(Luận văn) phân lập, tuyển chọn một số chủng nấm cộng sinh có khả năng phân giải photphat và kích thích sinh trưởng iaa trong sản xuất rau mầm

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KINH TẾ - KỸ THUẬT CÔNG NGHIỆP KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM lu an n va gh tn to PHẠM TRUNG ĐỨC ie PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG NẤM p CỘNG SINH CÓ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI nl w PHOTPHAT VÀ KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG IAA d oa TRONG SẢN XUẤT RAU MẦM an lu u nf va LUẬN VĂN THẠC SĨ CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ll oi m z at nh z m co l gm @ HÀ NỘI 2021 an Lu n va ac th si BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC KINH TẾ - KỸ THUẬT CÔNG NGHIỆP lu an n va gh tn to PHẠM TRUNG ĐỨC ie PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG NẤM p CỘNG SINH CÓ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI nl w PHOTPHAT VÀ KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG IAA d oa TRONG SẢN XUẤT RAU MẦM lu va an LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành: Công nghệ thực phẩm u nf Mã số : 8540101 ll m oi Người hướng dẫn khoa học 1: TS Nguyễn Thị Mai Hương z at nh Người hướng dẫn khoa học 2: TS Phạm Thị Thu Hồi z m co l gm @ HÀ NỢI 2021 an Lu n va ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực Tôi xin cam đoan giúp đỡ việc hồn thành luận văn cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận ghi rõ nguồn gốc lu an Hà Nội, ngày 23 tháng 12 năm 2021 HỌC VIÊN n va gh tn to Phạm Trung Đức p ie d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ i an Lu n va ac th si LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp này, bên cạnh cố gắng nỗ lực thân, nhận giúp đỡ nhiều cá nhân tập thể Đầu tiên, xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cô TS Nguyễn Thị Mai Hương, TS Phạm Thị Thu Hoài - Trường Đại học Kinh Tế Kỹ Thuật Công Nghiệp người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt giúp tơi lu an hồn thành khóa luận tốt nghiệp Qua đây, xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô Khoa Công nghệ thực n va phẩm – Đại học Kinh tế Kỹ thuật Công nghiệp tn to Cuối cùng, với lịng biết ơn, tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè động viên, khích lệ giúp đỡ tơi suốt thời gian vừa qua gh Trong q trình thực tập, hồn thiện luận văn không tránh khỏi ie p sai sót, kính mong nhận ý kiến đóng góp thầy bạn để báo cáo hồn thiện nl w Tơi xin chân thành cảm ơn! d oa HỌC VIÊN an lu ll u nf va Phạm Trung Đức oi m z at nh z m co l gm @ ii an Lu n va ac th si MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT .vi DANH MỤC BẢNG BIỂU vii DANH MỤC HÌNH ẢNH viii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU lu an 1.1 Cơ sở lý luận đề tài n va 1.2 Cơ sở thực tiễn .4 1.3 Giới thiệu khu hệ nấm cộng sinh đất rễ .8 to 1.3.1 Phân loại khu hệ nấm cộng sinh đất rễ .9 tn Nấm gh 1.3.1.1 rễ ngoại cộng sinh (Ectomycorrhiza ie Ectotrophicmycorrhiz) 10 p 1.3.1.2 Nấm rễ nội cộng sinh (Endomycorrhiza) 11 1.3.1.3 Nấm rễ nội ngoại cộng sinh (Ectoendo mycorrhiza) 12 w oa nl 1.4 Vai trò khu hệ nấm cộng sinh đất rễ chủ 13 