(Luận văn) phân lập và tuyển chọn một số chủng nấm men có khả năng lên men rượu cao trên vỏ trái cây

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o lu TRẦN VĂN NAM an va n Tên đề tài: NĂNG LÊN MEN RƢỢU CAO TRÊN VỎ TRÁI CÂY p ie gh tn to PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG NẤM MEN CÓ KHẢ oa nl w d KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC nf va an lu : Chính quy z at nh oi lm ul Hệ đào tạo Công nghệ sinh học Khoa : CNSH & CNTP : 2012 - 2016 Khóa học z Chuyên ngành: m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2016 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o TRẦN VĂN NAM lu an Tên đề tài: va n PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG NẤM MEN CÓ KHẢ to p ie gh tn NĂNG LÊN MEN RƢỢU CAO TRÊN VỎ TRÁI CÂY d oa nl w KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC an lu Hệ đào tạo nf va : Chính quy Cơng nghệ sinh học Lớp K44 - CNSH Khoa Khóa học : z at nh oi lm ul Chuyên ngành: : CNSH & CNTP : 2012 - 2016 z Giảng viên hƣớng dẫn : TS Trần Văn Chí m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2016 n va ac th si i LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập nghiên cứu để hồn thành khóa luận tốt nghiệp em nhận hướng dẫn, giúp đỡ động viên thầy cơ, bạn bè gia đình Nhân dịp hồn thành khóa luận tốt nghiệp: Trước hết, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Văn Chí - Giảng viên Khoa Cơng nghệ Sinh học - Công nghệ Thực phẩm, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên quan tâm giúp đỡ hướng dẫn em tận tình, chu đáo suốt trình làm khóa luận tốt nghiệp lu Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Th.s Vi Đại Lâm tạo điều an n va kiện giúp đỡ hướng dẫn để em hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Sinh học - Cơng nghệ Thực phẩm, trường Đại học Nơng Lâm Thái Ngun dìu gh tn to Em xin gửi lời tri ân tới thầy giáo ngồi Khoa Cơng nghệ ie dắt truyền đạt cho em không kiến thức mà cao hết đạo đức làm người p suốt bốn năm học qua nl w Cuối em xin cảm ơn gia đình, người thân bạn bè động an lu luận d oa viên, giúp đỡ em suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành khóa nf va Thái Nguyên, tháng năm 2016 Sinh viên z at nh oi lm ul Trần Văn Nam z m co l gm @ an Lu n va ac th si ii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Các hóa chất sử dụng đề tài nghiên cứu .28 Bảng 3.2 Các thiết bị sử dụng thí nghiệm 28 Bảng 3.3 Thành phần lít mơi trường Hansen 29 Bảng 4.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc sau ngày ni cấy 38 Bảng 4.2 Kết thử khả lên men: Thời gian để 50 chủng lên men 5ml CO2 .40 Bảng 4.3 Kết thử khả lên men đường saccharose maltose 41 lu Bảng 4.4 Kết thử khả tăng sinh khối cách đo OD 43 an trường Hansen 18% glucose) .44 n va Bảng 4.5 kết chưng cất xác định hàm lượng rượu dịch dấm chin (môi gh tn to Bảng 4.6 Kết theo dõi ảnh hưởng nhiệt độ tới sinh trưởng chủng ie Saccharomyces cerevisiae VPk1 .47 p Bảng 4.7 Ảnh hưởng pH tới phát triển chủng Saccharomyces cerevisiae nl w VPk1 48 d oa Bảng 4.8 Ảnh hưởng hàm lượng peptone tới phát triển chủng nấm men an lu Saccharomyces cerevisiae VPk1 .50 nf va Bảng 4.9 Ảnh hưởng nồng độ đường tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 51 lm ul Bảng 4.10 Kết thử khả lên men môi trường dịch .52 z at nh oi z m co l gm @ an Lu n va ac th si iii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 3.1 Các khuẩn lạc phân lập phương pháp cấy trang môi trường Hansen .33 Hình 3.2 Kết thử khả lên men số chủng nấm men .34 Hình 3.3 Một số hình ảnh trình chưng cất rượu 36 Hình 4.1 Hình ảnh khuẩn lạc vi sinh vật tổng số mọc môi trường phân lập .37 Hình 4.2 Hình ảnh số khuẩn