Phân lập và tuyển chọn một số chủng xạ khuẩn có khả năng sinh tổng hợp enzyme ngoại bào và đối kháng vi sinh vật

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VIỆN CƠNG NGHỆ SINH HỌC & THỰC PHẨM BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG TÊN ĐỀ TÀI PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ENZYME NGOẠI BÀO VÀ ĐỐI KHÁNG VI SINH VẬT Mã số đề tài: 19.2TP04SV Chủ nhiệm đề tài: Đặng Bích Ngân Hứa Trường Chinh Đơn vị thực hiện: Viện Công nghệ Sinh học Thực Phẩm THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, 2020 LỜI CẢM ƠN Đề tài “Phân lập tuyển chọn số chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào đối kháng vi sinh vật” nội dung chúng em chọn để thực đề tài nghiên cứu cấp trường Để thực tốt đề tài nghiên cứu này, chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban giám hiệu, phịng Quản lí Khoa học Hợp tác Quốc tế trường Đại học Công nghiệp TP.HCM tạo môi trường học tập nghiên cứu thân thiện hỗ trợ mặt kinh phí chúng em phát huy khả nghiên cứu khoa học Chúng em xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm hỗ trợ, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi sở trang thiết bị cho chúng em trình thực đề tài nghiên cứu Chúng em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thị Diệu Hạnh Cảm ơn bảo, hướng dẫn em tận tình, cung cấp cho chúng em kiến thức sâu rộng suốt trình thực đề tài nghiên cứu Chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Phạm Tấn Việt, TS Nguyễn Ngọc Ẩn cho em lời khun, lời góp ý hữu ích, giúp cho chúng em tích lũy thêm nhiều kiến thức, có nhìn sâu sắc vấn đề nghiên cứu sống, giúp chúng em hoàn thành tốt nghiên cứu Chúng em xin gửi lời cảm ơn ba mẹ ln u thương, quan tâm chăm sóc tạo động lực tiếp bước cho đường học vấn Chúng em xin gửi lời cảm ơn đến anh chị, bạn bè tập thể Lab vi sinh ủng hộ, giúp đỡ chúng em suốt khoảng thời gian thực đề tài nghiên cứu Mặc dù cố gắng hoàn thành nghiên cứu phạm vi cho phép khả kinh nghiệm thân có hạn, nên nghiên cứu chắn không tránh khỏi tồn tại, hạn chế thiếu sót Chúng em mong nhận thơng cảm, góp ý tận tình bảo q thầy bạn PHẦN I THƠNG TIN CHUNG I Thơng tin tổng quát 1.1 Tên đề tài: Phân lập tuyển chọn số chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào đối kháng vi sinh vật 1.2 Mã số: 19.2TP04SV 1.3 Danh sách chủ trì, thành viên tham gia thực đề tài Họ tên TT (học hàm, học vị) TS Nguyễn Thị Diệu Hạnh Hứa Trường Chinh Đặng Bích Ngân Đơn vị công tác Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm ĐHSH12A, Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm ĐHSH12A, Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm 1.4 Đơn vị chủ trì: Viện Cơng nghệ Sinh học & Thực phẩm 1.5 Thời gian thực hiện: Vai trò thực đề tài Cố vấn khoa học Chủ nhiệm đề tài Chủ nhiệm đề tài 1.5.1 Theo hợp đồng: từ tháng 10 năm 2019 đến tháng năm 2020 1.5.2 Gia hạn (nếu có): tháng 1.5.3 Thực thực tế: từ tháng 10 năm 2019 đến tháng năm 2020 1.6 Những thay đổi so với thuyết minh ban đầu (nếu có): Khơng có 1.7 Tổng kinh phí phê duyệt đề tài: 05 triệu đồng (số tiền chữ: Năm triệu đồng) II Kết nghiên cứu Đặt vấn đề Xạ khuẩn nhóm vi khuẩn gram dương, hiếu khí, sống hoại sinh, thường có tỷ lệ GC DNA cao 55% Trong chu trình sống, chúng thường sinh trưởng dạng sợi khơng có vách ngăn Xạ khuẩn phân bố rộng rãi tự nhiên đất, nước chất hữu Chúng xem sinh vật trung gian nấm vi khuẩn vừa có đặc điểm giống nấm, vừa giống vi khuẩn Chúng có vai trị quan trọng chu trình tuần hồn vật chất tự nhiên, tạo độ phì nhiêu cho đất đảm nhận nhiều chức việc làm màu mỡ thêm cho đất, tham gia tích cực vào q trình chuyển hóa phân giải nhiều hợp chất hữu phức tạp cellulose, tinh bột, lignin,… chúng có khả sinh tổng hợp nhiều loại enzyme ngoại bào amylase, cellulase,… ứng dụng rộng rãi xử lí chất thải cơng nghiệp có chứa hàm lượng tinh bột hay cellulose cao [1], [2] Xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp nhiều sản phẩm trao đổi chất quan trọng, đặc biệt hợp chất kháng sinh Các chất kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn có phổ kháng rộng nên ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực đời sống nông nghiệp, công nghiệp thực phẩm, y tế, Trong trình trao đổi chất, xạ khuẩn có khả sinh hợp chất hữu vitamin nhóm B (B1, B2, B6), số acid hữu acid lactic, acid acetic nhiều acid amin glutamic, methionin,… Một số khác cịn có khả tạo thành chất kích thích sinh trưởng thực vật [3], [4] Hiện tượng kháng kháng sinh gia tăng loại bệnh mối quan tâm lớn cộng đồng Việc nghiên cứu lựa chọn tác nhân từ tự nhiên có khả đối kháng với mầm bệnh ưu tiên hàng đầu, xạ khuẩn vi sinh vật tiềm Xạ khuẩn loài sinh