1.4.1 Tăng khả hấp thụ Photphat dinh dưỡng chủ .13 d lu 1.4.2 Hình thành chất kích thích sinh trưởng .14 an 1.4.3 Nâng cao sức chống chịu thích nghi với môi trường trồng u nf va 14 1.4.4 Tăng khả kháng bệnh trồng 15 ll 1.5 Tổng quan cơng trình nghiên cứu ngồi nước có liên quan 18 m oi 1.5.1 Trên giới .18 z at nh 1.5.2 Tại Việt Nam .20 1.6 Tình hình ni trồng phát triển dược liệu Việt Nam 24 1.6.1 Thực trạng nguồn dược liệu thiên nhiên 24 z @ 1.6.2 Tình hình phát triển dược liệu 27 iii m co l gm CHƯƠNG 2: MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 30 an Lu n va ac th si 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 30 2.2 Đối tượng nghiên cứu 30 2.3 Nội dung nghiên cứu 30 2.4 Phạm vi nghiên cứu 30 2.5 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học thực tiễn 31 CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .32 3.1 Nguyên Vật Liệu 32 lu an 3.1.1 Mẫu thí nghiệm 32 3.1.2 Hóa chất dụng cụ thí nghiệm 32 n va 3.1.3 Thiết bị phịng thí nghiệm 32 tn to 3.1.4 Môi trường nuôi cấy 32 3.2 Phương pháp nghiên cứu 33 gh 3.2.1 Phương pháp thu thập mẫu 33 ie p 3.2.2 Phương pháp phân lập chủng nấm vùng rễ 33 3.3.3 Phương pháp định lượng khả phân giải photphat khó tan nấm nl w rễ .34 oa 3.3.4 Xác định khả sinh tổng hợp IAA nấm rễ 34 d 3.3.5 Xác định khả kích thích sinh trưởng thực vật chủng nấm lu an vùng rễ 34 va 3.3.6 Phương pháp xác định hoạt tính enzyme phosphataza nấm vùng rễ u nf 35 ll 3.3.7 Đánh giá hiệu nảy mầm sản xuất rau mầm 35 m 3.4 Quy trình thử nghiệm nảy mầm sản xuất rau mầm 35 oi z at nh 3.4.1 Quy trình trồng rau mầm .35 3.4.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ IAA đến nảy mầm rau cải mầm .36 z @ 3.4.3 Ảnh hưởng chủng nấm cộng sinh có khả sản sinh chất gm kích thích IAA đến sinh trưởng rau cải mầm .37 iv m co l 3.5 Phương pháp xử lý số liệu 38 an Lu n va ac th si CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .39 4.1 Thu thập xử lý mẫu vùng rễ đất trồng số (cỏ ngọt, đinh lăng, bạch chỉ) số vùng phía Bắc Việt Nam 39 4.2 Phân lập khu nấm vùng rễ mẫu thu thập .40 4.3 Tuyển chọn chủng có khả phân giải photphat sản sinh chất kích thích sinh trưởng IAA chủng phân lập .44 4.3.1 Đánh giá hoạt tính enzyme phosphatase chủng nấm vùng rễ lu an phân lập 44 4.3.2 Đánh giá khả phân giải photphat khó tan 46 n va 4.3.3.Đánh giá khả sản sinh chất kích thích sinh trưởng IAA tn to chủng nấm 47 4.3.4 Xác định khả đối kháng chủng nấm vùng rễ 49 gh 4.4 Đánh giá đa dạng sinh học .50 ie p 4.5 Thử nghiệm đánh giá hiệu phân giải phophat sản sinh chất kích thích sinh trưởng IAA chủng phân lập sản xuất rau mầm 55 nl w 4.5.1 Ảnh hưởng nồng độ IAA đến nảy mầm rau cải mầm 55 oa 4.5.2 Ảnh hưởng chủng nấm cộng sinh có khả sản sinh chất d kích thích IAA đến sinh trưởng rau cải mầm .56 lu an KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 58 va Kết luận .58 u nf Kiến nghị 58 ll TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 oi m z at nh z m co l gm @ v an Lu n va ac th si DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ Tiếng Anh Nghĩa Tiếng Việt IAA Inodole Acetic Inodole Acetic PTNT Rural Development Phát triển nông thôn GLS Gluosinonates Gluosinonates ITC