Luận văn thạc sỹ nghiên cứu biến thể gen adh1b ở bệnh nhân bị bệnh xơ gan do sử dụng rượu

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGUYỄN THẾ KIÊN NGHIÊN CỨU BIẾN THỂ GEN ADH1B Ở BỆNH NHÂN BỊ BỆNH XƠ GAN DO SỬ DỤNG RƢỢU LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN, 2022 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGUYỄN THẾ KIÊN NGHIÊN CỨU BIẾN THỂ GEN ADH1B Ở BỆNH NHÂN BỊ BỆNH XƠ GAN DO SỬ DỤNG RƢỢU Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Hoàng Thị Thu Yến Trƣờng Đại học Khoa học – ĐH Thái Nguyên THÁI NGUYÊN, 2022 LỜI CẢM ƠN Lời tơi xin đƣợc bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Hồng Thị Thu Yến, Khoa Cơng nghệ sinh học, Trƣờng Đại học Khoa học Thái Nguyên tận tình hƣớng dẫn, bảo giúp đỡ tơi suốt thời gian thực hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trƣờng Đại học Khoa học Đại học Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm Khoa Công nghệ sinh học thầy cô giáo, cán Khoa Công nghệ sinh học, đặc biệt quan tâm, giúp đỡ anh chị thuật viên ph ng th nghiệm Khoa tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình làm luận văn thạc sĩ Tôi xin cảm ơn gia đình bạn bè ln bên cạnh ủng hộ, khuyến khích, động viên tạo động lực để tơi hồn thành luận văn Trong q trình làm luận văn hơng tránh hỏi sai sót, tơi mong nhận đƣợc đóng góp q báu từ phía thầy bạn bè để tơi hồn thành luận văn Thái Ngun, ngày tháng năm 2022 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công tr nh nghiên cứu thực dƣới hƣớng dẫn TS Hoàng Thị Thu Yến Mọi tr ch dẫn uận văn ghi rõ nguồn gốc Các số iệu, ết nghiên cứu uận văn trung thực chƣa công bố công tr nh hác Thái Nguyên, ngày tháng năm 2022 Tác giả Nguyễn Thế Kiên ii MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình sử dụng đồ uống có ethanol 1.1.1 Tình hình sử dụng đồ uống có ethanol giới 1.1.2 Tình hình sử dụng đồ uống có ethanol t i Việt Nam 1.2 Chuyển hóa ethano ảnh hƣởng đến sức hỏe ngƣời 1.2.1 Chuyển hoá ethanol người 1.2.2 Ảnh hưởng ethanol đến sức khoẻ người 1.3 Mối liên quan đa h nh rs1229984 gen ADH1B với bênh xơ gan 10 1.3.1 Đa hình rs1229984 gen ADH1B 10 1.3.2 Tình hình nghiên cứu đa hình rs1229984 gen ADH1B 12 1.3.3 Mối liên quan đa hình rs1229984 gen ADH1B với bệnh xơ gan 13 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tƣợng vật liệu nghiên cứu 15 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.2 Vật liệu nghiên cứu 15 2.2 Hóa chất, thiết bị dụng cụ 16 2.2.1 Hóa chất 16 2.2.2 Thiết bị, dụng cụ 16 2.