TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG PHÂN HỦY CELLULOSE ĐỂ ỨNG DỤNG XỬ LÝ VỎ CA CAO

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG PHÂN HỦY CELLULOSE ĐỂ ỨNG DỤNG XỬ LÝ VỎ CA CAO Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực hiện: PHẠM TRẦN VŨ THƢ Niên khóa: 2008 – 2012 Tháng 07/2012 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG PHÂN HỦY CELLULOSE ĐỂ ỨNG DỤNG XỬ LÝ VỎ CA CAO Hƣớng dẫn khoa học Sinh viên thực KS TRẦN THỊ QUỲNH DIỆP PHẠM TRẦN VŨ THƢ ThS VÕ THỊ THÚY HUỆ Tháng 07/2012 ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin gởi lời cảm ơn chân thành đến: Ban giám hiệu Trƣờng Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh, Ban Chủ nhiệm Bộ môn Công nghệ Sinh học tất Quý Thầy Cơ tận tình giảng dạy truyền đạt kiến thức cho thời gian học tập trƣờng Thầy Lê Đình Đơn ln lắng nghe, động viên chia sẻ tạo điều kiện cho suốt q trình thực khóa luận tốt nghiệp Viện Nghiên cứu Công nghệ sinh học Môi trƣờng Cô Trần Thị Quỳnh Diệp, Cô Võ Thị Thúy Huệ, Thầy Nguyễn Minh Quang, dạy, chia sẻ, hỗ trợ cho tơi, giúp tơi vƣợt qua khó khăn thực đề tài Chị Nguyễn Trƣờng Ngọc Tú, chị Trƣơng Thị Ngọc Hân thành viên làm việc Trại Thực Nghiệm Viện Nghiên cứu Công nghệ sinh học Môi trƣờng Trƣờng Đại học Nông Lâm hƣớng dẫn giúp đỡ nhiều Bạn Nguyễn Xuân Tuấn, Nguyễn Thị Hồng Trâm, Mai Thị Hồng Diễm, Từ Thị Anh, Võ Đức Tuấn, Đỗ Tô Hoa Mai, Nguyễn Công Phát, Quách Văn Thiệu tất bạn lớp DH08SH đồng hành thực đề tài, học tập nhƣ sống Cuối xin gởi lời cám ơn chân thành đến bố mẹ, ngƣời sinh nuôi dạy lớn lên, nâng dậy vấp ngã ln bên để có đƣợc ngày hơm Tp Hồ Chí Minh, 14/7/2012 PHẠM TRẦN VŨ THƢ i TĨM TẮT Đến năm 2015, diện tích ca cao nƣớc đạt 53.580 ha, dẫn tới lƣợng lớn vỏ ca cao thải môi trƣờng mà chƣa có qui trình xử lý thích hợp Việc tận dụng vỏ ca cao nhƣ nguồn nguyên liệu để chế biến thành phân hữu sinh học, thức ăn cho vật nuôi sản xuất ethanol sinh học góp phần nâng cao hiệu kinh tế giảm nhiễm mơi trƣờng Tuy nhiên, có vấn đề lớn hàm lƣợng cellulose vỏ ca cao cao, đòi hỏi phải có khâu xử lý ban đầu hiệu Vì vậy, nhóm nghiên cứu thực đề tài phân lập tuyển chọn số chủng xạ khuẩn có khả phân hủy cellulose để ứng dụng xử lý vỏ ca cao Đề tài tiến hành phân lập chủng xạ khuẩn từ mẫu khác nhƣ đất, mục, phân ủ, vỏ trấu, cà phê mục thu thập địa phƣơng Tiến hành định tính, định lƣợng khả sinh hệ enzyme cellulase chủng Dựa vào kết chọn số chủng mạnh để tiếp tục khảo sát ảnh hƣởng điều kiện nuôi cấy đến khả tăng sinh sinh tổng hợp enzyme cellulase Từ tiến hành tăng sinh khối để thử nghiệm xử lý vỏ ca cao quy mô nhỏ Kết phân lập đƣợc 25 chủng xạ khuẩn có khả phân giải cellulose sinh hệ enzyme cellulase mạnh Trong chủng 14IV 23XIV chủng có khả tăng sinh khối mạnh lần lƣợt 9,9 x 1010 CFU/ml, 8,3 x 1010 CFU/ml điều kiện nuôi cấy tối ƣu môi trƣờng YS, pH 6, thời gian 108 lắc tốc độ 150 vòng/phút nhiệt độ phòng Tiếp tục tăng sinh khối chủng để xử lý vỏ ca cao thấy trình ủ, độ ẩm pH giảm đến ngƣỡng tối ƣu Nhiệt độ khơng tăng mạnh kích thƣớc đống ủ q nhỏ nhƣng hàm lƣợng cellulose giảm có ý nghĩa so với nghiệm thức đối chứng ii SUMMARY Vietnam’s area under cocoa cultivation in 2015 is estimated for 50.580 hectares It causes a large number of cocoa shells discharged into the environment without any appropriate