lạc khiết 37 lu an Hình 4.3 Kết thử khả lên men đường saccharose maltose chủng 42 n va Hình 4.4 Biểu đồ thể khả tăng sinh chủng qua kết đo OD 43 Hình 4.6 Khuẩn lạc trước thử nghiệm catalase 46 gh tn to Hình 4.5 Hình ảnh tế bào chủng VPk1 soi kính hiển vi 45 p ie Hình 4.7 Khuẩn lạc sau thử nghiệm catalase 46 Hình 4.8 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ tới phát triển chủng nl w nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 47 d oa Hình 4.9 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng pH tới phát triển chủng nấm men an lu Saccharomyces cerevisiae VPk1 49 nf va Hình 4.10 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng hàm lượng peptone tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 50 lm ul Hình 4.11 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng nồng độ đường tới phát triển z at nh oi chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 .51 Hình 4.12 Kết chưng cất dịch dấm chín nho 19 độ Brix 53 z m co l gm @ an Lu n va ac th si iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chú thích VSV : Vi sinh vật KL : Khuẩn lạc OD : Optical density lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si v MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv MỤC LỤC v Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề lu 1.2 Mục tiêu đề tài .1 an n va 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn p ie gh tn to 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .2 Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU nl w 2.1 Vi sinh vật nói chung nấm men nói riêng vỏ dịch trái d oa 2.2 Đặc điểm chung nấm men .3 an lu 2.2.1 Thành phần hóa học nấm men nf va 2.2.2 Đặc điểm hình thái nấm men 2.2.3 Cấu tạo tế bào nấm men lm ul 2.2.4 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa nấm men 10 z at nh oi 2.2.5 Sự sinh sản nấm men 13 2.2.6 Nhu cầu dinh dưỡng nấm men 16 2.2.7 Sự trao đổi chất nấm men 19 z gm @ 2.2.8 Phân loại nấm men 20 2.2.9 Vai trò nấm men 22 l co 2.2.10 Ứng dụng nấm men 22 m 2.3 Tình hình nghiên cứu nước 24 an Lu 2.3.1 Tình hình nghiên cứu nước 24 n va 2.3.2 Tình hình nghiên cứu giới 25 ac th si vi Phần 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 3.1 Đối tượng nghiên cứu 28 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 28 3.3 Hóa chất thiết bị sử dụng .28 3.3.1 Hóa chất 28 3.3.2 Dụng cụ thiết bị sử dụng 28 3.3.3 Môi trường nuôi cấy 29 3.4 Nội dung nghiên cứu 29 3.5 Phương pháp nghiên cứu 29 lu 3.5.1 Phương pháp thu nhận mẫu 29 an va 3.5.2 Phương pháp pha loãng mẫu 30 n 3.5.3 Phương pháp phân lập tuyển chọn nấm men tổng số 30 to 3.5.5 Quan sát chủng giống qua khuẩn lạc 33 ie gh tn 3.5.4 Phương pháp cấy chuyển giữ giống 31 p 3.5.6 Xác định khả lên men qua khả sinh khí 34 nl w 3.5.7 Thử khả catalaza 34 d oa 3.5.8 Xác định mật độ tế bào phương pháp đo OD 35 an lu 3.5.9 Phương pháp chưng cất xác định nồng độ cồn .35 nf va 3.5.10 Phương pháp xử lý số liệu 36 Phần 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 lm ul 4.1 Kết phân lập chủng nấm men từ vỏ số loại 37 z at nh oi 4.2 Tuyển chọn chủng nấm men có khả lên men rượu tốt .39 4.2.1 Thử khả lên men .40 4.2.2 Thử khả lên men đường saccharose maltose 41 z gm @ 4.2.3 Kết thí nghiệm khả tăng sinh 42 4.2.4 Nghiên cứu khả sinh rượu chủng nấm men chọn 44 l co 4.3 Định danh sơ chủng VPk1 45 m 4.3.1 Quan sát hình thái tế bào 45 an Lu 4.3.2 Thử nghiệm catalase 46 n va ac th si vii 4.4 Tối ưu hóa điều kiện mơi trường sinh trưởng phát triển chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 .46 4.4.1 Ảnh hưởng nhiệt độ 47 4.4.2 Ảnh hưởng pH 48 4.4.3 Khả sử dụng nguồn nitơ (peptone) 49 4.4.4 Khả sử dụng nguồn carbon (đường glucose) 51 4.5 Thử khả lên men môi trường dịch 52 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 5.1 Kết luận 54 lu an 5.2 Kiến nghị 54 n va TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 II Tài liệu tiếng anh 56 gh tn to I Tài liệu Tiếng Việt 55 p ie PHỤ LỤC d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Ở nước ta, rượu thức uống có cồn phổ biến, mang đậm tính truyền thống, gắn bó lâu đời khơng thể thiếu sống tinh thần văn hóa dân tộc Trên thị trường có nhiều loại rượu tiếng rượu ngô Bản Phố, loại rượu đặc sản người Mông Bản Phố, cao nguyên Bắc Hà, Lào Cai; rượu Làng Vân, đặc sản cổ truyền Bắc Giang; rượu Bầu Đá, đặc sản miền đất võ Bình Định; rượu Gị Đen q hương Long An; rượu Phú Lễ miền đất lu an Đồng khởi Bến Tre; rượu Xuân Thạnh Trà Vinh [1] n va Bên cạnh loại rượu truyền thống thị trường nước ta với nước giới nghề cổ xưa Việt Nam xuất gh tn to du nhập thêm rượu vang từ nước phương tây Chế biến rượu vang đối p ie vài chục năm gần [7] Việc tiêu thụ rượu vang không mạnh bước người tiêu dùng ưa chuộng có độ cồn nhẹ, hương vị thơm tự nhiên, nl w có tác dụng kích thích tiêu hố… rượu vang chọn thay cho loại d oa rượu mạnh [7] dịp lễ tết Tuy nhiên, ngành công nghiệp sản xuất rượu an lu vang nước ta nhiều hạn chế, chưa thực đáp ứng yêu cầu ngày nf va cao người tiêu dùng Nghiên cứu nâng cao chất lượng rượu vang vấn đề quan tâm Một phương pháp cải tiến chất lượng sử lm ul dụng nguồn nấm men tự nhiên phân lập từ nguyên liệu cho trình sản xuất z at nh oi rượu vang cho rượu có độ cồn cao, chất lượng rượu ổn định mùi vị đặc trưng [15] Xuất phát tử thực tế em xin thực đề tài: “Phân lập tuyển chọn số chủng nấm men có khả lên men rượu cao vỏ trái cây” Hoạt động z gm @ giúp cải thiện tăng cường chất lượng rượu vang, góp phần đa dạng hóa sản phẩm, nâng cao giá trị kinh tế loại phần đáp ứng nhu cầu sử m co 1.2 Mục tiêu đề tài l dụng dạng nước uống có cồn đa dạng an Lu Phân lập chủng nấm men từ vỏ vùng miền khác n va ac th si 51 lu an n va p ie gh tn to Ta thấy hàm lượng peptone 10g chủng có khả phát triển tốt (giá trị OD đạt 1.692) Kết hoàn toàn phù hợp với nghiên cứu tác giả Nguyễn Lê Bảo Trâm [23] cho nấm men phát triển tốt hàm lượng 10g peptone Kết luận: Hàm lượng Peptone thích hợp cho chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 phát triển 10g/l môi trường 4.4.4 Khả sử dụng nguồn carbon (đường glucose) Thí nghiệm tiến hành mơi trường hansen lỏng lượng đường thay đổi từ 1% - 5% Kết nghiên ảnh hưởng nồng độ đường tới sinh trưởng phát triển chủng nấm men thể qua bảng 4.9 hình 4.11 Bảng 4.9 Ảnh hƣởng nồng độ đƣờng tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 Thời gian Nồng độ đƣờng nuôi cấy 1% 2% 3% 4% 5% 0.015 0.013 0.012 0.015 0.013 0.080 0.113 0.118 0.100 0.112 0.718 0.790 0.780 0.670 0.739 12 1.303 1.570 1.660 1.615 1.654 16 1.361 1.603 1.703 1.721 1.721 20 1.521 1.622 1.682 1.750 1.719 24 1.494 1.583 1.676 1.699 1.770 28 1.461 1.572 1.674 1.766 1.682 32 1.450 1.564 1.661 1.755 1.672 36 1.430 1.555 1.652 1.656 1.595 d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu Hình 4.11 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng nồng độ đường tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 n va ac th si 52 Từ bảng 4.9 hình 4.11 em nhận thấy rằng: Chủng VPk1 có xu hướng phát triển theo nồng độ đường, cụ thể tăng nồng độ đường cao chủng VPk1 phát triển mạnh (giá trị OD thu từ 0.620 - 1.188), mức nồng độ đường 4% chủng VPk1 có khả sinh trưởng phát triển mạnh (giá trị OD tăng mạnh 0.012 - 1.770), nồng độ đường tăng lên 5% sinh trưởng phát triển chủng nấm men vào mức ổn định có xu hướng giảm Như vậy, nồng độ đường thích