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 17 2.4 Sơ đồ nghiên cứu 17 2.5 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.5.1 Tách chiết DNA tổng số từ mẫu máu 18 2.5.2 Điện di DNA tổng số gel agarose 20 2.5.3 Xác định nồng độ DNA độ tinh s ch 20 iii 2.5.4 PCR khuếch đ i vùng gen đích 21 2.5.5 Tinh s ch sản phẩm PCR 22 2.5.6 Giải trình tự Sanger 23 2.5.7 Phân tích kết xử lý số liệu 23 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Nghiên cứu đặc điểm đa hình rs1229984 gen ADH1B ngƣời việt nam sinh sống thái nguyên 24 3.1.1 Kết tách chiết DNA tổng số 24 3.1.2 Kết khuếch đ i xác định trình tự đo n gen ADH1B 25 3.1.3 Tần số iểu gen tần số alen đa hình rs1229984 gen ADH1B 26 3.1.4 Đa hình rs1229984 gen ADH1B người Việt Nam mối liên quan đến nguy nghiện rượu bệnh rượu 27 3.2 Nghiên cứu mối liên quan đa h nh RS1229984 gen ADH1B ngƣời lạm dụng rƣợu 28 3.2.1 Mô tả mẫu nghiên cứu 28 3.2.2 Xác định tần số kiểu gen, tần số alen đa hình rs1229984 gen ADH1B người l m dụng rượu 29 3.2.3 So sánh tần số alen ADH1B*2 người l m dụng rượu với nghiên cứu công bố giới 30 3.3 Nghiên cứu mối liên quan đa h nh rs1229984 gen ADH1B ngƣời lạm dụng rƣợu xơ gan 33 3.3.1 Xác định tần số kiểu gen, tần số alen đa hình rs1229984 gen ADH1B người l m dụng rượu xơ gan hông xơ gan 33 3.3.2 So sánh tần số alen ADH1B*2 người l m dụng rượu với nghiên cứu công bố giới 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 PHỤ LỤC 44 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Nghĩa tiếng Việt Từ viết tắt Nghĩa tiếng Anh ADH Enzyme chuyển hóa ethanol ADH alcohol dehydrogenase ADH1B Enzyme chuyển hóa ethanol ADH1B alcohol dehydrogenase 1B ALDH Enzyme chuyển hóa acetaldehyde ALDH aldehyde dehyrogenase ALDH2 Enzyme chuyển hóa acetaldehyde ALDH2 aldehyde dehyrogenase Bp Cặp base Base pair DNA Axit Deoxynucleic Deoxyribonucleic acid Đtg đồng tác giả et al Kb Kilobase Kilobase = 1000 bp PCR Phản ứng chuỗi trùng hợp Polymerase Chain Reaction Taq Vi khuẩn chịu nhiệt Thermus aquaticus TAE TAE Tris Acetate EDTA WHO Tổ chức y tế giới World Health Organization v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Mô tả đa h nh rs1229984 gen ADH1B 12 Bảng 2.1 Thiết bị dụng cụ sử dụng nghiên cứu 17 Bảng 2.2: Danh sách trình tự mồi sử dụng nghiên cứu 22 Bảng 3.1 Tần số iểu gen a en gen ADH1B từ nhóm mẫu nghiên cứu 26 Bảng 3.2 So sánh tần số alen ADH1B*2 ngƣời Việt Nam 27 Bảng 3.3 Đặc điểm tuổi nhóm mẫu lạm dụng rƣợu đối chứng sử dụng nghiên cứu 28 Bảng 3.4 Tần số kiểu gen, tần số a en đa h nh rs1229984 gen ADH1B nhóm ngƣời lạm dụng rƣợu đối chứng 29 Bảng 3.5 Mô tả so sánh nghiên cứu đa h nh rs1229984 gen ADH1B ngƣời lạm dụng rƣợu không lạm dụng rƣợu 32 Bảng 3.6 Đặc điểm tuổi nhóm mẫu lạm dụng rƣợu bị xơ gan hông bị xơ gan 33 Bảng 3.7 Tần số kiểu gen, tần số a en đa h nh rs1229984 gen ADH1B nhóm ngƣời lạm dụng rƣợu bị xơ gan hông bị xơ gan 34 Bảng 3.8 Mô tả so sánh nghiên cứu đa h nh rs1229984 gen ADH1B ngƣời lạm dụng rƣợu bị xơ gan hông bị xơ gan 36 vi DANH MỤC CÁC HÌNH H nh 1.1 Con đƣờng oxy hoá chuyển hoá ethanol Hình 1.2 Biểu đồ mức độ biểu gen ADH1B mô khác 11 H nh 2.1 Sơ đồ thiết kế primer khuếch đại đoạn gen ADH1B 21 Hình 3.1 Hình ảnh