BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH BỘ MÔN SINH HÓA HỌC ỨNG DỤNG Giảng viên Trần Thị Lệ Minh Thời gian Thứ Sáu ca 3 Tiểu nhóm[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH BỘ MƠN SINH HĨA HỌC ỨNG DỤNG Giảng viên: Trần Thị Lệ Minh Thời gian: Thứ Sáu ca Tiểu nhóm thực hành: nhóm Danh sách thành viên: Phan Minh Ngọc _ MSSV: 21126426 Nguyễn Đinh Bảo Trân _ MSSV: 21126547 Cao Minh Trực _ MSSV: 21126559 Phạm Nhật Trường _ MSSV: 21126562 MỤC LỤC BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI 1 Các phản ứng kết tủa thuận nghịch protein Phương pháp kết tủa dung môi hữu 2.Các phản ứng kết tủa không thuận nghịch protein Phương pháp kết tủa nhiệt độ cao BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI Các phản ứng màu để định tính protein: Phản ứng biure…………………………………………………………………………………………………………………………… Phản ứng Xantoprotein BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI Định lượng protein Phản ứng Lowry BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI Khảo sát tính khử monosaccharid BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI Phản ứng xà phịng hóa BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI 1 Các phản ứng kết tủa thuận nghịch protein: Phương pháp kết tủa dung môi hữu 1.1 Chuẩn bị: Dụng cụ: pipette, bóp cao su, nghiệm, cốc đong Hóa chất: albumin, nước cất, ethanol, NaCl, aceton, đắ lạnh 1.2 Thực hành: Chuẩn bị: Ethanol 96%: pha 9.6ml ethanol vào 0.4ml nước cất Dung dịch Albumin 1%: pha 0.1 ml dung dịch albumin vào 9.9ml nước NaCl bão hòa: Cho NaCl liên tục vào 10ml nước cất khuấy đến khơng thể tan Tiến hành thí nghiệm: Bước 1: Lấy hai ống nghiệm, cho vào ống nghiệm ml dung dịch albumin 1%, làm lạnh nước đá Bước 2: Thêm vào ống 1: 2ml etanol 96% lạnh, ống 2: 2ml aceton lạnh, quan sát Bước 3: Cho thêm vào hai ống nghiệm vài giọt dung dịch NaCl bão hòa, kết tủa lắng xuống đáy ống, gạn bỏ lớp dung môi, thêm nước vào, lắc đều, kết tủa tan 1.3 Hiện tượng giải thích: Ống nghiệm 1: dung dịch ống nghiệm thêm etanol 96% có màu đục khơng tạo kết tủa Nhưng sau thêm NaCl bão hịa tạo kết tủa trắng Ống nghiệm 2: tương tự ống nghiệm có kết tủa nhiều màu đục Giải thích: Các phân tử protein bị nước bền dung dịch etanol 96% acetol chất háo nước , chúng lấy nước protein Khi cho NaCl bão hòa, chất điện giải mạnh, tạo ion Na + Cl- Các ion trung hòa điện tử tiểu phân tử protein, tạo kết tủa Ống nghiệm có kết tủa nhiều ống nghiệm acetol háo nước etanol 96% Phân công công việc: TÊN NGỌC TRÂN TRỰC TRƯỜNG CƠNG VIỆC Pha hóa chất, hỗ trợ thực thí nghiệm, làm báo cáo Hỗ trợ lấy pha hóa chất, ghi hình q trình ghi chép thơng tin Thực thí nghiệm chính, hỗ trợ chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm Chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm, hỗ trợ thực thí nghiệm Các phản ứng kết tủa không thuận nghịch protein: 2.1 Chuẩn bị: Nguyên liệu: Sữa tươi pha loãng lần, acid acetic 