treatment system Cocoa shells could be used for the production of microorganism fertilizer, animal feed and bioethanol This would enhance economic efficiency and decrease environmental pollution However, the key problem is the cellulose content of cocoa shell is quite high, so an effective initial treatment of cocoa shell is necessary Therefore isolation and selection of some actinomycetes strains which could decompose cellulose in cocoa shell was performed After isolating actinomycete strains from different samples such as soil, leaves, compost, rice hulls collected from different provinces in Vietnam, their ability to produce cellulase enzyme system was investigated Some strong strains were selected to test and culture medium and condition to increase biomass as well as cellulase enzyme producing were determined for the selected strong strains Based on the result, we tested cocoa shell process on a small scale Twenty five isolated actinomycete strains were able to decompose cellulose and generate strong cellulase enzyme system Among those strains, strains 14IV and 23XIV are the ones have the highest capacity of enriching biomass Their biomass are 9,9 x 1010 CFU/ml, 8,3 x 1010 CFU/ml, respectively, in the optimal culture conditions are environment YS, pH 6, the time 108 hours, shaking at the speed of 150 cycles per minute at room temperature In the processing, we found that, the moisture and pH factors were reduced to the optimal threshold The temperature increased insignigicantly because the heap size was small However, the cellulose content was significantly reduced compared with control treatment iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii SUMMARY iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH SÁCH CÁC BẢNG viii DANH SÁCH CÁC HÌNH .ix Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề: 1.2 Yêu cầu khóa luận 1.3 Nội dung khóa luận Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1 Giới thiệu chung xạ khuẩn 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Đặc điểm hình thái, cấu tạo xạ khuẩn .4 2.1.2.1 Đặc điểm hình thái 2.2.1.2 Đặc điểm cấu tạo xạ khuẩn 2.1.2.3 Bào tử xạ khuẩn 2.1.3 Đặc điểm sinh thái 2.1.4 Enzyme cellulase xạ khuẩn .7 2.2 Cellulose hệ enzyme cellulase .8 2.2.1 Cellulose 2.2.2 Enzyme cellulase 2.2.2.1 Định nghĩa 2.2.2.2 Cấu tạo chung cellulase .8 2.2.2.3 Phân loại hệ thống hệ enzyme cellulase .9 2.2.2.4 Tính chất 10 2.2.2.5 Cơ chế tác động enzyme cellulase .10 2.3 Giới thiệu vỏ ca cao 11 2.3.1 Cây ca cao 11 iv 2.3.2 Lợi ích vỏ ca cao 12 2.4 Một số cơng trình nghiên cứu giới Việt Nam 13 2.4.1 Một số cơng trình nghiên cứu giới 13 3.4.2 Một số cơng trình nghiên cứu Việt Nam 14 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 16 3.1 Thời gian địa điểm thực .16 3.2 Vật liệu nghiện cứu .16 3.2.1 Đối tƣợng thí nghiệm 16 3.2.2 Hóa chất .17 3.2.3 Dụng cụ, thiết bị 17 3.2.4 Môi trƣờng 17 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 17 3.3.1 Phƣơng pháp phân lập tăng sinh dòng xạ khuẩn từ tự nhiên 17 3.3.2 Phƣơng pháp quan sát hình dạng khuẩn ty bào tử tiêu phòng ẩm .18 3.3.3 Phƣơng pháp xác định mật độ tế bào phƣơng pháp đếm khuẩn lạc 18 3.3.4 Phƣơng pháp định tính khả phân giải cellulose 19 3.3.5 Phƣơng pháp định lƣợng hoạt độ enzyme cellulase 19 3.3.5.1 Dựng