vật có tính đa dạng cao, có khả sinh tổng hợp nhiều loại enzyme ngoại bào hợp chất chuyển hóa thứ cấp đa dạng có khả đối kháng với nhiều mầm bệnh khác Hiện nay, việc sử dụng chất kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn ứng dụng rộng rãi việc kháng khuẩn, kháng nấm, kháng khối u, kháng virus [5], [6] Do đó, đề tài nghiên cứu “Phân lập tuyển chọn số chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào đối kháng vi sinh vật” thực với mục đích làm sở đáp ứng nhu cầu sống Mục tiêu nghiên cứu Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn có hoạt tính sinh học cao (khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào, kháng khuẩn, kháng mốc) Nội dung nghiên cứu - Phân lập chủng xạ khuẩn từ nguồn khác - Tuyển chọn chủng xạ khuẩn có hệ enzyme ngoại bào mạnh: amylase, cellulase, protease - Tuyển chọn chủng xạ khuẩn đối kháng với vi khuẩn nấm mốc gây bệnh Phương pháp nghiên cứu 4.1 Phương pháp lấy mẫu Chọn điểm thu mẫu đất: mẫu đất lấy khu vực khác (đất gị cao, khu vực có nhiều gỗ bị hoai mục, đất khu vực ẩm ướt, bờ ruộng, khu vực xung quanh chuồng gà, chuồng lợn,…) thuộc tỉnh Bến Tre Long An Cách lấy mẫu: dùng dao lấy khoảng 10-15g đất độ sâu 10-15 cm vị trí trên, cho vào túi nilon khử trùng, buộc kín, ghi ngày vị trí lấy mẫu Mẫu đất bảo quản 4°C, sau ngày tiến hành phân lập xạ khuẩn [7], [8] 4.2 Phân lập xạ khuẩn từ đất Các mẫu đất pha lỗng thập phân đến nồng độ thích hợp (10-2, 10-3 10-6) nước cất nước muối sinh lí vơ trùng Từ nồng độ pha lỗng, hút 100µl dịch mẫu pha loãng chuyển sang đĩa Petri chứa môi trường Gause I Dùng que trang trải ủ nhiệt độ phòng ngày Tiến hành nhận diện khuẩn lạc đặc trưng xạ khuẩn Từ khuẩn lạc nhận diện, tiến hành làm chúng cách cấy ria môi trường Gause I, đến nhận khuẩn lạc khiết Bảo quản giống °C giữ giống glycerol 40% -60°C để thực thí nghiệm [9], [10] 4.3 Quan sát đặc điểm hình thái xạ khuẩn Quan sát đại thể: Xạ khuẩn cấy ria mơi trường Gause I nhiệt độ phịng, quan sát đặc điểm đại thể sau ngày cấy: kích thước, hình dạng, đặc điểm bề mặt, rìa, màu sắc khuẩn lạc mặt trên, mặt dưới, sắc tố xạ khuẩn tiết môi trường nuôi cấy Quan sát vi thể: Xạ khuẩn nuôi cấy môi trường Gause I theo phương pháp tiêu phịng ẩm Sau 5-7 ngày ni nhiệt độ phịng, đặc điểm vi thể xạ khuẩn quan sát kính hiển vi quang học với độ phóng đại 1000 lần [11] 4.4 Khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào xạ khuẩn Nguyên tắc: nguồn chất cảm ứng có mơi trường ni cấy bị phân giải có enzyme thích hợp Sau đó, nhận biết khả phân hủy chất enzyme thuốc thử đặc trưng Xác định hoạt tính enzyme thơng qua kích thước vịng phân giải chất Khảo sát khả sinh tổng hợp amylase, cellulase ngoại bào: chủng xạ khuẩn cấy chấm điểm mơi trường Gause I có chứa nguồn chất cảm ứng tương ứng tinh bột CMC (carboxy methyl cellulose) Kiểm tra hoạt tính amylase, cellulase cách nhuộm thuốc thử Lugol đo kích thước vịng phân giải chất sau ngày ni ủ nhiệt độ phịng [12]–[14] Khảo sát khả sinh tổng hợp protease: chủng xạ khuẩn cấy chấm điểm mơi trường có bổ sung nguồn chất cảm ứng casein Kiểm tra hoạt tính protease bằng TCA (Trichlo acetic acid) 10% đo kích thước vịng phân giải chất sau ngày ni ủ nhiệt độ phịng [15] 4.5 Sàng lọc, tuyển chọn chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với vi khuẩn gây bệnh Các chủng xạ khuẩn vi khuẩn tăng sinh môi trường tương ứng Gause I broth LB broth Phương pháp khuếch tán đĩa thạch sử dụng để kiểm tra khả kháng khuẩn xạ khuẩn Dịch nuôi cấy vi khuẩn cấy trải vào đĩa Petri chứa môi trường LB agar tiến hành khoan giếng thạch Nhỏ 100µl dịch tăng sinh xạ khuẩn sau ngày ni cấy vào giếng thạch khoan Đem đĩa cấy ni ủ kiểm tra hoạt tính đối kháng xạ khuẩn với vi khuẩn thị sau 24h [16] 4.6 Sàng lọc, tuyển chọn chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với nấm mốc gây bệnh Từ ống thạch nghiêng, giống xạ khuẩn cấy chuyền sang ống nghiệm chứa 5ml môi trường Gause I broth nuôi lắc 150 rpm ngày nhiệt độ phịng Hoạt tính đối kháng với nấm mốc dịch nuôi xạ khuẩn xác định phương pháp khuếch tán đĩa thạch Trên môi trường PGA, cm2 thạch chứa tơ nấm cắt đặt vào phía đối diện lỗ thạch khoan Hút 100µl dịch ni cấy xạ khuẩn nhỏ vào lỗ thạch Để nhiệt độ phòng, sau đến ngày tiến hành kiểm tra kết dựa vào kích thước vịng đối kháng (D-d, mm) Trong D đường kính vịng đối kháng d đường kính lỗ thạch [9] Mức độ đối kháng xạ khuẩn với nấm mốc gây bệnh đánh giá dựa theo nghiên cứu Nguyễn Thới An (2014) mức độ kháng mạnh, kháng trung bình kháng yếu với kính thước vịng đối kháng là: ≥ 20 mm, ≥ 15 mm ≥ 10 mm [17] 4.7 Phương pháp xử lí số liệu Sử dụng phần mềm Excel để tổng hợp tính tốn số liệu từ kết thu