điện di DNA tổng số gel agarose 0,8% nhóm ngƣời sinh sống Thái Nguyên 24 Hình 3.2 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR đoạn gen ADH1B nhóm ngƣời sinh sống Thái Nguyên 25 Hình 3.3 Kết giải trình tự đoạn gen ADH1B 26 vii MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Sử dụng rƣợu, bia thƣờng xuyên iên tục vấn đề phổ biến toàn giới, lạm dụng rƣợu bia yếu tố nguy thứ gây tử vong bệnh tật ngƣời [36] Sau đƣợc đƣa vào thể, ethano có rƣợu, bia đƣợc đào thải chủ yếu qua chuyển hoá, phần nhỏ đƣợc tiết qua thở (0,7%), nƣớc tiểu (0,3%) mồ (0,1%) Chuyển hố ethanol có đƣờng ch nh: oxy hố hơng oxy hố Ethano đƣợc chuyển hố chủ yếu thơng qua q trình oxy hố, q tr nh có tham gia enzyme nhƣ alcohol dehydrogenase (ADH), aldehyde dehydrogenase (ALDH), cytochrom 450 catalase Nhiều nghiên cứu rằng, ethano đƣợc oxy hoá chủ yếu gan [5], [21], [32], [44] Cơ thể ngƣời có gen mã hoá ADH nằm nhiễm sắc thể số 4, số đó, ADH1B mã hố enzyme có vai trị chuyển hố rƣợu gan Trƣớc tiên, ADH chuyển hố rƣợu thành acetaldehyde, chất có độc t nh cao đƣợc gọi chất gây ung thƣ Sau đó, aceta dehyde bị ALDH phân hủy thành hợp chất t độc Aceta dehyde đƣợc cho có liên quan đến chế hình thành bệnh gan rƣợu Sự tích tụ acetaldehyde gan sau uống rƣợu mãn t nh đƣợc xác định tốc độ hình thành loại bỏ nó, đƣợc xúc tác ADH, ALDH số enzyme khác Nghiên cứu ngƣời song sinh cho thấy, sở di truyền cho khác biệt cá nhân tính nhạy cảm với bệnh xơ gan rƣợu [26], t nh đa h nh di truyền enzym iên quan đến tr nh oxy hoá ethano thành acetate đƣợc biết đến [19], [43] Các biến thể ADH enzyme chuyển hoá ethanol thành aceta dehyde nhanh dẫn đến việc tăng t ch tụ acetaldehyde gan sau uống rƣợu Do đó, ngƣời có isozyme dễ bị xơ gan rƣợu đƣợc bảo vệ chống lại phát triển chứng nghiện rƣợu [7], [18] Chen J, Huang W, Cheng CH, Zhou L, Jiang GB, Hu YY (2019), Association Between Aldehyde dehydrogenase-2 Polymorphisms and Risk of Alzheimer's Disease and Parkinson's Disease: A Meta-Analysis Based on 5,315 Individuals, Frontiers in neurology, 10: 290 10 Cichoz-Lach H, Partycka J, Nesina I, Celinski K, Slomka M, Wojcierowski J (2007), Alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase gene polymorphism in alcohol liver cirrhosis and alcohol chronic pancreatitis among Polish individuals, J Scandinavian journal of gastroenterology, 42(4): 493-498 11 Coriell Institute for medical research (2008), 1000 genomes collections 12 Couigou P, Fleury B, Groppi A, Cassaigne A, Begueret J, Iron A (1990), Genotyping study of alcohol dehydrogenase class I polymorphism in French patients with alcoholic cirrhosis, J Alcohol Alcoholism: Clinical and Experimental Research, 25(6): 623-626 13 Day CP, Bashir R, James OF, Bassendine MF, Crabb DW, Thomasson HR, Li TK, Edenberg H (1991), Investigation of the role of polymorphisms at the alcohol and