1% 10%, NaOH 10%, NaCl bão hoà Dụng cụ: pipette, bơm cao su, ống nghiệm 2.2 Thực hành: Chuẩn bị: Sữa pha loãng lần: 6ml sữa tươi 24ml nước cất Acid acetic 1%: 10ml H2O 0.1g CH3COOH Acid acetic 10%: 10ml H2O 1g CH3COOH NaOH 10%: 10ml H2O 1g NaOH NaCl bão hịa pha từ thí nghiệm 1.1 Tiến hành thí nghiệm: Cho vào ống nghiệm sạch mỗi ống ml dd sữa đã pha loãng.m ống ml dd sữa pha loãng Ống 1: Khơng thêm hố chất Đun lửa đèn cồn, đảo dung dịch Ống 2: Thêm giọt acid acetic 1% Đun lửa đèn cồn, đảo dung dịch Ống 3: Thêm 0,5ml dung dịch acid acetic 10% Đun lửa đèn cồn, đảo dung dịch Ống 4: Thêm 0,5 ml dd NaOH 10% Đun lửa đèn cồn, đảo dung dịch Ống 5: Thêm 0,5ml dung dịch acid acetic 10% 3-4 giọt NaCl bão hòa Đun lửa đèn cồn, đảo dung dịch 2.3 Hiện tượng giải thích: Ống 1: Khơng có tượng xảy đun lửa đèn cồn Ống 2: Có xuất kết tủa nhiên nhanh chóng tan hết Ống 3: Có tượng kết tủa bắn sữa nhiệt độ lên cao Ống 4: Không kết tủa có đổi màu Ống 5: Có xuất kết tủa nhanh ống nghiệm thứ Giải thích Ống nghiệm 1: Dung dịch có màu trắng khơng kết tủa tiểu phân tử protein bị lớp nước bao bên cịn điện tích Ống nghiệm 2: Có kết tủa đục cho giọt axit acetic 1% tạo nên mơi trường axit yếu Nhóm -COO- bị ức chế phân ly nên tiểu phân tử protein điện tích pH mơi trường đạt gần tới điểm đẳng điện Ống nghiệm 3: Khi cho 0,5ml dung dịch axit acetic 10% tạo nên môi trường axit mạnh Do tính háo nước axit mơi trường axit mạnh có nhiều ion H + nên protein bị khử nước Các nhóm -COO- trung hịa nên nhóm NH + khơng trung hịa Phân tử protein điện tích dương Do xuất hiện tượng kết tủa nhanh chóng tan hết Ống nghiệm 4: Khi thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10% gây mơi trường kiềm Nhóm NH 3+ trung hịa Vì ta đun sơi điện tử âm tiểu phân tử protein cịn nên protein mang điện tích âm khơng thể tạo kết tủa Ống nghiệm 5: Khi cho dung dịch acid acetic 10% 3-4 giọt NaCl bão hòa NaCl bão hịa tạo nên mơi trường trung hòa điện đồng thời NaCl chất điện ly mạnh nên tạo phản ứng nhanh Kết luận Phần lớn protein bị đông tụ đun nóng mơi trường trung tính hay axit yếu Trong mơi trường kiềm mạnh hay axit mạnh, protein cịn mang điện tích khơng thể tạo kết tủa Đồng thời protein tạo kết tủa pH môi trường trạng thái đạt đẳng điện Phân công công việc: TÊN NGỌC TRÂN TRỰC TRƯỜNG CƠNG VIỆC Pha hóa chất, hỗ trợ thực thí nghiệm, làm báo cáo Hỗ trợ lấy pha hóa chất, ghi hình q trình ghi chép thơng tin Thực thí nghiệm chính, hỗ trợ chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm Chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm, hỗ trợ thực thí nghiệm BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI Phản ứng Biure: 1.1 Chuẩn bị: Dung dịch sữa pha loãng 10 lần Ure tinh thể NaOH 10% CuSO4 1% 1.2 Thực hành Chuẩn bị: Sữa pha loãng 10 lần: lấy 10ml sữa pha với 100ml nước cất NaOH 10%: cho 10gram NaOH vào 90ml nước CuSO4 1%: cho 1gram CuSO4 vào 99ml nước Tiến hành thí nghiệm: Phản ứng