hợp để chủng VPk1 sinh trưởng phát triển tốt 4% Kết luận: Nồng độ đường thích hợp cho chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 phát triển 4% lu 4.5 Thử khả lên men môi trường dịch an va Với mục đích thử khả lên men mơi trường tự nhiên chủng n VPk1 em tiến hành thử khả lên men môi trường dịch nho to gh tn Tiến hành: Lấy khoảng 200ml dịch nho (với mức pha loãng xác định độ Brix) cho vào bình ni cấy, mang trùng 600C 20 ie p phút để nguội sau cấy chủng VPk1 vào, ni lắc 24 đầu sau chuyển nl w vào tủ ấm 300C lên men ngày Sau trình lên men hồn tất em oa tiến hành chưng cất xác định độ cồn dịch dấm chín d Kết thể bảng sau 4.10 lu Dịch Dịch Dịch Dịch 50Brix 70Brix 90Brix 140Brix 190Brix (pl lần) (pl lần) (pl 0.5 lần) (không pl) Thêm glucose 3.5e 4.3d 5.4c 7.4b 11.8a Độ rượu @ Cv% 0.462629 z LSD05 z at nh oi Dịch lm ul Ct nf va an Bảng 4.10 Kết thử khả lên men môi trƣờng dịch 3.9 m co l gm PL: Pha loãng an Lu n va ac th si 53 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu lm ul Hình 4.12 Kết chưng cất dịch dấm chín nho 19 độ Brix z at nh oi Từ kết lên men dịch cho thấy chủng VPk1 có khả lên men tốt mơi trường dịch quả, nồng độ 19 Brix đạt nồng độ rượu 11,8 % z Theo tác giả Lường Đức Phẩm [14] độ rượu vang sau giai đoạn lên men gm @ thường đạt từ – 10 độ cồn l Đối với kết thí nghiệm đạt độ rượu 11,8% đạt yêu cầu rượu vang an Lu trình sản xuất rượu vang quy mơ cơng nghiệp m co Đây cơng thức có nhiều tiềm năng, nghiên cứu để hoàn thiện quy n va ac th si 54 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Qua trình thực đề tài: “Phân lập tuyển chọn chủng nấm men có khả lên men rượu cao vỏ trái cây” em thu số kết sau: Phân lập 50 chủng nấm men từ mẫu thu thập tỉnh Nghệ An, Thái Nguyên, Thanh Hóa, Vĩnh Phúc lu an Tuyển chọn chủng nấm men VPk1 có khả lên men mạnh nhất, n va nồng độ đường 18% nồng độ cồn rượu đạt 11,4% tn to Định danh sơ chủng nấm men đặt tên tạm thời cho chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 gh p ie Tối ưu điều kiện sinh trưởng phát triển chủng em thấy chủng có thể sinh trưởng phát triển tốt điều kiện môi trường có chứa 40g/l đường nl w glucoza, 10g/l pepton, nuôi cấy nhiệt độ 300C pH d oa Thử khả lên men môi trường dịch cho chủng VPk1 Ở nf va 5.2 Kiến nghị an lu 190Brix nồng độ cồn đạt 11,8% cerevisiae VPk1 z at nh oi lm ul Nghiên cứu sâu đặc điểm sinh học chủng Saccharomyces Nghiên cứu ứng dụng chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 lên men công nghiệp Công nghệ Thực phẩm z Định danh giải mã trình tự cho chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 m co l gm @ an Lu n va ac th si TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu Tiếng Việt Lý Nguyễn Bình, Trần Văn Khánh, Hà Phương Thảo Phân lập tuyển chọn Nấm men có hoạt lực cao từ men rượu Tạp chí khoa học đại học Cần Thơ, 2015 Nguyễn lân Dũng, Vũ Đức Minh Nghiên cứu chủng nấm men phân giải tinh bột Endomycopsis 119 khả sử dụng chúng để sản xuất sinh khối phục vụ chăn nuôi Tập san Đại học Tổng hợp, 1978 lu Nguyễn Lân Dũng Nghiên cứu số loại nấm men phân lập Việt Nam an n va để nâng cao chất lượng thức ăn gia súc gia cầm Tin tức hoạt động khoa to học, 1969 tn Nguyễn Lân Dũng, Dương Văn Hợp Nghiên cứu lựa chọn chủng nấm men p ie gh Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty Giáo trình vi sinh điều kiện sản xuất sinh khối Tạp chí sinh học, 1986 nl w vật học NXB Giáo dục, 2007 Nguyễn Lân Dũng Vi Sinh Vật Học Giáo dục, 2009 Vũ Cơng Hậu Làm vang trái gia đình NXB nông nghiệp Hà d oa nf va an lu Nội 1987 Phạm Hồng Hải, Ngô Kim Chi Xử lý số liệu quy hoạch thực nghiệm lm ul nghiên cứu hóa học Hà Nội NXB khoa học tự nhiên công z at nh