aldehyde dehydrogenase loci in genetic predisposition to alcohol related end organ damage, J Hepatology, 14(5): 798-801 14 Edenberg HJ, McClintick JN (2018), Alcohol Dehydrogenases, Aldehyde Dehydrogenases, and Alcohol Use Disorders: A Critical Review, Alcoholism, clinical and experimental research, 42(12): 2281-2287 15 Frenzer A, Butler WJ, Norton ID, Wilson JS, Apte MV, Pirola RC, Ryan P (2002), Polymorphism in alcohol metabolizing enzymes, glutathione S transferases and apolipoprotein E and susceptibility to alcohol‐ induced cirrhosis and chronic pancreatitis, J Journal of gastroenterology and hepatology, 17(2): 177-182 16 García Buelos J, Panduro A, Gordillo Bastidas D, Gordillo Bastidas E, Moz Valle JF, Gurrola Díaz CM, Sánchez Enríquez S, Ruiz Madrigal B, Bastidas Ramírez BE (2012), Genetic polymorphisms of genes coding to alcohol‐ metabolizing enzymes in Western Mexicans: association of CYP2E1* c2/CYP2E1* 5B allele with cirrhosis and liver function, J Alcoholism: Clinical Experimental Research, 36(3): 425-431 39 17 Ghosh S, Bankura B, Ghosh S, Saha ML, Pattanayak AK, Ghatak S, Guha M, Nachimuthu SK, Panda CK, Maji S, Chakraborty S, Maity B, Das M (2017), Polymorphisms in ADH1B and ALDH2 genes associated with the increased risk of gastric cancer in West Bengal, India, BMC cancer, 17(1): 782 18 Harada S, Misawa S, Agarwal DP, Goedde HW (1980), Liver alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase in the Japanese: isozyme variation and its possible role in alcohol intoxication, J American journal of human genetics, 32(1): 19 Hayashi S-i, Watanabe J, Kawajiri K (1991), Genetic polymorphisms in the 5'flanking region change transcriptional regulation of the human cytochrome P45011E1 gene, J The Journal of Biochemistry, 110(4): 559-565 20 He L, Deng T, Luo H-S (2015), Alcohol dehydrogenase 1C (ADH1C) gene polymorphism and alcoholic liver cirrhosis risk: A meta analysis, Int J Clin Exp Med, 8(7): 11117 21 Hurley TD, Edenberg HJ (2012), Genes encoding enzymes involved in ethanol metabolism, Alcohol Res, 34(3): 339-334 22 Iron A, Groppi A, Fleury B, Begueret J, Cassaigne A, Couzigou P (1992), Polymorphism of class I alcohol dehydrogenase in French, Vietnamese and Niger populations: genotyping by PCR amplification and RFLP analysis on dried blood spots, Annales de genetique, 35(3): 152-156 23 Khan AJ, Husain Q, Choudhuri G, Parmar D (2010), Association of polymorphism in alcohol dehydrogenase and interaction with other genetic risk factors with alcoholic liver cirrhosis, J Drug alcohol dependence, 109(1-3): 190-197 24 Kim MS, Lee DH, Kang HS, Park HS, Jung S, Lee JW, Kwon KS, Kim PS, Kim HG, Shin YW (2004), Genetic polymorphisms of alcohol-metabolizing enzymes and cytokines in patients with alcohol induced pancreatitis and alcoholic liver cirrhosis, Korean J Gastroenterol, 