đƣờng chuẩn 19 3.3.5.2 Định lƣợng hoạt độ enzyme cellulase mẫu .20 3.3.6 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng tăng sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase .21 3.3.6.1 Ảnh hƣởng thời gian nuôi cấy lên sinh tổng hợp cellulase 21 3.3.6.2 Ảnh hƣởng pH nuôi cấy lên sinh tổng hợp cellulase 21 3.3.6.3 Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy lên khả tăng sinh xạ khuẩn 22 3.3.7 Thử nghiệm khả phân giải cellulose vỏ ca cao quy mơ nhỏ 22 3.3.7.1 Xử lý phân tích mẫu đầu vào 22 3.3.7.2 Tiến hành ủ quy mô nhỏ 22 3.3.7.3 Phƣơng pháp phân tích tiêu mẫu ủ .23 3.3.8 Tính tốn .24 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 Kết phân lập .25 4.2 Mơ tả đặc điểm hình thái dòng phân lập 25 4.3 Kết quan sát hình thái phƣơng pháp phòng ẩm 26 v 4.4 Kết khảo sát hoạt tính enzyme cellulase 25 chủng xạ khuẩn phân lập .27 4.5 Kết khảo sát hoạt độ hệ enzyme cellulase .29 4.6 Kết khảo sát điều kiện ảnh hƣởng đến khả nhân sinh khối 30 4.6.1 Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian nuôi cấy lên khả tăng sinh .30 4.6.2 Xác định pH mơi trƣờng thích hợp 31 4.6.2 Xác định môi trƣờng tăng sinh thích hợp 33 4.7 Thử nghiệm xử lý vỏ ca cao quy mô nhỏ 34 4.7.1 Đặc tính vỏ ca cao đầu vào 34 4.7.2 Theo dõi thay đổi nhiệt độ 34 4.7.3 Theo dõi thay đổi độ ẩm 35 4.7.4 Theo dõi thay đổi pH 36 4.7.4 Theo dõi thay đổi hàm lƣợng cellulose 36 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 5.1 Kết luận 37 5.2 Kiến nghị 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO .38 PHỤ LỤC 40 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT APGII Angiosperm Phylogeny Group II CMC Carboxymethylcellulose CFU/g Colony forming units/gram C/N Carbon/nitrogen DNA Deoxyribo nucleic acid DNS 3,5 – Acid dinotrosalisylic DC Nghiệm thức đối chứng EDTA Ethylendiamine tertraacetic axid HEC Hydroxyethyl cellulose Hđez Hoạt độ enzyme KTKS Khuẩn ty khí sinh KTCC Khuẩn ty chất OD Optical density UI International Unit X Nghiệm thức bổ sung hỗn hợp dịch tăng sinh XK Xạ khuẩn vii DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Khuẩn lạc xạ khuẩn Hình 2.2 Mơ hình phân tử cellulase thủy phân cellulose 11 Hình 4.1 Khuẩn lạc xạ khuẩn mơi trƣờng Gause sau 10 ngày 26 Hình 4.2 Hình dạng khuẩn ty cuống sinh bào tử xạ khuẩn 27 Hình 4.3 Vòng phân giải CMC chủng xạ khuẩn sau ngày 29 Hình 4.4 Đồ thị biểu diễn biến thiên mật độ xạ khuẩn theo thời gian 30 Hình 4.5 Đồ thị thể biến thiên hoạt độ enzyme cellulase theo thời gian 31 Hình 4.6 Đồ thị biễu diễn biến thiên mật độ xạ khuẩn theo pH 32 Hình 4.7 Đồ thị biểu diễn biến thiên hoạt độ enzyme cellulase theo pH 32 Hình 4.8 Đồ thị biễu diễn thay đổi mật độ xạ khuẩn theo mơi trƣờng 33 Hình 4.9 Đồ thị biểu diễn thay đổi nhiệt độ đống ủ theo ngày 34 Hình 4.10 Đồ thị biểu diễn thay đổi độ ẩm đống ủ theo ngày 35 Hình 4.11 Sự thay đổi pH đống ủ theo ngày 36 Hình 4.12 Đồ thị biểu diễn thay đổi hàm lƣợng cellulose đống ủ 36 viii Bảng Sự thay đổi nhiệt vỏ ca cao trình ủ Nghiệm thức ĐC 23XIV 14VIII X Nghiệm thức ĐC 23XIV 14VIII X Nghiệm thức ĐC 23XIV 14VIII X Ngày Ngày 30 31,4 30 31,5 30 31,8 30 32,4 Ngày 32,3 35 33,7 36,1 Ngày 15 32 33 34 36 Ngày 32,8 33 32,2 33,1 Ngày 31,9 34,3 35,3 36,2 Nhiệt độ (oC) Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày 32,5 32,8 33,1 32,7 