nhận trình thực thí nghiệm Tổng kết kết nghiên cứu Đề tài “Phân lập tuyển chọn số chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào đối kháng vi sinh vật” số kết sau: + 40 chủng xạ khuẩn phân lập làm + 19/40 chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp amylase ngoại bào, chủng ghi nhận có hoạt tính cao + 21/40 chủng xạ khuẩn ghi nhận có khả sinh tổng hợp cellulase ngoại bào, chủng có hoạt tính cellulase ngoại bào mạnh + 20/40 chủng xạ khuẩn ghi nhận có khả sinh tổng hợp protease ngoại bào, chủng có hoạt tính protease ngoại bào mạnh + 5/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Bacillus subtilis, 12/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Bacillus cereus, 1/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Escherichia coli 4/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Staphylococcus aureus + 15/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Fusarium sp., 7/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Fusarium equiseti, 12/40 chủng có khả đối kháng với nấm Neoscytaidium dimidiatum, 9/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Aspergilus sp., 5/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Aspergilus fumigatus, 8/40 chủng xạ khuần có khả đối kháng với Colletotrichum sp có 9/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Penicillum chermesinum Đánh giá kết đạt kết luận Các chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào cao sở để ứng dụng sản xuất enzyme thương mại có nguồn gốc từ vi sinh vật, đáp ứng nhu cầu sử dụng enzyme Bên cạnh đó, chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với vi khuẩn nấm mốc gây bệnh có tiềm ứng dụng việc sản xuất hợp chất đối kháng có nguồn gốc từ tự nhiên, ứng dụng rộng rãi lĩnh vực đời sống Tóm tắt kết Tóm tắt: Xạ khuẩn thuộc nhóm vi sinh vật có khả sinh tổng hợp đa dạng loại enzyme ngoại bào hợp chất chuyển hóa thứ cấp có hoạt tính sinh học cao Từ mẫu đất thu nhận tỉnh Bến Tre Long An, 40 chủng xạ khuẩn phân lập làm Hơn 50% số có khả sinh tổng hợp loại enzyme ngoại bào: amylase, cellulase, protease chitinase Dịch nuôi cấy 17 chủng xạ khuẩn thể hoạt tính đối kháng với Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Escherichia coli Staphylococcus Trong đó, dịch ni cấy 22 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với chủng nấm mốc kiểm định: Fusarium oxysporum, Fusarium equiseti, Neoscytalidium dimidiatum, Aspergillus sp., Aspergillus fumigatus, Colletotrichum siamence Penicillium chermesinum Nghiên cứu cho thấy tiềm ứng dụng hợp chất chuyển hóa từ xạ khuẩn sản xuất công nghiệp, đối kháng với vi khuẩn gây bệnh quản lý nấm bệnh trồng, góp phần bảo vệ mơi trường sức khỏe người Abstract: Actinomycetes belong to a group of microorganisms that can be producing a variety of extracellular enzymes, and secondary metabolic compounds with high biological activity From soil samples collected in two provinces of Ben Tre and Long An, forty strains actinomycetes were isolated More than 50% of them are capable of biosynthesizing of extracellular enzymes: amylase, cellulase, protease, and chitinase The crude extract of 17 strains actinomycetes showed antagonistic activity against Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Escherichia coli, and Staphylococcus Meanwhile, the crude extract of 22 strains actinomycetes was able to resistant to tested microfungi strains: Fusarium oxysporum, Fusarium equiseti, Neoscytalidium dimidiatum, Aspergillus sp., Aspergillus fumigatus, Colletotrichum siamence, and Penicillium chermesinum This study showed the potential for the application of antibacterial metabolites in industrial production, in antagonism with pathogenic bacteria, and managing fungi caused disease in plants, contributing to environmental protection and health people Sản phẩm đề tài, công bố kết đào tạo Yêu cầu khoa học hoặc/và tiêu kinh tế - kỹ thuật Tên sản phẩm TT Đăng ký + Phân lập 20 chủng xạ khuẩn + Đã phân lập làm đươc 20 chủng xạ khuẩn đăng kí + Thu chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào cao Đạt + Đã sàng lọc, tuyển chọn đươc chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp ezyme ngoại bào cao Giống xạ khuẩn + Thu chủng xạ khuẩn có khả kháng khuẩn + Đã sàng lọc, tuyển chọn chủng xạ khuẩn kháng khuẩn mạnh + Thu chủng xạ khuẩn có khả kháng mốc + Đã sàng lọc, tuyển chọn chủng xạ khuẩn kháng mốc mạnh Tình hình sử dụng kinh phí T Nội dung chi T A Chi phí trực tiếp Thuê khốn chun mơn Ngun liệu + Tinh bột + Khoai tây + Agar + KNO3 + MgSO4.7H2O + FeSO4.7H2O + NaCl + Casein + CMC (Carboxymethyl cellulose) + TCA (Triclo acetic acid) + Cồn + Yeast extract + Meat extract + Peptone + Glucose Thiết bị, dụng cụ + Ống nghiệm + Đĩa Petri + Bơng gịn khơng thấm / thấm + Curvet nhựa + Đầu típ xanh 1ml + Đầu típ vàng 0,1ml + Chai thủy tinh Cơng tác phí Dịch vụ th ngồi Hội nghị, hội thảo,thù lao nghiệm thu Kinh phí Kinh phí duyệt thực (triệu đồng) (triệu đồng) 2,51 2,51 2,15 2,15 Ghi CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Từ mẫu đất lấy từ tỉnh Bến Tre Long An, 40 chủng xạ khuẩn phân lập 40 chủng xạ khuẩn khảo sát khả sinh tổng hợp amylase, cellulase, protease ngoại bào khả đối kháng với vi khuẩn nấm mốc gây bệnh chúng Kết cho thấy rằng: + 19/40 chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp amylase ngoại bào, chủng cho hoạt tính amylase cao CNXK 40, CNXK 72, CNXK 65.2, CNXK 99 CNXK 91.2 với đường kính vịng phân giải tinh bột 26; 23; 18; 12 11 mm + 21/40 chủng xạ khuẩn ghi nhận có khả sinh tổng hợp cellulase ngoại bào, chủng có hoạt tính cellulase ngoại bào cao là CNXK 99, CNXK 52, CNXK 72, CNXK 55 CNXK 75 với đường kính vòng phân giải CMC 22; 18; 18; 15 14 mm + 20/40 chủng xạ khuẩn ghi nhận có khả sinh tổng hợp protease ngoại bào, chủng có hoạt tính protease ngoại bào cao CNXK 72, CNXK 83, CNXK 55 , CNXK 65.2 CNXK 116 với đường kính vịng phân giải casein 22; 22; 19; 17 16 mm + 5/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với B.subtilis, 12/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với B.cereus, 1/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với E.coli 4/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với S.aureus +15/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Fusarium sp., 7/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Fusarium equiseti, 12/40 chủng có khả đối kháng với nấm Neoscytaidium dimidiatum, 9/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Aspergilus sp., 5/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Aspergilus fumigatus, 8/40 chủng xạ khuần có khả đối kháng với Colletotrichum sp có 9/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với Penicillum chermesinum 4.2 Kiến nghị Cần có nghiên cứu để xác định loại môi trường lên men, điều kiện môi trường nuôi cấy: nguồn C, N; nhiệt độ, pH,…thích hợp cho chủng xạ khuẩn CNXK 56 sinh tổng hợp nhiều enzyme ngoại bào có hoạt tính sinh học cao, sinh tổng hợp nhiều hợp chất kháng khuẩn nấm mốc gây bệnh Đánh giá tác động dịch nuôi cấy xạ khuẩn lên nảy nầm hệ sợi tơ nấm mốc, khảo sát nồng độ dịch nuôi cấy tối thiểu để ức chế nảy mầm bào từ tác động đến trương phình hệ sợi tơ nấm mốc Tinh loại enzyme ngoại bào có hoạt tính cao từ chủng xạ khuẩn CNXK Xác định mốc nhiệt độ pH phản ứng cho enzyme amylase, cellulase, protease có hoạt tính mạnh Đồng thời đánh giá khả bền nhiệt, bền pH, tác động ion kim loại lên hoạt tính loại enzyme Đánh giá khả bền nhiệt, bền pH tác động proteinase K lên hoạt tính đối kháng dịch ni cấy chủng xạ khuẩn CNXK vi khuẩn nấm mốc gây bệnh Tách chiết xác định hợp chất có khả kháng khuẩn kháng mốc 57 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Hình ảnh số chủng xạ khuẩn phân lập 58 Phụ lục 2: Hình ảnh vi thể số chủng xạ khuẩn phân lập 59 Phụ lục 3: Khả sinh tổng hợp amylase ngoại bào số chủng xạ khuẩn sau ngày nuôi cấy môi trường Gause I Phụ lục 4: Khả sinh tổng hợp cellulase ngoại bào số chủng xạ khuẩn sau ngày nuôi cấy môi trường Gause - CMC Phụ lục 5: Khả kháng khuẩn dịch nuôi cấy xạ khuẩn (C: Bacillus cereus) 60 Phụ lục 6: Khả kháng nấm mốc dịch nuôi cấy xạ khuẩn (A: Fusarium sp.; C: Colletrotrichum sp.; D: Aspergillus sp.; F: Penicillium Chermesinum; G: Neoscytalidium dimidiatum) 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Nguyễn Lân Dũng, Phạm Văn Ty, Dương Văn Hợp, Nguyễn Liên Hoa, Đinh Thúy Hằng, Đào Thị Lương, Nguyễn Thị Hoài Hà, Lê Hoàng Yến, Nguyễn Kim Nữ Thảo, Nguyễn Văn Bắc, Hoàng Văn Minh, "Vi sinh vật học" Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, 2012 [2] Hoàng Hải, Dư Ngọc Thành., “Vi sinh vật đại cương” Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội, 2008 [3] M Sharma, P Dangi, and M Choudhary, “Actinomycetes: Source, Identification, and Their Applications” International Journal of current Microiology and Ápplied Sciences, 2014, vol 3, no 3, pp 801-832 [4] B Prapagdee, C Kuekulvong, and S Mongkolsuk, “Antifungal potential of extracellular metabolites produced by Streptomyces hygroscopicus against phytopathogenic fungi” International Journal of Biological Sciences, vol 4, no 5, pp 330–337, 2008, doi: 10.7150/ijbs.4.330 [5] Z Zheng, Z Zheng, Wei Zeng, Y Huang, Z Yang, J Li, H Cai, W Su, “Detection of antitumor and antimicrobial activities in marine organism associated actinomycetes