oi nghệ, 2007 Nguyễn Thị Hiền MALT VÀ BIA NXB Khoa học Kỹ thuật, 2009 10 Nguyễn Văn Hiệu Hoàn thiện quy trình sản suất bánh men cổ truyền ứng z 11 gm @ dụng sản suất rượu Hà nội : Luận án phó tiến sĩ, 1992 Lê Đình Lương Nấm men – đối tượng cổ điển đại công nghệ m co 12 l sinh học Tạp chí hoạt động khoa học, 1990 Lê Thanh Mai, Nguyễn Thị Hiền, Phạm Thu Thủy, Nguyễn Thanh Hằng, Lê an Lu Thị Lan Chi Các phương pháp phân tích ngành cơng nghệ lên men Hà n va Nội : NXB KHKT, 2005 ac th si Lê, Văn Mẫn, Lại Mai Hương Thí nghiệm vi sinh vật học thực phẩm NXB 13 ĐHQGTPHCM, 2006 14 Lường Đức phẩm Công nghệ vi sinh NXB khoa học công nghệ, 2015 15 Lường Đức Phẩm Nấm men công nghiệp NXB Khoa học Kỹ thuật, 2006 16 Lường Đức Phẩm, Hồ Sướng Vi sinh tổng hợp Hà Nội : NXB KHKT, 1978 17 Nguyễn Đình Quyến Sinh lý, sinh hóa vi sinh vật NXBKH- KT, Hà Nội, 2009 18 Lê Ngọc Tú, Lê Dỗn Dun, Phạm Quốc Thăng, Hóa sinh học cơng nghiệp Hà Nội : Đại học THCN, 1977 19 Nguyễn Khắc Tuấn Nguyễn Khắc Tuấn Tuyển chọn số chủng nấm men lu từ bánh men cổ truyền để sản xuất để sản xuất số chế phẩm sinh học sử an n va dụng chăn nuôi lợn Hà Nội : Luận án phó tiến sĩ, 1996 vài ứng dụng Hà Nội : Luận án phó tiến sĩ khoa học, 1989 gh tn to Đặng Thị Thu Nghiên cứu glucoamilaza Endomycopsis Fibuliger 20 Trần Linh Thước Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm p ie 21 Trần Thanh Thủy Hướng dẫn thực hành vi sinh vật học NXB Giáo nl w 22 mỹ phẩm NXB Giáo dục, 2007 Lê Nguyễn Bảo Trâm Khảo sát nuôi cấy nấm men dùng làm chế phẩm bổ an lu 23 d oa Dục,1999 TP.HCM, 2005 z at nh oi 24 lm ul II Tài liệu tiếng anh nf va sung selen Khóa luận tốt nghiệp cử nhân CNSH Đại Học Mở - Bán công C Maragatham and A Panneerselvam Isolation, identification and characterization of wine yeast from rotten papaya fruits for wine production z Pelagia Research Library Advances in Applied Science Research, 2011, gm 25 @ (2): 93-98 Dângelly Lins Figuerôa Martins de Melo; Flávia Cristiana Santos; Antônio l m co Marcio Barbosa Junior; Patrícia Oliveira Santos; Marcelo Augusto Gutiérrez Carnelossi; Rita de Cássia Trindade Identification of yeasts isolated from the an Lu pulp in nature and the production of homemade "umbu" wine Brazilian n va Archives of Biology and Technology, 2007 ac th si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si 26 Mantell S.H Principles of plant Oxfor London, 1985 27 Prescott S.C, and Dunn C.G Industrial microbiology Mc Graw – hill book Company new york, 1979 28 R.S Rao, B Bhadra and S Shivaji Isolation and characterization of ethanol-producing yeasts from fruits and tree barks Institution Centre for Cellular and Molecular Biology, Hyderabad, India, 2007 29 Villee C A Vincent G , Pethier Biolgical principles and processes Philadelphia- London- Toronto : s.n., 1971 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC BẢNG CHUYỂN ĐỔI ĐỘ RƢỢU Phụ lục 1: Bảng chuyển đổi độ rƣợu nhiệt độ khác 200C (từ 25,5– 30%) lu an n va p ie gh d oa nl w an lu 26,0 25,5 22,3 22,7 23,0 23,4 23,8 24,1 24,5 24,9 25,3 25,6 26,0 26,4 26,7 27,1 27,5 27,9 28,3 28,7 29,1 29,5 29,9 30,3 30,7 31,1 31,6 32,0 32,4 32,9 33,3 33,7 34,2 21,9 22,2 22,6 22,9 23,3 23,7 24,0 24,4 24,8 25,1 25,5 25,9 26,2 26,6 27,0 27,4 27,8 28,2 28,5 28,9 29,3 29,7 30,2 30,6 31,0 31,4 31,8 32,3 32,7 33,1 33,6 m co l gm @ 25,6 26,0 26,4 26,7 27,1 27,5 27,9 28,3 28,7 29,4 29,5 29,9 30,3 30,7 31,1 31,5 31,9 32,3 32,8 33,2 33,6 34,0 34,4 34,9 35,3 35,7 36,1 36,6 37,0 37,4 37,8 z 26,1 26,4 26,8 27,2 27,6 28,0 28,4 28,8 29,2 29,6 30,0 30,4 30,8 31,2 31,6 32,0 32,4 32,8 33,3 33,7 34,4 34,5 35,0 35,4 35,8 36,2 36,6 37,1 37,5 37,9 38,3 z at nh oi + 30 + 29 + 28 + 27 + 