31,8 33,5 33 35 34 34 32 33,4 34,1 34 34,3 34,1 34,1 34,3 35,1 34,2 Nhiệt độ (oC) Ngày 10 Ngày 11 Ngày 12 Ngày 13 Ngày 14 32,4 34,5 35 37 Ngày 16 Ngày 17 32 32 34 33 35 34 36 35 32,4 34,1 35,2 37,1 Ngày 8,50 8,50 8,50 8,50 pH Ngày Ngày 14 Ngày 21 8,30 7,97 7,63 8,17 7,33 7,00 8,20 7,47 7,13 7,93 7,17 6,77 Bảng Sự thay đổi độ ẩm vỏ ca cao trình ủ Nghiệm thức Đc 23XIV 14VIII X Ngày 65,33 65,33 65,33 65,33 Độ ẩm (%) Ngày Ngày 14 Ngày 21 60,33 52,33 48,47 58,67 47,67 44,83 58,67 49,67 43,47 57,33 47,00 41,80 12 31,3 34,5 34,5 36,8 32,3 34,5 33,1 34,7 Nhiệt độ (oC) Ngày 18 Ngày 19 Ngày 20 Ngày 21 31 31,5 32,4 32 33 33,8 33,5 32 35 34,5 34 33 35 35 34 34 Bảng Sự thay đổi pH vỏ ca cao trình ủ Nghiệm thức Đc 23XIV 14VIII X 31,4 34 35 37 Phụ lục Bảng 10 Số liệu dùng cho xử lý thống kê kết định tính Nghiệm thức 1I 2II 3III 4IV 5IV 6IV 7V 8V 9V 10V 11VI 12VII 13VII 14VIII 15IX 16IX 17IX 18X 19XI 20XII 21XIII 22XIII 23XVI 24XIV 25XIV 41,75 40,5 20 30 26 40 28,5 22 35 32,5 35,75 32,5 26,5 36,5 33 22 30 17 25 22,75 27 28 40 33,5 29 Lần lặp lại 40 41,75 19 29 27 41 29 21,5 32,5 32 32 32,75 19,5 37 32 22,75 29,25 16,5 24,75 23,25 24,25 29 37 37,5 24,25 41,25 41,25 19 27 26,5 42 28,5 21,5 33 35,5 34,25 31 24,25 36 32,5 22,75 28,25 17 24,75 23 25,5 30 38,5 35 27,25 Trung bình 41,00 41,17 19,33 28,67 26,50 41,00 28,67 21,67 33,50 33,33 34,00 32,08 23,42 36,50 32,50 22,50 29,17 16,83 24,83 23,00 25,58 29,00 38,50 35,33 26,83 Bảng 11 Bảng ANOVA kết định tính số liệu Bảng 10 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 24 3412.378 142.182 79.915 0.0000 Within 50 88.958 1.779 -Total 74 3501.337 Coefficient of Variation = 4.48% 13 Bảng 12 Bảng trắc nghiệm phân hạng kết định tính kết Bảng 11 Error Mean Square = 1.779 Error Degrees of Freedom = 50 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 2.916 s_ = 0.7701 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 41.00 41.17 19.33 28.67 26.50 41.00 28.67 21.67 33.50 33.33 34.00 32.08 23.42 36.50 32.50 22.50 29.17 16.83 24.83 23.00 25.58 29.00 38.50 35.33 26.83 Ranked Order A A MN GH GHIJ A GH LM CDE CDE CDE EF JKL BC DE KL FG N IJKL KL HIJK G AB CD GHI 14 Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 23 14 24 11 10 15 12 17 22 25 21 19 13 20 16 18 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 41.17 41.00 41.00 38.50 36.50 35.33 34.00 33.50 33.33 32.50 32.08 29.17 29.00 28.67 28.67 26.83 26.50 25.58 24.83 23.42 23.00 22.50 21.67 19.33 16.83 A A A AB BC CD CDE CDE CDE DE EF FG G GH GH GHI GHIJ HIJK IJKL JKL KL KL LM MN N Bảng 13 Số liệu dùng cho xử lý thống kê kết định lƣợng Nghiệm thức 1I 2II 3III 4IV 5IV 6IV 7V 8V 9V 10V 11VI 12VII 13VII 14VIII 15IX 16IX 17IX 18X 19XI 20XII 21XIII 22XIII 23XVI 24XIV 25XIV 527,78 444,44 27,78 16,67 166,67 375,00 263,89 41,67 291,67 152,78 111,11 250,00 5,56 555,56 83,33 13,89 222,22 13,89 125,00 41,67 83,33 222,22 555,56 305,56 250,00 LLL 486,11 430,56 55,56 20,83 180,56 444,44 250,00 69,44 277,78 152,78 138,89 250,00 8,33 527,78 69,44 152,78 222,22 27,78 101,39 83,33 111,11 166,67 541,67 347,22 236,11 458,33 319,44 59,72 27,78 194,44 430,56 194,44 83,33 319,44 138,89 111,11 236,11 5,56 513,89 69,44 97,22 194,44 55,56 111,11 69,44 138,89 152,78 541,67 361,11 194,44 Trung bình 490,74 398,15 47,69 21,76 180,56 416,67 236,11 64,81 