isolated from the Taiwan Strait, China” FEMS Microbiol Letters, vol 188, no 1, pp 87–91, 2000, doi: 10.1016/S0378-1097(00)00215-9 [6] Y Ouhdouch, M Barakate, and C Finance, “Actinomycetes of Moroccan habitats: Isolation and screening for antifungal activities” Euprope Journal of Soil Biology, vol 37, pp 69– 74, 2001 [7] M Oskay, A Ü Tamer, and C Azeri, “Antibacterial activity of some actinomycetes isolated from farming soils of Turkey” African Juournal Biotechnology, vol 3, no 9, pp 441–446, 2004, doi: 10.5897/ajb2004.000-2087 [8] Khưu Phương Yến Anh, “Nghiên cứu xạ khuẩn có khả đối kháng nấm gây bệnh đạo ôn lúa phân lập từ đất huyện thoại sơn , tỉnh an giang,” 2015 [9] Nguyễn Thị Phong Lan, Võ Thị Thu Ngân, Trần Phước Lộc, Trần Hà Anh, “Tuyển chọn chủng xạ khuẩn (Streptomyces spp.) đối kháng nấm Pyricularia grisea gây bệnh đạo ơn hại lúa” Tạp chí Khoa học Phát triển, vol 13, no 8, pp 1442–1451, 2015 [10] L D Sette, V M De Oliveira, and G P Manfio, “Isolation and characterization of alachlordegrading actinomycetes from soil” Antonie van Leeuwenhok, vol 87, no 2, pp 81–89, 2005, doi: 10.1007/s10482-004-1129-2 62 [11] N M Zin, C S Loi, N M Sarmin, and A N Rosli, “Cultivation-dependent characterization of endophytic actinomycetes” Research Journal of Microbiol., vol 5, no 8, pp 717–724, 2010, doi: 10.3923/jm.2010.717.724 [12] F Kafilzadeh and F Dehdari, “Amylase activity of aquatic actinomycetes isolated from the sediments of mangrove forests in south of Iran” Egyptian Journal Aquatic Research, vol 41, no 2, pp 197–201, 2015, doi: 10.1016/j.ejar.2015.04.003 [13] F N M Da Vinha, M P Gravina-Oliveira, M N Franco, A Macrae, E P Silva Bon, R P Nascimento, R R R Coelho, “Cellulase production by Streptomyces viridobrunneus SCPE-09 using lignocellulosic biomass as inducer substrate” Appl Biochem Biotechnol., vol 164, no 3, pp 256–267, 2011, doi: 10.1007/s12010-010-9132-8 [14] K A El-Tarabily, M H Solimana, A H Nassara, H A Al-Hassania, K Sivasithamparamc, F McKennad and G E St J Hardyb, “Biological control of Sclerotinia minor using a chitinolytic bacterium and actinomycetes” Plant Pathol., vol 49, no 5, pp 573–583, 2000, doi: 10.1046/j.1365-3059.2000.00494.x [15] V J Mehta, J T Thumar, and S P Singh, “Production of alkaline protease from an alkaliphilic actinomycete” Bioresources Technololy., vol 97, no 14, pp 1650–1654, 2006, doi: 10.1016/j.biortech.2005.07.023 [16] A Pandey, I Ali, K S Butola, T Chatterji, and V Singh, “Isolation and characterization of actinomycetes from soil and evaluation of antibacterial activities of actinomycetes against pathogens” International Journal of Applied Biology and Pharmaceutical Technolog, vol 2, no 4, pp 384–392, 2011 [17] Trịnh Thới An, “Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn có khả sinh chất kháng nấm Pythium sp.”, Tạp chí Khoa học Đại học Sư phạm TP.HCM, no 1992, pp 113–121, 2014 18] B G E T Jayashantha, “Actinobacteria” University Kelaniya-Sri Lanka, pp 1–16, 2015 [19] S T Williams and E M H Wellington, “Actinomyces” University Liverpool, Liverpool, England, vol 9, no 9, 1982, doi: 10.2134/agronmonogr9.2.2ed.c45 [20] Q Li, X Chen, Y Jiang, and C Jiang, “Morphological Identification of Actinobacteria” Actinobacteria-Basics Biotechnological Applications, no i, 2016, doi: 10.5772/61461 [21] C Mendez, A F Brana, M B Manzanal, and C Hardisson, “Role of substrate mycelium in colony development in Streptomyces” Canadian Journal Microbiology, vol 31, no 5, pp 446–450, 1985, doi: 10.1139/m85-083 63 [22] S Wood, “A method for the examination of the substrate mycelium of actinomycetes by scanning electron microscopy” Journal of Genery Microbiology, vol 131, no 9, pp 2493– 2495, 1985, doi: 10.1099/00221287-131-9-2493 [23] J Willey, J Schwedock, and R Losick, “Multiple extracellular signals govern the production of a morphogenetic protein involved in aerial mycelium formation by Streptomyces coelicolor” Genes Developments, vol 7, no 5, pp 895–903, 1993, doi: 10.1101/gad.7.5.895 [24] J C Ensign, “Formation, properties, and germination of actinomycete spores” Annu Rev Microbiol., vol 32, no 149, pp 185–219, 1978, doi: 10.1146/annurev.mi.32.100178.001153 [25] A Dietz and J Mathews, “Classification of Streptomyces spore surfaces into five groups” Applications Microbiology, vol 21, no 3, pp 527–533, 1971, doi: 10.1128/aem.21.3.527533.1971 [26] W J Li, P Xu, S K Tang, L H Xu, R M Kroppenstedt, E Stackebrandt and C L Jiang, “Prauserella halophilia sp nov and Prauserella alba sp nov., moderately halophilic actinomycetes from saline oil,” International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, vol 