26 + 25 + 24 + 23 + 22 + 21 + 20 + 19 + 18 + 17 + 16 + 15 + 14 + 13 + 12 + 11 + 10 +9 +8 +7 +6 +5 +4 +3 +2 +1 +0 Thông số đo đƣợc rƣợu kế 24,9 28,5 28,0 27,5 27,0 26,5 Độ rƣợu tính theo thể tích nhiệt độ 20 oC 25,4 24,6 24,2 23,7 23,2 22,8 25,5 25,1 24,6 24,1 23,6 23,2 25,9 25,4 24,9 24,4 24,0 23,5 26,3 25,8 25,3 24,8 24,4 23,9 26,6 26,2 25,7 25,2 24,7 24,2 27,0 26,6 26,1 25,6 25,1 24,6 27,4 26,9 26,4 26,0 25,5 25,0 27,8 27,3 26,8 26,3 25,8 25,4 28,2 27,7 27,2 26,7 26,2 25,8 28,6 28,1 27,6 27,4 26,6 26,1 29,0 28,5 28,0 27,5 27,0 26,5 29,4 28,9 28,4 27,9 27,4 26,9 29,8 29,3 28,8 28,3 27,8 27,2 30,2 29,7 29,2 28,6 28,1 27,6 30,6 30,1 29,6 29,0 28,5 28,0 31,0 30,5 30,0 29,5 28,9 28,4 31,4 30,9 30,4 29,9 29,3 28,9 31,8 31,3 30,8 30,3 29,7 29,2 32,2 31,7 31,2 30,7 30,2 29,6 32,7 32,4 31,6 31,1 30,6 30,1 33,1 32,6 32,0 31,5 31,0 30,4 33,5 33,0 32,5 32,0 31,4 30,9 33,9 33,4 32,9 32,4 31,8 31,3 34,4 33,8 33,3 32,8 32,2 31,7 34,8 34,2 33,7 33,2 32,7 32,4 35,2 34,7 34,2 33,6 33,1 32,6 35,6 35,1 34,6 34,0 33,5 33,0 36,0 35,5 35,0 34,5 34,0 33,4 36,5 36,0 35,4 34,9 34,4 33,8 36,9 36,4 35,9 35,3 34,8 34,3 37,3 36,8 36,3 35,8 35,3 34,7 lm ul 29,5 nf va 30,0 tn to Nhiệt độ oC an Lu n va ac th si Phụ lục 2: Bảng chuyển đổi độ rƣợu nhiệt độ khác 200C (từ 20,5– 25%) lu an n va p ie gh d oa nl w an lu m co l gm @ 20,9 21,3 21,6 22,0 22,4 22,7 23,1 23,4 23,8 24,1 24,5 24,8 25,2 25,6 25,9 26,3 26,7 27,1 27,4 27,8 28,2 28,6 29,0 29,4 29,8 30,3 30,7 31,1 31,5 32,0 32,4 z 21,4 21,8 22,4 22,5 22,8 23,2 23,5 23,9 24,3 24,6 25,0 25,4 25,7 26,1 26,5 26,8 27,2 27,6 28,0 28,4 28,8 29,2 29,6 30,0 30,4 30,8 31,3 31,7 32,2 32,6 33,0 z at nh oi + 30 + 29 + 28 + 27 + 26 + 25 + 24 + 23 + 22 + 21 + 20 + 19 + 18 + 17 + 16 + 15 + 14 + 13 + 12 + 11 + 10 +9 +8 +7 +6 +5 +4 +3 +2 +1 +0 lm ul 24,5 Thông số đo đƣợc rƣợu kế 24,0 23,5 23,0 22,5 22,0 21,5 Độ rƣợu tính theo thể tích nhiệt độ 20 oC 20,5 20,0 19,6 19,1 18,6 18,2 20,8 20,4 19,9 19,4 19,0 18,5 21,2 20,7 20,2 19,8 19,3 18,8 21,5 21,0 20,6 20,1 19,6 19,2 21,8 21,4 20,9 20,5 20,0 19,5 22,2 21,8 21,3 20,8 20,3 19,8 22,6 22,1 21,6 21,1 20,7 20,2 22,9 22,4 22,0 21,5 21,0 20,5 23,3 22,8 22,3 21,8 21,3 20,8 23,6 23,1 22,6 22,2 21,7 21,2 24,0 23,5 23,0 22,5 22,0 21,5 24,4 23,8 23,3 22,8 22,3 21,8 24,7 24,2 23,7 23,2 22,6 22,1 25,1 24,5 24,0 23,5 23,0 22,5 25,4 24,9 24,4 23,8 23,3 22,8 25,8 25,3 24,7 24,2 23,7 23,1 26,2 25,6 25,1 24,6 24,0 23,5 26,5 26,0 25,4 24,9 24,4 23,8 26,9 26,4 25,8 25,3 24,7 24,2 27,3 26,7 26,2 25,6 25,0 24,5 27,7 27,1 26,6 26,0 25,4 24,8 28,1 27,5 26,9 26,3 25,8 25,8 28,5 27,9 27,3 26,7 26,1 25,5 28,9 28,3 27,7 27,1 26,5 25,9 29,3 28,7 28,1 27,5 26,9 26,2 29,7 29,1 28,5 27,9 27,2 26,6 30,1 29,5 28,9 28,2 27,6 27,0 30,5 29,9 29,3 28,6 28,1 27,4 30,9 30,3 29,7 29,0 28,4 27,8 31,4 30,7 30,1 29,5 28,8 28,2 31,8 31,2 30,6 29,9 29,2 28,6 nf va 25,0 tn to Nhiệt độ oC 21,0 20,5 17,7 18,0 18,4 18,7 19,0 19,4 19,7 20,0 20,4 20,7 21,0 21,3 21,6 22,0 22,3 22,6 23,0 23,3 23,6 23,9 24,3 24,2 24,9 25,3 25,6 26,0 26,4 26,8 27,1 27,5 27,9 17,3 17,6 17,9 18,2 18,6 18,9 19,2 19,5 19,9 20,2 20,5 20,8 21,2 21,4 21,8 22,1 22,4 22,7 23,0 23,4 23,7 24,6 24,3 24,7 25,0 25,4 25,7 26,1 26,4 26,8 27,2 an Lu n va ac th si Phụ lục 3: Bảng chuyển đổi độ rượu nhiệt độ khác 200C (từ 15,5 – 20%) Thông số đo đƣợc rƣợu kế Nhiệt 20,0 độ oC 19,5 19,0 18,5 18,0 17,5 17,0 16,5 16,0 15,5 Độ rƣợu tính theo thể tích nhiệt độ 20 C o an n va 16,4 16,0 15,5 15,1 14,7 14,2 13,8 13,4 12,9 + 29 17,2 16,7 16,3 15,8 15,4 15,0 14,5 14,1 13,6 13,2 + 28 17,5 17,0 16,6 16,1 15,7 15,2 14,8 14,4 13,9 13,4 + 27 17,8 17,3 16,9 16,4 16,0 15,5 15,1 14,6 14,2 13,7 + 26 18,1 17,6 17,2 16,7 16,3 15,8 