296,30 148,15 120,37 245,37 6,48 532,41 74,07 87,96 212,96 32,41 112,50 64,81 111,11 180,56 546,30 337,96 226,85 Bảng 14 Bảng ANOVA kết định lƣợng số liệu Bảng 13 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 24 1914986.303 79791.096 157.945 0.0000 Within 50 25259.112 505.182 -Total 74 1940245.415 Coefficient of Variation = 10.67% 15 Bảng 15 Bảng trắc nghiệm phân hạng kết định lƣợng kết Bảng 14 Error Mean Square = 505.2 Error Degrees of Freedom = 50 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 49.14 s_ = 12.98 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 491.0 408.7 51.09 21.76 180.6 424.0 236.1 71.59 296.3 148.1 123.7 245.4 6.483 532.4 74.07 130.3 213.0 32.41 112.5 64.81 111.1 180.6 546.3 338.0 226.9 Ranked Order B Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean C KL KL FG C E IJK D GH HI E L AB IJK GH EF KL HIJ JK HIJ FG A D EF 16 23 14 24 12 25 17 22 10 16 11 19 21 15 20 18 13 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 546.3 532.4 491.0 424.0 408.7 338.0 296.3 245.4 236.1 226.9 213.0 180.6 180.6 148.1 130.3 123.7 112.5 111.1 74.07 71.59 64.81 51.09 32.41 21.76 6.483 A AB B C C D D E E EF EF FG FG GH GH HI HIJ HIJ IJK IJK JK KL KL KL L Bảng 16 Số liệu dùng cho xử lý thống kê ảnh hƣởng thời gian đến khả sinh tổng hợp enzyme cellulase chủng 1I, 2II, 6IV, 14VIII, 23XIV Nghiệm thức 1I 2II 6IV 14VIII 23XIV Thời gian nuôi cấy (giờ) 48 60 72 84 96 108 120 48 60 72 84 96 108 120 48 60 72 84 96 108 120 48 60 72 84 96 108 120 48 60 72 84 96 108 120 Lần lặp lại 0,00 30,49 69,44 222,22 277,78 416,67 279,84 12,20 27,78 263,89 402,78 486,11 430,56 294,82 18,29 54,88 111,11 263,89 458,33 534,72 387,45 73,17 111,11 222,22 347,22 486,11 569,44 446,26 48,78 76,39 222,22 305,56 430,56 527,78 468,18 17 1,22 28,05 41,67 236,11 305,56 375,00 287,42 24,39 13,89 208,33 388,89 472,22 416,67 315,12 20,73 43,90 166,67 305,56 444,44 527,78 367,12 42,68 125,00 236,11 333,33 472,22 583,33 383,45 60,98 72,22 236,11 347,22 402,78 541,67 403,65 1,22 31,71 55,56 194,44 291,67 402,78 260,12 30,49 41,67 222,22 347,22 513,89 437,50 270,41 18,29 47,56 180,56 277,78 486,11 541,67 371,59 48,78 55,56 180,56 333,33 458,33 569,44 378,23 42,68 90,28 201,39 319,44 416,67 513,89 397,45 Bảng 17 Bảng ANOVA ảnh hƣởng thời gian đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 1I theo số liệu Bảng 16 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 390913.577 78182.715 363.647 0.0000 Within 12 2579.951 214.996 -Total 17 393493.529 Coefficient of Variation = 8.85% Bảng 18 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng thời gian đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 1I kết Bảng 17 Error Mean Square = 215.0 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 36.57 s_ = 8.466 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 0.8130 30.08 55.56 217.6 291.7 398.1 Ranked Order E DE D C B A Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 398.1 291.7 217.6 55.56 30.08 0.8130 A B C D DE E Bảng 19 Bảng ANOVA ảnh hƣởng thời gian đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 2II theo số liệu Bảng 16 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 621006.490 124201.298 296.375 0.0000 Within 12 5028.810 419.068 -Total 17 626035.300 Coefficient of Variation = 7.77% 18 Bảng 20 