Isothiocyanates Isothiocyanates AM Mycorrhizal Mycorrhizal P Phosphor Photpho K Potassium Kali N Nitrate Nitrat WHO World Helth Tổ Chức Y Tế Thế Giới lu Từ Viết Tắt an n va gh tn to ie Organization Bảo Vệ Thực Vật p BVTV d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ vi an Lu n va ac th si DANH MỤC BẢNG BIỂU Commented [D1]: Thứ tự: xếp Danh mục bảng biểu đặt trước Danh mục hình vẽ đồ thị lu an n va Bảng 2.1 Thành phần dinh dưỡng có 100g rau mầm đậu tương Bảng 4.1 Sự hấp thụ trình sản xuất IAA 37 Bảng 5.1 Ký hiệu mẫu nơi thu thập loại mẫu 40 Bảng 5.2 Đặc điểm ký hiệu chủng nấm phân lập 41 Bảng 5.3 Đánh giá hoạt tính enzyme phosphatase chủng nấm 45 Bảng 5.4 Khả phân giải photphat chủng nấm 46 Bảng 5.5 Khả sản sinh chất kích thích sinh trưởng IAA 47 Bảng 5.6 Khả đối kháng chủng lựa chọn 50 Bảng 5.7: Bảng đánh giá đa dạng sinh học dựa vào khả phân giải 51 tn to photphat khả sản sinh chất IAA Ảnh hưởng nồng độ IAA chủng nấm lên tỷ lệ nảy Ảnh hưởng chủng nấm lên khả sinh trưởng 56 p Bảng 5.9 55 mầm hạt rau cải sau ngày thí nghiệm ie gh Bảng 5.8 d oa nl w rau cải mầm điều kiện phịng thí nghiệm ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ vii an Lu n va ac th si DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Nấm rễ ngoại cộng sinh 11 Hình 2.2 Hình ảnh nấm rễ nội sinh 12 Hình 4.1 Phương trình biểu đồ đường chuẩn IAA 37 Hình 5.1 Mẫu đất rễ loại cỏ ngọt, đinh lăng, bạch 39 địa điểm khác Hình 5.2 Màu sắc khuẩn ty chủng nấm vùng rễ phân lập 42 lu an từ Cỏ Màu sắc khuẩn ty chủng nấm vùng rễ phân lập 43 từ đinh lăng n va Hình 5.3 to Hình 5.4 Màu sắc khuẩn ty chủng nấm vùng rễ phân lập 43 tn gh từ Bạch Khả phân giải photphat 10 chủng nấm 47 Hình 5.6 Khả sản sinh chất kích thích sinh trưởng IAA 48 p ie Hình 5.5 chủng ĐC, BC1, BC4, BC6, BC7, BC8 w Khả sản sinh chất kích thích sinh trưởng IAA 49 oa nl Hình 5.7 chủng ĐC, CN5, ĐL3, ĐL6, Đl1, CN7, BC1 d Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng CN7 52 Hình 5.9 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng ĐL1 52 Hinh 5.10 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng ĐL3 Hình 5.11 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng BC1 Hình 5.12 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng BC6 54 Hinh 5.13 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng BC7 54 Hình 5.14 Khả kích thích nảy mầm sinh trưởng rau va an lu Hình 5.8 53 u nf 53 ll oi m z at nh 57 cải mầm dung dịch chứa chủng nấm cộng sinh z ĐL3 m co l gm @ viii an Lu n va ac th si Bảng 4.6: Khả đối kháng chủng lựa chọn Chủng CN5 CN7 ĐL1 ĐL3 ĐL6 BC1 BC4 - CN5 BC6 BC7 BC8 an - + - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + - - - - - - - + - - CN7 - ĐL1 - - ĐL3 - - - ĐL6 - - - - BC1 + - - - - BC4 - - - - - - BC6 - - - - - - - - - - - + - - - BC8 - - - - - - + - n va - to lu - BC7 - gh tn - ie Ghi chú: + đối kháng; - không đối kháng p Từ bảng 4.6, ta kết luận có số cặp đối kháng CN5 với BC1; ĐL6 với BC7 BC4 với BC8 Căn vào hoạt tính enzyme có khả w oa nl phân giải photphat khó tan khả sinh tổng hợp IAA, cho thấy chủng CN5, ĐL6, BC4, BC8 chủng có hoạt tính đối kháng d lu với Do vậy, lựa chọn chủng CN7, ĐL1, ĐL3, BC1, BC6 an BC7 có khả