15,4 14,9 14,4 14,0 + 25 18,4 18,0 17,5 17,0 16,6 16,1 15,6 15,2 14,7 14,2 + 24 18,7 18,3 17,8 17,3 16,9 16,4 15,9 15,4 15,0 14,5 + 23 19,0 18,6 18,1 17,8 17,1 16,6 16,2 15,7 15,2 14,7 + 22 19,4 18,9 18,4 17,9 17,4 17,0 16,5 16,0 15,5 15,0 + 21 19,7 19,2 18,7 18,2 17,7 17,2 16,7 16,2 15,7 15,2 + 20 20,0 19,5 19,0 18,5 18,0 17,5 17,0 16,5 16,0 15,5 + 19 20,3 19,8 19,3 18,6 18,3 17,8 17,3 16,8 16,3 15,8 20,6 20,1 19,6 19,1 18,6 18,1 17,6 17,0 16,5 16,0 20,9 19,9 19,4 18,9 18,3 17,8 17,3 16,8 16,2 20,2 19,7 19,2 18,6 18,1 17,5 17,0 16,5 21,0 20,5 20,0 19,4 18,9 18,3 17,8 17,2 16,7 20,8 20,2 19,7 19,1 18,6 18,0 17,5 16,9 21,1 20,5 20,0 19,4 18,8 18,3 17,7 17,2 tn to 16,8 gh lu + 30 p ie + 16 21,2 20,7 + 15 21,6 + 14 21,9 21,3 + 13 22,2 21,6 + 12 22,5 21,9 21,4 nf va 20,8 20,2 19,7 19,1 18,5 18,0 17,4 + 11 22,8 22,2 21,7 21,1 20,0 19,4 18,8 18,2 17,6 + 10 23,1 22,5 22,0 lm ul 20,5 21,4 20,8 20,2 19,8 19,0 18,4 17,8 +9 23,4 22,8 22,3 21,7 21,1 20,5 19,9 19,2 18,6 18,0 +8 23,8 23,2 22,6 21,9 21,3 20,7 20,1 19,5 18,9 18,2 +7 24,1 23,4 22,8 22,2 21,6 21,0 20,4 19,7 19,1 18,4 +6 24,4 23,8 23,2 22,5 21,9 21,2 @ 20,6 19,9 19,3 18,6 +5 24,7 24,1 23,4 22,8 22,2 21,5 21,9 20,2 19,5 18,8 +4 25,1 24,4 23,8 23,1 22,5 21,8 l 20,4 19,7 19,0 +3 25,4 24,8 24,1 23,4 22,7 22,0 21,4 20,6 19,9 19,2 +2 25,8 25,1 24,1 23,7 23,0 22,3 21,6 20,1 19,4 +1 26,1 25,1 24,7 24,0 23,3 22,6 21,8 21,1 20,3 19,6 +0 26,5 25,8 25,1 24,3 23,6 22,8 22,0 21,3 20,5 19,7 d oa an lu z at nh oi 20,4 nl w + 17 + 18 z gm 21,1 m co 20,8 an Lu n va ac th si Phụ lục 4: Bảng chuyển đổi độ rượu nhiệt độ khác 200C (từ 10,5 – 15%) an n va 8,9 8,4 12,7 12,3 11,8 11,4 10,9 10,5 10,0 9,5 9,1 8,6 + 28 13,0 12,6 12,1 11,6 11,2 10,7 10,3 9,8 9,3 8,9 + 27 13,2 12,8 12,3 11,9 11,4 10,9 10,5 10,0 9,5 9,1 + 26 13,5 13,0 12,6 12,1 11,7 11,2 10,7 10,2 9,8 9,3 + 25 13,8 13,3 12,8 12,4 11,9 11,4 10,9 10,4 10,0 9,5 + 24 14,0 13,5 13,1 12,6 12,1 11,6 11,2 10,7 10,2 9,7 + 23 14,3 13,8 13,3 12,8 12,3 11,8 11,4 10,9 10,4 9,9 + 22 14,5 14,0 13,6 13,1 12,6 12,1 11,6 11,1 10,6 10,1 + 21 14,8 14,3 13,8 13,3 12,8 12,3 11,8 11,3 10,8 10,3 + 20 15,0 14,5 14,0 13,5 13,0 12,5 12,0 11,5 11,0 10,5 + 19 15,2 14,7 14,2 13,7 13,2 12,7 12,2 11,7 11,2 10,7 + 18 15,5 15,0 14,4 13,9 13,4 12,9 12,4 11,9 11,4 10,9 15,7 15,2 14,7 14,1 13,6 13,1 12,6 12,1 11,5 11,0 15,9 14,9 14,3 13,8 13,3 12,8 12,2 11,7 11,2 15,1 14,5 14,0 13,5 12,9 12,4 11,9 11,3 15,8 15,3 14,7 14,2 13,6 13,1 12,5 12,0 11,5 15,5 14,9 14,4 13,8 13,2 12,7 12,2 11,6 15,7 15,1 14,5 14,0 13,4 12,8 12,3 11,8 15,8 15,3 14,7 14,1 13,6 13,0 12,4 11,9 16,0 15,4 14,3 13,7 13,1 12,6 12,0 15,6 15,0 14,4 13,8 13,2 12,7 12,1 15,0 14,5 + 30 12,5 + 29 p ie gh tn to 10,5 z at nh oi lu 11,0 12,0 Thông số đo đƣợc rƣợu kế 14,0 13,5 13,0 12,5 12,0 11,5 Độ rƣợu tính theo thể tích nhiệt độ 20 oC 11,6 11,1 10,7 10,2 9,8 9,3 Nhiệt độ oC + 15 16,2 15,6 + 14 16,4 + 13 16,6 16,0 + 12 16,8 16,2 + 11 17,0 16,4 + 10 17,2 16,6 +9 17,4 16,8 16,2 lm ul 14,9 +8 17,6 17,0 16,4 15,8 15,2 14,6 14,0 13,4 12,8 12,2 +7 17,8 17,2 16,5 15,9 15,3 14,7 14,1 13,5 12,8 12,3 +6 18,0 17,3 16,7 16,1 15,4 14,8 14,2 13,6 13,0 12,4 +5 18,2 17,5 16,8 16,2 15,6 14,9 14,3 13,7 13,0 12,4 +4 18,3 17,7 17,0 16,3 15,7 15,0 @ 14,4 13,8 13,1 12,5 +3 18,5 17,8 17,1 16,4 15,8 15,1 14,2 13,8 13,2 12,6 +2 18,6 17,9 17,2 16,6 15,9 15,2 l 13,9 13,2 12,6 +1 18,8 18,1 17,3 16,8 15,9 15,3 14,6 13,9 13,3 12,6 +0 19,0 18,2 17,5 16,7 16,0 15,3 14,8 14,0 13,3 12,7 d oa nf va an lu z 15,4 nl w + 16 + 17 gm 14,5 m co an Lu n va ac th si Phụ lục 5: Bảng chuyển đổi độ rượu nhiệt độ khác 200C (từ 5,5 – 10%) Thông số đo đƣợc rƣợu kế Nhiệt 10,0 độ oC 9,5 9,0 8,5 8,0 7,5 7,0 6,5 6,0 