43(6): 355-353 25 Lee HC, Lee HS, Jung SH, Yi SY, Jung HK, Yoon JH, Kim CY (2001), Association between polymorphisms of ethanol-metabolizing enzymes and susceptibility to alcoholic cirrhosis in a Korean male population, Journal of Korean medical science, 16(6): 745-750 40 26 Lieber CS (1994), Alcohol and the liver: 1994 update, J Gastroenterology, 106(4): 1085-1105 27 Lorenzo A, Auguet T, Vidal F, Broch M, Olona M, Gutiérrez C, LópezDupla M, Sirvent J-J, Quer J-C, Santos M (2006), Polymorphisms of alcohol-metabolizing enzymes and the risk for alcoholism and alcoholic liver disease in Caucasian Spanish women, J Drug alcohol dependence, 84(2): 195-200 28 Matejcic M, Gunter MJ, Ferrari P (2017), Alcohol metabolism and oesophageal cancer: a systematic review of the evidence, Carcinogenesis, 38(9): 859-872 29 Matsuo K, Wakai K, Hirose K, Ito H, Saito T, Tajima K (2006), Alcohol dehydrogenase His47Arg polymorphism influences drinking habit independently of aldehyde dehydrogenase Glu487Lys polymorphism: analysis of 2,299 Japanese subjects, Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 15(5): 1009-1003 30 Méndez C, Rey M (2015), Characterization of polymorphisms of genes ADH2, ADH3, ALDH2 and CYP2E1 and relationship to the alcoholism in a Colombian population, J Colombia Médica, 46(4): 176-182 31 Micu SI, Manea ME, Popoiag R, Nikolic D, Andrada D, Patti AM, Musat M, Balalau C, Rogoveanu A, Rizzo M (2019), Alcoholic liver cirrhosis, more than a simple hepatic disease–A brief review of the risk factors associated with alcohol abuse, J Mind Med Sci, 6(2): 232-236 32 National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (2007), Alcohol alert Alcohol metabolism: an update In., vol 72: P.O Box 10686, Rockville, MD 20849–0686 33 Ogurtsov PP, Garmash IV, Miandina GI, Guschin AE, Itkes AV, Moiseev VS (2001), Alcohol dehydrogenase ADH2–1 and ADH2–2 allelic isoforms in the Russian population correlate with type of alcoholic disease, J Addiction biology, 6(4): 377-383 41 34 Ramchandani VA (2013), Genetics of Alcohol Metabolism In: Alcohol, Nutrition, and Health Consequences Edited by Watson RR, Preedy, Victor R., Zibadi, Sherma (Eds.): Humana Press: 15-25 35 Rao A, Tiwari A, Sinha M, Nayak S, Bhatt S, Ahirwar B (2017), The role of ALDH2 and ADH1B polymorphism in alcohol dependence: A case - control study from Bilaspur, Chhattisgarh, India, European Journal of Biomedical, 4(12): 440-445 36 Rice E, Tulbert E, Cederbaum J, Barman Adhikari A, Milburn NG (2012), Mobilizing homeless youth for HIV prevention: a social network analysis of the acceptability of a face-to-face and online social networking intervention, Health Educ Res, 27(2): 226-236 37 Sanchez-Roige S, Palmer AA, Clarke TK (2020), Recent Efforts to Dissect the Genetic Basis of Alcohol Use and Abuse, Biological psychiatry, 