phân giải photphat sản sinh chất kích thích sinh trưởng cao phẩm sau ll 4.4 Đánh giá đa dạng sinh học u nf va không đối kháng để làm sở cho phối trộn sản xuất chế m oi Dựa kết bảng 4.1 bảng 4.2, phân lập z at nh tổng cộng 27 chủng nấm từ mẫu vật thu thập từ vùng rễ loại : Cỏ ngọt, Đinh Lăng, Bạch Chỉ 06 địa điểm: Hưng Yên, Vĩnh Phúc, Nam Định, Lào Cai, Ninh Bình, Phú Thọ Chúng nhận thấy: z 50 m co l gm Lăng thu 11 chủng nấm, Bạch Chỉ : 09 chủng nấm @ - Phân bố theo nhóm thực vật: Cỏ phân lập 07 chủng nấm, Đinh an Lu n va ac th si - Phân bố theo khu vực : Cỏ có 04 chủng rễ 03 chủng đất, Đinh Lăng có 06 chủng đất 05 chủng đất, Bạch có 06 chủng rễ 03 chủng đất - Các chủng có màu sắc đa dạng, có 14 chủng màu trắng (52%), chủng màu đen (22%),3 chủng màu xám(11%) lại chủng màu xanh vàng (7.5%) Dựa kết đánh giá khả phân giải photphat chủng nấm, lu an khả sản sinh chất kích thích sinh trưởng IAA, khả đối kháng chủng lựa chọn từ bảng 4.4 bảng 4.5, 4.6 Chúng thu kết sau: n va Bảng 4.7: Bảng đánh giá đa dạng sinh học dựa vào khả phân giải gh tn to photphat khả sản sinh chất IAA Hoạt tính enzyme ie Ký hiệu Phosphatase (D-d, p TT chủng Khả phân Khả kích thích sinh giải photphat (Hàm lượng mm (Hàm lượng IAA, ppm CN7 341,9 49 ĐL1 11 1255,04 40 ĐL3 12 390,79 33,34 BC1 10 1498,46 52,35 BC6 14 79,1 51,3 BC7 11 ll u nf va an 12 lu d oa nl w P2O5, ppp trưởng m 67,83 oi 1243,24 z at nh z m co l gm @ 51 an Lu n va ac th si lu an n va gh tn to p ie Hình 4.8: Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng CN7 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh Hình 4.9: Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng ĐL1 z m co l gm @ 52 an Lu n va ac th si lu an n va gh tn to p ie Hinh 4.10: Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng ĐL3 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z 53 m co l gm @ Hình 4.11: Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng BC1 an Lu n va ac th si lu an n va p ie gh tn to Hình 4.12 : Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng BC6 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z Hình 4.13: Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng BC7 m co l gm @ 54 an Lu n va ac th si 4.5 Thử nghiệm đánh giá hiệu phân giải phophat sản sinh chất kích thích sinh trưởng IAA chủng phân lập sản xuất rau mầm 4.5.1 Ảnh hưởng nồng độ IAA đến nảy mầm rau cải mầm Tiến hành ngâm hạt rau cải mầm dung dịch nuôi cấy 3.3.5 thí nghiệm xử lý riêng rẽ chủng nấm cộng sinh vùng rễ với nồng độ IAA là: ppm; 10 ppm; 15 ppm; 20 ppm Thời gian ngâm hạt trước gieo công thức giờ Đối chứng ngâm nước lã lu an Kết khảo sát ảnh hưởng xử lý IAA cho hạt trước gieo sau ngày thí nghiệm trình bày Bảng 4.8 n va Bảng 4.8: Ảnh hưởng nồng độ IAA chủng nấm lên tỷ lệ nảy tn to mầm hạt rau cải sau ngày thí nghiệm Chủng VSV gh Tỉ lệ nảy mầm (%) ĐL1 ĐL3 BC1 BC6 BC7 82,5e 82,5d 82,5e 82,5e 82,5d 82,5d 95,8d 93,7c 96,6d 95,2d 93,5c 94,7c 10 98,6b 96,5b 98,8b 97,7b 96,8b 97,6b p ie CN7 Nồng độ (ppm) 100,0 a 98,2a 100,0a 99,5a 98,9a 99,6a d oa nl 20 w 15 97,6c 96,1b 97,5c 96,3c 96,2b 95,3c lu an Lưu ý: Trong cột số có chữ theo sau giống khơng khác u nf va biệt ý nghĩa thống kê mức 5% (p