5,5 Độ rƣợu tính theo thể tích nhiệt độ 20 C o n va 7,0 6,6 6,1 5,9 5,2 4,7 4,2 3,8 + 29 8,2 7,7 7,2 6,8 6,3 5,8 5,4 4,9 4,4 4,0 + 28 8,4 7,9 7,7 7,0 6,5 6,1 5,6 5,1 4,6 4,2 + 27 8,6 8,1 7,7 7,2 6,7 6,3 5,8 5,3 4,8 4,3 + 26 8,8 8,3 7,9 7,4 6,9 6,4 6,0 5,5 5,0 4,5 + 25 9,0 8,6 8,1 7,6 7,1 6,6 6,2 5,7 5,2 4,7 + 24 9,2 8,8 8,3 7,8 7,3 6,8 6,3 5,8 5,4 4,9 + 23 9,4 8,9 8,4 8,0 7,5 7,0 6,5 6,0 5,5 5,0 + 22 9,7 9,1 8,6 8,2 7,7 7,2 6,7 6,2 5,7 5,2 + 21 9,8 9,3 8,8 8,3 7,8 7,3 6,8 6,3 5,8 5,4 + 20 10,0 9,5 9,0 8,5 8,0 7,5 7,0 6,5 6,0 5,5 + 19 10,2 9,7 9,2 8,7 8,2 7,6 7,2 6,6 6,1 5,6 10,4 9,8 9,3 8,8 8,3 7,8 7,3 6,8 6,3 5,8 10,5 10,0 9,5 9,0 8,5 8,0 7,4 6,9 6,4 5,9 + 16 10,7 10,2 9,6 9,1 8,6 8,1 7,6 7,0 6,5 6,0 + 15 10,8 9,9 9,3 8,8 8,2 7,7 7,2 6,6 6,1 + 14 11,0 10,4 10,0 9,4 8,9 8,3 7,8 7,3 6,7 6,2 + 13 11,1 10,6 10,0 9,5 9,0 8,4 7,9 7,4 6,8 6,3 + 12 11,2 10,7 10,1 9,6 9,1 8,5 8,0 7,5 6,9 6,4 + 11 11,3 10,8 10,2 9,7 9,2 8,6 8,1 7,6 7,1 6,5 + 10 11,4 10,9 10,3 9,8 9,3 8,7 8,2 7,6 7,1 6,5 +9 11,5 11,0 10,4 9,9 9,3 8,8 8,2 7,7 7,2 6,6 +8 11,6 11,1 10,5 10,0 9,4 8,8 8,3 7,7 7,2 6,6 +7 11,6 11,0 10,6 10,0 9,5 8,9 8,4 7,8 7,3 6,7 +6 11,8 11,2 10,6 10,1 9,5 8,9 8,4 7,8 7,3 6,9 +5 11,8 11,3 10,7 10,1 9,6 9,0 8,4 7,8 7,3 6,7 +4 11,9 11,3 10,7 10,2 9,6 9,0 8,4 7,8 7,3 6,7 +3 12,0 11,4 10,8 10,2 9,6 9,0 7,8 7,3 6,7 +2 12,0 11,4 10,8 10,2 9,6 9,0 8,4 7,8 7,3 6,7 +1 12,0 11,4 10,8 10,2 9,6 9,0 8,4 7,4 6,6 +0 12,0 11,4 10,8 10,2 9,6 9,0 8,4 p ie gh tn to 7,5 @ an 7,9 nf va lu + 30 + 18 oa nl w + 17 10,3 d an lu z at nh oi lm ul z l gm 8,4 m co 7,8 an Lu 7,8 7,4 6,6 n va ac th si Phụ lục Kết xử lý số liệu lên men môi trường dịch BALANCED ANOVA FOR VARIATE DC FILE NVV 12/ 5/16 0:55 :PAGE Bang phan tich sai khac giua cac cong thuc dich qua ve VARIATE V003 DC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CT 131.631 * RESIDUAL 32.9077 10 646666 508.88 0.000 646666E-01 lu - an * TOTAL (CORRECTED) 14 132.277 9.44838 va - n TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NVV 12/ 5/16 0:55 tn to :PAGE Bang phan tich sai khac giua cac cong thuc dich qua ve gh MEANS FOR EFFECT CT ie p - NOS nl w CT oa d 3.50000 4.30000 5.43333 7.40000 11.8000 lu DC nf va an lm ul SE(N= 3) 0.146818 5%LSD 10DF 0.462629 z at nh oi -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NVV 12/ 5/16 0:55 :PAGE z Bang phan tich sai khac giua cac cong thuc dich qua ve gm @ VARIATE STANDARD (N= SD/MEAN | BASED ON TOTAL SS RESID SS 3.0738 0.25430 15 6.4867 % | | | 3.9 0.0000 | | n va BASED ON OBS | an Lu NO C OF V |CT m DC GRAND MEAN 15) DEVIATION co l F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - ac th si Phụ lục 7: kết phân tích sai khác chủng nấm men đô cồn BALANCED ANOVA FOR VARIATE DC FILE B2 12/ 5/16 8: :PAGE ket qua phan tich sai khac giua cac chung nam men ve VARIATE V003 DC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CT 34.1707 * RESIDUAL 8.54267 10 526665 162.20 0.000 526665E-01 lu - an * TOTAL (CORRECTED) 14 34.6973 2.47838 - va TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B2 12/ 5/16 8: n :PAGE to gh tn ket qua phan tich sai khac giua cac chung nam men ve MEANS FOR EFFECT CT ie - p CT NOS w nl 7.76667 9.03333 oa DC 11.4333 7.03333 8.30000 d 0.132497 10DF 0.417503 lm ul 5%LSD nf va 3) an lu SE(N= - z at nh oi ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B2 12/ 5/16 8: :PAGE ket qua phan tich sai khac giua cac chung nam men ve z @ VARIATE STANDARD (N= SD/MEAN | 15) 15 8.7133 BASED ON TOTAL SS RESID SS 1.5743 0.22949 % | | | | 2.6 0.0000 | | an Lu OBS DC BASED ON C OF V |CT m NO DEVIATION co GRAND MEAN l gm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - n va ac th si