53, no 5, pp 1545–1549, 2003, doi: 10.1099/ijs.0.02611-0 [27] S A Waksman and R E Curtis, “Ecology of Actinomycetes” Soil Sciences, vol 37, no 1, pp 189–216, 1983, doi: 10.1146/annurev.mi.37.100183.001201 [28] H S Chaudhary, B Soni, A R Shrivastava, and S Shrivastava, “Diversity and versatility of actinomycetes and its role in antibiotic production” Journal Applied Pharmaceutical Science, vol 3, no 8, 2013, doi: 10.7324/JAPS.2013.38.S14 [29] D Peschen, H P Li, R Fischer, F Kreuzaler, and Y C Liao, “Fusion proteins comprising a Fusarium-specific antibody linked to antifungal peptides protect plants against a fungal pathogen,” Nature Biotechnology, vol 22, no 6, pp 732–738, 2004, doi: 10.1038/nbt970 [30] S H Son, Z Khan, S G Kim, and Y H Kim, “Plant growth-promoting rhizobacteria, Paenibacillus polymyxa and Paenibacillus lentimorbus suppress disease complex caused by root-knot nematode and Fusarium wilt fungus” Journal of Applied Microbiology, vol 107, no 2, pp 524–532, 2009, doi: 10.1111/j.1365-2672.2009.04238.x [31] Mobolaji Felicia Adegboye, “Taxonomy and ecology of antibiotic producing actinomycetes” African Journal of Agricultural Reseearch, vol 7, no 15, pp 2255–2261, 64 2012, doi: 10.5897/ajarx11.071 [32] E Busti, P Monciardini, L Cavaletti, R Bamonte, A Lazzarini, M Sosio and S Donadio, “Antibiotic-producing ability by representatives of a newly discovered lineage of actinomycetes” Microbiology, vol 152, no 3, pp 675–683, 2006, doi: 10.1099/mic.0.28335-0 [33] A Lazzarini, L Cavaletti, G Toppo, and F Marinelli, “Rare genera of actinomycetes as potential producers of new antibiotics” Antonie van Leeuwenhoek, vol 78, no 3–4, pp 399–405, 2000, doi: 10.1023/A:1010287600557 [34] K Rachedi, F Zermanea, R Tird, F Ayachef, R Durane, B Laugae, S Karamae, M Simone, A Boulahrouf, “Effect of sulfonylurea tribenuron methyl herbicide on soil Actinobacteria growth and characterization of resistant strains” Brazilian Journal of Microbiology, vol 49, no 1, pp 79–86, 2018, doi: 10.1016/j.bjm.2017.05.004 [35] A De Schrijver and R De Mot, “Degradation of pesticides by actinomycetes,” Critical Reviews in Microbiology., vol 25, no 2, pp 85–119, 1999, doi: 10.1080/10408419991299194 [36] N A Al-Dhabi, G A Esmail, A K M Ghilan, and M V Arasu, “Isolation and screening of Streptomyces sp Al-Dhabi-49 from the environment of Saudi Arabia with concomitant production of lipase and protease in submerged fermentation,” Saudi Journal of Biology Sciences, vol 27, no 1, pp 474–479, 2020, doi: 10.1016/j.sjbs.2019.11.011 [37] Shu-Mei Zhang, “Isolation and characterization of antifungal lipopeptides produced by endophytic Bacillus amyloliquefaciens TF28” African Journal Microbiolog Research, vol 6, no 8, pp 1747–1755, 2012, doi: 10.5897/ajmr11.1025 [38] T L M Stamford, N P Stamford, L C B B Coelho, and J M AraĂjo, “Production and characterization of a thermostable α-amylase from Nocardiopsis sp endophyte of yam bean,” Bioresource Technology, vol 76, no 2, pp 137–141, 2001, doi: 10.1016/S09608524(00)00089-4 [39] D S Ningthoujam, P Kshetri, S Sanasam, and S Nimaichand,“Screening, Identification of Best Producers and Optimization of Extracellular Proteases from Moderately Halophilic Alkalithermotolerant Indigenous Actinomycetes” World Applied of Sciences Journal, vol 7, no 7, pp 907–916, 2009 [40] J J Song and K Soytong, “Research and development on bio-products for Crop Production 65 in China: A short communication,” International Journal of Agricultural Technology, vol 14, no 1, pp 131–141, 2018 [41] J L You, L X Cao, G F Liu, S N Zhou, H M Tan, and Y C Lin, “Isolation and characterization of actinomycetes antagonistic to pathogenic Vibrio spp from nearshore marine sediments,” World Journal of Microbiology and Biotechnology, vol 21, no 5, pp 679–682, 2005, doi: 10.1007/s11274-004-3851-3 [42] L T H Tan, K G Chan, L H Lee, and B H Goh, “Streptomyces bacteria as potential probiotics in aquaculture” Fronties Microbiology., vol 7, no FEB, pp 1–8, 2016, doi: 10.3389/fmicb.2016.00079 [43] R E de Lima Procópio, I R da Silva, M K Martins, J L de Azevedo, and J M de Araújo, “Antibiotics produced by Streptomyces” Brazilian Journal of Infectious Diseases, vol 16, no 5, pp 466–471, 2012, doi: 10.1016/j.bjid.2012.08.014 [44] G L Cai, C L Wei, Y Q Ji, M W Hui, T Liu, and W L De, “Identification of an antifungal metabolite produced by a potential biocontrol Actinomyces strain A01" Brazilian Journal of Microbiology, vol 39, no 4, pp 701–707, 2008, doi: 10.1590/S151783822008000400020 [45] L Lo Grasso, D Chillura-Martino, and R Alduina, “Production of Antibacterial