD 118 0.2258 CD 32 0.0398 D 36 0.03320 D 28 0.03320 D 48 0.02656 D 40 0.02656 D 44 0.01992 D  NỒNG ĐỘ CHẤT ỨC CHẾ (HMF)  One-way ANOVA: HMF versus THOI GIAN TG N Mean StDev 0.216988 0.001081 0.164581 0.000216 0.154349 0.000216 12 0.153601 0.000572 16 0.152852 0.000216 20 0.155098 0.000216 24 0.152478 0.000216 28 0.143244 0.000216 32 0.142121 0.000572 36 0.132638 0.000216 40 0.134135 0.000216 44 0.142246 0.000374 48 0.136631 0.000374 TG N Mean Grouping 0.216988 A 0.164581 B 20 0.155098 C 0.154349 CD 12 0.153601 DE 16 0.152852 E 24 0.152478 E 28 0.143244 F 44 0.142246 F 32 0.142121 F 48 0.136631 G 119 40 0.134135 H 36 0.132638 I  NỒNG ĐỘ ETHANOL  One-way ANOVA: CON versus THOI GIAN TG N Mean StDev 0.000000 0.000000 0.3612 0.0357 1.2177 0.0644 12 1.393 0.000 16 1.4373 0.0541 20 1.4998 0.0541 24 1.5519 0.0477 28 1.5582 0.0644 32 1.6305 0.0357 36 1.7646 0.0536 40 1.0311 0.0312 44 1.8018 0.0361 48 1.4894 0.0361 TG N Mean Grouping 44 1.8018 A 36 1.7646 A 32 1.6305 B 28 1.5582 B C 24 1.5519 B C 20 1.4998 B C D 48 1.4894 CD 16 1.4373 CD 12 1.393 D 1.2177 E 40 1.0311 F 0.3612 G 0.000000 H  MẬT ĐỘ NẤM MEN SAU LÊN MEN  One-way ANOVA: MAT DO NAM MEN versus THOI GIAN TG N Mean StDev 120 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 64750000 15500000 69000000 56000000 67500000 73500000 49000000 52500000 55000000 58000000 68500000 31500000 54500000 0 0 0 0 0 0 TG N Mean Grouping 20 73500000 A 69000000 B 40 68500000 C 16 67500000 D  Các kết thí nghiệm bã rong Enteromorpha sp phƣơng pháp lên men SSF  ĐƯỜNG KHỬ Source DF SS MS F P yt1 10 8.4993 0.8499 13.91 0.000 Error 22 1.3438 0.0611 Total 32 9.8432 S = 0.2471 R-Sq = 86.35% R-Sq(adj) = 80.14% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ 24.11 1.49 ( * ) 23.85 0.65 ( * ) 121 12 16 20 24 28 32 36 40 923.13 0.42 ( * ) 22.32 0.08 ( * ) 22.12 0.26 ( -* ) 21.44 0.55 ( * ) 21.33 0.22 ( * ) 21.03 0.04 ( * ) 20.55 0.10 ( * ) 20.24 0.07 ( * ) 20.24 0.14 ( * ) + -+ -+ -+ 7.80 8.40 9.00 9.60 Pooled StDev = 0.2471 Grouping Information Using Tukey Method yt1 N Mean Grouping 23.85 A 24.11 A 23.13 A B 12 22.32 A B C 16 22.12 A B C 20 21.44 B C D 24 21.33 B C D 28 21.03 CD 32 820.55 CD 40 20.24 D 36 20.24 D  ĐƯỜNG GLUCOSE Source DF SS MS F P yt1 10 1.323165 0.132317 132.80 0.000 Error 22 0.021920 0.000996 Total 32 1.345086 S = 0.03157 R-Sq = 98.37% R-Sq(adj) = 97.63% 122 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -0 0.89147 0.06713 (-*) 0.37957 0.00000 (*-) 0.32616 0.00000 (*-) 12 0.25549 0.00942 (*-) 16 0.19455 0.00000 (-*) 20 0.18349 0.00000 (*-) 24 0.15291 0.00000 (*-) 28 0.16779 0.00000 (-*) 32 0.19208 0.03909 (-*) 36 0.22038 0.03201 (-*) 40 0.27180 0.06174 (-*) -+ -+ -+ -+ -0.25 0.50 0.75 1.00 Pooled StDev = 0.03157 Grouping Information Using Tukey Method yt1 N Mean Grouping 0.89147 A 0.37957 B 0.32616 B C 40 0.27180 CD 12 0.25549 CDE 36 0.22038 DEF 16 0.19455 DEF 32 0.19208 DEF 20 0.18349 DEF 28 0.16779 EF 24 0.15291 F 123  ETHANOL Source DF SS MS F P yt1 10 7.555885 0.755589 2883.25 0.000 Error 22 0.005765 0.000262 Total 32 7.561651 S = 0.01619 R-Sq = 99.92% R-Sq(adj) = 99.89% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -0 0.0000 0.0000 (*) 0.0200 0.0000 (* 0.0426 0.0000 *) 12 0.3208 0.0130 *) 16 0.4636 0.0260 *) 20 0.9072 0.0130 (* 24 1.1553 0.0130 (*) 28 1.1853 0.0260 (* 32 1.2004 0.0130 *) 36 1.1327 0.0260 *) 40 0.8621 0.0130 (* -+ -+ -+ -+ -0.00 0.35 0.70 1.05 Pooled StDev = 0.0162 Grouping Information Using Tukey Method yt1 32 28 24 36 N Mean Grouping 1.2004 A 1.1853 A 1.1553 A B 1.1327 B 124 20 40 16 12 0.9072 0.8621 0.4636 0.3208 0.0426 0.0200 0.0000 C C D E F F F 125