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng thời gian đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 2II kết Bảng 19 Error Mean Square = 419.1 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 51.06 s_ = 11.82 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 22.36 27.78 231.5 379.6 490.7 428.2 D D C Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean B A B = = = = = = 490.7 428.2 379.6 231.5 27.78 22.36 A B B C D D Bảng 21 Bảng ANOVA ảnh hƣởng thời gian đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 6IV theo số liệu Bảng 16 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 692171.211 138434.242 356.184 0.0000 Within 12 4663.917 388.660 -Total 17 696835.129 Coefficient of Variation = 7.88% Bảng 22 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng thời gian đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 6IV kết Bảng 21 Error Mean Square = 388.7 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 49.17 s_ = 11.38 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 19.11 48.78 152.8 282.4 463.0 534.7 Ranked Order E E D C B A Mean Mean Mean Mean Mean Mean 19 = = = = = = 534.7 463.0 282.4 152.8 48.78 19.11 A B C D E E Bảng 23 Bảng ANOVA ảnh hƣởng thời gian đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 14VIII theo số liệu Bảng 16 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 643707.775 128741.555 279.066 0.0000 Within 12 5535.952 461.329 -Total 17 649243.726 Coefficient of Variation = 7.37% Bảng 24 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng thời gian đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 14VIII kết Bảng 23 Error Mean Square = 461.3 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 53.57 s_ = 12.40 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 54.88 97.22 213.0 338.0 472.2 574.1 Ranked Order E E D C B A Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 574.1 472.2 338.0 213.0 97.22 54.88 A B C D E E Bảng 25 Bảng ANOVA ảnh hƣởng thời gian đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 23XIV theo số liệu Bảng 16 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 533032.151 106606.430 485.508 0.0000 Within 12 2634.925 219.577 -Total 17 535667.076 Coefficient of Variation = 5.49% 20 Bảng 26 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng thời gian đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 23ZIV kết bảng 25 Error Mean Square = 219.6 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 36.96 s_ = 8.555 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 50.81 E Mean = 527.8 Mean = 79.63 E Mean = 416.7 Mean = 219.9 D Mean = 324.1 Mean = 324.1 C Mean = 219.9 Mean = 416.7 B Mean = 79.63 Mean = 527.8 A Mean = 50.81 A B C D E E Bảng 27 Số liệu dùng cho xử lý thống kê ảnh hƣởng pH môi trƣờng đến khả sinh tổng hợp enzyme cellulase chủng 1I, 2II, 6IV, 14VIII, 23XIV Lần lặp lại Chủng Nghiệm Trung XK thức bình 4,5 166,67 145,83 155,56 156,02 5,0 236,11 222,22 236,11 231,48 5,5 333,33 291,67 312,50 312,50 1I 6,0 375,00 402,78 361,11 379,63 6,5 263,89 250,00 222,22 245,37 7,0 152,78 166,67 152,78 157,41 4,5 138,89 111,11 125,00 125,00 5,0 180,56 166,67 194,44 180,56 5,5 347,22 361,11 333,33 347,22 2II 6,0 486,11 472,22 513,89 490,74 6,5 416,67 394,44 402,78 404,63 7,0 305,56 333,33 347,22 