87(7): 609-618 38 Seitz HK, Becker P (2007), Alcohol metabolism and cancer risk, Alcohol Res Health, 30(1): 38-41, 44-37 39 Tan B, Ning N (2019), Association of ADH1B Arg47His polymorphism with the risk of cancer: a meta-analysis, Bioscience reports, 39(4) 40 Vatansever S, Tekin F, Salman E, Altintoprak E, Coskunol H, Akarca US (2015), Genetic polymorphisms of ADH1B, ADH1C and ALDH2 in Turkish alcoholics: lack of association with alcoholism and alcoholic cirrhosis, Bosn J Basic Med Sci, 15(2): 37 41 World Health Oganization (1988), Alcohol Drinking, IARC Monographs on the Evaluation of the Carcinogenic Risks to Humans In: IARC Working Group on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans, International Agency for Research on Cancer vol 42 Yokoyama A, Mizukami T, Matsui T, Yokoyama T, Kimura M, Matsushita S, Higuchi S, Maruyama K (2013), Genetic Polymorphisms of Alcohol Dehydrogenase B and Aldehyde Dehydrogenase and Liver Cirrhosis, Chronic Calcific Pancreatitis, Diabetes Mellitus, and Hypertension Among J apanese Alcoholic Men, Alcoholism: Clinical and Experimental Research Experimental Research, 37(8): 1391-1401 42 43 Yoshida A, Hsu LC, Yasunami M (1991), Genetics of human alcoholmetabolizing enzymes, J Progress in nucleic acid research molecular biology, 40: 255-287 44 Zakhari S (2006), Overview: how is alcohol metabolized by the body?, Alcohol Res Health, 29(4): 245-244 43 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Nồng độ DNA tỉ số OD260/OD280 mẫu nghiên cứu thu thập trƣờng Cao đẳng y Thái Nguyên Ký hiệu Nồng độ Tỷ số Ký hiệu mẫu DNA (ng/µl) OD260/OD280 mẫu Y1 23,3 1,90 Y26 23,8 1,79 Y2 14,0 1,68 Y27 19,5 1,66 Y3 49,3 1,85 Y28 14,7 1,65 Y4 29,8 1,78 Y29 19,4 1,67 Y5 30,9 1,88 Y30 23,4 1,72 Y6 18,2 1,82 Y31 29,9 1,73 Y7 24,9 1,84 Y32 15,4 1,61 Y8 16,6 1,71 Y33 28,7 1,67 Y9 14,3 1,76 Y34 28,6 1,72 Y10 24,0 1,75 Y35 27,8 1,67 Y11 24,7 1,79 Y36 25,4 1,59 Y12 17,4 1,75 Y37 27,3 1,66 Y13 26,6 1,72 Y38 28,0 1,60 Y14 9,6 1,60 Y39 29,5 1,64 Y15 22,8 1,58 Y40 41,6 1,85 Y16 11,7 1,55 Y41 17,0 1,55 Y17 12,7 1,63 Y42 48,0 1,85 Y18 14,3 1,57 Y43 23,1 1,62 Y19 28,0 1,67 Y44 59.4 1.85 Y20 18,2 1,63 Y45 17.8 1.76 Y21 18,8 1,60 Y46 56.7 1.85 Y22 26,3 1,78 Y47 39.2 1.89 Y23 20,5 1,74 Y48 58.5 1.87 Y24 11,8 1,79 Y49 28.4 1.78 Y25 16,2 1,87 44 Nồng độ Tỷ số DNA (ng/µl) OD260/OD280 Phụ lục 2: Nồng độ DNA tỉ số OD260/OD280 mẫu nghiên cứu lạm dụng rƣợu xơ gan Ký hiệu Nồng độ Tỷ số Ký hiệu mẫu DNA (ng/µl) OD260/OD280 mẫu X1 10.2 2.08 X55 43 1.83 X2 29.6 1.81 X56 70.3 1.85 X3 14.8 1.81 X57 101.7 1.88 X4 7.4 1.74 X58 64.1 1.84 X5 63.1 1.59 X59 85.6 1.84 X6 36.8 1.71 X60 58.6 1.84 X7 22.3 1.55 X61 34.4 1.82 X8 82.0 1.86 X62 53.4 1.78 X9 67.9 1.85 X63 43.2 1.88 X10 22.6 1.86 X64 39.9 1.85 X11 113.4 1.88 X65 65.1 1.85 X12 49.5 1.80 X66 43 1.81 X13 20.2 1.94 X67 172.8 1.86 K14 