biure: cho vào ống nghiệm khơ tinh thể ure, đun lửa đèn yếu Lúc đầu ure nóng chảy, đến bắt đầu cứng lại ngừng lại Quá trình tạo biure, acid cyanuric ammoniac (có mùi ammoniac thử giấy quỳ tím) Hình 1.1 Để ống nguội, thêm 2ml dung dịch NaOH 10% lắc cho tan Thêm vài giọt CuSO4 1% Quan sát màu ( ý khơng thêm q nhiều CuSO4 màu xanh Cu(OH)2 tạo thành lấn át màu phản ứng) Phản ứng với protein: cho vào ống nghiệm 5ml dung dịch sữa pha loãng, 2ml NaOH 10% 1-2 giọt dung dịch CuSO4 1% Lắc kỹ, quan sát màu.(xem hình 1.2) Hình 1.2 1.3 Hiện tượng giải thích: Thuốc thử phản ứng màu biure dung dịch NaOH CuSO4, đơi cịn gọi tác chất biure Tuy nhiên chữ biure khơng phải thuốc thử có chứa biure mà biure protein cho phản ứng màu giống với NaOH CuSO4, cường độ màu thay đổi tùy thuộc vào độ dài mạch peptide Phản ứng so màu Biure, liên kết peptide với Cu2+ môi trường kiềm phản ứng đặc trưng để nhận biết protein Phản ứng xantoprotein I Nguyên liệu Sữa pha loãng lần Albumin 1% Gelatin 1% NaOH 20% HNO3 đặc II Giải thích vai trò nguyên liệu HNO3 đặc dùng để làm thuốc thử, quan sát tượng Chất tham gia phản ứng: Albumin 1%, gelatin 1% Sữa tươi pha loãng lần protein Thêm dung dịch kiềm (NaOH 20%) vào tạo thành dung dịch muối có cấu tạo quinoit có màu da cam III Quy trình thực Điều chế nguyên liệu Sữa pha loãng lần: lấy 10ml sữa pha loãng với 50ml nước Albumin 1%: pha 1gram albumin với 99ml nước NaOH 20%: cho 20gram NaOH vào 80ml nước HNO3 đặc có sẵn Thực phản ứng +Bước 1: Tiến hành cho hóa chất vào ống nghiệm Ống 1: 2ml dung dịch albumin 1% Ống 2: 2ml dung dịch gelatin 1% Ống 3: 2ml sữa pha loãng + Bước 2: tiến hành thêm vào ống 1ml HNO3 đậm đặc + Bước 3: tiến hành đun nhẹ hỗn hợp lửa đèn cồn quan sát +Bước 4: nhỏ dung dịch NaOH 20% vào quan sát tượng Hình 1: ống nghiệm Hình 2: ống nghiệm Hình 3: ống nghiệm IV Kết giải thích tượng - Ống nghiệm 1: đổi sang màu vàng có dẫn xuất nitro - Ống nghiệm 2: không đổi màu chứng tỏ phản ứng không xảy ra, gelatin khơng có axit amin nhân thơm nên phản ứng khơng xảy - Ống nghiệm 3: xuất màu vàng dung dịch, cho HNO3 vào protein,các axit amin nhân thơm có protein bị nitro hóa nhân thơm tạo dẫn xuất nitro có màu vàng => Kết luận: phản ứng Xantoprotein phản ứng đặc trưng để phát axit amin nhân thơm Phân công công việc: TÊN NGỌC TRÂN TRỰC TRƯỜNG CƠNG VIỆC Pha hóa chất, hỗ trợ thực thí nghiệm, làm báo cáo Hỗ trợ lấy pha hóa chất, ghi hình q trình ghi chép thơng tin Thực thí nghiệm chính, hỗ trợ chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm Chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm, hỗ trợ thực thí nghiệm BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI I Nguyên liệu Phenylalanin 0,02% Glycine 0,02% Albumin 1% Dung dịch A: Na2CO3 2% NaOH 0.1N Dung dịch B: CuSO4.5H2O 0,5% natri citrat 1% Dung dịch C: hỗn hợp dung dịch A B theo tỷ lệ 49/1; dùng ngày Thuốc thử Folin II Giải thích vai trị ngun liệu Albumin protein