328,70 4,5 201,39 212,50 215,28 209,72 5,0 284,72 263,89 305,56 284,72 5,5 458,33 444,44 486,11 462,96 6V 6,0 416,67 402,78 440,28 419,91 6,5 347,22 333,33 368,06 349,54 7,0 250,00 277,78 236,11 254,63 4,5 229,17 159,72 169,44 186,11 5,0 319,44 312,50 276,39 302,78 5,5 508,33 486,11 472,22 488,89 14VIII 6,0 625,00 575,00 558,33 586,11 6,5 451,39 486,11 500,00 479,17 7,0 372,22 388,89 395,83 385,65 4,5 180,56 208,33 236,11 208,33 5,0 347,22 375,00 340,28 354,17 23XIV 5,5 430,56 437,50 416,67 428,24 6,0 444,44 458,33 486,11 462,96 6,5 388,89 375,00 381,94 381,94 21 7,0 291,67 277,78 277,78 282,41 Bảng 28 Bảng ANOVA ảnh hƣởng pH đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 1I theo số liệu Bảng 27 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 156702.262 31340.452 189.407 0.0000 Within 12 1985.599 165.467 Total 17 158687.861 Coefficient of Variation = 7.54% Bảng 29 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng pH đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 1I kết Bảng 28 Error Mean Square = 165.5 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 32.08 s_ = 7.427 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 17.13 92.59 238.4 291.7 226.9 157.4 Ranked Order E D B A B C Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 291.7 238.4 226.9 157.4 92.59 17.13 A B B C D E Bảng 30 Bảng ANOVA ảnh hƣởng pH đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 2II theo số liệu Bảng 27 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 282872.503 56574.501 211.502 0.0000 Within 12 3209.876 267.490 Total 17 286082.379 Coefficient of Variation = 5.23% 22 Bảng 31 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng pH đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 2II kết Bảng 30 Error Mean Square = 267.5 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 40.79 s_ = 9.443 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 125.0 180.6 347.2 490.7 404.6 328.7 Ranked Order E D C A B C Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 490.7 404.6 347.2 328.7 180.6 125.0 A B C C D E Bảng 32 Bảng ANOVA ảnh hƣởng pH đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 6IV theo số liệu Bảng 27 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 145023.988 29004.798 84.763 0.0000 Within 12 4106.233 342.186 -Total 17 149130.221 Coefficient of Variation = 5.60% Bảng 33 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng pH đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 6IV kết Bảng 32 Error Mean Square = 342.2 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 46.14 s_ = 10.68 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 209.7 284.7 463.0 419.9 349.5 254.6 Ranked Order D C A A B CD Mean Mean Mean Mean Mean Mean 23 = = = = = = 463.0 419.9 349.5 284.7 254.6 209.7 A A B C CD D Bảng 34 Bảng ANOVA ảnh hƣởng pH đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 14VIII theo số liệu Bảng 27 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 312225.665 62445.133 87.993 0.0000 Within 12 8515.953 709.663 -Total 17 320741.618 Coefficient of Variation = 6.58% Bảng 35 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng pH đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 14VIII kết Bảng 34 Error Mean Square = 709.7 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 