57.0 1.90 X68 86 1.85 X15 43.2 1.86 X69 72.8 1.86 X16 40.1 1.73 X70 49.6 1.88 X17 40.7 1.81 X71 35.1 1.85 X18 45.0 1.84 X72 82.4 1.63 X19 19.8 1.83 X73 38.1 1.89 X20 53.0 1.85 X74 48.4 1.85 X21 37.7 1.87 X75 44.6 1.89 X22 25.2 1.79 X76 61.1 1.86 X23 22.5 1.58 X77 24.8 1.76 X24 17.1 1.67 X78 91.3 1.88 X25 20.2 1.70 X79 32.3 1.85 X26 44.1 1.68 X80 32.8 1.88 X27 73.1 1.77 X81 79.7 1.89 X28 65.9 1.76 X82 49.4 1.59 X29 78.8 1.77 X83 41.6 1.88 X30 27.0 1.58 X84 48.6 1.85 45 Nồng độ Tỷ số DNA (ng/µl) OD260/OD280 Ký hiệu Nồng độ Tỷ số Ký hiệu mẫu DNA (ng/µl) OD260/OD280 mẫu X31 47.0 1.79 X85 21.4 1.85 X32 80.1 1.79 X86 29.4 1.85 X33 70.6 1.81 X87 12.6 1.92 X34 26.4 1.72 X88 10.4 1.91 X35 50.0 1.83 X89 60.5 1.83 X36 14.7 1.40 X90 91.4 1.87 X37 25.2 1.73 X91 29.6 1.82 X38 22.0 1.77 X92 17.9 1.64 X39 28.4 1.85 X93 42.8 1.8 X40 15.5 1.84 X94 20.9 1.71 X41 30.8 1.97 X95 59.1 1.71 X42 20.2 1.91 X96 31.9 1.75 X43 53.5 1.86 X97 48.6 1.75 X44 18.7 1.94 X98 57.5 1.74 X45 39.8 1.9 X99 71.5 1.8 X46 22.3 1.92 X100 129.7 1.86 X47 43.5 1.91 X101 38 1.74 X48 32.2 1.85 X102 23.2 1.64 X49 71.1 1.88 X103 26.4 1.68 X50 49.5 1.85 X104 10.6 1.55 X51 51.4 1.87 X105 23.2 1.66 X52 137.1 1.86 X106 14.1 1.44 X53 122.9 1.87 X107 18.8 1.49 X54 58.2 1.85 46 Nồng độ Tỷ số DNA (ng/µl) OD260/OD280 Phụ lục 3: Nồng độ DNA tỉ số OD260/OD280 mẫu nghiên cứu lạm dụng rƣợu Ký hiệu Nồng độ Tỷ số Ký hiệu mẫu DNA (ng/µl) OD260/OD280 mẫu L1 71 1.77 L51 57.2 1.78 L2 36.1 1.79 L52 99.1 1.85 L3 60.7 1.82 L53 46.6 1.82 L4 40.6 1.67 L54 53.6 1.83 L5 54.7 1.81 L55 49.7 1.84 L6 49.2 1.82 L56 38.1 1.76 L7 49.5 1.74 L57 63.1 1.86 L8 49.5 1.82 L58 41.1 1.79 L9 65.5 1.84 L59 37.6 1.91 L10 46.9 1.78 L60 47.1 1.87 L11 33.0 1.84 L61 38.3 1.88 L12 50.4 1.77 L62 97.2 1.87 L13 61.1 1.73 L63 52.5 1.88 L14 49.5 1.81 L64 55.1 1.79 L15 61.2 1.83 L65 49.8 1.91 L16 53.9 1.84 L66 50.3 1.73 L17 110.0 1.88 L67 46.1 1.90 L18 46.1 1.84 L68 58.4 1.79 L19 59.4 1.86 L69 54.0 1.89 L20 51.0 1.83 L70 55.2 1.77 L21 49.1 1.78 L71 84.9 1.87 L22 35.6 1.75 L72 38.5 1.83 L23 50.5 1.85 L73 50.7 1.88 L25 47.5 1.88 L74 65.4 1.88 L25 98.6 1.87 L75 46.5 1.85 L26 81.2 1.84 L76 26.3 1.85 47 Nồng độ Tỷ số DNA (ng/µl) OD260/OD280 Ký hiệu Nồng độ Tỷ số Ký hiệu mẫu DNA (ng/µl) OD260/OD280 mẫu L27 38.7 1.84 L77 71.3 1.88 L28 30.5 1.84 L78 40.5 1.84 L29 60.2 1.73 L79 49.8 1.81 L30 50.7 1.76 L80 73.4 1.83 L31 42.3 1.79 L81 76.6 1.79 L32 40.0 1.17 L82 67.7 1.84 L33 58.2 1.79 L83 67.9 1.85 L34 56.6 1.80 L84 56.6 1.81 L35 80.0 1.81 L85 82.9 1.84 L36 48.6 1.79 L86 51.3 1.83 L37 63.8 1.82 L87 69.5 1.82 L38 43.1 1.76 L88 59.2 1.84 L39 29.0 1.71 L89 38.7 1.84 L40 37.3 1.77 L90 66.4 1.54 L41 45.1 1.43 L91 61.8 1.79 L42 70.3 1.71 L92 59.4 1.82 L43 57.7 1.79 L93 71.4 1.83 L44 48.0 1.77 L94 60.8 1.82 L45 52.8 1.69 L95 76.3 1.85 L46 50.6 1.75 L96 114.8 1.88 L47 66.2 1.76 L97 76.4 1.85 L48 53.7 