Compounds from Actinomycetes,” Actinobacteria - Basics Biotechnological Applications, 2016, doi: 10.5772/61525 [46] F Van Bambeke, “Glycopeptides in clinical development: Pharmacological profile and clinical perspectives” Current Opinion Pharmacology, vol 4, no 5, pp 471–478, 2004, doi: 10.1016/j.coph.2004.04.006 [47] E A Campbell, N Korzheva, A Mustaev, K Murakami, S Nair, A Goldfarb, and S A Darst, “Structural mechanism for rifampicin inhibition of bacterial RNA polymerase” Cell, vol 104, no 6, pp 901–912, 2001, doi: 10.1016/S0092-8674(01)00286-0 [48] T J Walsh, H C Standiford, A C Reboli, J F John, M E Mulligan, B S Ribner, J Z Montgomerie, M B Goetz, C G Mayhall, D Rimland, D A Stevens, S L Hansen, G C Gerard, and R J Ragual, “Randomized double-blinded trial of rifampin with either novobiocin or trimethoprim-sulfamethoxazole against methicillin-resistant Staphylococcus aureus colonization: Prevention of antimicrobial resistance and effect of host factors on outcome”, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, vol 37, no 6, pp 1334–1342, 1993, 66 doi: 10.1128/AAC.37.6.1334 [49] P P Singh, Y C Shin, C S Park, and Y R Chung, “Biological control of Fusarium wilt of cucumber by chitinolytic bacteria” Phytopathology, vol 89, no 1, pp 92–99, 1999, doi: 10.1094/PHYTO.1999.89.1.92 [50] F Fukamizo, “Chitinolytic Enzymes: Catalysis, Substrate Binding, and their Application” Current Protein and Peptide Science, vol 1, no 1, pp 105–124, 2005, doi: 10.2174/1389203003381450 [51] A Sadeghi, A R Hessan, H Askari, S Aghighi, and G H Shahidi Bonjar, “Biological control potential of two Streptomyces isolates on Rhizoctonia solani, the causal agent of damping-off of sugar beet” Pakistan Journal Biology Science, vol 9, no 5, pp 904–910, 2006, doi: 10.3923/pjbs.2006.904.910 [52] I M S M E W Tahtamouni, K M Hameed, “Biological control of Sclerotinia sclertiorum using indigenous chitinolytic Actinomycetes in Jordan” The Plant Pathology Journal, pp 107–114, 2006 [53] C H Yang and W H Liu, “Purification and properties of a maltotriose-producing αamylase from Thermobifida fusca,” Enzyme Microbial Technology, vol 35, no 2–3, pp 254–260, 2004, doi: 10.1016/j.enzmictec.2004.05.004 [54] Lê Thu Hiền, Hà Minh Thanh, Vũ Phương Bình, Trần Ngọc Kháng, “Nghiên cứu vi khuẩn, xạ khuẩn đối kháng với nấm Fusarium oxysporum gây bệnh héo vàng cà chua, dưa chuột,” pp 1009–1017 [55] A Schatz, E Bugie, and S A Waksman, “Streptomycin, a substance exhibiting antibiotic activity against gram-positive and gram-negative bacteria” Clinical Orthopaedics and Related Research, no 437, pp 3–6, 2005, doi: 10.1097/01.blo.0000175887.98112.fe [56] H T Dulmage, “The production of neomycin by Streptomyces fradiae in synthetic media.,” Applied Microbiology., vol 1, no 2, pp 103–106, 1953, doi: 10.1128/aem.1.2.103106.1953 [57] R Gonzalez, L Islas, A M Obregon, L Escalante, and S Sanchez, “Gentamicin Formation in Micromonospora purpurea: Stimulatory Effect of Ammonium” Journal of Antibiotics, vol 48, no 6, pp 479–483, 1995, doi: 10.7164/antibiotics.48.479 [58] C R Wang, Y G., Davies, J E., Hut Chinson, “Plasmid DNA in the erythromycin producing microorganism Streptomyces erythreus NBRC 2338,” Journal of Antibiotic, vol 67 53, no 9, pp 1689–1699, 2019, doi: 10.1017/CBO9781107415324.004 [59] J I Mitchell, P G Logan, K E Cushing, and D A Ritchie, “Novobiocin‐resistance sequences from the novobiocin‐producing strain Streptomyces niveus” Molecular Microbiology, vol 4, no 5, pp 845–849, 1990, doi: 10.1111/j.1365-2958.1990.tb00655.x [60] Trần Thị Hồng, Nguyễn Thị Kim Cúc, Phậm Thị Thúy Hoài, Phạm Việt Hoàng “Phân lập vi sinh vật đối kháng số nguồn bệnh nấm thực vật đánh giá hoạt tính chúng in vitro in vivo" Tạp chí Khoa học Cơng Nghệ, vol 52, no 4, p 419, 2014, doi: 10.15625/0866-708X/52/4/3238 [61] Nguyễn Thanh Sơn, Lê Thị Thúy Ái, “Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học vườn Quốc gia Nam Cát Tiên khu sinh thái Cam Ranh,” vol 4, pp 1210–1216, 2009 [62] Nguyễn Thị Hồng, Nguyễn Ngọc Phương, “Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn từ rừng ngập mặn Cần Giờ kháng nấm Fusarium sp.” Tạp chí khoa học DHSP TPHCM, pp 59– 71, 2013 [63] Chu Đức Hà, Nguyễn Văn Giang, Nguyễn Thị Thu, “Nghiên cứu đặc điểm sinh học chủng xạ khuẩn VS18 đối kháng với nấm Corynaspora cassiicola” Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, vol 6, no 79 pp 64–67, 2017 [64] D Liu, R Yan, Y Fu, X Wang, J Zhang, and W Xiang, “Antifungal, Plant GrowthPromoting, and Genomic Properties of an Endophytic Actinobacterium Streptomyces sp NEAU-S7GS2,” Frontiers Microbiology, vol 