66.44 s_ = 15.38 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 186.1 302.8 488.9 586.1 479.2 385.6 Ranked Order E D B A B C Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 586.1 488.9 479.2 385.6 302.8 186.1 A B B C D E Bảng 36 Bảng ANOVA ảnh hƣởng pH đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 23XIV theo số liệu Bảng 27 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 133511.750 26702.350 89.789 0.0000 Within 12 3568.671 297.389 -Total 17 137080.421 Coefficient of Variation = 4.89% 24 Bảng 37 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng pH đến sinh tổng hợp hệ enzyme cellulase chủng xạ khuẩn 23XIV kết Bảng 36 Error Mean Square = 297.4 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 43.01 s_ = 9.956 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 208.3 354.2 428.2 463.0 381.9 282.4 D B A A B C Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 463.0 428.2 381.9 354.2 282.4 208.3 A A B B C D Bảng 38 Số liệu dùng cho xử lý thống kê kết hàm lƣợng cellulose đống ủ Ngày sau ủ (ngày) 14 Nghiệm thức ĐC 23XIV 14VIII X ĐC 23XIV 14VIII X ĐC 23XIV 14VIII X Lần lặp lại 22,2 22,2 22,2 22,2 21,5 19,6 19,4 19,2 20,2 17,3 16,8 16,4 23 23 23 23 21 19,9 19,5 19 19,8 16,7 17 16,2 22,3 22,3 22,3 22,3 21,2 19,8 19,7 18,9 20,2 17,4 17,4 16,6 Trung bình 22,50 22,50 22,50 22,50 21,23 19,77 19,53 19,03 20,07 17,13 17,07 16,40 Bảng 39 Bảng ANOVA thí nghiệm hàm lƣợng cellulose vỏ ca cao sau ngày ủ với dịch tăng sinh xạ khuẩn theo số liệu Bảng 38 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 8.043 2.681 80.425 0.0000 Within 0.267 0.033 Total 11 8.309 25 Bảng 40 Bảng trắc nghiệm phân hạng thí nghiệm hàm lƣợng cellulose vỏ ca cao sau ngày ủ với dịch tăng sinh xạ khuẩn kết Bảng 39 Error Mean Square = 0.03300 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.4531 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 21.23 19.77 19.53 19.03 Ranked Order A B B C Mean Mean Mean Mean = = = = 21.23 19.77 19.53 19.03 A B B C Bảng 41 Bảng ANOVA thí nghiệm hàm lƣợng cellulose vỏ ca cao sau 14 ngày ủ với dịch tăng sinh xạ khuẩn theo số liệu Bảng 38 A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 18.627 6.209 88.699 0.0000 Within 0.560 0.070 -Total 11 19.187 Coefficient of Variation = 1.51% Bảng 42 Bảng trắc nghiệm phân hạng thí nghiệm hàm lƣợng cellulose vỏ ca cao sau 14 ngày ủ với dịch tăng sinh xạ khuẩn kết Bảng 41 Error Mean Square = 0.07000 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.6599 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 20.07 17.13 17.07 16.40 Ranked Order A B B C Mean Mean Mean Mean 26 = = = = 20.07 17.13 17.07 16.40 A B B C ... Khuẩn lạc xạ khuẩn (www.jic.ac.uk) Gồm 35 họ, 110 chi 1000 loài với 478 loài thu c chi Streptomyces 500 lồi thu c chi lại thu c nhóm xạ khuẩn (Nguyễn Lân Dũng, 2006) Thơng thƣờng ngƣời ta nhận dạng... Giang Đất mùn, màu đen Vỏ ca cao sau thu hoạch từ Vƣờn ƣơm ca cao trƣờng Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh 16 3.2.2 Hóa chất Thu c thử Lugol Acid acetic đặc Thu c thử DNS HNO3 đậm đặc Acetate... khuẩn bị đứt thành đoạn ngắn giống nhƣ bào tử, gặp điều kiện thu n lợi phát triển thành thể Hình dạng, kích thƣớc bào tử không giống tùy thu c vào lồi, cá thể lồi, chí cuống Bào tử xạ khuẩn đƣợc