1.80 L98 57.2 1.78 L49 63.0 1.79 L99 81.9 1.83 L50 84.1 1.83 L100 48.3 1.81 48 Nồng độ Tỷ số DNA (ng/µl) OD260/OD280 Phụ lục 4: Nồng độ DNA tỉ số OD260/OD280 mẫu nghiên cứu không lạm dụng rƣợu Ký hiệu Nồng độ Tỷ số Ký hiệu mẫu DNA (ng/µl) OD260/OD280 mẫu K1 38.4 1.84 K50 28.3 1.88 K2 61.9 1.86 K51 25.7 1.49 K3 30.3 1.91 K52 22.7 1.82 K4 90.5 1.88 K53 57.3 1.86 K5 35.7 1.87 K54 57.7 1.89 K6 124.9 1.9 K55 44.5 1.01 K7 26.1 1.87 K56 37.5 1.69 K8 82.2 1.98 K57 56.1 1.88 K9 41.2 1.95 K58 35.4 1.26 K10 59.8 1.8 K59 53.6 1.88 K11 63.2 1.82 K60 64.2 1.85 K12 18.8 1.71 K61 32.6 1.8 K13 14.3 1.87 K62 43.8 1.84 K14 23.7 1.85 K63 44.1 1.81 K15 5.5 2.05 K64 45.8 1.75 K16 57.8 1.79 K65 33.6 1.93 K17 23.5 1.87 K66 54.7 1.89 K18 3.7 1.76 K67 42.5 1.8 K19 31.9 1.86 K68 45.2 1.79 K20 25.1 1.82 K69 55.1 1.84 K21 33 1.65 K70 42.2 1.72 K22 62 1.85 K71 86.8 1.84 K23 122.5 1.87 K72 50.8 1.77 K25 109.8 1.84 K73 65.8 1.76 K25 47.8 1.8 K74 41.5 1.73 K26 43.7 1.77 K75 33.6 1.7 49 Nồng độ Tỷ số DNA (ng/µl) OD260/OD280 Ký hiệu Nồng độ Tỷ số Ký hiệu mẫu DNA (ng/µl) OD260/OD280 mẫu K27 79.8 1.86 K76 38.2 1.74 K28 43.7 1.84 K77 106.2 1.8 K29 31.2 1.86 K78 51 1.83 K30 105.1 1.3 K79 19.3 1.72 K31 77.4 1.81 K80 55.3 1.82 K32 47.8 1.8 K81 70.1 1.75 K33 60 1.82 K82 52 1.71 K34 116.8 1.87 K83 25.2 1.59 K35 101.8 1.86 K84 58.8 1.73 K36 30.7 1.78 K85 48.4 1.72 K37 51 1.82 K86 120.3 1.8 K38 36.9 1.8 K87 32.3 1.68 K39 32.1 1.82 K88 45.2 1.69 K40 84.2 1.83 K89 37.7 1.71 K41 40.1 1.82 K90 37.1 1.68 K42 29 1.82 K91 98.9 1.8 K43 41.2 1.84 K92 118.9 1.82 K44 26.2 1.85 K93 37.2 1.68 K45 66.3 1.84 K94 82.5 1.76 K46 27 1.77 K95 26.4 1.63 K47 40.1 1.83 K96 46.6 1.68 K48 118.3 1.87 K97 72.2 1.73 K49 74.7 1.83 K98 17.1 1.49 50 Nồng độ Tỷ số DNA (ng/µl) OD260/OD280 Phụ lục 5: Hình ảnh điện di sản phẩm PCR khuếch đại đoạn gen ADH1B số mẫu nghiên cứu Hình Hình ảnh điện di sản phẩm PCR khuếch đại đoạn gen ADH1B; M: marker 100bp (Thermo Scientific); - 9: tƣơng ứng nhóm mẫu nghiên đƣợc thu thập trƣờng Cao Đẳng Y Thái Nguyên Hình Hình ảnh điện di sản phẩm PCR khuếch đại đoạn gen ADH1B; M: marker 100 bp (Thermo Scientific); - 9: tƣơng ứng nhóm mẫu khơng lạm dụng rƣợu 51 Hình Hình ảnh điện di sản phẩm PCR khuếch đại đoạn gen ADH1B; M: marker 1kb (Thermo Scientific); - 8: tƣơng ứng nhóm mẫu lạm dụng rƣợu xơ gan Hình Hình ảnh điện di sản phẩm PCR khuếch đại đoạn gen ADH1B; M: marker 1kb (Thermo Scientific); - 13: tƣơng ứng nhóm lạm dụng rƣợu hơng xơ gan 52 Phụ lục 6: Hình ảnh giải trình tự đoạn gen ADH1B mang đa hình rs1229984 số mẫu nghiên cứu Hình Hình ảnh trình tự phát kiểu gen dị hợp đa h nh rs1229984 gen ADH1B từ mẫu nghiên cứu Hình Hình ảnh trình tự phát kiểu gen đồng hợp đột biến đa h nh rs1229984 gen ADH1B từ mẫu nghiên cứu Hình Hình ảnh trình tự phát kiểu gen đồng hợp đột kiểu dại đa h nh rs1229984 gen ADH1B từ mẫu nghiên cứu 53