10, no September, pp 1–16, 2019, doi: 10.3389/fmicb.2019.02077 [65] L Hankin, R P Poincelot, and S L Anagnostakis, “Microorganisms from Composting Leaves: Ability to Produce Extracellular Degradative Enzymes” vol 2, no 1976, pp 296– 308 [66] R Jog, G Nareshkumar, and S Rajkumar, “Plant growth promoting potential and soil enzyme production of the most abundant Streptomyces spp from wheat rhizosphere” Journal Applied Microbiology., vol 113, no 5, pp 1154–1164, 2012, doi: 10.1111/j.13652672.2012.05417.x.2010 [67] P M de Souza and P de O e Magalhães, “Application of microbial α-amylase in industrya review” Brazilian Journal Microbiology, vol 41, no 4, pp 850–861, 2010, doi: 10.1590/s1517-83822010000400004 68 [68] Lê Thị Hiền, Đinh Văn Lợi, Vũ Thị Vân, Nguyễn Văn Giang, “Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn Streptomyces đối kháng nấm bệnh cây” Tạp chí Khoa học Phát triển, vol 12, no 5, pp 656–664, 2014.actinomycetes strains for the production of antifungal metabolites,” African Journal [69] A L Grigorevski De Lima, R Pires Do Nascimento, E P Da Silva Bon, and R R R Coelho, “Streptomyces drozdowiczii cellulase production using agro-industrial by-products and its potential use in the detergent and textile industries,” Enzyme Microbial Technology, vol 37, no 2, pp 272–277, 2005, doi: 10.1016/j.enzmictec.2005.03.016 [70] Trần Hoàng Dũng, Huỳnh Văn Hiếu, Trần Duy Dương, Nguyễn Thành Công, “Phân lập chủng vi sinh vật có khả phân giải cellulose mạnh phục vụ sản xuất chế phẩm phân hủy rơm rạ” Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, vol 60, no 6, pp 32–36, 2018 [71] N A El-Sersy, H Abd-Elnaby, G M Abou-Elela, H A H Ibrahim, and N M K ElToukhy, “Optimization, economization and characterization of cellulase produced by marine Streptomyces ruber” African Journal of Biotechnology, vol 9, no 38, pp 6355– 6364, 2010, doi: 10.5897/AJB10.677 [72] V N Jeyadharshan, “Production and Partial Purification of Protease by Actinomyces Species,” International Journal of Sciences Research Publicatuions, vol 3, no 1, pp 2250– 3153, 2013 [73] A A Al-Askar, Y M Rashad, E E Hafez, W M Abdulkhair, Z A Baka, and K M Ghoneem, “Characterization of alkaline protease produced by Streptomyces griseorubens E44G and its possibility for controlling Rhizoctonia root rot disease of corn” Biotechnology and Biotechnological Equipment, vol 29, no 3, pp 457–462, 2015, doi: 10.1080/13102818.2015.1015446 [74] S Ramesh, M Rajesh, and N Mathivanan, “Characterization of a thermostable alkaline protease produced by marine Streptomyces fungicidicus MML1614” Bioprocess and Biosystems Engineering, vol 32, no 6, pp 791–800, 2009, doi: 10.1007/s00449-009-03051 [75] J Solecka, J Zajko, M Postek, and A Rajnisz, “Biologically active secondary metabolites from Actinomycetes” Central European Journal of Biology, vol 7, no 3, pp 373–390, 2012, doi: 10.2478/s11535-012-0036-1 [76] M Arifuzzaman, M R Khatun, and H Rahman, “Isolation and screening of actinomycetes 69 from Sundarbans soil for antibacterial activity,” African Journal of Biotechnology, vol 9, no 29, pp 4615–4619, 2010, doi: 10.5897/AJB10.339 [77] N Kumar, R K Singh, M SK, S AK, and P UC, “Isolation and screening of soil Actinomycetes as source of antibiotics active against bacteria,” International Journal of Microbiology Research, vol 2, no 2, pp 12–16, 2010, doi: 10.9735/0975-5276.2.2.12-16 [78] K Kathiresan, R Balagurunathan, and M M Selvam, “Fungicidal activity of marine actinomycetes against phytopathogenic fungi” Indian Journal of Biotechnology, vol 4, pp 271–276, 2005 [79] H Sharma and L Parihar, “Antifungal activity of extracts obtained from actinomycetes” Journal of Yeast and Fungal Research, vol 1, no 10, pp 197–200, [80] A Kavitha, M Vijayalakshmi, P Sudhakar, and G Narasimha, “Screening of actinomycetes strains for the production of antifungal metabolites” African Journal Microbiol Research, vol 4, no 1, pp 027–032, 2010 70 ... 20 chủng xạ khuẩn đăng kí + Thu chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào cao Đạt + Đã sàng lọc, tuyển chọn đươc chủng xạ khuẩn có khả sinh tổng hợp ezyme ngoại bào cao Giống xạ khuẩn. .. 5: 5/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với B.subtilis, 12/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với B.cereus, 1/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với E.coli 4/40 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng. .. Phân lập xạ khuẩn 39 3.2 Khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme ngoại bào xạ khuẩn 41 3.2.1 Khả sinh tổng hợp amylase ngoại bào xạ khuẩn 42 3.2.2 Khả sinh tổng hợp cellulase ngoại