Thuốc thử Folin: tạo màu xanh để đo quang phổ, làm tang độ nhạy phức chất Cu-protein ( biure) III Quy trình thực Điều chế nguyên liệu - Dung dịch A: pha 0.4g NaOH 0.1N 2g Na2CO3 2% với 97.6ml nước - Dung dịch B: Bước 1: Pha 0,1 g Natri citrat với 10ml nước cất Bước 2: Cân 0,05g CuSO4.5H2O pha với dung dịch pha bước - Dung dịch C: Lấy 98ml dung dịch A pha với 2ml dung dịch B 100ml dung dịch C Thực hiên phản ứng *Nguyên tắc: + Đặc trưng cho tạo thành phức chất màu gốc acid amin vịng với thuốc thử Folin ciocalteu Ngồi thuốc thử Folin có acid phosphomolipolic acid phosphovonphramic làm tăng độ nhạy phức chất Cu-protein (biure) + Phản ứng lowry có độ nhạy cao, sử dụng rộng rãi để phát định lượng protein *Phần 1: Tiến hành thí nghiệm quan sát tượng + Bước 1: Lấy ống nghiệm Ống 1: 1ml albumin 1% Ống 2: 1ml phenylalanine 0.02 % Ống 3: 1ml glycine 0.02% Ống 4: 1ml nước cất + Bước 2: Cho vào ống 2ml dung dịch C + Bước 3: Để yên 10 phút sau thêm vào ống giọt thuốc thử Folin + Bước 4: Quan sát ghi chép tượng * Phần 2: Đo với máy đo quang phổ + Bước 1: Chuấn bị ống nghiệm Chất Ống Ống 0,5ml Ống 1ml Albumin Nước cất Ống 1,5ml Ống 2ml 4,5ml 4ml Ống 2,5ml Ống 3ml 3,5ml 3ml Ống 3,5ml Ống 4ml 2,5ml 2ml 1,5ml 1ml 0,5ml + Bước 2: Cho vào ống 2ml dung dịch C + Bước 3: Đợi 10 phút sau cho thêm vào ống giọt thuốc thử Folin( hình 1) Hình + Bước 4: Sử dụng máy đo quang phổ Sử dụng ống nghiệm thứ phần làm nền, cho vào ống đo đặt vào máy Đặt để mặt có hình đối diện với đèn chiếu ( thành ống phải sạch, khơng có vân tay ) 4,5ml Lần lượt cho ống nghiệm chuẩn bị vào ống đo đo Ghi chép số liệu *Phần 3: Chuẩn bị ống nghiệm + Lấy 0,6g lòng trắng trứng, lấy thêm 2,4ml nước cất + Cho 2ml dung dịch C đợi 10 phút + Thêm giọt thuốc thử Folin + Bỏ vào ống đo đo số OD lòng trắng trứng IV Kết giải thích tượng *Phần 1: - Ống xuất màu xanh albumin 1% có protein - Ống khơng có tượng *Phần 2: STT ống Chỉ số OD 0,151 0.184 0,212 0,241 0,27 0,296 0,318 0,339 0,359 Biểu đồ biểu diễn *Phần 3: Chỉ số OD lòng trắng trứng : 0,185 Áp dụng cơng thức Theo phần ta có phương trình y=0,0521x + 0,133 Y số OD lòng trắng trứng 0,185=0,0521x + 0,133 X= 520/521 CM 520 0,2 521 0,6 =3,3269 mg/g 0,3 Phân công công việc: TÊN NGỌC TRÂN TRỰC TRƯỜNG CƠNG VIỆC Pha hóa chất, hỗ trợ thực thí nghiệm, làm báo cáo Hỗ trợ lấy pha hóa chất, ghi hình q trình ghi chép thơng tin Thực thí nghiệm chính, hỗ trợ chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm Chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm, hỗ trợ thực thí nghiệm BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI I Nguyên liệu Glucose 1% Saccharose 1% Maltose 1% Thuốc thử Fehling II Giải thích vai trị ngun liệu Glucose 1% monosaccharide Saccharose 1%, Maltose 1% disaccharide Fehling: thuốc thử tính khử monosaccharid III Quy trình thực Điều chế nguyên liệu - Fehling A: 40g CuSO4.5H2O lít nước cất - Fehling B: 20g natri-kali tartrate (C4H4O6NaK.4H2O) 150 g NaOH lít nước cất - Trộn Fehling A B theo tỷ lệ 1:1 ta thuốc thử Fehling Thực phản ứng *Nguyên tắc: Thuốc thử Fehling dung dịch CuSO4 với dung dịch soude đậm đặc tartrate kép natri-kali Cu2+ dạng kết hợp với muối natri kali tartrate bị monosaccharid khử thành Cu+ (Cu2O), chứa aldehyde hay ceton đường bị oxy hóa thành acid hay muối tương ứng + Bước 1: : Lấy ống nghiệm Ống 1: 1ml glucose 1% Ống 2: 1ml saccharose 1% Ống 3: 1ml maltose 1% + Bước 2: Thêm vào ống 1ml thuốc thử Fehling lắc + Bước 3: Đun sôi ống nghiệm phút + Bước 4: Quan sát tượng Hình 1: Ống nghiệm Hình 2: ống nghiệm hình 3: quy trình đun hình 4: sau đun IV Kết giải thích tượng *Kết quả: ống nghiệm kết tủa đỏ gạch, ống không tượng *Giải thích tượng: Cả glucose maltose có nhóm CHO- thể tính khử Cịn phân tử saccharose khơng có nhóm –CHO phân tử (khơng có tính khử), có nhóm -OH Phân tử maltose gồm gốc glucose liên kết với qua C1 gốc α-glucose với C4 gốc α-glucose qua nguyên tử oxi Trong dung dịch, gốc α-glucose maltose mở vịng tạo nhóm C=O Khi có thuốc thử Fehling dung dịch CuSO4 với dung dịch soude đậm đặc tartrate kép natri-kali Cu2+ dạng kết hợp với muối natri kali tartrate bị monosaccharid khử thành Cu+ (Cu2O), chức aldehyde hay ceton đường bị oxy hóa thành acid hay muối tương ứng Phân công công việc: TÊN NGỌC TRÂN TRỰC TRƯỜNG CƠNG VIỆC Pha hóa chất, hỗ trợ thực thí nghiệm, làm báo cáo Hỗ trợ lấy pha hóa chất, ghi hình q trình ghi chép thơng tin Thực thí nghiệm chính, hỗ trợ chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm Chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm, hỗ trợ thực thí nghiệm BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI I Nguyên liệu NaOH 18.4g Nước cất 36.8g Dầu dừa 400g II III Vai trò nguyên liệu NaOH giúp xảy phản ứng xà phịng hóa Quy trình thực + Bước 1: Dùng cân chuẩn bị : 400g dầu dừa, 18,4g NaOH (có thể vài gam khơng lớn ), 36.8g nước cất Dùng cân chuẩn bị : 400g dầu dừa, 18,4g NaOH (có thể vài gam không lớn ), 36.8g nước cất + Bước 2: Pha NaOH vào nước cất Sau dd NaOH nguội khoảng 35-40 độ C cho dd vào 400g dầu dừa ( khơng làm ngược lại ) Sau tiến hành khuấy hỗn hợp hòa thành dung dịch + Bước 3: Dùng máy xay cầm tay trộn hỗn hợp đến hỗn hợp đặc bạn bắt đầu thấy xà phịng tạo vệt keo lại cho khn trang trí để tăng tính thẩm mĩ + ước 4: Tiến hành cho vào khn trang trí, để nguội nhận thành phẩm IV Kết giải thích tượng - Sau đổ khn để nguội, nhận xà phịng dầu dừa - Phản ứng thủy phân biến chất béo thành muối natri glyxerol Sau tách thành phần glyxerol, dung dịch muối natri thu xà phịng Phân cơng cơng việc: TÊN NGỌC TRÂN TRỰC TRƯỜNG CƠNG VIỆC Pha hóa chất, hỗ trợ thực thí nghiệm, làm báo cáo Hỗ trợ lấy pha hóa chất, ghi hình q trình ghi chép thơng tin Thực thí nghiệm chính, hỗ trợ chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm Chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm, hỗ trợ thực thí nghiệm